一种三肽、三肽盐或衍生物及其应用

技术领域

本发明涉及生物肽技术领域，特别涉及一种三肽、三肽盐或衍生物及其应用。

背景技术

皮肤位于身体表面，是保护身体组织器官免受机械、化学、物理和微生物侵袭等因素损伤的第一道生理防线，对机体起到屏障保护作用。但随着年龄增大以及外部不良环境因素的影响，皮肤会积累大量的自由基，引起氧化应激和炎症反应，进而损伤细胞生物分子和破坏皮肤组织结构，造成皮肤屏障功能受损。而且，产生的自由基还会进一步诱导黑色素过量生成，从而导致皮肤色素沉着和黑斑的形成，影响皮肤美观。因此，有效的自由基清除不仅可以对皮肤屏障和健康起到保护作用，而且能有效改善皮肤色素沉着和黑斑形成等问题。此外，促进皮肤修复也有利于辅助恢复受损的皮肤屏障，重新建立起健康的皮肤屏障保护功能。

多肽因有各种各样的结构而具备广泛的生物活性潜力。目前，大量具有单一生物活性的多肽已被发现，但同时具有多种功效的多肽仍然稀缺。因此，如能有效开发得到一种兼具抗氧化、促进细胞迁移的多肽，将对保护、恢复皮肤健康起到重要作用。而且，如其还具有酪氨酸酶抑制活性，则还能进一步降低黑色素生成，对黑斑形成的降低、皮肤的提亮具有重要意义。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供一种三肽、其美容上或药学上可接受的盐或其衍生物及其应用。本发明中的三肽同时兼具抗氧化、促进细胞迁移和抑制酪氨酸酶效果，可以广泛应用于食品、药品和化妆品领域，从而具有极高的实用价值和经济价值。

本发明的第一个方面，提供一种三肽、其盐或其衍生物，所述三肽具有如式I所示结构：

X

式I

其中，AA1选自Trp、His、Phe、Arg或Thr中的一种；

AA2选自Phe、Trp、Arg或Ala中的一种；

AA3选自His、Trp、Thr或Phe中的一种；

X

在本发明的一些实施方式中，所述非活性基团包括保护基团和标记基团，如Trt、Acm、Mob、Boc、Fmoc、Trt、Dde、Allyl、Otbu、OBzl、OMe、OAll、OFm等。

在本发明的一些实施方式中，所述X

在本发明中，术语“氨基酸”是指任何天然或非天然氨基酸，包括任何L-或D-构型的氨基酸，当所有氨基酸都是L-构型时，该肽被称作L-对映体；当所有氨基酸都是D-构型时，该肽被称作D-对映体。该术语还可包括用作肽模拟物或类肽的氨基酸类似物。该术语还包括修饰的或不寻常的氨基酸或氨基酸的合成衍生物，例如二氨基丁酸和二氨基丙酸等。在本发明的一些实施方式中，三肽为通过肽键连接在一起的氨基酸，通常在疏水条件下呈螺旋构象。除非另有说明，上述三肽通常从氨基末端到羧基末端给出序列。

在本发明的一些实施方式中，所述盐包括美容上或药学上可接受的盐。

在本发明的一些实施方式中，所述盐为可溶性盐。

在本发明的一些实施方式中，所述盐为与金属离子、有机酸、有机碱、无机酸形成的盐。

在本发明的一些实施方式中，所述金属离子包括锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌和铝离子。

在本发明的一些实施方式中，所述有机碱包括：乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸和哌嗪。

在本发明的一些实施方式中，所述有机酸包括：乙酸、柠檬酸、乳酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、延胡索酸、苯甲酸、天冬氨酸、谷氨酸、琥珀酸、油酸、三氟乙酸、草酸、扑酸和葡萄糖酸。

在本发明的一些实施方式中，所述无机酸包括：盐酸、硫酸、硼酸和碳酸。

在本发明的一些实施方式中，所述三肽衍生物包括所述三肽经化学键修饰后得到的衍生物，所述化学键修饰包括N-末端修饰、C-末端修饰和CH-末端修饰。

在本发明的一些实施方式中，所述修饰包括但不限于甲基化、乙酰化、己酰基化、辛酰基化、羟基化、羧基化、磷酸化、糖基化、棕榈酰基化、硬脂酰基化、月桂酰基化、肉豆蔻酰基化和油酰基化。

在本发明的一些实施方式中，所述三肽包括如SEQ ID NO：1～5所示的氨基酸序列。

在本发明的一些实施方式中，所述三肽还包括在SEQ ID NO：1～5所示的氨基酸序列两端插入氨基酸残基、序列同一性大于等于90％且保有功能活性的多肽序列。

在本发明的一些实施方式中，所述序列同一性大于等于92％。

在本发明的一些实施方式中，所述序列同一性大于等于95％。

在本发明的一些实施方式中，所述序列同一性大于等于99％。

在本发明中，术语“保有功能活性”是指具有与SEQ ID NO：1～5所示的氨基酸序列在抗氧化、促进细胞迁移或抑制酪氨酸酶中至少一个方面具有相同或相近的功能效果。

在本发明的一些实施方式中，所述多肽序列至少具有与SEQ ID NO：1～5所示的氨基酸序列在抗氧化、促进细胞迁移或抑制酪氨酸酶中至少一个方面50％、75％或90％的功能效果。

在本发明的一些实施方式中，所述多肽序列同时具有抗氧化、促进细胞迁移和抑制酪氨酸酶效果。

本发明的第二个方面，提供编码本发明第一个方面所述三肽、其的盐或其衍生物的核酸分子。

在本发明的一些实施方式中，所述核酸分子还包括与其序列同一性≥90％的核苷酸序列。

在本发明的一些实施方式中，所述核酸分子还包括与其序列同一性≥95％的核苷酸序列。

在本发明的一些实施方式中，所述核酸分子还包括与其序列同一性≥99％的核苷酸序列。

在本发明的一些实施方式中，所述核苷酸序列翻译得到的肽保有抗氧化、促进细胞迁移或抑制酪氨酸酶中至少一个方面的功能效果。

在本发明的一些实施方式中，所述核苷酸序列翻译得到的肽同时具有抗氧化、促进细胞迁移和抑制酪氨酸酶效果。

本发明的第三个方面，提供含有本发明第二个方面所述核酸分子的表达载体。

在本发明的一些实施方式中，所述三肽、其盐或其衍生物由一个或多个表达载体共同编码。

本发明的第四个方面，提供含有本发明第三个方面所述表达载体的转化子。

在本发明的一些实施方式中，所述转化子包括微生物和细胞。

在本发明中，术语“微生物”广义地指细菌、真菌、病毒和原生动物。特别地，该术语适用于具有脂质双层膜的细胞或结构组分的微生物。在本发明的一些实施方式中，所述膜是细胞质膜。细菌可包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

在本发明的一些实施方式中，所述细胞是分离的细胞。

在本发明的一些实施方式中，所述细胞是原位细胞，其可以是活组织、器官或包括来自人的动物细胞。

在本发明的一些实施方式中，所述细胞是真核细胞。

本发明的第五个方面，提供一种组合物，所述组合物中含有本发明第一个方面所述的三肽、其盐或其衍生物。

在本发明的一些实施方式中，所述组合物还含有其他辅剂。

在本发明的一些实施方式中，所述辅剂包括美容上或药学上可接受的辅剂或载体、食品添加剂和化妆品领域中的辅剂。

在本发明中，术语“美容上或药学上可接受的载体”是指可用于本发明所公开的方法中的常规美容原料或药物载体。可以参见Remington's pharmaceutical sciences,ewmartin,mack publishing co.,easton,pa.,第15版(1975)。

在本发明的一些实施方式中，所述美容上或药学上可接受的辅剂包括但不限于稀释剂(如淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、甘露醇等)、吸收剂(如硫酸钙、磷酸氢钙等)、润湿剂(如乙醇)、粘合剂(如羟丙甲纤维素、聚维酮等)、崩解剂(如羟甲基淀粉钠、交联聚维酮等)、润滑剂(如滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇等)、着色剂(如二氧化钛、亚甲蓝等)、包衣材料、溶剂、pH调节剂、抗菌剂(如亚硫酸钠、硫代硫酸钠等)、等渗调节剂(如葡萄糖、氯化钠等)、螯合剂(如EDTA二钠)。

在本发明的一些实施方式中，所述食品添加剂包括但不限于着色剂、酶制剂、增稠剂、膨松剂、甜味剂。

本发明的第六个方面，提供本发明第一个方面所述的三肽、其盐或其衍生物在制备食品、药品和化妆品中的应用。

在本发明的一些实施方式中，所述食品、药品和化妆品具有如下(1)～(3)中至少一项中的功能：

(1)抗氧化；

(2)促进细胞迁移；

(3)抑制酪氨酸酶。

在本发明的一些实施方式中，所述促进细胞迁移具体体现为促进血管生成、促进伤口愈合、促进皮肤修复等。

在本发明的一些实施方式中，抑制酪氨酸酶可以有效抑制黑色素生成，从而增白提亮。

本发明的有益效果是：

本发明中首次发现了一种三肽，其同时兼具有抗氧化、促进细胞迁移、抑制酪氨酸酶活性。相比于现有的单一功效肽而言具有更广泛的应用场景，且分子量较小(仅为500Da左右)，相比其他大分子多肽而言具有更加好的透皮潜力，有利于其作为药品或化妆品原料的使用。

附图说明

图1为本发明实施例中的三肽的抗氧化效果。

图2为本发明实施例中的三肽的促进细胞迁移效果。

图3为本发明实施例中的三肽的酪氨酸酶活性抑制效果。

具体实施方式

以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。实施例和对比例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有技术方法得到。除非特别说明，试验或测试方法均为本领域的常规方法。

三肽的设计与构建

在本发明中，发明人发现基于如下式I构建得到的三肽兼具有抗氧化、促进细胞迁移、降低黑色素生成作用。

X

式I

其中，AA1选自Trp、His、Phe、Arg或Thr中的一种；

AA2选自Phe、Trp、Arg或Ala中的一种；

AA3选自His、Trp、Thr或Phe中的一种；

X

AA1～AA3的可选残基包括L和D构型，其可以经过本领域常见修饰，包括但不限于甲基化、乙酰化、己酰基化、辛酰基化、羟基化、羧基化、磷酸化、糖基化、棕榈酰基化、硬脂酰基化、月桂酰基化、肉豆蔻酰基化和油酰基化等。

在本发明中，上述三肽设计完成后交由生物化学公司合成，并取以下5种三肽(如表1)用于后续验证性试验。

表1抗氧化、促进细胞迁移、降低黑色素生成作用的三肽

三肽的细胞抗氧化性验证

在本实施例中，以人皮肤成纤维细胞(HSF)作为测试对象，检测上述三肽的抗氧化效果。

具体试验步骤如下：

在5％ CO

用单因素方差分析(ANOVA)来检验无H

可以发现，相对于Con组(无H

三肽的促进细胞迁移效果验证

在本实施例中，以人永生化角质形成细胞(HaCaT)作为测试对象，检测上述三肽对细胞迁移的促进效果。

具体试验步骤如下：

在5％ CO

采用单因素方差分析(ANOVA)来检验含多肽组(P1等)与不含多肽组(Con)统计学差异，其中，*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示P<0.001和****表示p<0.0001。结果如图2所示。

可以发现，相比于无多肽干预的Con组，使用上述实施例中的P1～P5干预后的组的细胞迁移率显著上升，从而可以说明，上述三肽对细胞迁移具有促进效果。

三肽的酪氨酸酶抑制效果

酪氨酸酶的表达和活性决定着黑色素生成的速度和产量，一般来说，酪氨酸酶活性越高，皮肤中黑色素形成的量就越多。在本实施例中，通过验证上述三肽对于酪氨酸酶抑制效果来展示其所具有的抑制黑色素生成的效果。

具体试验步骤如下：

在96孔板中分别添加50μL浓度为1mM和5mM的上述不同多肽溶液，然后加入150μL浓度为1mg/mL的左旋多巴溶液，震荡混合后，再加入50μL浓度为110U/mL酪氨酸酶溶液。在10s内用酶标仪在475nm下测定吸光值作为初始吸光值。然后将其置于37℃下孵育20min后，再次测定吸光值。分别计算空白组(不加入任何多肽组)和样品组(加入多肽样品组)两次吸光值变化量。通过如下公式来计算样品的酪氨酸酶抑制率。

结果如图3所示。

可以发现，上述三肽均显示出了一定的酪氨酸酶抑制效果，且总体上显示出明显的剂量依赖性。高浓度下的三肽给药极大地增强了酪氨酸酶抑制效果。因此，可以说明，上述三肽具有极好的抑制黑色素生成效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。