一种局部放射性脑坏死小鼠模型的建立方法

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及一种局部放射性脑坏死小鼠模型的建立方法。

背景技术

放射性脑坏死（cerebral radiation necrosis，CRN）是头颈部良、恶性肿瘤最常见的晚期并发症。随着近年来立体定向放射外科的普及、全身药物治疗的更新换代、以及影像检查手段的不断升级，CRN的发生率呈逐年上升趋势。CRN轻者可以无明显症状，重者可明显降低患者生活质量，甚至死亡。而目前缺乏成熟的小动物CRN模型，严重阻碍了CRN诊断和治疗的发展。

理想情况下，考虑到辐射敏感性和辐射阈值，灵长类动物是模拟放射引发的人类疾病的最合适的候选者。然而，灵长类动物的研究非常昂贵。考虑到遗传背景、解剖结构、可操作性和相对较低的使用成本，大鼠和小鼠提供了一些最有利的人类疾病和损伤状态模型。以前的大多数CRN动物模型都是在大鼠身上建立的，而在基础实验中最常见的模型一般是在小鼠上建立。目前，中外文献报道小鼠CRN模型包括KV级小动物辐照仪（small animalradiation research platform SARRP、Precision X-Ray’s X-Rad 320 cabinetirradiator、A Philips orthovoltage machine）临床使用伽马刀及质子，其中最多、最成功的CRN小鼠模型是基于临床使用的伽马刀，单次50Gy或者60Gy，等剂量线50%，已知伽马刀剂量率1.8-2.7Gy/min，平均一只小鼠的放疗时间为37-55min，效率极低，耗费医疗资源，成本极高。同时，并不是每个研究中心都有小动物辐照仪，且小动物辐照仪能量低，照射时间长，效率低下、机器容易发生故障；伽马刀也并没有普及到每家放疗中心，且效率低下。综上所述，建立成熟、简单、每家放疗中心均可实现的小鼠CRN模型迫在眉睫。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种局部放射性脑坏死小鼠模型的建立方法，使模型的构建变得稳定而可靠。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种局部放射性脑坏死小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：

S1、先进行剂量关系的验证；所述关系是指放射治疗处方剂量与吸收剂量之间的关系；

S2、对小鼠进行麻醉，使用红霉素眼药膏保护小鼠双侧眼睛，适当暴露颅骨；

S3、通过脑立体定位仪对小鼠进行照射脑区的标记；

S4、对小鼠的脑部进行固定；

S5、对固定位置的小鼠进行位置验证，确保小鼠照射位置及脑部位置水平；

S6、使用兆伏级加速器照射小鼠右半脑，所述照射源皮距与射野与S1中验证试验条件相同；

S7、通过包埋切片对照射部位做γH2AX验证，并完成局部放射性脑坏死小鼠模型的建立。

优选地，所述S1中剂量关系的验证方法为，使用EBT3胶片验证方法测出试验条件下的离轴比曲线与百分深度剂量曲线；并进行剂量验证方法的试验条件的设定。

优选地，所述S2中的小鼠为C57BL/6雄性小鼠。

优选地，所述S3中标记的小鼠脑区为小鼠右半脑前卤后2.5mm，中线右侧2mm的交点。

优选地，所述S5中通过锥形束CT对小鼠进行位置验证。

优选地，所述S6中照射的总剂量为120-300Gy，照射的总次数为1次，照射的单次时间为6.15-15min。

本发明的有益效果体现在：本发明对小鼠进行建模，本发明的建模方法使动物的建模时间大大缩短，但病理表现相同，从而使模型变得稳定而可靠，并具有可重复性，为放射性脑坏死的诊断和治疗提供了理论依据。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1：本发明的流程结构示意图。

实施方式

本发明揭示的是一种局部放射性脑坏死小鼠模型的建立方法，为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图1及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明揭示的是一种局部放射性脑坏死小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：

S1、先进行剂量关系的验证；所述关系是指放射治疗处方剂量（MU）与吸收剂量（Gy）之间的关系；具体的，所述S1中剂量关系的验证方法为，使用EBT3胶片验证方法测出试验条件下的离轴比曲线Profile与百分深度剂量（percentage depth dose，PDD）曲线。剂量验证方法的试验条件为vital beam无均整器模式（flattening-filter-free，FFF）下垂直照射，源皮距（source skin distance，SSD）=70cm，7mm×7mm方形射野，给予500MU。

S2、对小鼠进行麻醉，使用红霉素眼药膏保护小鼠双侧眼睛，适当暴露颅骨；本实施例中，使用的小鼠为C57BL/6雄性小鼠。

S3、通过脑立体定位仪对小鼠进行照射脑区的标记；本实施例中，脑坏死区域的观察区具体标记的小鼠脑区为小鼠右半脑前卤后2.5mm，中线右侧2mm的交点。

S4、对小鼠的脑部进行固定；

S5、通过锥形束CT（Cone Beam CT，CBCT）对固定位置的小鼠进行位置验证，确保小鼠照射位置及脑部位置水平；

S6、使用兆伏级加速器照射小鼠右半脑，将光野中心与小鼠脑部标记点重合，将厚度为1.5cm的有机玻璃板置于小鼠脑部立体固定架上方（紧贴小鼠脑部），直线加速器机架角为0度位，治疗床升至于小鼠脑部表面使得SSD等于70cm，射野大小为7mm×7mm，照射的总剂量为120-300Gy，照射的总次数为1次，照射的单次时间为6.15-15min，由于细胞需要一定的照射剂量才能坏死，所述的照射时间跟直线加速器参数设置相关，本实施例中总照射时间为6.15-15.29min。

S7、通过包埋切片对照射部位做γH2AX验证，并完成局部放射性脑坏死小鼠模型的建立。

本发明所述的方法使动物的建模时间大大缩短，但病理表现相同，从而使模型变得稳定而可靠，并具有可重复性，为放射性脑坏死的诊断和治疗提供了理论依据。

且以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。