具有促进周围神经损伤修复作用的嗜氮酮化合物及其制备方法

技术领域

本发明属于海洋天然药物领域，具体涉及嗜氮酮化合物及其制备方法和在促进周围神经损伤修复作用的组合物、药物、保健品中的应用。

背景技术

周围神经损伤是外科临床常见的疾病之一。周围神经损伤的修复是一个非常复杂的生物学过程，由于神经再生缓慢，神经残端Wallerian变性、组织粘连、肌肉萎缩和运动终板等因素始终制约着受损神经的功能恢复，致残率较高，给患者家庭和社会带来沉重的负担。雪旺细胞是周围神经系统内最重要的的神经胶质细胞，沿着神经元的突起分布，可以分泌多种神经营养因子来促进受损神经元存活，促进轴突生长、再生及髓鞘形成，在周围神经损伤相关的神经变性和再生过程中发挥关键作用。因此通过促进施万细胞增殖，分泌各种神经营养因子以支持受损神经元的存活，可以加速周围神经损伤修复，对于治疗和改善周围神经损伤及神经系统病具有重要的价值。

发明内容

本发明提供两个具有促进周围神经损伤修复作用的嗜氮酮类化合物，其结构式如式（I）所示：

式（I）。

本发明的另一个目的是提供一种上述嗜氮酮类化合物的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种菌核青霉（

一种菌核青霉（

一种菌核青霉（

式（I）嗜氮酮类化合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）菌核青霉（

（2）从步骤（1）所得发酵物中经提取得到发酵提取物；

（3）步骤（2）中的提取物通过正相硅胶柱、快速中压层析柱、反相C18柱、高效液相色谱等方法进行分离。

本发明提供一种含有步骤（2）中提取物，或式（I）所示化合物在制备促进周围神经损伤修复保健品、药物或药物中间体中的用途。

本发明提供一种含有步骤（2）中提取物，或式（I）所示化合物的促进周围神经损伤修复保健品或药物。所述促进周围神经损伤修复保健品或药物还包括医学上可接受的辅料。所述促进周围神经损伤修复保健品或药物还可以包括其他有效成分，以增强对雪旺细胞的增殖作用或周围神经损伤修复效果。

本发明具有以下优点：

本发明的嗜氮酮类化合物可以通过

生物保藏信息

菌核青霉（

附图说明

图1为真菌

图2为式（I）所示化合物1主要的

图3为式（I）所示化合物的ECD谱图。

图4为化合物1、2对雪旺细胞增殖的影响。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。实施例中的实验方法，如无特别说明，均采用本领域常规技术，实验试剂均为商业购买。

实施例1 发酵物的制备

种子培养基的配制方法：土豆浸出液200 mL，葡萄糖20 g，海盐30 g，用水定容到1L。将培养基装入20个500 mL的三角烧瓶中，每瓶约150 mL，在121℃高压蒸汽灭菌25分钟，备用。

PDB发酵培养基配置方法：土豆浸出液200 mL，葡萄糖20 g，海盐30 g，用水定容到1 L。置于1 L三角瓶中，每瓶350mL液体培养基，共150瓶。121℃高压蒸汽灭菌25分钟，备用。

用无菌竹签挑取适量的真菌

将发酵物用纱布进行过滤分为菌体和菌液，菌体用95%乙醇浸泡，浸取液回收乙醇后剩余水相，再用乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物A，菌液用等量乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物B，A、B合并得到总提取物。

实施例2 嗜氮酮类化合物的制备

按照实施例1的方法获得70 L液体培养基，菌体用95%乙醇浸泡、浸取液回收乙醇后剩余水相再用乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物A，菌液用等量乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物B，A、B合并得到总提取物200 g。乙酸乙酯提取物用大孔树脂吸附材料进行柱层析，以乙醇/水作为洗脱剂，体积比30%、50%、75%、90%进行洗脱，回收洗脱溶剂，获得4个馏分（Fr.1-Fr.4）。

Fr.3通过硅胶柱层析（100-200目），以二氯甲烷/甲醇（1:0-0:1）进行梯度洗脱，结合薄层色谱硅胶板检测，共得到8个馏分（Fr.3.1- Fr.3.8）。Fr.3.5通过硅胶柱层析（200-300目），以二氯甲烷/甲醇（1:0-0:1）进行梯度洗脱，合并得到7个馏分（Fr.3.5.1-Fr.3.5.7），Fr.3.5.4通过Flash RP C-18（甲醇/水 40:60-100:0）进行梯度洗脱，合并得到7个馏分（Fr.3.5.4.1- Fr.3.5.4.7），Fr.3.5.4.2通过半制备高效液相色谱（色谱柱为YMC-Pack ODS-A 10 mm×250 mm，流速为3.0 mL/min，检测波长280 nm和320 nm，流动相为体积比为60：40的甲醇-水）得到式I所示化合物2 (t

式（I）所示化合物均为淡黄色胶状物，易溶于氯仿、甲醇、DMSO，难溶于水，化合物1旋光度值为 [α]

对分离获得的化合物进行高分辨质谱（HR-ESIMS）、

表1 化合物1在CDCl

。

结构鉴定：

化合物1：黄色胶状，高分辨质谱（HRESIMS）在

J

化合物2，淡黄色胶状物，根据质谱（ESIMS）给出的准分子离子峰m/z 429.9（[M +H]）以及结合NMR数据推测出其分子式为C

化合物的结构如下：

。

实施例3 式（I）所示化合物的促进雪旺细胞增殖活性测试

采用大鼠雪旺细胞（RSC 96）测定式（I）所示化合物的的神经损伤修复活性。实验中使用MTT法确定细胞存活率。将细胞按照1.5×10

实验结果显示，在测试浓度为100 μM时，相较于对照组，式（I）所示化合物1、2均促进了RSC 96细胞的增值，表明化合物1、2具有促进雪旺细胞增殖的作用，在加速周围神经损伤修复，治疗和改善周围神经损伤及神经系统病具有一定的应用潜力。