一种水痘带状疱疹病毒疫苗及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种水痘带状疱疹病毒疫苗及其应用，特别涉及一种基于黑猩猩腺病毒载体AdC68XY3的新型水痘带状疱疹病毒疫苗及其应用。

背景技术

水痘带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus，VZV)是导致水痘(Varicella orChickenpox) 和带状疱疹(Zoster or Shingles)的病原体。VZV是一种普遍存在且特异性感染人类的α型疱疹病毒，在其他动物体中不会发生感染或受高度限制，这也使得VZV感染的病理机制研究极具挑战。流行病学证据表明，VZV主要感染人体的T淋巴细胞、上皮细胞和神经元细胞，且主要在细胞间传播，CD4和CD8 T淋巴细胞对宿主的抗病毒防御比特异性抗体更为重要。首次感染VZV会引发水痘，特别是在婴幼儿或免疫力缺陷的个体中会诱发局部或全身性的严重水痘疱疹。初次感染VZV时，VZV颗粒会通过T细胞病毒血症或皮肤复制部位，沿逆向轴突运输到不同部位神经节神经元中，建立潜伏感染直至个体康复也不会被彻底清除。伴随个体年龄的增长，或者免疫力缺陷个体的免疫功能下降，其针对VZV的细胞免疫 (Cell-Mediated Immunity，CMI)减弱，潜伏在神经元中的VZV被重新激活而发展为带状疱疹。成人水痘病人的抗病毒CMI研究表明，疾病严重程度与病毒载量呈正相关，与T淋巴细胞的抗病毒特异性细胞反应呈负相关。

VZV极具传染性，可通过空气途径传播。水痘病人和带状疱疹病人的皮肤疱疹囊泡中含有高度传染性的病毒，染毒皮肤细胞和VZV(Cell-free)会经常脱落，被认为是空气传播病毒的主要来源。水痘每年都会在全世界范围内流行，特别是孩童但不排除成人，其感染发病一般在冬季和春季，发病率约为13-16‰。由于针对VZV的CMI随年龄的增长而下降，带状疱疹发病率和严重性均有所增加。带状疱疹会导致一系列并发症，包括有慢性带状疱疹后神经痛(Postherpetic Neuralgia，PHN)、脑膜炎、脊髓炎、颅神经麻痹、血管病、角膜炎和视网膜病等其他严重的神经和眼部疾病，以及溃疡、肝炎和胰腺炎等多种内脏或胃肠道疾病。 PHN是带状疱疹最严重的并发症，约15％的带状疱疹病人长时间饱受病痛折磨。年龄也是 PHN的重要风险因子，特别是超过50岁的人群。在带状疱疹疫苗上市之前，约1/3的成年人易发带状疱疹。

预防性水痘疫苗的研发可追溯至1970年代，由日本科学家高桥理明(MichiakiTakahashi) 成功研制减毒活疫苗株(vOka)，现在使用的冻干水痘减毒活疫苗是在其基础上形成。今天水痘疫苗极大改善了人们的生活质量，孩子们不会因为感染水痘生病缺课或者感染导致的严重病发症住院。对水痘易感的成人也可通过接种水痘疫苗获益。在最近一项随机对照的研究中发现水痘疫苗的有效率是65.4％(一剂)和94.9％(两剂)。

早期带状疱疹疫苗的研发在水痘疫苗的基础上展开，默沙东公司于2006年在美国获批的 Zostavax同样为减毒活疫苗，其PFU(空斑形成单位)是水痘疫苗的至少12倍。该疫苗有效率在50-59岁人群中为69.8％，在60-69岁人群中为64％；预防PHN的效力在60岁以上人群中为66.5％，在70岁以上人群中为37％。但由于该疫苗为减毒活病毒，接种后有一定增加患病的风险，特别是免疫缺陷或免疫力低的人群，所以Zostavax暂未在中国获批。此外，葛兰素史克公司研制并于2017年上市的Shingrix为VZVgE重组蛋白疫苗(AS01B佐剂)，其有效率高于减毒疫苗，在50-59岁人群中为96.6％，在60-69岁人群中为97.4％，在70-79岁人群中为90％，在80岁以上人群中为89.2％。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于黑猩猩腺病毒载体AdC68XY3的新型水痘带状疱疹病毒疫苗及其应用。

为了实现上述目的，本发明首先提供了一种重组病毒，所述重组病毒为如下A1)-A8) 中任一种：

A1)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白的重组腺病毒；

A2)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和CPG序列的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白的重组腺病毒；

A3)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和细胞因子IL21编码基因的DNA分子插入 AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白和细胞因子 IL21的重组腺病毒；

A4)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和T细胞共刺激分子CD40L编码基因的 DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白和T细胞共刺激分子CD40L的重组腺病毒；

A5)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子和含有三聚体孔蛋白ProB编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白和三聚体孔蛋白ProB的重组腺病毒；

A6)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组 DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白和水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白的重组腺病毒；

A7)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因的 DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白和水痘带状疱疹病毒gH蛋白的重组腺病毒；

A8)将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因的 DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA得到的，表达水痘带状疱疹病毒gE蛋白和水痘带状疱疹病毒gB蛋白的重组腺病毒；

所述AdC68XY3-empty空载病毒的基因组DNA的核苷酸序列如序列1所示。

上述重组病毒中，所述水痘带状疱疹病毒gE蛋白的氨基酸序列如序列4所示。

所述细胞因子IL21的氨基酸序列如序列10所示。

所述T细胞共刺激分子CD40L的氨基酸序列如序列12所示。

所述三聚体孔蛋白ProB的氨基酸序列如序列15所示。

所述水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白的氨基酸序列如序列18所示。

所述水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白的氨基酸序列如序列21所示。

所述水痘带状疱疹病毒gH蛋白的氨基酸序列如序列23所示。

所述水痘带状疱疹病毒gB蛋白的氨基酸序列如序列25所示。

进一步的，所述水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因如序列3(含有终止子)或序列3中第 1-1869位(不含有终止子)所示。具体地，上述A1)和A2)所述重组病毒中，所述水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因如序列3所示，上述A3)-A8)所述重组病毒中，所述水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因如序列3中第1-1869位所示。

所述细胞因子IL21编码基因如序列9所示。

所述T细胞共刺激分子CD40L编码基因如序列11所示。

所述三聚体孔蛋白ProB编码基因如序列14所示。

所述水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因如序列17所示。

所述水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因如序列20所示。

所述水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因如序列22所示。

所述水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因如序列24所示。

所述CPG序列如序列6所示。所述CPG序列可为2-10个连续重复的CPG序列。

又进一步的，所述A1)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和BGH polyA信号a。

所述A2)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和CPG序列的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、含有4个连续重复的CPG序列的DNA分子和BGH polyA信号a。

所述A3)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和细胞因子IL21编码基因的 DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、细胞因子IL21编码基因和BGH polyA信号a。

所述A4)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和T细胞共刺激分子CD40L编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a 序列、T细胞共刺激分子CD40L编码基因和BGH polyA信号a。

所述A5)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和BGH polyA信号a；所述含有三聚体孔蛋白ProB 编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子b、三聚体孔蛋白ProB编码基因和BGH polyA信号 b。

所述A6)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因、连接子 f2a序列、水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因和BGH polyA信号a。

所述A7)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a 序列、水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因和BGH polyA信号a。

所述A8)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因的DNA分子依次包括CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a 序列、水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因和BGH polyA信号a。

上述任一所述CMV启动子a的核苷酸序列如序列2所示。

上述任一所述BGH polyA信号a的核苷酸序列如序列5所示。

上述任一所述含有4个连续重复的CPG序列的DNA分子的核苷酸序列如序列7所示。

上述任一所述连接子p2a序列如序列8所示。

上述任一所述连接子f2a序列如序列19所示。

上述任一所述CMV启动子b的核苷酸序列如序列13所示。

上述任一所述BGH polyA信号b的核苷酸序列如序列16所示。

再进一步的，所述A1)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和BGH polyA信号a组成；

所述A2)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和CPG序列的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、含有4个连续重复的CPG序列的DNA分子和BGH polyA信号a组成；

所述A3)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和细胞因子IL21编码基因的 DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、细胞因子IL21编码基因和BGH polyA信号a组成；

所述A4)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和T细胞共刺激分子CD40L编码基因的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、 T细胞共刺激分子CD40L编码基因和BGH polyA信号a组成；

所述A5)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和BGH polyA信号a组成；所述含有三聚体孔蛋白ProB 编码基因的DNA分子依次由CMV启动子b、三聚体孔蛋白ProB编码基因和BGH polyA信号b组成；

所述A6)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因、连接子f2a 序列、水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因和BGH polyA信号a组成；

所述A7)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因和BGH polyA信号a组成；

所述A8)中，所述含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因的DNA分子依次由CMV启动子a、水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、连接子p2a序列、水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因和BGH polyA信号a组成。

更进一步的，所述A1)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的 DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒；

所述A2)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和CPG序列的 DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒；

所述A3)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和细胞因子IL21 编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒；

所述A4)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和T细胞共刺激分子CD40L编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒；

所述A5)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子插入 AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区，且将含有三聚体孔蛋白ProB编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E3删除区得到的重组腺病毒；

所述A6)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒；

所述A7)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒；

所述A8)中，所述重组病毒为将含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因的DNA分子插入AdC68XY3-empty空载病毒的E1删除区得到的重组腺病毒。

上述任一所述E1删除区可为序列1第518-624位所示。

上述任一所述E3删除区可为序列1第25317-25318位所示。

上述任一所述插入为广义插入，既可以为插入E1删除区或E3删除区中任意两个相邻核苷酸之间，也可以为插入E1删除区或E3删除区中任意两个不相邻核苷酸之间(即替换部分核苷酸)。

在本发明的具体实施例中，所述A1)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子后得到的重组腺病毒；

所述A2)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和CPG序列的DNA分子后得到的重组腺病毒；

所述A3)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和细胞因子IL21编码基因的DNA分子后得到的重组腺病毒；

所述A4)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和T细胞共刺激分子CD40L编码基因的DNA分子后得到的重组腺病毒；

所述A5)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因的DNA分子，且在AdC68XY3-empty空载病毒第25317-25318位间插入含有三聚体孔蛋白ProB编码基因的DNA分子后得到的重组腺病毒；

所述A6)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因、水痘带状疱疹病毒Orf9蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒Orf63蛋白编码基因的DNA分子后得到的重组腺病毒；

所述A7)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gH蛋白编码基因的DNA 分子后得到的重组腺病毒；

所述A8)中，所述重组病毒为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为含有水痘带状疱疹病毒gE蛋白编码基因和水痘带状疱疹病毒gB蛋白编码基因的DNA 分子后得到的重组腺病毒。

为了实现上述目的，本发明还提供了上述重组病毒的新用途。

本发明提供了上述重组病毒在如下X1)-X5)中任一种中的应用：

X1)作为水痘带状疱疹疫苗；

X2)作为抗水痘带状疱疹病毒药物；

X3)制备水痘带状疱疹疫苗；

X4)制备抗水痘带状疱疹病毒药物；

X5)制备预防和/或治疗水痘或带状疱疹的产品。

为了实现上述目的，本发明最后提供了一种产品，所述产品的活性成分为上述重组病毒；所述产品的用途为如下Z1)或Z2)：

Z1)抗水痘带状疱疹病毒；

Z2)预防和/或治疗水痘或带状疱疹。

上述任一所述应用或产品中，所述产品可为疫苗或药物。所述疫苗可为预防性疫苗或治疗性疫苗。

所述疫苗的免疫剂量可为(0.1-10)×10

所述疫苗的免疫对象可为哺乳动物，所述哺乳动物包括小鼠、猴和人。

所述疫苗的免疫次数可为一次或两次或多次。

所述疫苗的免疫方式可为肌肉注射、皮下注射或鼻腔喷雾。

在本发明的具体实施例中，所述疫苗的免疫对象为小鼠，具体为6-8周龄Balb/c雌性小鼠，免疫剂量为5×10

需要的时候，在上述疫苗中还可加入佐剂或免疫增强剂或免疫调节剂或其他疫苗。

需要的时候，在上述药物中还可加入药学上可接受的载体。

本发明利用复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体AdC68XY3成功构建并鉴定了8株重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE，AdC68XY3-gE-CPG，AdC68XY3-gE-IL21，AdC68XY3-gE-CD40L，AdC68XY3-gE-ProB，AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63，AdC68XY3-gE-gH及AdC68XY3-gE-gB。通过使用小鼠模型，检测了8株重组黑猩猩腺病毒免疫后，激发特异性VZVgE的T细胞反应及血清特异性VZVgE的抗体反应，结果显示：本发明制备的8株重组黑猩猩腺病毒均能诱导较强的抗病毒特异性免疫反应。更重要的是，与已上市的减毒活疫苗(Zostavax)和重组蛋白疫苗(Shingrix)仅能诱导抗病毒CD4 T细胞反应不同，本发明制备的8株重组黑猩猩腺病毒在诱导强的抗病毒CD4 T细胞反应的同时能诱导极强的抗病毒CD8 T细胞反应。因此，本发明的8株重组黑猩猩腺病毒可作为新型水痘带状疱疹候选疫苗。

附图说明

图1为8株以重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3为载体的新型水痘带状疱疹候选疫苗基本信息。

图2为pAdC68XY3-empty空载质粒图谱及其鉴定。A为pAdC68XY3-empty空载质粒图谱；B为使用ApaI，BglII，XhoI酶切pAdC68XY3-empty电泳模拟图；C为使用ApaI，BglII，XhoI酶切pAdC68XY3-empty真实电泳图谱。

图3为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE图谱及其鉴定。A为pAdC68XY3-gE质粒图谱；B为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE电泳模拟图；C为使用ApaI，BglII， MfeI酶切pAdC68XY3-gE真实电泳图谱。

图4为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-CPG图谱及其鉴定。A为pAdC68XY3-gE-CPG质粒图谱；B为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-CPG电泳模拟图；C为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-CPG真实电泳图谱。

图5为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-IL21图谱及其鉴定。A为 pAdC68XY3-gE-IL21质粒图谱；B为使用ApaI，MfeI，XhoI酶切pAdC68XY3-gE-IL21电泳模拟图；C为使用ApaI，MfeI，XhoI酶切pAdC68XY3-gE-IL21真实电泳图谱。

图6为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-CD40L图谱及其鉴定。A为pAdC68XY3-gE-CD40L质粒图谱；B为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-CD40L 电泳模拟图；C为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-CD40L真实电泳图谱。

图7为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-ProB图谱及其鉴定。A为 pAdC68XY3-gE-ProB质粒图谱；B为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-ProB电泳模拟图；C为使用ApaI，BglII，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-ProB真实电泳图谱。

图8为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63图谱及其鉴定。A为pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63质粒图谱；B为使用ApaI，MfeI，XhoI酶切 pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63电泳模拟图；C为使用ApaI，MfeI，XhoI酶切 pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63真实电泳图谱。

图9为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-gH图谱及其鉴定。A为pAdC68XY3-gE-gH 质粒图谱；B为使用ApaI，XhoI，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-gH电泳模拟图；C为使用ApaI，XhoI，MfeI酶切pAdC68XY3-gE-gH真实电泳图谱。

图10为重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-gB图谱及其鉴定。A为 pAdC68XY3-gE-gB质粒图谱；B为使用ApaI，MfeI，XhoI酶切pAdC68XY3-gE-gB电泳模拟图；C为使用ApaI，MfeI，XhoI酶切pAdC68XY3-gE-gB真实电泳图谱。

图11为重组黑猩猩腺病毒基因组DNA酶切鉴定图谱。A为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-empty基因组DNA经ApaI，BglII，XhoI酶切鉴定图谱；B为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE基因组DNA经ApaI，BglII，MfeI酶切鉴定图谱；C为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG基因组DNA经ApaI，BglII，MfeI酶切鉴定图谱；D为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21基因组DNA经ApaI，MfeI，XhoI酶切鉴定图谱；E为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CD40L基因组DNA经BglII，MfeI，XhoI酶切鉴定图谱；F为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB基因组DNA经ApaI，BglII，MfeI酶切鉴定图谱；G为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63基因组DNA经ApaI，MfeI，XhoI酶切鉴定图谱； H为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gH基因组DNA经ApaI，MfeI，XhoI酶切鉴定图谱； I为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gB基因组DNA经ApaI，BglII，XhoI酶切鉴定图谱。

图12为蛋白免疫印迹检测VZVgE蛋白表达。A为不同剂量AdC68XY3-gE重组黑猩猩腺病毒感染HEK293细胞后表达VZVgE蛋白免疫印迹鉴定；B为不同剂量 AdC68XY3-gE-CPG重组黑猩猩腺病毒感染HEK293细胞后表达VZVgE蛋白免疫印迹鉴定； C为不同剂量AdC68XY3-gE-IL21重组黑猩猩腺病毒感染HEK293细胞后表达VZVgE蛋白免疫印迹鉴定；D为不同剂量AdC68XY3-gE-CD40L重组黑猩猩腺病毒感染HEK293细胞后表达VZVgE蛋白免疫印迹鉴定；E为不同剂量AdC68XY3-gE-ProB重组黑猩猩腺病毒感染 HEK293细胞后表达VZVgE免疫印迹鉴定；F为不同剂量AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63重组黑猩猩腺病毒感染HEK293细胞后表达VZVgE蛋白、VZVOrf9蛋白和VZVOrf63蛋白免疫印迹鉴定；G为不同剂量AdC68XY3-gE-gH重组黑猩猩腺病毒感染HEK293细胞后表达VZVgE 蛋白和VZVgH蛋白免疫印迹鉴定；H为不同剂量AdC68XY3-gE-gB重组黑猩猩腺病毒感染 HEK293细胞后表达VZVgE蛋白和VZVgB蛋白免疫印迹鉴定。

图13为重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠实验方案。

图14为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE免疫小鼠流式细胞术Gating策略分析图。

图15为重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠激发抗原VZVgE特异性CD4 T细胞反应。A为表达 IFNγ

图16为重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠激发抗原VZVgE特异性CD8 T细胞反应。A为表达 IFNγ

图17为重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠激发血清抗原VZVgE特异性抗体反应。A为重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠后，取第2周，第4周，第6周，第8周，第13周血清，检测抗原VZVgE 特异性抗体IgG的滴度水平；B为小鼠免疫后第6周gE特异性抗体IgG的滴度水平；C为小鼠免疫后第6周血清中表达gE特异性抗体IgG2a的表达水平；D为小鼠免疫后第6周血清中表达gE特异性抗体IgG2b的表达水平；E为小鼠免疫后第6周血清中表达gE特异性抗体IgG1 的表达水平。所使用的显著性分析方法为one-way ANOVA，数据表示为具有95％置信区间的几何平均(n＝5)。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中涉及的主要试剂及来源如下：针对VZVgE抗原共150条肽的肽库(每条肽长度为15个氨基酸，每10个氨基酸重叠)(金斯瑞)；细胞共刺激因子Anti-mouse CD28，Anti-mouse CD49d，Anti-mouse CD16/CD32，细胞因子分泌阻断剂GolgiPlug

实施例1、重组黑猩猩腺病毒的制备与鉴定

一、重组黑猩猩腺病毒质粒的构建及鉴定

根据NCBI上查找的Human herpesvirus 3strain VZVs/Shanghai.CHN/42.11/1glycoprotein E gene(Genebank:KC820942.1)，即编码VZVgE蛋白的基因orf68(CDS区共1872bp含终止密码子)按照human密码子进行优化，并于5’前端加上EcoRI酶切位点(gaattc)和Kozak 序列(gccacc)，3’端后加上HindIII酶切位点(aagctt)，密码子优化和合成由擎科生物完成。然后通过限制性酶切连接或DNA重组技术将VZVgE等目的基因插入含有CMV启动子和 BGH ployA的pShuttle质粒中，再利用稀有酶I-Ceu I和PI-Sce I将整个表达元件分别克隆至 pAdC68XY3-empty空载质粒中，构建得到如下8个重组黑猩猩腺病毒质粒：pAdC68XY3-gE、 pAdC68XY3-gE-CPG、pAdC68XY3-gE-IL21、pAdC68XY3-gE-CD40L、pAdC68XY3-gE-ProB、 pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63、pAdC68XY3-gE-gH和pAdC68XY3-gE-gB。pAdC68XY3-empty 空载质粒和8个重组黑猩猩腺病毒质粒基本信息如图1所示。详细信息如下：

pAdC68XY3-empty空载质粒图谱如图2A所示。使用ApaI，BglII，XhoI对pAdC68XY3-empty空载质粒进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图2B和图2C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE图谱如图3A所示。使用ApaI，BglII，MfeI对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图3B和图3C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-CPG图谱如图4A所示。使用ApaI，BglII，MfeI 对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-CPG进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图4B和图4C 所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-IL21图谱如图5A所示。使用ApaI，MfeI，XhoI 对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-IL21进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图5B和图5C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-CD40L图谱如图6A所示。使用ApaI，BglII，MfeI 对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-CD40L进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图6B和图6C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-ProB图谱如图7A所示。使用ApaI，BglII，MfeI 对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-ProB进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图7B和图7C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63图谱如图8A所示。使用ApaI，MfeI， XhoI对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图8B 和图8C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-gH图谱如图9A所示。使用ApaI，XhoI，MfeI对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-gH进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图9B和图9C所示。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-gB图谱如图10A所示。使用ApaI，MfeI，XhoI对重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE-gB进行酶切鉴定，酶切鉴定结果图10B和图10C所示。

上述各质粒的酶切鉴定结果可以看出，模拟电泳图与真实电泳图均完全一致，说明本发明成功构建了8个重组黑猩猩腺病毒质粒。

二、重组黑猩猩腺病毒的包装和扩增

1、重组黑猩猩腺病毒的包装

用Pac I分别单酶切pAdC68XY3-empty空载质粒及8个重组黑猩猩腺病毒质粒，得到线性化DNA，用Lipofectamine 2000(Invitrogen)分别将线性化DNA转染HEK293细胞(中科院上海生科院细胞库)。转染之前，先将细胞培养基换成无血清DMEM，然后加入按1:3混合的 DNA/Lipofectamine 2000脂质体复合物，细胞转染4-6小时后换成含5％FBS的DMEM培养基。转染后每天在显微镜下观察细胞病变，当细胞噬斑达到60％-80％时收集拯救病毒细胞悬液 (病毒液)。

重组黑猩猩腺病毒质粒pAdC68XY3-gE、pAdC68XY3-gE-CPG、pAdC68XY3-gE-IL21、pAdC68XY3-gE-CD40L、pAdC68XY3-gE-ProB、pAdC68XY3-gE-Orf9-Orf63、 pAdC68XY3-gE-gH和pAdC68XY3-gE-gB的线性化DNA经HEK293细胞包装后，分别得到重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE、AdC68XY3-gE-CPG、AdC68XY3-gE-IL21、 AdC68XY3-gE-CD40L、AdC68XY3-gE-ProB、AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63、AdC68XY3-gE-gH 和AdC68XY3-gE-gB。

pAdC68XY3-empty空载质粒的线性化DNA经HEK293细胞包装后，得到对照腺病毒AdC68XY3-empty(AdC68XY3-empty空载病毒)。

对照腺病毒AdC68XY3-empty(AdC68XY3-empty空载病毒)的核苷酸序列如序列1所示，其为将黑猩猩型腺病毒AdC68的基因组DNA改造后得到的新型黑猩猩腺病毒载体，改造后的载体中，E1区完全删除，且E3区部分删除，且E4区部分删除并替换为人5型腺病毒ORF6/7。该载体中的E1删除区为序列1第518-624位所示，E3删除区为序列1第25317-25318位所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的 DNA分子替换为VZVgE表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3)和BGH polyA信号a(序列5)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE 表达VZVgE蛋白，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为VZVgE-CPG4表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE-CPG4表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3)、含有4个连续重复CPG序列的DNA分子(序列7) 和BGHpolyA信号a(序列5)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG表达VZVgE蛋白， VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为VZVgE-p2a-IL21(human)表达元件，且保持pAdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE-p2a-IL21(human)表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3中第1-1869位)、连接子p2a序列(序列8)、细胞因子IL21编码基因序列(human)(序列9)和BGH polyA信号a(序列5) 组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21表达VZVgE蛋白和细胞因子IL21，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示，细胞因子IL21的氨基酸序列如序列10所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CD40L为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为VZVgE-p2a-CD40L(human)表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE-p2a-CD40L(human)表达元件依次由CMV 启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3中第1-1869位)、连接子p2a序列(序列8)、T细胞共刺激分子CD40L编码基因序列(human)(序列11)和BGH polyA信号a(序列5)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CD40L表达VZVgE蛋白和T细胞共刺激分子CD40L，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示，T细胞共刺激分子CD40L的氨基酸序列如序列12所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的DNA分子替换为VZVgE表达元件，且在AdC68XY3-empty空载病毒第25317-25318位间插入 ProB表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE 表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列 3)和BGH polyA信号a(序列5)组成；ProB表达元件依次由CMV启动子b(序列13)、三聚体孔蛋白ProB序列(Neisseria meningitidis)(序列14)和BGH polyA信号b(序列16)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB表达VZVgE蛋白和三聚体孔蛋白ProB，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示，三聚体孔蛋白ProB的氨基酸序列如序列15所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624 位所示的DNA分子替换为VZVgE-p2a-VZVOrf9-p2a-VZVOrf63表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中， VZVgE-p2a-VZVOrf9-f2a-VZVOrf63表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3中第1-1869位)、连接子p2a序列(序列8)、水痘带状疱疹病毒VZVOrf9序列(序列17)、连接子f2a序列(序列19)、水痘带状疱疹病毒VZVOrf63 序列(序列20)和BGH polyA信号a(序列5)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63 表达VZVgE蛋白、VZVOrf9蛋白和VZVOrf63蛋白，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示， VZVOrf9蛋白的氨基酸序列如序列18所示，VZVOrf63蛋白的氨基酸序列如序列21所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gH为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的 DNA分子替换为VZVgE-p2a-VZVgH表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE-p2a-VZVgH表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3中第1-1869位)、连接子p2a序列(序列8)、水痘带状疱疹病毒VZVgH序列(序列22)和BGH polyA信号a(序列5)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gH表达VZVgE蛋白和VZVgH蛋白，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示，VZVgH蛋白的氨基酸序列如序列23所示。

重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gB为将AdC68XY3-empty空载病毒第518-624位所示的 DNA分子替换为VZVgE-p2a-VZVgB表达元件，且保持AdC68XY3-empty空载病毒其它序列不变后得到的病毒。其中，VZVgE-p2a-VZVgB表达元件依次由CMV启动子a(序列2)、水痘带状疱疹病毒VZVgE密码子优化后序列(序列3中第1-1869位)、连接子p2a序列(序列8)、水痘带状疱疹病毒VZVgB(序列24)和BGH polyA信号a(序列5)组成。重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gB表达VZVgE蛋白和VZVgB蛋白，VZVgE蛋白的氨基酸序列如序列4所示，VZVgB蛋白的氨基酸序列如序列25所示。

2、重组黑猩猩腺病毒的扩增

按下述方法分别扩增以上8株重组黑猩猩腺病毒及对照腺病毒AdC68XY3-empty：将收集好的病毒液在室温与-80℃之间反复冻融3次后离心收集上清，感染适量HEK293细胞，感染24 小时细胞病变后按上述方法收获病毒细胞悬液。重组黑猩猩腺病毒在大量HEK293细胞中经3- 4次扩增后，最终收获约500-600mL的病毒细胞悬液，最后一次收集时离心收集细胞并加入10 mL无血清DMEM重悬细胞。

三、重组黑猩猩腺病毒浓缩纯化和滴度检测

按下述方法分别纯化并检测以上8株重组黑猩猩腺病毒及对照腺病毒AdC68XY3-empty 的滴度：使用1.2g/mL和1.4g/mL的氯化铯密度梯度离心分离浓缩重组黑猩猩腺病毒，浓缩后病毒使用液相色谱脱盐后去除氯化铯并将buffer置换为PBS缓冲液，最终得到2mL左右的病毒液，并加入终浓度为10％的甘油分成小份冻存于-80℃备用，使用Nanodrop测得9株重组黑猩猩腺病毒在A260的吸光值，将所得吸光值乘以1.1×10

8株重组黑猩猩腺病毒及对照腺病毒AdC68XY3-empty分别经扩增和纯化后得到的病毒液的滴度如表1所示。

表1、病毒滴度

四、重组黑猩猩腺病毒基因组酶切鉴定

分别取一小份冻存的8株重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE、AdC68XY3-gE-CPG、AdC68XY3-gE-IL21、AdC68XY3-gE-CD40L、AdC68XY3-gE-ProB、AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63、AdC68XY3-gE-gH、AdC68XY3-gE-gB及对照腺病毒pAdC68XY3-empty，待病毒于室温完全融化后，使用DNeasy Blood&Tissue Kit抽提病毒基因组DNA，并使用50-100μL去离子水洗脱基因组DNA。然后使用ApaI、BglII、XhoI或MfeI对各病毒基因组进行酶切鉴定。

酶切鉴定结果如图11所示。从图中可以看出：所有电泳条带均清晰可见，表明浓缩纯化得到的病毒可用于后续动物免疫实验。

五、蛋白免疫印迹检测VZVgE蛋白表达

分别取8株重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE、AdC68XY3-gE-CPG、AdC68XY3-gE-IL21、 AdC68XY3-gE-CD40L、AdC68XY3-gE-ProB、AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63、AdC68XY3-gE-gH 和AdC68XY3-gE-gB及对照腺病毒pAdC68XY3-empty感染HEK293细胞，2×10

结果如图12所示，10

实施例2、重组黑猩猩腺病毒作为水痘带状疱疹疫苗的免疫效果

一、免疫方法

重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠实验方案如图13所示。具体如下：

6-8周龄Balb/c雌性小鼠(百奥赛图)分为如下9组：

Group1：免疫对照腺病毒AdC68XY3-empty；

Group2：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE；

Group3：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG；

Group4：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21；

Group5：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CD40L；

Group6：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB；

Group7：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63；

Group8：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gH；

Group9：免疫重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-gB。

每组免疫方法具体如下：第0周肌肉免疫上述重组黑猩猩腺病毒(5×10

小鼠脾细胞流式细胞术检测VZVgE特异性T细胞反应的具体步骤如下：小鼠牺牲后使用75％酒精全身消毒，取出脾脏。研磨脾脏后过40μm滤网得到细胞，然后冰上裂解红细胞，离心后重悬脾细胞并计数。取5×10

小鼠血清ELISA检测VZVgE特异性抗体反应的具体步骤如下：用包被稀释液按100ng/孔包被重组VZVgE蛋白，ELISA板4℃孵育过夜。第二天，PBST(PBS缓冲液含0.5％Tween-20) 洗板1次。然后200μL/孔加入5％脱脂牛奶(w/v，溶解于PBST中)37℃封闭2小时，PBST洗板3次。使用0.5％脱脂牛奶(w/v，溶解于PBST中)按1:100起始稀释，并采用2倍倍比法稀释待测小鼠血清，100μL/孔加入稀释样本，ELISA板37℃孵育2小时。PBST洗板5次，100μL/ 孔加入HRP(辣根过氧化酶)标记的Anti-mouse IgG作为酶标二抗(1:10000稀释于PBST中)， 37℃孵育1小时。用PBST洗板7次。加入TMB显色液置于室温避光显色3-5分钟，待显色完成后加入2M H

二、小鼠免疫重组黑猩猩腺病毒后VZVgE特异CD4 T细胞反应检测结果

抗原VZVgE特异性的CD4 T细胞反应流式分析结果如图14和图15所示。图14为重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE免疫组其中一只小鼠的流式数据Gating结果。

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，8株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌IFNγ

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，6株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌IL2

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，7株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌TNFα

通过Boolean Gates分析，与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，本发明的8株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌IFNγ

为了确定本发明中8株重组黑猩猩腺病毒是否会影响T细胞的多功能性，本发明使用 Boolean Combination Gates分析了CD4

三、小鼠免疫重组黑猩猩腺病毒后VZVgE特异CD8 T细胞反应检测结果

抗原VZVgE特异性的CD8 T细胞反应流式分析结果如图14和如图16所示。

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，6株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌IFNγ

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，8株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌IL2

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，5株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌TNFα

通过Boolean Gates分析，与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，本发明的8株重组黑猩猩腺病毒免疫组分泌表达FNγ

为了确定本发明中8株重组黑猩猩腺病毒是否会影响T细胞的多功能性，本发明使用 Boolean Combination Gates分析了CD8

综上所述，本发明研制的8株重组黑猩猩腺病毒作为水痘带状疱疹候选疫苗在诱导CD4 T 细胞反应的同时能诱导很强的CD8 T细胞反应。这与目前已上市的两种水痘带状疱疹疫苗仅能诱导CD4 T细胞反应有明显不同。

四、小鼠血清ELISA检测VZVgE特异性抗体反应

抗原VZVgE特异性的IgG抗体反应ELISA检测结果如图17所示。

与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，8株重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠2周后，均能成功诱导较强的VZVgE特异性IgG抗体免疫应答(AdC68XY3-gE-gH与AdC68XY3-gE-gB未显示)，并在第4周后均保持稳定，在第13周检测时仍维持在较高水平(图17A)。与对照腺病毒AdC68XY3-empty相比，6株重组黑猩猩腺病毒免疫小鼠6周后血清中的VZVgE特异性IgG抗体滴度均有显著提高(图17B)，其中，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了318.6倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了301.6倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21 比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了228.9倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒 AdC68XY3-gE-CD40L比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了241.7倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了282.8倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了245.1倍(p< 0.001)。这些结果都表明本发明中的重组黑猩猩腺病毒作为水痘带状疱疹候选疫苗都能较强地激发抗原特异性IgG抗体免疫反应。

为了进一步分析免疫小鼠的分型IgGs免疫应答，本发明还分别检测了VZVgE特异性的 IgG2a、IgG2b和IgG1抗体反应。结果表明：与对照组腺病毒AdC68XY3-empty相比，5株重组黑猩猩腺病毒免疫6周后诱导的VZVgE特异性IgG2a抗体反应显著提高(图17C)，其中，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了30.0倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了38.7倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了23.1倍(p<0.01)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了31.1倍(p <0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了 17.6倍(p<0.001)。

与对照组腺病毒AdC68XY3-empty相比，6株重组黑猩猩腺病毒免疫6周后诱导的VZVgE 特异性IgG2b抗体反应显著提高(图17D)，其中，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了61.0倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了55.8倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21 比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了58.0倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CD40L比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了59.1倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了53.3倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-Orf9-Orf63比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了51.2倍(p<0.001)。

与对照组腺病毒AdC68XY3-empty相比，5株重组黑猩猩腺病毒免疫6周后诱导的VZVgE 特异性IgG1抗体反应显著提高(图17E)，其中，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了16.5倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-CPG比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了16.0倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-IL21比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了10.3倍(p<0.05)，重组黑猩猩腺病毒 AdC68XY3-gE-CD40L比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了13.5倍(p<0.001)，重组黑猩猩腺病毒AdC68XY3-gE-ProB比对照腺病毒AdC68XY3-empty提高了15.8倍(p<0.01)。

综上所述，本发明研制的8株重组黑猩猩腺病毒作为水痘带状疱疹候选疫苗都能较强地激发均衡的抗原特异性抗体反应。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 苏州相奕生物技术有限公司

<120> 一种水痘带状疱疹病毒疫苗及其应用

<160> 25

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 30510

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 1

ccatcttcaa taatatacct caaacttttt gtgcgcgtta atatgcaaat gaggcgtttg 60

aatttgggga ggaagggcgg tgattggtcg agggatgagc gaccgttagg ggcggggcga 120

gtgacgtttt gatgacgtgg ttgcgaggag gagccagttt gcaagttctc gtgggaaaag 180

tgacgtcaaa cgaggtgtgg tttgaacacg gaaatactca attttcccgc gctctctgac 240

aggaaatgag gtgtttctgg gcggatgcaa gtgaaaacgg gccattttcg cgcgaaaact 300

gaatgaggaa gtgaaaatct gagtaatttc gcgtttatgg cagggaggag tatttgccga 360

gggccgagta gactttgacc gattacgtgg gggtttcgat taccgtgttt ttcacctaaa 420

tttccgcgta cggtgtcaaa gtccggtgtt tttacgtacg atatcatttc cccgaaagtg 480

ccacctgacc gtaactataa cggtcctaag gtagcgagag acccaagctg gctagcgttt 540

aaacgggccc tctagactcg agcggccgcc actgtgctgg atgatccgag ctcggtacca 600

agcttaagtt taaaccgctg atcaatctat gtcgggtgcg gagaaagagg taatgaaatg 660

gtattatggg tattatgggt ctgcattaat gaatcggtca gatatcgaca tatgctggcc 720

accgtacatg tggcttccca tgctcgcaag ccctggcccg agttcgagca caatgtcatg 780

accaggtgca atatgcatct ggggtcccgc cgaggcatgt tcatgcccta ccagtgcaac 840

ctgaattatg tgaaggtgct gctggagccc gatgccatgt ccagagtgag cctgacgggg 900

gtgtttgaca tgaatgtgga ggtgtggaag attctgagat atgatgaatc caagaccagg 960

tgccgagcct gcgagtgcgg agggaagcat gccaggttcc agcccgtgtg tgtggatgtg 1020

acggaggacc tgcgacccga tcatttggtg ttgccctgca ccgggacgga gttcggttcc 1080

agcggggaag aatctgacta gagtgagtag tgttctgggg cgggggagga cctgcatgag 1140

ggccagaata actgaaatct gtgcttttct gtgtgttgca gcagcatgag cggaagcggc 1200

tcctttgagg gaggggtatt cagcccttat ctgacggggc gtctcccctc ctgggcggga 1260

gtgcgtcaga atgtgatggg atccacggtg gacggccggc ccgtgcagcc cgcgaactct 1320

tcaaccctga cctatgcaac cctgagctct tcgtcgttgg acgcagctgc cgccgcagct 1380

gctgcatctg ccgccagcgc cgtgcgcgga atggccatgg gcgccggcta ctacggcact 1440

ctggtggcca actcgagttc caccaataat cccgccagcc tgaacgagga gaagctgttg 1500

ctgctgatgg cccagctcga ggccttgacc cagcgcctgg gcgagctgac ccagcaggtg 1560

gctcagctgc aggagcagac gcgggccgcg gttgccacgg tgaaatccaa ataaaaaatg 1620

aatcaataaa taaacggaga cggttgttga ttttaacaca gagtctgaat ctttatttga 1680

tttttcgcgc gcggtaggcc ctggaccacc ggtctcgatc attgagcacc cggtggatct 1740

tttccaggac ccggtagagg tgggcttgga tgttgaggta catgggcatg agcccgtccc 1800

gggggtggag gtagctccat tgcagggcct cgtgctcggg ggtggtgttg taaatcaccc 1860

agtcatagca ggggcgcagg gcatggtgtt gcacaatatc tttgaggagg agactgatgg 1920

ccacgggcag ccctttggtg taggtgttta caaatctgtt gagctgggag ggatgcatgc 1980

ggggggagat gaggtgcatc ttggcctgga tcttgagatt ggcgatgtta ccgcccagat 2040

cccgcctggg gttcatgttg tgcaggacca ccagcacggt gtatccggtg cacttgggga 2100

atttatcatg caacttggaa gggaaggcgt gaaagaattt ggcgacgcct ttgtgcccgc 2160

ccaggttttc catgcactca tccatgatga tggcgatggg cccgtgggcg gcggcctggg 2220

caaagacgtt tcgggggtcg gacacatcat agttgtggtc ctgggtgagg tcatcatagg 2280

ccattttaat gaatttgggg cggagggtgc cggactgggg gacaaaggta ccctcgatcc 2340

cgggggcgta gttcccctca cagatctgca tctcccaggc tttgagctcg gaggggggga 2400

tcatgtccac ctgcggggcg ataaagaaca cggtttccgg ggcgggggag atgagctggg 2460

ccgaaagcaa gttccggagc agctgggact tgccgcagcc ggtggggccg tagatgaccc 2520

cgatgaccgg ctgcaggtgg tagttgaggg agagacagct gccgtcctcc cggaggaggg 2580

gggccacctc gttcatcatc tcgcgcacgt gcatgttctc gcgcaccagt tccgccagga 2640

ggcgctctcc ccccagggat aggagctcct ggagcgaggc gaagtttttc agcggcttga 2700

gtccgtcggc catgggcatt ttggagaggg tttgttgcaa gagttccagg cggtcccaga 2760

gctcggtgat gtgctctacg gcatctcgat ccagcagacc tcctcgtttc gcgggttggg 2820

acggctgcgg gagtagggca ccagacgatg ggcgtccagc gcagccaggg tccggtcctt 2880

ccagggtcgc agcgtccgcg tcagggtggt ctccgtcacg gtgaaggggt gcgcgccggg 2940

ctgggcgctt gcgagggtgc gcttcaggct catccggctg gtcgaaaacc gctcccgatc 3000

ggcgccctgc gcgtcggcca ggtagcaatt gaccatgagt tcgtagttga gcgcctcggc 3060

cgcgtggcct ttggcgcgga gcttaccttt ggaagtctgc ccgcaggcgg gacagaggag 3120

ggacttgagg gcgtagagct tgggggcgag gaagacggac tcgggggcgt aggcgtccgc 3180

gccgcagtgg gcgcagacgg tctcgcactc cacgagccag gtgaggtcgg gctggtcggg 3240

gtcaaaaacc agtttcccgc cgttcttttt gatgcgtttc ttacctttgg tctccatgag 3300

ctcgtgtccc cgctgggtga caaagaggct gtccgtgtcc ccgtagaccg actttatggg 3360

ccggtcctcg agcggtgtgc cgcggtcctc ctcgtagagg aaccccgccc actccgagac 3420

gaaagcccgg gtccaggcca gcacgaagga ggccacgtgg gacgggtagc ggtcgttgtc 3480

caccagcggg tccacctttt ccagggtatg caaacacatg tccccctcgt ccacatccag 3540

gaaggtgatt ggcttgtaag tgtaggccac gtgaccgggg gtcccggccg ggggggtata 3600

aaagggtgcg ggtccctgct cgtcctcact gtcttccgga tcgctgtcca ggagcgccag 3660

ctgttggggt aggtattccc tctcgaaggc gggcatgacc tcggcactca ggttgtcagt 3720

ttctagaaac gaggaggatt tgatattgac ggtgccggcg gagatgcctt tcaagagccc 3780

ctcgtccatc tggtcagaaa agacgatctt tttgttgtcg agcttggtgg cgaaggagcc 3840

gtagagggcg ttggagagga gcttggcgat ggagcgcatg gtctggtttt tttccttgtc 3900

ggcgcgctcc ttggcggcga tgttgagctg cacgtactcg cgcgccacgc acttccattc 3960

ggggaagacg gtggtcagct cgtcgggcac gattctgacc tgccagcccc gattatgcag 4020

ggtgatgagg tccacactgg tggccacctc gccgcgcagg ggctcattag tccagcagag 4080

gcgtccgccc ttgcgcgagc agaagggggg cagggggtcc agcatgacct cgtcgggggg 4140

gtcggcatcg atggtgaaga tgccgggcag gaggtcgggg tcaaagtagc tgatggaagt 4200

ggccagatcg tccagggcag cttgccattc gcgcacggcc agcgcgcgct cgtagggact 4260

gaggggcgtg ccccagggca tgggatgggt aagcgcggag gcgtacatgc cgcagatgtc 4320

gtagacgtag aggggctcct cgaggatgcc gatgtaggtg gggtagcagc gccccccgcg 4380

gatgctggcg cgcacgtagt catacagctc gtgcgagggg gcgaggagcc ccgggcccag 4440

gttggtgcga ctgggctttt cggcgcggta gacgatctgg cggaaaatgg catgcgagtt 4500

ggaggagatg gtgggccttt ggaagatgtt gaagtgggcg tggggcagtc cgaccgagtc 4560

gcggatgaag tgggcgtagg agtcttgcag cttggcgacg agctcggcgg tgactaggac 4620

gtccagagcg cagtagtcga gggtctcctg gatgatgtca tacttgagct gtcccttttg 4680

tttccacagc tcgcggttga gaaggaactc ttcgcggtcc ttccagtact cttcgagggg 4740

gaacccgtcc tgatctgcac ggtaagagcc tagcatgtag aactggttga cggccttgta 4800

ggcgcagcag cccttctcca cggggagggc gtaggcctgg gcggccttgc gcagggaggt 4860

gtgcgtgagg gcgaaagtgt ccctgaccat gaccttgagg aactggtgct tgaagtcgat 4920

atcgtcgcag cccccctgct cccagagctg gaagtccgtg cgcttcttgt aggcggggtt 4980

gggcaaagcg aaagtaacat cgttgaagag gatcttgccc gcgcggggca taaagttgcg 5040

agtgatgcgg aaaggttggg gcacctcggc ccggttgttg atgacctggg cggcgagcac 5100

gatctcgtcg aagccgttga tgttgtggcc cacgatgtag agttccacga atcgcggacg 5160

gcccttgacg tggggcagtt tcttgagctc ctcgtaggtg agctcgtcgg ggtcgctgag 5220

cccgtgctgc tcgagcgccc agtcggcgag atgggggttg gcgcggagga aggaagtcca 5280

gagatccacg gccagggcgg tttgcagacg gtcccggtac tgacggaact gctgcccgac 5340

ggccattttt tcgggggtga cgcagtagaa ggtgcggggg tccccgtgcc agcgatccca 5400

tttgagctgg agggcgagat cgagggcgag ctcgacgagc cggtcgtccc cggagagttt 5460

catgaccagc atgaagggga cgagctgctt gccgaaggac cccatccagg tgtaggtttc 5520

cacatcgtag gtgaggaaga gcctttcggt gcgaggatgc gagccgatgg ggaagaactg 5580

gatctcctgc caccaattgg aggaatggct gttgatgtga tggaagtaga aatgccgacg 5640

gcgcgccgaa cactcgtgct tgtgtttata caagcggcca cagtgctcgc aacgctgcac 5700

gggatgcacg tgctgcacga gctgtacctg agttcctttg acgaggaatt tcagtgggaa 5760

gtggagtcgt ggcgcctgca tctcgtgctg tactacgtcg tggtggtcgg cctggccctc 5820

ttctgcctcg atggtggtca tgctgacgag cccgcgcggg aggcaggtcc agacctcggc 5880

gcgagcgggt cggagagcga ggacgagggc gcgcaggccg gagctgtcca gggtcctgag 5940

acgctgcgga gtcaggtcag tgggcagcgg cggcgcgcgg ttgacttgca ggagtttttc 6000

cagggcgcgc gggaggtcca gatggtactt gatctccacc gcgccattgg tggcgacgtc 6060

gatggcttgc agggtcccgt gcccctgggg tgtgaccacc gtcccccgtt tcttcttggg 6120

cggctggggc gacgggggcg gtgcctcttc catggttaga agcggcggcg aggacgcgcg 6180

ccgggcggca ggggcggctc ggggcccgga ggcaggggcg gcaggggcac gtcggcgccg 6240

cgcgcgggta ggttctggta ctgcgcccgg agaagactgg cgtgagcgac gacgcgacgg 6300

ttgacgtcct ggatctgacg cctctgggtg aaggccacgg gacccgtgag tttgaacctg 6360

aaagagagtt cgacagaatc aatctcggta tcgttgacgg cggcctgccg caggatctct 6420

tgcacgtcgc ccgagttgtc ctggtaggcg atctcggtca tgaactgctc gatctcctcc 6480

tcttgaaggt ctccgcggcc ggcgcgctcc acggtggccg cgaggtcgtt ggagatgcgg 6540

cccatgagct gcgagaaggc gttcatgccc gcctcgttcc agacgcggct gtagaccacg 6600

acgccctcgg gatcgcgggc gcgcatgacc acctgggcga ggttgagctc cacgtggcgc 6660

gtgaagaccg cgtagttgca gaggcgctgg tagaggtagt tgagcgtggt ggcgatgtgc 6720

tcggtgacga agaaatacat gatccagcgg cggagcggca tctcgctgac gtcgcccagc 6780

gcctccaaac gttccatggc ctcgtaaaag tccacggcga agttgaaaaa ctgggagttg 6840

cgcgccgaga cggtcaactc ctcctccaga agacggatga gctcggcgat ggtggcgcgc 6900

acctcgcgct cgaaggcccc cgggagttcc tccacttcct cttcttcctc ctccactaac 6960

atctcttcta cttcctcctc aggcggcagt ggtggcgggg gagggggcct gcgtcgccgg 7020

cggcgcacgg gcagacggtc gatgaagcgc tcgatggtct cgccgcgccg gcgtcgcatg 7080

gtctcggtga cggcgcgccc gtcctcgcgg ggccgcagcg tgaagacgcc gccgcgcatc 7140

tccaggtggc cgggggggtc cccgttgggc agggagaggg cgctgacgat gcatcttatc 7200

aattgccccg tagggactcc gcgcaaggac ctgagcgtct cgagatccac gggatctgaa 7260

aaccgctgaa cgaaggcttc gagccagtcg cagtcgcaag gtaggctgag cacggtttct 7320

tctggcgggt catgttggtt gggagcgggg cgggcgatgc tgctggtgat gaagttgaaa 7380

taggcggttc tgagacggcg gatggtggcg aggagcacca ggtctttggg cccggcttgc 7440

tggatgcgca gacggtcggc catgccccag gcgtggtcct gacacctggc caggtccttg 7500

tagtagtcct gcatgagccg ctccacgggc acctcctcct cgcccgcgcg gccgtgcatg 7560

cgcgtgagcc cgaagccgcg ctggggctgg acgagcgcca ggtcggcgac gacgcgctcg 7620

gcgaggatgg cttgctggat ctgggtgagg gtggtctgga agtcatcaaa gtcgacgaag 7680

cggtggtagg ctccggtgtt gatggtgtag gagcagttgg ccatgacgga ccagttgacg 7740

gtctggtggc ccggacgcac gagctcgtgg tacttgaggc gcgagtaggc gcgcgtgtcg 7800

aagatgtagt cgttgcaggt gcgcaccagg tactggtagc cgatgaggaa gtgcggcggc 7860

ggctggcggt agagcggcca tcgctcggtg gcgggggcgc cgggcgcgag gtcctcgagc 7920

atggtgcggt ggtagccgta gatgtacctg gacatccagg tgatgccggc ggcggtggtg 7980

gaggcgcgcg ggaactcgcg gacgcggttc cagatgttgc gcagcggcag gaagtagttc 8040

atggtgggca cggtctggcc cgtgaggcgc gcgcagtcgt ggatgctcta tacgggcaaa 8100

aacgaaagcg gtcagcggct cgactccgtg gcctggaggc taagcgaacg ggttgggctg 8160

cgcgtgtacc ccggttcgaa tctcgaatca ggctggagcc gcagctaacg tggtattggc 8220

actcccgtct cgacccaagc ctgcaccaac cctccaggat acggaggcgg gtcgttttgc 8280

aacttttttt tggaggccgg atgagactag taagcgcgga aagcggccga ccgcgatggc 8340

tcgctgccgt agtctggaga agaatcgcca gggttgcgtt gcggtgtgcc ccggttcgag 8400

gccggccgga ttccgcggct aacgagggcg tggctgcccc gtcgtttcca agaccccata 8460

gccagccgac ttctccagtt acggagcgag cccctctttt gttttgtttg tttttgccag 8520

atgcatcccg tactgcggca gatgcgcccc caccaccctc caccgcaaca acagccccct 8580

ccacagccgg cgcttctgcc cccgccccag cagcaacttc cagccacgac cgccgcggcc 8640

gccgtgagcg gggctggaca gagttatgat caccagctgg ccttggaaga gggcgagggg 8700

ctggcgcgcc tgggggcgtc gtcgccggag cggcacccgc gcgtgcagat gaaaagggac 8760

gctcgcgagg cctacgtgcc caagcagaac ctgttcagag acaggagcgg cgaggagccc 8820

gaggagatgc gcgcggcccg gttccacgcg gggcgggagc tgcggcgcgg cctggaccga 8880

aagagggtgc tgagggacga ggatttcgag gcggacgagc tgacggggat cagccccgcg 8940

cgcgcgcacg tggccgcggc caacctggtc acggcgtacg agcagaccgt gaaggaggag 9000

agcaacttcc aaaaatcctt caacaaccac gtgcgcaccc tgatcgcgcg cgaggaggtg 9060

accctgggcc tgatgcacct gtgggacctg ctggaggcca tcgtgcagaa ccccaccagc 9120

aagccgctga cggcgcagct gttcctggtg gtgcagcata gtcgggacaa cgaagcgttc 9180

agggaggcgc tgctgaatat caccgagccc gagggccgct ggctcctgga cctggtgaac 9240

attctgcaga gcatcgtggt gcaggagcgc gggctgccgc tgtccgagaa gctggcggcc 9300

atcaacttct cggtgctgag tttgggcaag tactacgcta ggaagatcta caagaccccg 9360

tacgtgccca tagacaagga ggtgaagatc gacgggtttt acatgcgcat gaccctgaaa 9420

gtgctgaccc tgagcgacga tctgggggtg taccgcaacg acaggatgca ccgtgcggtg 9480

agcgccagca ggcggcgcga gctgagcgac caggagctga tgcatagtct gcagcgggcc 9540

ctgaccgggg ccgggaccga gggggagagc tactttgaca tgggcgcgga cctgcactgg 9600

cagcccagcc gccgggcctt ggaggcggcg gcaggaccct acgtagaaga ggtggacgat 9660

gaggtggacg aggagggcga gtacctggaa gactgatggc gcgaccgtat ttttgctaga 9720

tgcaacaaca acagccacct cctgatcccg cgatgcgggc ggcgctgcag agccagccgt 9780

ccggcattaa ctcctcggac gattggaccc aggccatgca acgcatcatg gcgctgacga 9840

cccgcaaccc cgaagccttt agacagcagc cccaggccaa ccggctctcg gccatcctgg 9900

aggccgtggt gccctcgcgc tccaacccca cgcacgagaa ggtcctggcc atcgtgaacg 9960

cgctggtgga gaacaaggcc atccgcggcg acgaggccgg cctggtgtac aacgcgctgc 10020

tggagcgcgt ggcccgctac aacagcacca acgtgcagac caacctggac cgcatggtga 10080

ccgacgtgcg cgaggccgtg gcccagcgcg agcggttcca ccgcgagtcc aacctgggat 10140

ccatggtggc gctgaacgcc ttcctcagca cccagcccgc caacgtgccc cggggccagg 10200

aggactacac caacttcatc agcgccctgc gcctgatggt gaccgaggtg ccccagagcg 10260

aggtgtacca gtccgggccg gactacttct tccagaccag tcgccagggc ttgcagaccg 10320

tgaacctgag ccaggctttc aagaacttgc agggcctgtg gggcgtgcag gccccggtcg 10380

gggaccgcgc gacggtgtcg agcctgctga cgccgaactc gcgcctgctg ctgctgctgg 10440

tggccccctt cacggacagc ggcagcatca accgcaactc gtacctgggc tacctgatta 10500

acctgtaccg cgaggccatc ggccaggcgc acgtggacga gcagacctac caggagatca 10560

cccacgtgag ccgcgccctg ggccaggacg acccgggcaa cctggaagcc accctgaact 10620

ttttgctgac caaccggtcg cagaagatcc cgccccagta cgcgctcagc accgaggagg 10680

agcgcatcct gcgttacgtg cagcagagcg tgggcctgtt cctgatgcag gagggggcca 10740

cccccagcgc cgcgctcgac atgaccgcgc gcaacatgga gcccagcatg tacgccagca 10800

accgcccgtt catcaataaa ctgatggact acttgcatcg ggcggccgcc atgaactctg 10860

actatttcac caacgccatc ctgaatcccc actggctccc gccgccgggg ttctacacgg 10920

gcgagtacga catgcccgac cccaatgacg ggttcctgtg ggacgatgtg gacagcagcg 10980

tgttctcccc ccgaccgggt gctaacgagc gccccttgtg gaagaaggaa ggcagcgacc 11040

gacgcccgtc ctcggcgctg tccggccgcg agggtgctgc cgcggcggtg cccgaggccg 11100

ccagtccttt cccgagcttg cccttctcgc tgaacagtat ccgcagcagc gagctgggca 11160

ggatcacgcg cccgcgcttg ctgggcgaag aggagtactt gaatgactcg ctgttgagac 11220

ccgagcggga gaagaacttc cccaataacg ggatagaaag cctggtggac aagatgagcc 11280

gctggaagac gtatgcgcag gagcacaggg acgatccccg ggcgtcgcag ggggccacga 11340

gccggggcag cgccgcccgt aaacgccggt ggcacgacag gcagcgggga cagatgtggg 11400

acgatgagga ctccgccgac gacagcagcg tgttggactt gggtgggagt ggtaacccgt 11460

tcgctcacct gcgcccccgt atcgggcgca tgatgtaaga gaaaccgaaa ataaatgata 11520

ctcaccaagg ccatggcgac cagcgtgcgt tcgtttcttc tctgttgttg ttgtatctag 11580

tatgatgagg cgtgcgtacc cggagggtcc tcctccctcg tacgagagcg tgatgcagca 11640

ggcgatggcg gcggcggcga tgcagccccc gctggaggct ccttacgtgc ccccgcggta 11700

cctggcgcct acggaggggc ggaacagcat tcgttactcg gagctggcac ccttgtacga 11760

taccacccgg ttgtacctgg tggacaacaa gtcggcggac atcgcctcgc tgaactacca 11820

gaacgaccac agcaacttcc tgaccaccgt ggtgcagaac aatgacttca cccccacgga 11880

ggccagcacc cagaccatca actttgacga gcgctcgcgg tggggcggcc agctgaaaac 11940

catcatgcac accaacatgc ccaacgtgaa cgagttcatg tacagcaaca agttcaaggc 12000

gcgggtgatg gtctcccgca agacccccaa tggggtgaca gtgacagagg attatgatgg 12060

tagtcaggat gagctgaagt atgaatgggt ggaatttgag ctgcccgaag gcaacttctc 12120

ggtgaccatg accatcgacc tgatgaacaa cgccatcatc gacaattact tggcggtggg 12180

gcggcagaac ggggtgctgg agagcgacat cggcgtgaag ttcgacacta ggaacttcag 12240

gctgggctgg gaccccgtga ccgagctggt catgcccggg gtgtacacca acgaggcttt 12300

ccatcccgat attgtcttgc tgcccggctg cggggtggac ttcaccgaga gccgcctcag 12360

caacctgctg ggcattcgca agaggcagcc cttccaggaa ggcttccaga tcatgtacga 12420

ggatctggag gggggcaaca tccccgcgct cctggatgtc gacgcctatg agaaaagcaa 12480

ggaggatgca gcagctgaag caactgcagc cgtagctacc gcctctaccg aggtcagggg 12540

cgataatttt gcaagcgccg cagcagtggc agcggccgag gcggctgaaa ccgaaagtaa 12600

gatagtcatt cagccggtgg agaaggatag caagaacagg agctacaacg tactaccgga 12660

caagataaac accgcctacc gcagctggta cctagcctac aactatggcg accccgagaa 12720

gggcgtgcgc tcctggacgc tgctcaccac ctcggacgtc acctgcggcg tggagcaagt 12780

ctactggtcg ctgcccgaca tgatgcaaga cccggtcacc ttccgctcca cgcgtcaagt 12840

tagcaactac ccggtggtgg gcgccgagct cctgcccgtc tactccaaga gcttcttcaa 12900

cgagcaggcc gtctactcgc agcagctgcg cgccttcacc tcgcttacgc acgtcttcaa 12960

ccgcttcccc gagaaccaga tcctcgtccg cccgcccgcg cccaccatta ccaccgtcag 13020

tgaaaacgtt cctgctctca cagatcacgg gaccctgccg ctgcgcagca gtatccgggg 13080

agtccagcgc gtgaccgtta ctgacgccag acgccgcacc tgcccctacg tctacaaggc 13140

cctgggcata gtcgcgccgc gcgtcctctc gagccgcacc ttctaaatgt ccattctcat 13200

ctcgcccagt aataacaccg gttggggcct gcgcgcgccc agcaagatgt acggaggcgc 13260

tcgccaacgc tccacgcaac accccgtgcg cgtgcgcggg cacttccgcg ctccctgggg 13320

cgccctcaag ggccgcgtgc ggtcgcgcac caccgtcgac gacgtgatcg accaggtggt 13380

ggccgacgcg cgcaactaca cccccgccgc cgcgcccgtc tccaccgtgg acgccgtcat 13440

cgacagcgtg gtggccgacg cgcgccggta cgcccgcgcc aagagccggc ggcggcgcat 13500

cgcccggcgg caccggagca cccccgccat gcgcgcggcg cgagccttgc tgcgcagggc 13560

caggcgcacg ggacgcaggg ccatgctcag ggcggccaga cgcgcggctt caggcgccag 13620

cgccggcagg acccggagac gcgcggccac ggcggcggca gcggccatcg ccagcatgtc 13680

ccgcccgcgg cgagggaacg tgtactgggt gcgcgacgcc gccaccggtg tgcgcgtgcc 13740

cgtgcgcacc cgcccccctc gcacttgaag atgttcactt cgcgatgttg atgtgtccca 13800

gcggcgagga ggatgtccaa gcgcaaattc aaggaagaga tgctccaggt catcgcgcct 13860

gagatctacg gccctgcggt ggtgaaggag gaaagaaagc cccgcaaaat caagcgggtc 13920

aaaaaggaca aaaaggaaga agaaagtgat gtggacggat tggtggagtt tgtgcgcgag 13980

ttcgcccccc ggcggcgcgt gcagtggcgc gggcggaagg tgcaaccggt gctgagaccc 14040

ggcaccaccg tggtcttcac gcccggcgag cgctccggca ccgcttccaa gcgctcctac 14100

gacgaggtgt acggggatga tgatattctg gagcaggcgg ccgagcgcct gggcgagttt 14160

gcttacggca agcgcagccg ttccgcaccg aaggaagagg cggtgtccat cccgctggac 14220

cacggcaacc ccacgccgag cctcaagccc gtgaccttgc agcaggtgct gccgaccgcg 14280

gcgccgcgcc gggggttcaa gcgcgagggc gaggatctgt accccaccat gcagctgatg 14340

gtgcccaagc gccagaagct ggaagacgtg ctggagacca tgaaggtgga cccggacgtg 14400

cagcccgagg tcaaggtgcg gcccatcaag caggtggccc cgggcctggg cgtgcagacc 14460

gtggacatca agattcccac ggagcccatg gaaacgcaga ccgagcccat gatcaagccc 14520

agcaccagca ccatggaggt gcagacggat ccctggatgc catcggctcc tagtcgaaga 14580

ccccggcgca agtacggcgc ggccagcctg ctgatgccca actacgcgct gcatccttcc 14640

atcatcccca cgccgggcta ccgcggcacg cgcttctacc gcggtcatac cagcagccgc 14700

cgccgcaaga ccaccactcg ccgccgccgt cgccgcaccg ccgctgcaac cacccctgcc 14760

gccctggtgc ggagagtgta ccgccgcggc cgcgcacctc tgaccctgcc gcgcgcgcgc 14820

taccacccga gcatcgccat ttaaactttc gcctgctttg cagatcaatg gccctcacat 14880

gccgccttcg cgttcccatt acgggctacc gaggaagaaa accgcgccgt agaaggctgg 14940

cggggaacgg gatgcgtcgc caccaccacc ggcggcggcg cgccatcagc aagcggttgg 15000

ggggaggctt cctgcccgcg ctgatcccca tcatcgccgc ggcgatcggg gcgatccccg 15060

gcattgcttc cgtggcggtg caggcctctc agcgccactg agacacactt ggaaacatct 15120

tgtaataaac caatggactc tgacgctcct ggtcctgtga tgtgttttcg tagacagatg 15180

gaagacatca atttttcgtc cctggctccg cgacacggca cgcggccgtt catgggcacc 15240

tggagcgaca tcggcaccag ccaactgaac gggggcgcct tcaattggag cagtctctgg 15300

agcgggctta agaatttcgg gtccacgctt aaaacctatg gcagcaaggc gtggaacagc 15360

accacagggc aggcgctgag ggataagctg aaagagcaga acttccagca gaaggtggtc 15420

gatgggctcg cctcgggcat caacggggtg gtggacctgg ccaaccaggc cgtgcagcgg 15480

cagatcaaca gccgcctgga cccggtgccg cccgccggct ccgtggagat gccgcaggtg 15540

gaggaggagc tgcctcccct ggacaagcgg ggcgagaagc gaccccgccc cgatgcggag 15600

gagacgctgc tgacgcacac ggacgagccg cccccgtacg aggaggcggt gaaactgggt 15660

ctgcccacca cgcggcccat cgcgcccctg gccaccgggg tgctgaaacc cgaaaagccc 15720

gcgaccctgg acttgcctcc tccccagcct tcccgcccct ctacagtggc taagcccctg 15780

ccgccggtgg ccgtggcccg cgcgcgaccc gggggcaccg cccgccctca tgcgaactgg 15840

cagagcactc tgaacagcat cgtgggtctg ggagtgcaga gtgtgaagcg ccgccgctgc 15900

tattaaacct accgtagcgc ttaacttgct tgtctgtgtg tgtatgtatt atgtcgccgc 15960

cgccgctgtc caccagaagg aggagtgaag aggcgcgtcg ccgagttgca agatggccac 16020

cccatcgatg ctgccccagt gggcgtacat gcacatcgcc ggacaggacg cttcggagta 16080

cctgagtccg ggtctggtgc agtttgcccg cgccacagac acctacttca gtctggggaa 16140

caagtttagg aaccccacgg tggcgcccac gcacgatgtg accaccgacc gcagccagcg 16200

gctgacgctg cgcttcgtgc ccgtggaccg cgaggacaac acctactcgt acaaagtgcg 16260

ctacacgctg gccgtgggcg acaaccgcgt gctggacatg gccagcacct actttgacat 16320

ccgcggcgtg ctggatcggg gccctagctt caaaccctac tccggcaccg cctacaacag 16380

tctggccccc aagggagcac ccaacacttg tcagtggaca tataaagccg atggtgaaac 16440

tgccacagaa aaaacctata catatggaaa tgcacccgtg cagggcatta acatcacaaa 16500

agatggtatt caacttggaa ctgacaccga tgatcagcca atctacgcag ataaaaccta 16560

tcagcctgaa cctcaagtgg gtgatgctga atggcatgac atcactggta ctgatgaaaa 16620

gtatggaggc agagctctta agcctgatac caaaatgaag ccttgttatg gttcttttgc 16680

caagcctact aataaagaag gaggtcaggc aaatgtgaaa acaggaacag gcactactaa 16740

agaatatgac atagacatgg ctttctttga caacagaagt gcggctgctg ctggcctagc 16800

tccagaaatt gttttgtata ctgaaaatgt ggatttggaa actccagata cccatattgt 16860

atacaaagca ggcacagatg acagcagctc ttctattaat ttgggtcagc aagccatgcc 16920

caacagacct aactacattg gtttcagaga caactttatc gggctcatgt actacaacag 16980

cactggcaat atgggggtgc tggccggtca ggcttctcag ctgaatgctg tggttgactt 17040

gcaagacaga aacaccgagc tgtcctacca gctcttgctt gactctctgg gtgacagaac 17100

ccggtatttc agtatgtgga atcaggcggt ggacagctat gatcctgatg tgcgcattat 17160

tgaaaatcat ggtgtggagg atgaacttcc caactattgt ttccctctgg atgctgttgg 17220

cagaacagat acttatcagg gaattaaggc taatggaact gatcaaacca catggaccaa 17280

agatgacagt gtcaatgatg ctaatgagat aggcaagggt aatccattcg ccatggaaat 17340

caacatccaa gccaacctgt ggaggaactt cctctacgcc aacgtggccc tgtacctgcc 17400

cgactcttac aagtacacgc cggccaatgt taccctgccc accaacacca acacctacga 17460

ttacatgaac ggccgggtgg tggcgccctc gctggtggac tcctacatca acatcggggc 17520

gcgctggtcg ctggatccca tggacaacgt gaaccccttc aaccaccacc gcaatgcggg 17580

gctgcgctac cgctccatgc tcctgggcaa cgggcgctac gtgcccttcc acatccaggt 17640

gccccagaaa tttttcgcca tcaagagcct cctgctcctg cccgggtcct acacctacga 17700

gtggaacttc cgcaaggacg tcaacatgat cctgcagagc tccctcggca acgacctgcg 17760

cacggacggg gcctccatct ccttcaccag catcaacctc tacgccacct tcttccccat 17820

ggcgcacaac acggcctcca cgctcgaggc catgctgcgc aacgacacca acgaccagtc 17880

cttcaacgac tacctctcgg cggccaacat gctctacccc atcccggcca acgccaccaa 17940

cgtgcccatc tccatcccct cgcgcaactg ggccgccttc cgcggctggt ccttcacgcg 18000

tctcaagacc aaggagacgc cctcgctggg ctccgggttc gacccctact tcgtctactc 18060

gggctccatc ccctacctcg acggcacctt ctacctcaac cacaccttca agaaggtctc 18120

catcaccttc gactcctccg tcagctggcc cggcaacgac cggctcctga cgcccaacga 18180

gttcgaaatc aagcgcaccg tcgacggcga gggctacaac gtggcccagt gcaacatgac 18240

caaggactgg ttcctggtcc agatgctggc ccactacaac atcggctacc agggcttcta 18300

cgtgcccgag ggctacaagg accgcatgta ctccttcttc cgcaacttcc agcccatgag 18360

ccgccaggtg gtggacgagg tcaactacaa ggactaccag gccgtcaccc tggcctacca 18420

gcacaacaac tcgggcttcg tcggctacct cgcgcccacc atgcgccagg gccagcccta 18480

ccccgccaac tacccctacc cgctcatcgg caagagcgcc gtcaccagcg tcacccagaa 18540

aaagttcctc tgcgacaggg tcatgtggcg catccccttc tccagcaact tcatgtccat 18600

gggcgcgctc accgacctcg gccagaacat gctctatgcc aactccgccc acgcgctaga 18660

catgaatttc gaagtcgacc ccatggatga gtccaccctt ctctatgttg tcttcgaagt 18720

cttcgacgtc gtccgagtgc accagcccca ccgcggcgtc atcgaggccg tctacctgcg 18780

cacccccttc tcggccggta acgccaccac ctaagctctt gcttcttgca agccatggcc 18840

gcgggctccg gcgagcagga gctcagggcc atcatccgcg acctgggctg cgggccctac 18900

ttcctgggca ccttcgataa gcgcttcccg ggattcatgg ccccgcacaa gctggcctgc 18960

gccatcgtca acacggccgg ccgcgagacc gggggcgagc actggctggc cttcgcctgg 19020

aacccgcgct cgaacacctg ctacctcttc gaccccttcg ggttctcgga cgagcgcctc 19080

aagcagatct accagttcga gtacgagggc ctgctgcgcc gcagcgccct ggccaccgag 19140

gaccgctgcg tcaccctgga aaagtccacc cagaccgtgc agggtccgcg ctcggccgcc 19200

tgcgggctct tctgctgcat gttcctgcac gccttcgtgc actggcccga ccgccccatg 19260

gacaagaacc ccaccatgaa cttgctgacg ggggtgccca acggcatgct ccagtcgccc 19320

caggtggaac ccaccctgcg ccgcaaccag gaggcgctct accgcttcct caactcccac 19380

tccgcctact ttcgctccca ccgcgcgcgc atcgagaagg ccaccgcctt cgaccgcatg 19440

aatcaagaca tgtaaaccgt gtgtgtatgt taaatgtctt taataaacag cactttcatg 19500

ttacacatgc atctgagatg atttatttag aaatcgaaag ggttctgccg ggtctcggca 19560

tggcccgcgg gcagggacac gttgcggaac tggtacttgg ccagccactt gaactcgggg 19620

atcagcagtt tgggcagcgg ggtgtcgggg aaggagtcgg tccacagctt ccgcgtcagt 19680

tgcagggcgc ccagcaggtc gggcgcggag atcttgaaat cgcagttggg acccgcgttc 19740

tgcgcgcggg agttgcggta cacggggttg cagcactgga acaccatcag ggccgggtgc 19800

ttcacgctcg ccagcaccgt cgcgtcggtg atgctctcca cgtcgaggtc ctcggcgttg 19860

gccatcccga agggggtcat cttgcaggtc tgccttccca tggtgggcac gcacccgggc 19920

ttgtggttgc aatcgcagtg cagggggatc agcatcatct gggcctggtc ggcgttcatc 19980

cccgggtaca tggccttcat gaaagcctcc aattgcctga acgcctgctg ggccttggct 20040

ccctcggtga agaagacccc gcaggacttg ctagagaact ggttggtggc gcacccggcg 20100

tcgtgcacgc agcagcgcgc gtcgttgttg gccagctgca ccacgctgcg cccccagcgg 20160

ttctgggtga tcttggcccg gtcggggttc tccttcagcg cgcgctgccc gttctcgctc 20220

gccacatcca tctcgatcat gtgctccttc tggatcatgg tggtcccgtg caggcaccgc 20280

agcttgccct cggcctcggt gcacccgtgc agccacagcg cgcacccggt gcactcccag 20340

ttcttgtggg cgatctggga atgcgcgtgc acgaagccct gcaggaagcg gcccatcatg 20400

gtggtcaggg tcttgttgct agtgaaggtc agcggaatgc cgcggtgctc ctcgttgatg 20460

tacaggtggc agatgcggcg gtacacctcg ccctgctcgg gcatcagctg gaagttggct 20520

ttcaggtcgg tctccacgcg gtagcggtcc atcagcatag tcatgatttc catacccttc 20580

tcccaggccg agacgatggg caggctcata gggttcttca ccatcatctt agcgctagca 20640

gccgcggcca gggggtcgct ctcgtccagg gtctcaaagc tccgcttgcc gtccttctcg 20700

gtgatccgca ccggggggta gctgaagccc acggccgcca gctcctcctc ggcctgtctt 20760

tcgtcctcgc tgtcctggct gacgtcctgc aggaccacat gcttggtctt gcggggtttc 20820

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ctcaccacta ctatctcttc ctcttcttgg tccgaggcca cgcggcggta ggtatgtctc 20940

ttcgggggca gaggcggagg cgacgggctc tcgccgccgc gacttggcgg atggctggca 21000

gagccccttc cgcgttcggg ggtgcgctcc cggcggcgct ctgactgact tcctccgcgg 21060

ccggccattg tgttctccta gggaggaaca acaagcatgg agactcagcc atcgccaacc 21120

tcgccatctg cccccaccgc cgacgagaag cagcagcagc agaatgaaag cttaaccgcc 21180

ccgccgccca gccccgccac ctccgacgcg gccgtcccag acatgcaaga gatggaggaa 21240

tccatcgaga ttgacctggg ctatgtgacg cccgcggagc acgaggagga gctggcagtg 21300

cgcttttcac aagaagagat acaccaagaa cagccagagc aggaagcaga gaatgagcag 21360

agtcaggctg ggctcgagca tgacggcgac tacctccacc tgagcggggg ggaggacgcg 21420

ctcatcaagc atctggcccg gcaggccacc atcgtcaagg atgcgctgct cgaccgcacc 21480

gaggtgcccc tcagcgtgga ggagctcagc cgcgcctacg agttgaacct cttctcgccg 21540

cgcgtgcccc ccaagcgcca gcccaatggc acctgcgagc ccaacccgcg cctcaacttc 21600

tacccggtct tcgcggtgcc cgaggccctg gccacctacc acatcttttt caagaaccaa 21660

aagatccccg tctcctgccg cgccaaccgc acccgcgccg acgccctttt caacctgggt 21720

cccggcgccc gcctacctga tatcgcctcc ttggaagagg ttcccaagat cttcgagggt 21780

ctgggcagcg acgagactcg ggccgcgaac gctctgcaag gagaaggagg agagcatgag 21840

caccacagcg ccctggtcga gttggaaggc gacaacgcgc ggctggcggt gctcaaacgc 21900

acggtcgagc tgacccattt cgcctacccg gctctgaacc tgccccccaa agtcatgagc 21960

gcggtcatgg accaggtgct catcaagcgc gcgtcgccca tctccgagga cgagggcatg 22020

caagactccg aggagggcaa gcccgtggtc agcgacgagc agctggcccg gtggctgggt 22080

cctaatgcta gtccccagag tttggaagag cggcgcaaac tcatgatggc cgtggtcctg 22140

gtgaccgtgg agctggagtg cctgcgccgc ttcttcgccg acgcggagac cctgcgcaag 22200

gtcgaggaga acctgcacta cctcttcagg cacgggttcg tgcgccaggc ctgcaagatc 22260

tccaacgtgg agctgaccaa cctggtctcc tacatgggca tcttgcacga gaaccgcctg 22320

gggcagaacg tgctgcacac caccctgcgc ggggaggccc ggcgcgacta catccgcgac 22380

tgcgtctacc tctacctctg ccacacctgg cagacgggca tgggcgtgtg gcagcagtgt 22440

ctggaggagc agaacctgaa agagctctgc aagctcctgc agaagaacct caagggtctg 22500

tggaccgggt tcgacgagcg caccaccgcc tcggacctgg ccgacctcat tttccccgag 22560

cgcctcaggc tgacgctgcg caacggcctg cccgacttta tgagccaaag catgttgcaa 22620

aactttcgct ctttcatcct cgaacgctcc ggaatcctgc ccgccacctg ctccgcgctg 22680

ccctcggact tcgtgccgct gaccttccgc gagtgccccc cgccgctgtg gagccactgc 22740

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ggcgagggcc tgctcgagtg ccactgccgc tgcaacctct gcacgccgca ccgctccctg 22860

gcctgcaacc cccagctgct gagcgagacc cagatcatcg gcaccttcga gttgcaaggg 22920

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acctcggcct acttgcgcaa gttcgtgccc gaggactacc atcccttcga gatcaggttc 23040

tacgaggacc aatcccatcc gcccaaggcc gagctgtcgg cctgcgtcat cacccagggg 23100

gcgatcctgg cccaattgca agccatccag aaatcccgcc aagaattctt gctgaaaaag 23160

ggccgcgggg tctacctcga cccccagacc ggtgaggagc tcaaccccgg cttcccccag 23220

gatgccccga ggaaacaaga agctgaaagt ggagctgccg cccgtggagg atttggagga 23280

agactgggag aacagcagtc aggcagagga ggaggagatg gaggaagact gggacagcac 23340

tcaggcagag gaggacagcc tgcaagacag tctggaggaa gacgaggagg aggcagagga 23400

ggaggtggaa gaagcagccg ccgccagacc gtcgtcctcg gcgggggaga aagcaagcag 23460

cacggatacc atctccgctc cgggtcgggg tcccgctcga ccacacagta gatgggacga 23520

gaccggacga ttcccgaacc ccaccaccca gaccggtaag aaggagcggc agggatacaa 23580

gtcctggcgg gggcacaaaa acgccatcgt ctcctgcttg caggcctgcg ggggcaacat 23640

ctccttcacc cggcgctacc tgctcttcca ccgcggggtg aactttcccc gcaacatctt 23700

gcattactac cgtcacctcc acagccccta ctacttccaa gaagaggcag cagcagcaga 23760

aaaagaccag cagaaaacca gcagctagaa aatccacagc ggcggcagca ggtggactga 23820

ggatcgcggc gaacgagccg gcgcaaaccc gggagctgag gaaccggatc tttcccaccc 23880

tctatgccat cttccagcag agtcgggggc aggagcagga actgaaagtc aagaaccgtt 23940

ctctgcgctc gctcacccgc agttgtctgt atcacaagag cgaagaccaa cttcagcgca 24000

ctctcgagga cgccgaggct ctcttcaaca agtactgcgc gctcactctt aaagagtagc 24060

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ccgcctccac ccatcatcat gagcaaagag attcccacgc cttacatgtg gagctaccag 24180

ccccagatgg gcctggccgc cggtgccgcc caggactact ccacccgcat gaattggctc 24240

agcgccgggc ccgcgatgat ctcacgggtg aatgacatcc gcgcccaccg aaaccagata 24300

ctcctagaac agtcagcgct caccgccacg ccccgcaatc acctcaatcc gcgtaattgg 24360

cccgccgccc tggtgtacca ggaaattccc cagcccacga ccgtactact tccgcgagac 24420

gcccaggccg aagtccagct gactaactca ggtgtccagc tggcgggcgg cgccaccctg 24480

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ctcaacgacg aggtggtgag ctcttcgctg ggtctgcgac ctgacggagt cttccaactc 24600

gccggatcgg ggagatcttc cttcacgcct cgtcaggccg tcctgacttt ggagagttcg 24660

tcctcgcagc cccgctcggg tggcatcggc actctccagt tcgtggagga gttcactccc 24720

tcggtctact tcaacccctt ctccggctcc cccggccact acccggacga gttcatcccg 24780

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gctgacctag ctcggcttcg acacctggac cactgccgcc gcttccgctg cttcgctcgg 24900

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cttcaccggg aacgagaccg agctccagct ccagtgtaag ccccacaaga agtacctcac 25260

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tattagttac ttcaatctaa ccggcggaga tgactgaccc actggccaac aacaacgtca 25440

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acgaccatcg cctctcctac gagctcctgc agcagcgcca gaagttcacc tgcctggtcg 25680

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cctgcgactc ccccgactgc gtccacactc tgatcaagac cctctgcggc ctccgcgacc 25800

tcctccccat gaactaatca cccccttatc cagtgaaata aagatcatat tgatgatgat 25860

tttacagaaa taaaaaataa tcatttgatt tgaaataaag atacaatcat attgatgatt 25920

tgagtttaac aaaaaaataa agaatcactt acttgaaatc tgataccagg tctctgtcca 25980

tgttttctgc caacaccact tcactcccct cttcccagct ctggtactgc aggccccggc 26040

gggctgcaaa cttcctccac acgctgaagg ggatgtcaaa ttcctcctgt ccctcaatct 26100

tcattttatc ttctatcaga tgtccaaaaa gcgcgtccgg gtggatgatg acttcgaccc 26160

cgtctacccc tacgatgcag acaacgcacc gaccgtgccc ttcatcaacc cccccttcgt 26220

ctcttcagat ggattccaag agaagcccct gggggtgttg tccctgcgac tggccgaccc 26280

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caacaccatt tcccttaaca tggatcaccc cttttacact aaagatggaa aattatcctt 26460

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tacatttgat actgatggaa acataaagct taccttagac agaggtttgc atgttacaac 26640

aggagatgca attgaaagca acataagctg ggctaaaggt ttaaaatttg aagatggagc 26700

catagcaacc aacattggaa atgggttaga gtttggaagc agtagtacag aaacaggtgt 26760

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ttcaatgtca ttttcataca cctggactaa tggaagctat gttggagcaa catttggggc 27360

taactcttat accttctcat acatcgccca agaatgaaca ctgtatccca ccctgcatgc 27420

caacccttcc caccccactc tgtggaacaa actctgaaac acaaaataaa ataaagttca 27480

agtgttttat tgattcaaca gtttcacaga accctagtat tcaacctgcc acctccctcc 27540

caacacacag agtacacagt cctttctccc cggctggcct taaaaagcat catatcatgg 27600

gtaacagaca tattcttagg tgttatattc cacacggttt cctgtcgagc caaacgctca 27660

tcagtgatat taataaactc cccgggcagc tcacttaagt tcatgtcgct gtccagctgc 27720

tgagccacag gctgctgtcc aacttgcggt tgcttaacgg gcggcgaagg agaagtccac 27780

gcctacatgg gggtagagtc ataatcgtgc atcaggatag ggcggtggtg ctgcagcagc 27840

gcgcgaataa actgctgccg ccgccgctcc gtcctgcagg aatacaacat ggcagtggtc 27900

tcctcagcga tgattcgcac cgcccgcagc ataaggcgcc ttgtcctccg ggcacagcag 27960

cgcaccctga tctcacttaa atcagcacag taactgcagc acagcaccac aatattgttc 28020

aaaatcccac agtgcaaggc gctgtatcca aagctcatgg cggggaccac agaacccacg 28080

tggccatcat accacaagcg caggtagatt aagtggcgac ccctcataaa cacgctggac 28140

ataaacatta cctcttttgg catgttgtaa ttcaccacct cccggtacca tataaacctc 28200

tgattaaaca tggcgccatc caccaccatc ctaaaccagc tggccaaaac ctgcccgccg 28260

gctatacact gcagggaacc gggactggaa caatgacagt ggagagccca ggactcgtaa 28320

ccatggatca tcatgctcgt catgatatca atgttggcac aacacaggca cacgtgcata 28380

cacttcctca ggattacaag ctcctcccgc gttagaacca tatcccaggg aacaacccat 28440

tcctgaatca gcgtaaatcc cacactgcag ggaagacctc gcacgtaact cacgttgtgc 28500

attgtcaaag tgttacattc gggcagcagc ggatgatcct ccagtatggt agcgcgggtt 28560

tctgtctcaa aaggaggtag acgatcccta ctgtacggag tgcgccgaga caaccgagat 28620

cgtgttggtc gtagtgtcat gccaaatgga acgccggacg tagtcatttt cgtacttgct 28680

gtagcagaac ctggtccggg cgctgcacac cgatcgccgg cggcggtctc ggcgcttgga 28740

acgctcggtg ttgaaattgt aaaacagcca ctctctcaga ccgtgcagca gatctagggc 28800

ctcaggagtg atgaagatcc catcatgcct gatggctctg atcacatcga ccaccgtgga 28860

atgggccaga cccagccaga tgatgcaatt ttgttgggtt tcggtgacgg cgggggaggg 28920

aagaacagga agaaccatga ttaactttta atccaaacgg tctcggagta cttcaaaatg 28980

aagatcgcgg agatggcacc tctcgccccc gctgtgttgg tggaaaataa cagccaggtc 29040

aaaggtgata cggttctcga gatgttccac ggtggcttcc agcaaagcct ccacgcgcac 29100

atccagaaac aagacaatag cgaaagcggg agggttctct aattcctcaa tcatcatgtt 29160

acactcctgc accatcccca gataattttc atttttccag ccttgaatga ttcgaactag 29220

ttcctgaggt aaatccaagc cagccatgat aaagagctcg cgcagagcgc cctccaccgg 29280

cattcttaag cacaccctca taattccaag atattctgct cctggttcac ctgcagcaga 29340

ttgacaagcg gaatatcaaa atctctgccg cgatccctga gctcctccct cagcaataac 29400

tgtaagtact ctttcatatc ctctccgaaa tttttagcca taggaccacc aggaataaga 29460

ttagggcaag ccacagtaca gataaaccga agtcctcccc agtgagcatt gccaaatgca 29520

agactgctat aagcatgctg gctagacccg gtgatatctt ccagataact ggacagaaaa 29580

tcgcccaggc aatttttaag aaaatcaaca aaagaaaaat cctccaggtg gacgtttaga 29640

gcctcgggaa caacgatgaa gtaaatgcaa gcggtgcgtt ccagcatggt tagttagctg 29700

atctgtagaa aaaacaaaaa tgaacattaa accatgctag cctggcgaac aggtgggtaa 29760

atcgttctct ccagcaccag gcaggccacg gggtctccgg cgcgaccctc gtaaaaattg 29820

tcgctatgat tgaaaaccat cacagagaga cgttcccggt ggccggcgtg aatgattcga 29880

caagatgaat acacccccgg aacattggcg tccgcgagtg aaaaaaagcg cccgaggaag 29940

caataaggca ctacaatgct cagtctcaag tccagcaaag cgatgccatg cggatgaagc 30000

acaaaattct caggtacaaa atgtaattac tcccctcctg cacaggcagc aaagcccccg 30060

atccctccag gtacacatac aaagcctcag cgtccatagc ttaccgagca gcagcacaca 30120

acaggcgcaa gagtcagaga aaggctgagc tctaacctgt ccacccgctc tctgctcaat 30180

atatagccca gatctacact gacgtaaagg ccaaagtcta aaaatacccg ccaaataatc 30240

acacacgccc agcacacgcc cagaaaccgg tgacacactc aaaaaaatac gcgcacttcc 30300

tcaaacgccc aaaactgccg tcatttccgg gttcccacgc tacgtcatca aaacacgact 30360

ttcaaattcc gtcgaccgtt aaaaacgtca cccgccccgc ccctaacggt cgcccgtctc 30420

tcagccaatc agcgccccgc atccccaaat tcaaacacct catttgcata ttaacgcgca 30480

caaaaagttt gaggtatatt attgatgatg 30510

<210> 2

<211> 915

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 2

aagctcagat ctcccgatcc cctatggtgc actctcagta caatctgctc tgatgccgca 60

tagttaagcc agtatctgct ccctgcttgt gtgttggagg tcgctgagta gtgcgcgagc 120

aaaatttaag ctacaacaag gcaaggcttg accgacaatt gcatgaagaa tctgcttagg 180

gttaggcgtt ttgcgctgct tcgcgatgta cgggccagat atacgcgttg acattgatta 240

ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag 300

ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc 360

ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga 420

cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat 480

atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc 540

cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct 600

attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca 660

cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg gcaccaaaat 720

caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat gggcggtagg 780

cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctctctggc taactagaga acccactgct 840

tactggctta tcgaaattaa tacgactcac tatagggaga cccaagctgg ctagcgttta 900

aacgggcccg ccacc 915

<210> 3

<211> 1872

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

atgggcaccg tgaacaagcc cgtggtgggc gtgctgatgg ggttcggcat catcaccggc 60

accctgagaa tcaccaaccc cgtgagagcc agcgtgctga gatacgacga cttccacatc 120

gatgaagata aactggacac caatagtgtg tacgaacctt actaccacag cgaccatgcc 180

gaaagcagct gggtgaacag aggagagagc agtagaaagg cctacgacca caacagcccc 240

tacatttggc ccagaaacga ctacgatggc tttctggaga acgcccacga gcaccacgga 300

gtgtacaacc agggacgggg aatcgacagc ggagaaagac tgatgcagcc aacacagatg 360

agcgctcagg aagacctggg agacgacacc ggcatccacg tgatcccaac cctgaacggc 420

gacgacagac acaaaatcgt gaacgtggac cagagacagt acggcgacgt gttcaagggc 480

gacctgaacc ccaaaccaca gggccagaga ctgatcgagg tgtccgtgga agagaaccac 540

cctttcaccc tgcgcgcccc cattcagaga atctacggcg tgagatacac cgagacatgg 600

agcttcctgc ccagcctgac ttgcaccggc gacgccgctc ctgccatcca gcacatctgc 660

ctgaaacaca ccacctgctt ccaggacgtg gtggtggatg tggactgcgc cgaaaacacc 720

aaggaggacc agctggccga gatctcttat agatttcagg gcaaaaagga ggccgaccag 780

ccctggatcg tggtgaacac ctcaaccctg ttcgacgagc tggagctgga tccacccgag 840

atcgagcccg gcgtgctgaa ggtgctgaga accgagaagc agtacctggg agtgtacatc 900

tggaacatga gaggcagcga cggcaccagc acatatgcca cctttctggt gacctggaag 960

ggagacgaga agacccggaa ccccacaccc gccgtgaccc ctcagcctag gggcgctgag 1020

ttccacatgt ggaactacca cagccacgtg ttcagcgtgg gcgacacctt cagcctggct 1080

atgcacctgc agtacaaaat ccacgaagcc cccttcgacc tgctgctgga gtggctgtac 1140

gtgcccatcg atcccacatg ccagcccatg agactgtact ccacctgcct gtaccacccc 1200

aacgcccccc agtgcctgtc ccacatgaac agcggatgca ccttcacctc cccccacctg 1260

gcccagagag tggccagcac cgtgtaccag aactgcgagc acgccgacaa ctacaccgcc 1320

tactgcctgg gcatcagcca catggaaccc agctttggcc tgatcctgca cgacggcggc 1380

accacactga aattcgtgga cacccccgaa agcctgagcg gactgtacgt gttcgtggtg 1440

tacttcaacg gccacgtgga ggccgtggcc tacacagtgg tgtccaccgt ggaccacttc 1500

gtgaacgcca ttgaggagag aggcttcccc cccaccgctg gccagcctcc tgctactacc 1560

aagcccaaag agattacccc cgtgaacccc ggcacctccc ccctgctgag atacgccgcc 1620

tggaccggcg gcctggctgc tgtggtgctg ctgtgcctgg tgatcttcct gatctgcacc 1680

gccaaaagaa tgagagtgaa ggcctacagg gtggacaaaa gcccttacaa ccagtccatg 1740

tactacgctg gcctgcccgt ggatgacttc gaggactctg agagcaccga caccgaagaa 1800

gagttcggca acgccatcgg aggctcacat ggcggcagct cctacaccgt gtacatcgac 1860

aagaccagat ga 1872

<210> 4

<211> 623

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 4

Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly

1 5 1015

Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val

202530

Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn

354045

Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp

505560

Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro

65707580

Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His

859095

Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu

100 105 110

Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp

115 120 125

Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His

130 135 140

Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly

145 150 155 160

Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val

165 170 175

Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr

180 185 190

Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys

195 200 205

Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr

210 215 220

Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr

225 230 235 240

Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys

245 250 255

Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp

260 265 270

Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val

275 280 285

Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg

290 295 300

Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys

305 310 315 320

Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro

325 330 335

Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser

340 345 350

Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His

355 360 365

Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp

370 375 380

Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro

385 390 395 400

Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr

405 410 415

Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys

420 425 430

Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met

435 440 445

Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys

450 455 460

Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val

465 470 475 480

Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr

485 490 495

Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr

500 505 510

Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val

515 520 525

Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly

530 535 540

Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr

545 550 555 560

Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr

565 570 575

Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp

580 585 590

Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly

595 600 605

Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg

610 615 620

<210> 5

<211> 300

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 5

aagcttaagt ttaaaccgct gatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt 60

tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc 120

ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg 180

tggggtgggg caggacagca agggggagga ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga 240

tgcggtgggc tctatggctt ctgaggcgga aagaaccagc agatctgcag atctgaattc 300

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 6

tcgtcgtttt cggcgcgcgc cg 22

<210> 7

<211> 106

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 7

cacagaagat gatcgtcgtt ttcggcgcgc gccgtcgtcg ttttcggcgc gcgccgtcgt 60

cgttttcggc gcgcgccgtc gtcgttttcg gcgcgcgccg ggtacc 106

<210> 8

<211> 66

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 8

ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60

ggacct 66

<210> 9

<211> 489

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 9

atgagaagca gccccgggaa catggagaga atcgtgatct gcctgatggt gatcttcctg 60

ggcaccctgg tgcacaagag cagcagccag ggccaggaca gacatatgat ccggatgaga 120

cagctgatcg acatcgtgga ccagctgaag aattacgtga acgacctggt gcctgaattc 180

ctgcccgcac ccgaggacgt ggagaccaac tgcgaatgga gcgcctttag ctgcttccag 240

aaggcccagc tgaagagcgc aaacacaggc aacaatgaga gaatcatcaa cgtgagcatc 300

aaaaagctga agagaaagcc acccagcacc aacgcaggaa gaagacagaa gcacagactg 360

acctgcccca gctgcgacag ctacgaaaaa aagcccccca aggagttcct ggagagattc 420

aagagcctgc tgcagaagat gatccaccag cacctgagca gcagaaccca cggcagcgag 480

gacagctga 489

<210> 10

<211> 162

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 10

Met Arg Ser Ser Pro Gly Asn Met Glu Arg Ile Val Ile Cys Leu Met

1 5 1015

Val Ile Phe Leu Gly Thr Leu Val His Lys Ser Ser Ser Gln Gly Gln

202530

Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val Asp Gln

354045

Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro

505560

Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gln

65707580

Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg Ile Ile

859095

Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala

100 105 110

Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr

115 120 125

Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Leu Leu

130 135 140

Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu

145 150 155 160

Asp Ser

<210> 11

<211> 786

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 11

atgatcgaga cctacaacca gaccagcccc agaagcgccg ctacaggact gcctatcagc 60

atgaagatct tcatgtacct gctgaccgtg ttcctgatca cccagatgat cggcagcgcc 120

ctgttcgctg tgtacctgca tagaagactg gacaagatcg aggacgagag aaacctgcac 180

gaggactttg tgttcatgaa gaccattcag agatgcaaca ccggcgagag aagcctgagt 240

ctgctgaatt gcgaagagat caaatcccag ttcgagggat tcgtgaagga cattatgctg 300

aacaaggagg agaccaagaa agaaaacagc ttcgaaatgc agaagggaga ccagaacccc 360

cagatcgccg ctcatgtgat cagcgaggct agcagtaaga ccacctccgt gctgcagtgg 420

gccgaaaagg gatactacac aatgagcaac aacctggtga ccctggagaa cggcaaacag 480

ctgaccgtga agagacaggg cctgtactac atctacgccc aggtgacttt ctgcagcaac 540

agagaggcca gcagccaggc tccattcatc gcttctctgt gcctgaagtc tcccggcaga 600

ttcgagagaa tcctgctgcg cgccgccaac acacattcaa gtgccaagcc ctgcggccag 660

cagtcaatcc atctgggagg cgtgttcgag ctgcagcctg gagcttctgt gttcgtgaac 720

gtgaccgacc cctcccaggt gagtcacgga acaggattca cttccttcgg cctgctgaag 780

ctgtga 786

<210> 12

<211> 261

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 12

Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly

1 5 1015

Leu Pro Ile Ser Met Lys Ile Phe Met Tyr Leu Leu Thr Val Phe Leu

202530

Ile Thr Gln Met Ile Gly Ser Ala Leu Phe Ala Val Tyr Leu His Arg

354045

Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp Phe Val

505560

Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser Leu Ser

65707580

Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe Val Lys

859095

Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu

100 105 110

Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser

115 120 125

Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly

130 135 140

Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln

145 150 155 160

Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr

165 170 175

Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser

180 185 190

Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala

195 200 205

Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His

210 215 220

Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn

225 230 235 240

Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe

245 250 255

Gly Leu Leu Lys Leu

260

<210> 13

<211> 698

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 13

cgcgttgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60

atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120

cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180

tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240

tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300

ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360

acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 420

gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 480

tgttttggca ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga 540

cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct ctctggctaa 600

ctagagaacc cactgcttac tggcttatcg aaattaatac gactcactat agggagaccc 660

aagctggcta gcgtttaaac gggccctcta gagccacc 698

<210> 14

<211> 996

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 14

atgaagaaga gcctgatcgc cctgaccctg gccgctctgc ctgtggctgc tatggctgat 60

gtgaccctgt acggcaccat caaggccgga gtggagacct ctaggagcgt gttccaccag 120

aacggacagg tgaccgaagt gaccaccgcc acaggaatcg tggacctggg atctaagatt 180

ggctttaagg gacaggagga cctgggaaat ggactgaagg ccatctggca ggtggagcag 240

aaggccagta tcgccggaac cgacagcgga tggggaaata gacagagctt tatcgggctg 300

aaggggggat tcggcaagct gagagtggga agactgaaca gcgtgctgaa ggacaccggg 360

gacatcaacc cttgggacag caagagcgac tacctgggag tgaacaagat cgctgaacca 420

gaggccagac tgatctccgt gagatatgac tctccagaat tcgccggcct gagcggaagc 480

gtgcagtatg ctctgaacga caacgctggc aggcacaata gcgagagcta ccacgccggc 540

ttcaactaca agaacggagg attcttcgtg cagtacggcg gagcttacaa aagacaccat 600

caggtgcagg agggcctgaa catcgagaaa taccagatcc acagactggt gagcggatac 660

gacaacgacg ccctgtacgc ctccgtggct gtgcagcagc aggatgctaa gctgaccgac 720

gcctccaaca gccacaacag ccagaccgag gtggccgcta cactggctta cagattcgga 780

aacgtgaccc ccagagtgag ctacgcccat ggattcaagg ggctggtgga cgacgccgat 840

atcggaaacg agtacgacca ggtggtggtg ggagccgaat acgatttcag caagagaacc 900

tctgccctgg tgagcgccgg atggctgcag gaaggaaaag gcgagaacaa gttcgtggcc 960

accgccggag gagtgggact gagacataag ttctga 996

<210> 15

<211> 331

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 15

Met Lys Lys Ser Leu Ile Ala Leu Thr Leu Ala Ala Leu Pro Val Ala

1 5 1015

Ala Met Ala Asp Val Thr Leu Tyr Gly Thr Ile Lys Ala Gly Val Glu

202530

Thr Ser Arg Ser Val Phe His Gln Asn Gly Gln Val Thr Glu Val Thr

354045

Thr Ala Thr Gly Ile Val Asp Leu Gly Ser Lys Ile Gly Phe Lys Gly

505560

Gln Glu Asp Leu Gly Asn Gly Leu Lys Ala Ile Trp Gln Val Glu Gln

65707580

Lys Ala Ser Ile Ala Gly Thr Asp Ser Gly Trp Gly Asn Arg Gln Ser

859095

Phe Ile Gly Leu Lys Gly Gly Phe Gly Lys Leu Arg Val Gly Arg Leu

100 105 110

Asn Ser Val Leu Lys Asp Thr Gly Asp Ile Asn Pro Trp Asp Ser Lys

115 120 125

Ser Asp Tyr Leu Gly Val Asn Lys Ile Ala Glu Pro Glu Ala Arg Leu

130 135 140

Ile Ser Val Arg Tyr Asp Ser Pro Glu Phe Ala Gly Leu Ser Gly Ser

145 150 155 160

Val Gln Tyr Ala Leu Asn Asp Asn Ala Gly Arg His Asn Ser Glu Ser

165 170 175

Tyr His Ala Gly Phe Asn Tyr Lys Asn Gly Gly Phe Phe Val Gln Tyr

180 185 190

Gly Gly Ala Tyr Lys Arg His His Gln Val Gln Glu Gly Leu Asn Ile

195 200 205

Glu Lys Tyr Gln Ile His Arg Leu Val Ser Gly Tyr Asp Asn Asp Ala

210 215 220

Leu Tyr Ala Ser Val Ala Val Gln Gln Gln Asp Ala Lys Leu Thr Asp

225 230 235 240

Ala Ser Asn Ser His Asn Ser Gln Thr Glu Val Ala Ala Thr Leu Ala

245 250 255

Tyr Arg Phe Gly Asn Val Thr Pro Arg Val Ser Tyr Ala His Gly Phe

260 265 270

Lys Gly Leu Val Asp Asp Ala Asp Ile Gly Asn Glu Tyr Asp Gln Val

275 280 285

Val Val Gly Ala Glu Tyr Asp Phe Ser Lys Arg Thr Ser Ala Leu Val

290 295 300

Ser Ala Gly Trp Leu Gln Glu Gly Lys Gly Glu Asn Lys Phe Val Ala

305 310 315 320

Thr Ala Gly Gly Val Gly Leu Arg His Lys Phe

325 330

<210> 16

<211> 234

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 16

ggtaccaagc ttaagtttaa accgctgatc agcctcgact gtgccttcta gttgccagcc 60

atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca ctcccactgt 120

cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc attctattct 180

ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata gcag 234

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<211> 906

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 17

atggccagca gcgacgggga cagactgtgc agaagcaacg ccgtgaggag gaagaccacc 60

cccagctaca gcgggcagta cagaaccgcc agaagaagcg tggtggtggg gccccccgac 120

gactcagacg acagcctggg ctacatcacc acagtgggag ccgacagccc cagccccgtg 180

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agcagcggca gcgaagacga cttcgaagac attgacgagg tggtggccgc cttcagagag 300

gccagactga gacacgagct ggtggaagac gccgtgtacg agaaccccct gagcgtggag 360

aagcctagca gatcctttac caagaacgcc gccgtgaagc ctaagctgga ggacagcccc 420

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gcccccaaaa ccgccacaag cagctggtgc ggccccaccc caagctataa caagagagtg 540

ttctgtgaag ccgtgagaag agtggccgcc atgcaggccc agaaggctgc cgaagccgcc 600

tggaactcca acccccccag aaacaacgct gaactggaca gactgctgac aggagccgtg 660

atcagaatta ccgtgcacga aggactgaac ctgatccagg ccgccaatga ggccgacctg 720

ggcgagggag ccagcgtgtc aaagagagga cacaacagaa agaccggcga cctgcagggc 780

ggcatgggca atgagccaat gtacgcccag gtgagaaaac ccaagagcag aaccgacaca 840

cagaccaccg gaagaatcac caacagaagc agagccagaa gcgcttccag aacagacgcc 900

agaaaa 906

<210> 18

<211> 302

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 18

Met Ala Ser Ser Asp Gly Asp Arg Leu Cys Arg Ser Asn Ala Val Arg

1 5 1015

Arg Lys Thr Thr Pro Ser Tyr Ser Gly Gln Tyr Arg Thr Ala Arg Arg

202530

Ser Val Val Val Gly Pro Pro Asp Asp Ser Asp Asp Ser Leu Gly Tyr

354045

Ile Thr Thr Val Gly Ala Asp Ser Pro Ser Pro Val Tyr Ala Asp Leu

505560

Tyr Phe Glu His Lys Asn Thr Thr Pro Arg Val His Gln Pro Asn Asp

65707580

Ser Ser Gly Ser Glu Asp Asp Phe Glu Asp Ile Asp Glu Val Val Ala

859095

Ala Phe Arg Glu Ala Arg Leu Arg His Glu Leu Val Glu Asp Ala Val

100 105 110

Tyr Glu Asn Pro Leu Ser Val Glu Lys Pro Ser Arg Ser Phe Thr Lys

115 120 125

Asn Ala Ala Val Lys Pro Lys Leu Glu Asp Ser Pro Lys Arg Ala Pro

130 135 140

Pro Gly Ala Gly Ala Ile Ala Ser Gly Arg Pro Ile Ser Phe Ser Thr

145 150 155 160

Ala Pro Lys Thr Ala Thr Ser Ser Trp Cys Gly Pro Thr Pro Ser Tyr

165 170 175

Asn Lys Arg Val Phe Cys Glu Ala Val Arg Arg Val Ala Ala Met Gln

180 185 190

Ala Gln Lys Ala Ala Glu Ala Ala Trp Asn Ser Asn Pro Pro Arg Asn

195 200 205

Asn Ala Glu Leu Asp Arg Leu Leu Thr Gly Ala Val Ile Arg Ile Thr

210 215 220

Val His Glu Gly Leu Asn Leu Ile Gln Ala Ala Asn Glu Ala Asp Leu

225 230 235 240

Gly Glu Gly Ala Ser Val Ser Lys Arg Gly His Asn Arg Lys Thr Gly

245 250 255

Asp Leu Gln Gly Gly Met Gly Asn Lys Pro Met Tyr Ala Gln Val Arg

260 265 270

Lys Pro Lys Ser Arg Thr Asp Thr Gln Thr Thr Gly Arg Ile Thr Asn

275 280 285

Arg Ser Arg Ala Arg Ser Ala Ser Arg Thr Asp Ala Arg Lys

290 295 300

<210> 19

<211> 96

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 19

cgaaaaagaa gatcaggttc gggtgcgcca gtaaagcaga cattaaactt tgatttgctg 60

aaacttgcag gtgatgtaga gtcaaatcca ggtcca 96

<210> 20

<211> 837

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 20

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ctgagagcca ccctgatgga ggtgagccac cggcccccca gaggagaaga cggattcatc 420

gaagccccca atgtgcctct gcaccggagc gccctggaat gcgacgtgag cgacgacggc 480

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<210> 21

<211> 278

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 21

Met Phe Cys Thr Ser Pro Ala Thr Arg Gly Asp Ser Ser Glu Ser Lys

1 5 1015

Pro Gly Ala Ser Val Asp Val Asn Gly Lys Met Glu Tyr Gly Ser Ala

202530

Pro Gly Pro Leu Asn Gly Arg Asp Thr Ser Arg Gly Pro Gly Ala Phe

354045

Cys Thr Pro Gly Trp Glu Ile His Pro Ala Arg Leu Val Glu Asp Ile

505560

Asn Arg Val Phe Leu Cys Ile Ala Gln Ser Ser Gly Arg Val Thr Arg

65707580

Asp Ser Arg Arg Leu Arg Arg Val Cys Leu Asp Phe Tyr Leu Met Gly

859095

Arg Thr Arg Gln Arg Pro Thr Leu Ala Cys Trp Glu Glu Leu Leu Gln

100 105 110

Leu Gln Pro Thr Gln Thr Gln Cys Leu Arg Ala Thr Leu Met Glu Val

115 120 125

Ser His Arg Pro Pro Arg Gly Glu Asp Gly Phe Ile Glu Ala Pro Asn

130 135 140

Val Pro Leu His Arg Ser Ala Leu Glu Cys Asp Val Ser Asp Asp Gly

145 150 155 160

Gly Glu Asp Asp Ser Asp Asp Asp Gly Ser Thr Pro Ser Asp Val Ile

165 170 175

Glu Phe Arg Asp Ser Asp Ala Glu Ser Ser Asp Gly Glu Asp Phe Ile

180 185 190

Val Glu Glu Glu Ser Glu Glu Ser Thr Asp Ser Cys Glu Pro Asp Gly

195 200 205

Val Pro Gly Asp Cys Tyr Arg Asp Gly Asp Gly Cys Asn Thr Pro Ser

210 215 220

Pro Lys Arg Pro Gln Arg Ala Ile Glu Arg Tyr Ala Gly Ala Glu Thr

225 230 235 240

Ala Glu Tyr Thr Ala Ala Lys Ala Leu Thr Ala Leu Gly Glu Gly Gly

245 250 255

Val Asp Trp Lys Arg Arg Arg His Glu Ala Pro Arg Arg His Asp Ile

260 265 270

Pro Pro Pro His Gly Val

275

<210> 22

<211> 2526

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 22

atgttcgccc tggtgctggc cgtggtgatc ctgcccctgt ggaccaccgc caacaagagc 60

tacgtgaccc ccacccccgc caccagaagc atcggccaca tgagcgccct gctgagagag 120

tacagcgaca gaaacatgag cctgaagctg gaagccttct accccaccgg cttcgacgag 180

gaactgatca aatccctgca ctggggcaac gacagaaagc acgtgttcct ggtgattgtg 240

aaagtgaacc ccaccaccca cgaaggcgac gtgggcctgg tgatcttccc caagtacctg 300

ctgagcccct accacttcaa ggccgagcac cgggccccct tccccgctgg aagattcgga 360

tttctgagcc accccgtgac acccgacgtg agtttctttg actcctcctt cgccccctac 420

ctgaccaccc agcacctggt ggccttcacc accttccccc ccaaccccct ggtgtggcac 480

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gccagaccca cagtgcctaa gaacaccatc ctggaacaca aggcccactt cgccacctgg 600

gacgccctgg ctagacacac cttctttagt gccgaggcca tcattaccaa ctccaccctg 660

agaatccacg tgcccctgtt cggcagcgtg tggcccatca gatactgggc taccggcagc 720

gtgctgctga cctccgactc tggcagagtg gaggtgaaca tcggcgtggg cttcatgagc 780

agcctgatta gcctgagcag cggactgccc atcgagctga tcgtggtgcc ccacaccgtg 840

aaactgaacg ccgtgaccag cgacaccacc tggttccagc tgaatccccc cggccccgac 900

cccggacctt cttatagagt gtacctgctg ggaagaggcc tggatatgaa cttctctaag 960

cacgccaccg tggacatctg cgcctacccc gaggaatccc tggactacag gtatcatctg 1020

agcatggccc acacagaggc cctgagaatg accacaaaag ccgaccagca cgacatcaac 1080

gaagagagct attaccacat cgccgccaga atcgccacct ccatcttcgc cctgagcgaa 1140

atgggaagaa caacagaata cttcctgctg gacgaaattg tggacgtgca gtaccagctg 1200

aagttcctga actacatcct gatgagaatc ggggccggcg ctcaccccaa cacaatcagc 1260

gggacctcag acctgatctt cgccgacccc agccagctgc acgatgagct gagcctgctg 1320

ttcggccagg tgaagcctgc caacgtggac tacttcatct cctacgacga ggccagagat 1380

cagctgaaga ccgcctacgc cctgagcaga ggacaggacc acgtgaacgc cctgagcctg 1440

gctagaaggg tgattatgag catttacaag ggcctgctgg tgaagcagaa cctgaacgcc 1500

accgagagac aggccctgtt cttcgccagc atgattctgc tgaactttag agagggcctg 1560

gagaactcta gcagagtgct ggacggccgg accaccctgc tgctgatgac cagcatgtgc 1620

accgccgctc acgccaccca ggccgctctg aacatccagg agggcctggc ctatctgaat 1680

cccagcaaac acatgttcac aatccccaac gtgtacagcc catgcatggg aagcctgaga 1740

acagatctga ccgaagaaat ccacgtgatg aacctgctga gtgctatccc cacccgcccc 1800

ggcctgaacg aggtgctgca cacccagctg gacgagagcg agatctttga cgccgccttc 1860

aagaccatga tgatcttcac cacctggacc gccaaagacc tgcacatcct gcacacacac 1920

gtgcccgagg tgttcacctg ccaggacgcc gccgccagaa acggcgagta tgtgctgatc 1980

ctgcccgccg tgcagggcca cagctacgtg atcaccagaa acaagcccca gagaggcctg 2040

gtgtacagcc tggccgacgt ggacgtgtat aatcccatca gcgtggtgta tctgagcaaa 2100

gacacctgcg tgtctgaaca cggcgtgatc gagaccgtgg ccctgcccca ccccgacaat 2160

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atggacatta ttatcatcga ttctaaggac accgagagac agctggccgc catgggcaac 2280

agcacaatcc ccccctttaa ccccgatatg cacggcgacg acagcaaagc cgtgctgctg 2340

ttccccaacg gcaccgtggt gacactgctg ggattcgaga gaagacaggc catcagaatg 2400

agcggccagt acctgggcgc cagcctggga ggagccttcc tggctgtggt gggcttcggg 2460

atcatcggct ggatgctgtg cggcaacagt aggctgagag agtataacaa gatccccctg 2520

acatga 2526

<210> 23

<211> 841

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 23

Met Phe Ala Leu Val Leu Ala Val Val Ile Leu Pro Leu Trp Thr Thr

1 5 1015

Ala Asn Lys Ser Tyr Val Thr Pro Thr Pro Ala Thr Arg Ser Ile Gly

202530

His Met Ser Ala Leu Leu Arg Glu Tyr Ser Asp Arg Asn Met Ser Leu

354045

Lys Leu Glu Ala Phe Tyr Pro Thr Gly Phe Asp Glu Glu Leu Ile Lys

505560

Ser Leu His Trp Gly Asn Asp Lys Lys His Val Phe Leu Val Ile Val

65707580

Lys Val Asn Pro Thr Thr His Glu Gly Asp Val Gly Leu Val Ile Phe

859095

Pro Lys Tyr Leu Leu Ser Pro Tyr His Phe Lys Ala Glu His Arg Ala

100 105 110

Pro Phe Pro Ala Gly Arg Phe Gly Phe Leu Ser His Pro Val Thr Pro

115 120 125

Asp Val Ser Phe Phe Asp Ser Ser Phe Ala Pro Tyr Leu Thr Thr Gln

130 135 140

His Leu Val Ala Phe Thr Thr Phe Pro Pro Asn Pro Leu Val Trp His

145 150 155 160

Leu Glu Arg Ala Glu Thr Ala Ala Thr Ala Glu Arg Pro Phe Gly Val

165 170 175

Ser Leu Leu Pro Ala Arg Pro Thr Val Pro Lys Asn Thr Ile Leu Glu

180 185 190

His Lys Ala His Phe Ala Thr Trp Asp Ala Leu Ala Arg His Thr Phe

195 200 205

Phe Ser Ala Glu Ala Ile Ile Thr Asn Ser Thr Leu Arg Ile His Val

210 215 220

Pro Leu Phe Gly Ser Val Trp Pro Ile Arg Tyr Trp Ala Thr Gly Ser

225 230 235 240

Val Leu Leu Thr Ser Asp Ser Gly Arg Val Glu Val Asn Ile Gly Val

245 250 255

Gly Phe Met Ser Ser Leu Ile Ser Leu Ser Ser Gly Leu Pro Ile Glu

260 265 270

Leu Ile Val Val Pro His Thr Val Lys Leu Asn Ala Val Thr Ser Asp

275 280 285

Thr Thr Trp Phe Gln Leu Asn Pro Pro Gly Pro Asp Pro Gly Pro Ser

290 295 300

Tyr Arg Val Tyr Leu Leu Gly Arg Gly Leu Asp Met Asn Phe Ala Lys

305 310 315 320

His Ala Thr Val Asp Ile Cys Ala Tyr Pro Glu Glu Ser Leu Asp Tyr

325 330 335

Arg Tyr His Leu Ser Met Ala His Thr Glu Ala Leu Arg Met Thr Thr

340 345 350

Lys Ala Asp Gln His Asp Ile Asn Glu Glu Ser Tyr Tyr His Ile Ala

355 360 365

Ala Arg Ile Ala Thr Ser Ile Phe Ala Leu Ser Glu Met Gly Arg Thr

370 375 380

Thr Glu Tyr Phe Leu Leu Asp Glu Ile Val Asp Val Gln Tyr Gln Leu

385 390 395 400

Lys Phe Leu Asn Tyr Ile Leu Met Arg Ile Gly Ala Gly Ala His Pro

405 410 415

Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Asp Leu Ile Phe Ala Asp Pro Ser Gln

420 425 430

Leu His Asp Glu Leu Ser Leu Leu Phe Gly Gln Val Lys Pro Ala Asn

435 440 445

Val Asp Tyr Phe Ile Ser Tyr Asp Glu Ala Arg Asp Gln Leu Lys Thr

450 455 460

Ala Tyr Ala Leu Ser Arg Gly Gln Asp His Val Asn Ala Leu Ser Leu

465 470 475 480

Ala Arg Arg Val Ile Met Ser Ile Tyr Lys Gly Leu Leu Val Lys Gln

485 490 495

Asn Leu Asn Ala Thr Glu Arg Gln Ala Leu Phe Phe Ala Ser Met Ile

500 505 510

Leu Leu Asn Phe Arg Glu Gly Leu Glu Asn Ser Ser Arg Val Leu Asp

515 520 525

Gly Arg Thr Thr Leu Leu Leu Met Thr Ser Met Cys Thr Ala Ala His

530 535 540

Ala Thr Gln Ala Ala Leu Asn Ile Gln Glu Gly Leu Ala Tyr Leu Asn

545 550 555 560

Pro Ser Lys His Met Phe Thr Ile Pro Asn Val Tyr Ser Pro Cys Met

565 570 575

Gly Ser Leu Arg Thr Asp Leu Thr Glu Glu Ile His Val Met Asn Leu

580 585 590

Leu Ser Ala Ile Pro Thr Arg Pro Gly Leu Asn Glu Val Leu His Thr

595 600 605

Gln Leu Asp Glu Ser Glu Ile Phe Asp Ala Ala Phe Lys Thr Met Met

610 615 620

Ile Phe Thr Thr Trp Thr Ala Lys Asp Leu His Ile Leu His Thr His

625 630 635 640

Val Pro Glu Val Phe Thr Cys Gln Asp Ala Ala Ala Arg Asn Gly Glu

645 650 655

Tyr Val Leu Ile Leu Pro Ala Val Gln Gly His Ser Tyr Val Ile Thr

660 665 670

Arg Asn Lys Pro Gln Arg Gly Leu Val Tyr Ser Leu Ala Asp Val Asp

675 680 685

Val Tyr Asn Pro Ile Ser Val Val Tyr Leu Ser Lys Asp Thr Cys Val

690 695 700

Ser Glu His Gly Val Ile Glu Thr Val Ala Leu Pro His Pro Asp Asn

705 710 715 720

Leu Lys Glu Cys Leu Tyr Cys Gly Ser Val Phe Leu Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Thr Gly Ala Ile Met Asp Ile Ile Ile Ile Asp Ser Lys Asp Thr Glu

740 745 750

Arg Gln Leu Ala Ala Met Gly Asn Ser Thr Ile Pro Pro Phe Asn Pro

755 760 765

Asp Met His Gly Asp Asp Ser Lys Ala Val Leu Leu Phe Pro Asn Gly

770 775 780

Thr Val Val Thr Leu Leu Gly Phe Glu Arg Arg Gln Ala Ile Arg Met

785 790 795 800

Ser Gly Gln Tyr Leu Gly Ala Ser Leu Gly Gly Ala Phe Leu Ala Val

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Val Gly Phe Gly Ile Ile Gly Trp Met Leu Cys Gly Asn Ser Arg Leu

820 825 830

Arg Glu Tyr Asn Lys Ile Pro Leu Thr

835 840

<210> 24

<211> 2607

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 24

atgttcgtga ccgccgtggt gtccgtgtcc cccagcagct tctacgagtc cctgcaggtg 60

gagcccaccc agtccgagga catcaccaga tccgcccacc tgggcgacgg cgacgagatc 120

agggaggcca ttcataagag ccaggacgcc gagaccaagc ccaccttcta cgtgtgcccc 180

cccccaaccg gcagcaccat cgtgagactg gaaccaccca gaacctgtcc cgactaccac 240

ctgggaaaga acttcaccga gggcattgcc gtggtgtaca aagagaacat cgccgcctac 300

aaattcaagg ccaccgtgta ctacaaagac gtgatcgtga gcaccgcctg ggccggctct 360

agctacaccc agatcacaaa cagatacgcc gacagagtgc ccatccccgt gtccgagatc 420

acagacacca tcgacaagtt cggaaaatgc agcagcaagg ccacctacgt gagaaacaac 480

cacaaagtgg aggccttcaa cgaggacaag aacccacagg acatgccact gatcgccagc 540

aagtacaaca gcgtgggcag caaggcctgg cacaccacca acgacaccta catggtggcc 600

ggcacccccg gcacctacag aaccggaacc tccgtgaact gcatcatcga ggaagtggag 660

gccagaagca tcttccccta cgacagcttc ggcctgagca caggcgacat catctacatg 720

agcccatttt tcggcctgag agacggcgcc tatcgcgagc acagcaacta cgccatggat 780

cggttccacc agttcgaggg atacaggcag agagacctgg acaccagagc cctgctggag 840

cccgctgcca gaaacttcct ggtgaccccc cacctgacag tgggctggaa ctggaagccc 900

aagagaaccg aggtgtgcag cctggtgaag tggagagaag tggaagatgt ggtgagagat 960

gaatacgccc acaactttag attcaccatg aaaaccctga gcaccacatt catcagcgag 1020

acaaacgagt tcaacctgaa ccagatccac ctgagccagt gcgtgaagga ggaggccaga 1080

gccattatca accggatcta caccaccaga tacaacagca gccacgtgag aaccggagac 1140

atccagacct acctggccag aggcggcttc gtggtggtgt tccagcccct gctgagcaac 1200

agcctggcca gactgtacct gcaggaactg gtgagggaaa acaccaacca cagcccccag 1260

aaacacccca ccagaaacac aagaagcaga agatcagtgc ccgtggaact gagagccaac 1320

agaacaatca ccaccaccag cagcgtggaa ttcgccatgc tgcagttcac ctacgaccac 1380

atccaggagc acgtgaacga aatgctggcc aggatcagca gtagctggtg ccagctgcag 1440

aacagagaaa gagccctgtg gagtgggctg ttccccatca accccagcgc cctggcctcc 1500

accattctgg atcagagagt gaaagccaga atcctgggcg acgtgatcag cgtgagcaac 1560

tgccccgaac tgggcagcga cacaagaatc atcctgcaga acagcatgag agtgagcggc 1620

tctactacca gatgctatag ccggcctctg atctctatcg tgagcctgaa tggaagcggg 1680

accgtggaag gacagctggg cacagacaac gaactgatca tgagcagaga tctgctggag 1740

ccatgcgtgg ctaaccacaa gcgctacttc ctgttcgggc accactacgt gtactatgag 1800

gactacagat acgtgagaga gatcgccgtg cacgacgtgg ggatgatttc tacatacgtg 1860

gacctgaatc tgacactgct gaaggaccgg gagttcatgc ccctgcaggt gtacacaaga 1920

gacgagctga gagacacagg cctgctggac tattctgaaa tccagaggag aaaccagatg 1980

cacagcctga gattctatga catcgacaag gtggtgcagt acgacagcgg gacagccatc 2040

atgcagggaa tggcccagtt cttccagggc ctggggaccg ccggccaggc tgtgggacat 2100

gtggtgctgg gggctaccgg cgccctgctg agtaccgtgc acgggtttac caccttcctg 2160

agcaacccct ttggcgccct ggccgtgggc ctgctggtgc tggctggact ggtggccgct 2220

ttttttgctt atcgctatgt gctgaagctg aagacctccc ccatgaaggc cctgtaccca 2280

ctgaccacca agggactgaa acagctgccc gaaggcatgg atcccttcgc cgagaagccc 2340

aacgccaccg acacccccat cgaagaaatc ggcgactccc agaacaccga acccagcgtg 2400

aacagcggct tcgacccaga caaattcaga gaagcccagg aaatgattaa gtacatgacc 2460

ctggtgagcg ccgccgagag acaggagagc aaggccagaa aaaagaacaa gaccagcgcc 2520

ctgctgacca gcagactgac cggcctggcc ctgagaaaca gaagaggcta cagcagagtg 2580

agaaccgaga acgtgaccgg cgtgtga 2607

<210> 25

<211> 868

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 25

Met Phe Val Thr Ala Val Val Ser Val Ser Pro Ser Ser Phe Tyr Glu

1 5 1015

Ser Leu Gln Val Glu Pro Thr Gln Ser Glu Asp Ile Thr Arg Ser Ala

202530

His Leu Gly Asp Gly Asp Glu Ile Arg Glu Ala Ile His Lys Ser Gln

354045

Asp Ala Glu Thr Lys Pro Thr Phe Tyr Val Cys Pro Pro Pro Thr Gly

505560

Ser Thr Ile Val Arg Leu Glu Pro Pro Arg Thr Cys Pro Asp Tyr His

65707580

Leu Gly Lys Asn Phe Thr Glu Gly Ile Ala Val Val Tyr Lys Glu Asn

859095

Ile Ala Ala Tyr Lys Phe Lys Ala Thr Val Tyr Tyr Lys Asp Val Ile

100 105 110

Val Ser Thr Ala Trp Ala Gly Ser Ser Tyr Thr Gln Ile Thr Asn Arg

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Tyr Ala Asp Arg Val Pro Ile Pro Val Ser Glu Ile Thr Asp Thr Ile

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865