一种动物双歧杆菌乳亚种菌株及其用途

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种动物双歧杆菌乳亚种菌株及其用途。

背景技术

在中国，随着经济的迅速发展，人们饮食习惯的改变和身体活动减少，导致与肥胖相关的疾病如糖尿病提前出现。糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病会引起血管和神经发生病变，而出现各种并发症，严重威胁患者的健康和生命。

目前，市售的降糖药都有常见的几点副作用。一是低血糖。降糖药物如果应用剂量过大，或者饮食不规律容易引起低血糖，尤其是胰岛素促泌剂包括磺脲类药物和格列奈类，通过促进胰岛素发挥降糖作用，单独或联合使用都有发生低血糖的可能，严重者可能发生低血糖昏迷。二是胃肠道反应。口服降糖药物有可能引起胃肠道反应，比如恶心、呕吐、腹泻、腹胀等，像双胍类制剂、糖苷酶抑制剂都有胃肠道反应。三是肝、肾损害。口服降糖药物可能加重肝、肾损害，尤其是在肝、肾功能不全的患者中。胰岛素对肝、肾功能没有影响。四是药物过敏。常用的降糖药都有引起过敏可能，比如皮疹、皮肤瘙痒等。五、其他。像噻唑烷二酮类药物可引起钠水潴留导致水肿，钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂，可能引发泌尿生殖系统感染、酮症酸中毒等。

动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)分为两个亚种，分别为动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis subsp.animalis)和动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)，通过维护肠道微生态平衡、调节免疫反应，减少氧化应激，增加短链脂肪酸的分泌进而控制血糖，具备良好的安全性和长久的安全使用历史，已被列入中国《可用于食品菌种名单》和欧盟安全资格认定(qualifiedpresumption of safety,QPS)名单中。卫生部第25号文中规定了婴幼儿允许使用的9种菌株，其中双歧杆菌为动物双歧杆菌乳亚种Bb-12、动物双歧杆菌乳亚种Bi07和HN019。目前，在中国本土尚未筛选出优良的动物双歧杆菌乳亚种。

因此，筛选一株中国本土的有助于减肥和降血糖等的优良动物双歧杆菌乳亚种至关重要。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)菌株、食品和保健品以及药物组合物，及其用途。

一方面，本发明提供一种动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalissubsp.lactis)菌株，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株的保藏编号为CGMCC No.25680。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株包含由SEQ ID NO:1表示的16S rRNA基因。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株具有高产乳酸和短链脂肪酸的能力。

本发明还提供了所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于生产乳酸和短链脂肪酸的用途。

可选地，所述短链脂肪酸选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和异丁酸中的一种或多种。

另外，本发明的动物双歧杆菌乳亚种菌株能抑制多种致病菌，还可以耐受人工胃肠液，能粘附到肠道上皮细胞，并且对红霉素，氯霉素，万古霉素，氨苄西林，克林霉素，链霉素都是敏感的。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株具有抗氧化能力。

进一步可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株具有羟自由基清除和/或DPPH自由基清除活性。

本发明还提供了所述动物双歧杆菌乳亚种菌株在制备用于抗氧化的组合物中的用途。

可选地，所述抗氧化为清除羟自由基和/或清除DPPH自由基。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株具有降低氧化应激的能力。

本发明还提供了所述动物双歧杆菌乳亚种菌株在制备用于降低氧化应激的药物中的用途。

另一方面，本发明提供了如上所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株在制备用于减肥的药物中的用途。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于抑制3T3-L1前脂肪细胞分化。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于降低3T3-L1细胞内甘油三酯(TG)含量。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于抑制脂肪的生成。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于治疗因肥胖导致的代谢性疾病。

再一方面，本发明提供了如上所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株在制备用于降低血糖的药物中的用途。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于抑制二肽基肽酶4(DPP-4)和α-葡萄糖苷酶的活性。

可选地，所述动物双歧杆菌乳亚种菌株用于刺激NCI-H716细胞分泌GLP-1。

再一方面，本发明提供一种食品或保健品，其包含如上所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株。

又一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含如上所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株和药用辅料。

又一方面，本发明提供了如上所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株用于预防或治疗糖尿病的药物组合物中的用途。

又一方面，本发明提供了如上所述的动物双歧杆菌乳亚种菌株在制备用于预防或治疗肥胖及相关疾病的药物组合物中的用途。

有益效果：

本发明的动物双歧杆菌乳亚种菌株可以抑制3T3-L1前体脂肪细胞的分化，从而达到有效抑制脂肪沉积的作用，具有减肥功能；可通过产生较高水平的DPP-4抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂，抑制DPP-4和α-葡萄糖苷酶的活性，并且可刺激NCI-H716细胞分泌高含量的GLP-1，从而具有降低血糖的功效。另外，本发明的动物双歧杆菌乳亚种菌株可作为普通食品或保健食品，或作为药品治疗因肥胖导致的代谢性疾病。

附图说明

图1示出了动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株的生物进化树。

图2示出了基于UPGMA方法构建的本发明的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株的RAPD聚类分析图。

图3示出了本发明的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株对3T3-L1前脂肪细胞活力的影响结果。

图4示出了本发明的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株对3T3-L1前脂肪细胞分化的油红染色结果。

图5出示了本发明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对3T3-L前脂肪细胞分化后脂质累积量的影响。注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01，***与模型对照组比较p<0.001。

图6出示了本发明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对3T3-L前脂肪细胞分化后甘油三酯含量的影响。注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01，***与模型对照组比较p<0.001。

图7示出了本发明的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株对3T3-L1前脂肪细胞分化的油红染色结果。

图8出示了本发明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对3T3-L前脂肪细胞分化后脂质累积量的影响。注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01，***与模型对照组比较p<0.001。

图9出示了本发明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对3T3-L前脂肪细胞分化后甘油三酯含量的影响。注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01，***与模型对照组比较p<0.001。

图10出示了本发明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠空腹血糖和糖耐量的影响。注：*与模型对照组比较p<0.05，**与模型对照组比较p<0.01，***与模型对照组比较p<0.001。

微生物保藏说明

本发明的动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)HOM1119菌株于2022年9月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏中心地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏编号为CGMCC No.25680。

本发明的动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)HOM1119菌株于2023年5月送检到中国科学院微生物研究所进行鉴定。

检测鉴定结论如下：在本实验室条件下，根据送检菌种的细胞形态、生理生化特征、16S rRNA基因序列、tuf基因序列等实验数据综合分析，参考《伯杰氏系统细菌学手册》、International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology有关研究论文，送检菌种(菌种编号：HOM1119)的鉴定结果为：Bifidobacterium animalissubsp.lactis(动物双歧杆菌乳亚种)。

该菌株的细胞形态为：多形态杆状；生理生化特征为：革兰氏阳性，接触酶阴性(-)，氧化酶阴性(-)；16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示，tuf基因序列如SEQ ID NO:9所示。

具体实施方式

本发明公开了菌株、特性及应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明的范围内。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为更进一步阐述本发明为达到预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此。凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施中未注明具体条件的实验方法，均按照本领域常规方法及条件实施。

定义

如本文所施用的，术语DPPH自由基是指1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，别名1,1-二苯基-2-苦肼基(自由基)；1,2-二苦基-2-三硝基苯亚肼；1,2-二苯基-2-苦肼基。作为一种稳定的自由基，DPPH能在有机溶剂中稳定存在，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

3T3-L1前脂肪细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)，是小鼠的正常细胞，也称3t3l1脂肪前体细胞。3T3-L1脂肪前体细胞小鼠胚胎成纤维细胞也称3t3l1脂肪前体细胞，该细胞有接触性抑制生长特征且能向脂肪样细胞分化，高血清培养液可促进细胞脂肪积累等。

3T3-L1细胞是一种小鼠胚胎成纤维细胞系，这种细胞系由于其能够在体外分化为类脂肪细胞，被广泛应用于肥胖和糖尿病等代谢性疾病的研究中。当细胞从快速分裂到长满且接触抑制时，该细胞经过前脂肪向脂肪样逆转。在培养过程中，高血清含量会促进脂肪积累。

需要说明的是，本发明中所使用的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

本发明中所使用的试剂和材料，如无特别说明，均采用常规方法配制或者由商业途径获得。

实施例1动物双歧杆菌乳亚种HOM1119的分离及鉴定

(1)人工胃肠液配制

人工胃液：取稀盐酸(1mol/L)16.4mL，加水800mL，调节pH至3.0，加入胃蛋白酶10g，摇匀后，加水至1000mL，5000rpm离心5min，取上清液，0.22μm滤膜过滤除菌，-20℃保存，备用。

人工肠液：取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL，用0.4％(0.1mol/L)的氢氧化钠溶液调节pH至6.8，另取胰酶10g，猪胆盐3g，加水适量使溶解，将两液混合，加水至1000mL，5000rpm离心5min，取上清液，0.22μm滤膜过滤除菌，-20℃保存，备用。

(2)分离培养基配制

MRS-Cys液体培养基：每升MRS肉汤培养基(货号：CM1163，英国OXOID公司)的基础上加入0.5克L-半胱氨酸盐酸盐，121℃灭菌15min，备用，2-8℃避光保存一周。

含有溴甲酚紫的MRS-Cys固体培养基：每升MRS固体培养基(货号：CM1175，英国OXOID公司)基础上添加溴甲酚紫0.04g，充分搅拌均匀。121℃灭菌15min，超净工作台中倒板，每个培养皿中倒入约15mL，凝固后备用。

(3)动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株的分离筛选

本发明的动物双歧杆菌乳亚种分离自健康婴儿粪便。

用无菌厌氧管收集离体粪便，置于厌氧环境下低温保存。取样当天即开始试验，取约1g粪便样品，加入含有9mL的MRS-Cys液体培养基的厌氧管中，37℃厌氧培养24h，8000rpm离心10min，弃上清，加入人工胃液10mL，混匀后，37℃厌氧培养3h，8000rpm离心10min，弃上清，加入人工肠液10mL，混匀后，37℃厌氧培养3h，利用10倍稀释法对样品稀释，稀释至10

挑取周边变黄的单菌落，划线培养，纯化3-4次至菌落单一，同时进行革兰氏染色、镜检观察菌落形态。转接单菌落至液体培养基中进行纯培养，甘油保种，保存于-80℃冰箱。

(4)动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株形态观察

动物双歧杆菌乳亚种HOM1119在MRS琼脂培养基上37℃厌氧培养48h，菌落圆形，呈乳白色，表面湿润光滑，中央隆起，边缘整齐，菌落直径约2.5mm。光学显微镜下观察，菌体呈端部膨大的杆状，棍棒状或Y形杆菌，菌体大小约为(0.5～0.9)μm×(3～6)μm，单个或成对排列，革兰氏阳性，不形成芽孢。同时筛选了其他两株相同形态的菌株，命名为动物双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33。

(5)动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株的鉴定

16S rDNA菌种鉴定：将保存的三株菌株HOM1119、BH13-25和BH13-33，分别抽提DNA，进行16S rDNA扩增，利用通用引物27F：5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’；1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’(见表1)进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，然后切胶回收、测序，分离获得的菌株进行16S rDNA测序。根据其16S rDNA序列，用BLAST工具在NCBI数据库中进行比对，利用Mega 7.0软件绘制生物进化树，如图1所示，3个菌株的鉴定结果均为动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)，分别命名为动物双歧杆菌乳亚种HOM1119、BH13-25和BH13-33，其中，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119的16S rRNA基因的序列如SEQ ID NO:1所示：

CTTACACATGCAGTCGAACGGGATCCCTGGCAGCTTGCTGTCGGGGTGAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCAACCTGCCCTGTGCACCGGAATAGCTCCTGGAAACGGGTGGTAATACCGGATGCTCCGCTCCATCGCATGGTGGGGTGGGAAATGCTTTTGCGGCATGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGTTGGCGGGGTGATGGCCCACCAAGGCGTTGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGCGGGATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCGCTTTTGTTCAAGGGCAAGGCACGGTTTCGGCCGTGTTGAGTGGATTGTTCGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCATCGCCTAACGGTGGATCTGCGCCGGGTACGGGCGGGCTGGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACACCAATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTCACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGTGGGGCCCTTTCCACGGGTCCCGTGTCGGAGCCAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTGCCGGATCGCCGTGGAGACACGGTTTCCCTTCGGGGCCGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCGCATGTTGCCAGCGGGTGATGCCGGGAACTCATGTGGGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAACGCGGTGCGACACGGTGACGTGGGGCGGATCGCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAACGCCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGAAAGTGGGTAGCACCCGAAGCCGGTGGCCCGACCCTTGTGGGGGGAGCCGTCTAA

另外，与本发明的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株同时分离出的动物双歧杆菌乳亚种菌株BH13-25和BH13-33，在本发明中用作对照菌株，其16S rRNA基因的序列分别如SEQ ID NO:10和11所示。通过比较本发明的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株以及在本发明中用作对照菌株的动物双歧杆菌乳亚种菌株BH13-25和BH13-33的16S rRNA基因序列可知，菌株BH13-25与本发明的菌株HOM1119具有1401个碱基相同，序列相似度为98.87％；菌株BH13-33与本发明的菌株HOM1119具有1396个碱基相同，序列相似度为98.52％。

(6)随机扩增多态性DNA(RAPD)菌株鉴定：将保存的菌株提取DNA，以菌株DNA为模版，分别用5种引物OPA-02：TGC CGA GCT G；OPA-18：AGG TGA CCG T；OPL-07：AGG CGG GAAC；OPL-16：AGG TTG CAG G；OPM-05：GGG AAC GTG T(见表1)，通过PCR扩增出能够显示多态性的DNA片段，继凝胶电泳后呈现出不同的DNA差异，通过聚类分析软件进行分析，结果见图2。如图2所示，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119与部分商业动物双歧杆菌乳亚种菌株以及与本发明同时分离出的另外两种菌株BH13-25和BH13-33均不同，具有唯一性。

表1

实施例2抑制常见致病菌能力试验

(1)指示菌活化

指示菌株大肠埃希菌(Escherichia coli)ATCC8739；金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC6538；鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)ATCC14028；铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC9027；单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)ATCC19111和艰难梭菌(Clostridium difficile)ATCC9689均购买于中国工业微生物保藏中心。将指示菌(大肠埃希菌ATCC8739；金黄色葡萄球菌ATCC6538；鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028；铜绿假单胞菌ATCC9027；单增李斯特菌ATCC19111)以占培养基总量1％的接种量接种于TSB培养基(胰蛋白胨大豆肉汤培养基，其中T是胰蛋白胨，S是大豆，B是肉汤)中，37℃，180rpm有氧培养24h备用。艰难梭菌ATCC9689以占培养基总量1％的接种量接种于脑心浸液肉汤(BHI)培养基，37℃，静止厌氧培养24h备用。

(2)动物双歧杆菌乳亚种活化

将实施例1中制备的-80℃冷冻保存的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119及对照菌株，分别以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液。然后在8000rpm条件下离心10min，取上清液做抑菌试验。

(3)平板制备

将已灭菌的TSA培养基加热到完全融化，倒入培养皿内，置于水平台面上使琼脂层形成均匀厚度，待其凝固。将指示菌加入到TSA培养基中，震荡均匀后，倒入预先制备好的TSA空白琼脂平板内，静置凝固。

(4)抑菌实验

用无菌镊子将牛津杯轻放于平板上，中间保持一定距离，向其中分别加入0.2mL待测的乳酸菌发酵液上清液，置于4℃冰箱中扩散24小时后，37℃培养箱中培养至少18小时，观察抑菌圈的出现。形成抑菌圈后用直尺进行测量。以实施例1中的液体培养基(MRS-Cys)为阴性对照，每个样做3个平行，抑菌结果见表2。

表2动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对致病菌的抑制效果

注：“–”无抑菌活性；“+”11-16mm；“++”17-22mm；“+++”≥23mm

由表2可知，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对6种致病菌均有抑制作用，与另外2株动物双歧杆菌乳亚种相比，其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及艰难梭菌的抑菌效果较好，说明其具有较好的抑制致病菌的能力。

实施例3胃肠道通过能力试验

(1)菌株的活化

将实施例1中制备的-80℃冷冻保存的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119及对照菌株BH13-25和BH13-33，分别以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液。

(2)人工胃液的配制

取稀盐酸16.4ml，加水约800ml与胃蛋白酶10g，摇匀后，调节pH为3.0，加水至1000ml，用0.2μm微孔滤膜过滤后待用。

(3)人工肠液的配制

取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL溶解，调节pH至6.8，另加胰蛋白酶10g，猪胆盐3g，溶解后使两溶液混合，加水至1000mL，用0.22um无菌滤膜在无菌环境下过滤，备用。

(4)菌株在模拟胃肠道中存活能力评价

取待测菌株活化后菌液1mL，将菌体加入至9mL人工胃液(pH3.0)中，混匀后计活菌数，放置于37℃培养箱培养3h后计活菌数。在人工胃液中培养3h后，将全部菌体转入至等体积人工肠液(pH6.8)中，混匀后于37℃培养。分别于3h、24h用MRS培养基进行平板活菌计数，其存活率用以下公式计算：

胃液3小时存活率(％)＝[logCFUN1/logCFUN0]×100％

肠液3小时存活率(％)＝[logCFUN2/logCFUN0]×100％

肠液24小时存活率(％)＝[logCFUN3/logCFUN0]×100％

N0＝未处理前动物双歧杆菌乳亚种活菌数，N1＝经过胃液处理3小时之后的动物双歧杆菌乳亚种活菌数，N2＝经过肠液处理3小时之后的动物双歧杆菌乳亚种活菌数，N3＝经过肠液处理24小时之后的动物双歧杆菌乳亚种活菌数。数据采用SPSS25.0软件进行单因素方差(ANOVA)分析及邓肯多重比较，结果见表3。

表3动物双歧杆菌乳亚种HOM1119在模拟胃肠液中的存活率

注：同列肩标为不同大写字母的表示差异极显著(p<0.01)

从表3可以看出：动物双歧杆菌乳亚种HOM1119在经过3小时的模拟胃液处理后，存活率高于98％，菌液继续经24小时的模拟肠液处理后，其存活率仍可高达85％以上，且极显著(p<0.01)优于其他2株动物双歧杆菌乳亚种菌株BH13-25和BH13-33的肠液耐受性。说明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119在肠道中具有较高的存活率，为其在肠道内定植及发挥有效的功能奠定基础。

实施例4肠上皮细胞黏附能力试验

(1)细胞培养基配制

完全培养基：高糖DMEM培养基，其中添加10％灭活的胎牛血清(FBS)及1％(v/v)的抗生素(100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素)，混合后于4℃储存。

不完全培养基：高糖DMEM培养基，其中添加10％灭活的胎牛血清(FBS)混合后于4℃储存。

(2)细胞的复苏与培养

人结直肠腺癌细胞Caco-2细胞购买于中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。用新鲜的培养液重悬细胞，使其均匀分散于培养瓶中，在5％ CO

(3)动物双歧杆菌乳亚种活化

将实施例1中制备的-80℃冷冻保存的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液。

(4)粘附实验

8000rpm离心10min收集在相应培养基中生长的菌体；用DPBS洗涤菌体3次后不完全培养基重悬菌体，并调节菌体浓度为10

表4动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对Caco-2细胞的粘附能力

注：同列肩标为不同大写字母的表示差异极显著(p<0.01)，不同小写字母的表示差异显著(p<0.05)

表4的结果表明，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对人结肠癌细胞Caco-2的粘附率为5.14％，粘附指数为2.56，优于其他2株动物双歧杆菌乳亚种，具有较好的粘附肠道上皮细胞的能力。

粘附指数＝粘附后细菌数/每个平皿细胞数

粘附率＝粘附后细菌数/粘附前细菌数

实施例5乳酸和短链脂肪酸产生能力试验

将实施例1中制备的-80℃冷冻保存的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液。然后在8000rpm条件下离心10min，取上清液用气相色谱仪检测乳酸和短链脂肪酸的含量。实施例1所述的MRS-Cys液体培养基为阴性对照，其他2株动物双歧杆菌乳亚种作为阳性对照，每个样做3个平行，数据采用SPSS25.0软件进行单因素方差(ANOVA)分析及邓肯多重比较，结果见表5。

表5动物双歧杆菌乳亚种HOM1119乳酸和短链脂肪酸产生能力

注：同列肩标为不同大写字母的表示差异极显著(p<0.01)

由表5可知，与其他动物双歧杆菌乳亚种相比，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119具有较强的产生乳酸和短链脂肪酸(乙酸，甲酸，丙酸，丁酸和异丁酸)的能力。

实施例6抗生素敏感性试验

药敏试验依据国际标准化组织制定的ISO10932-2010牛奶和乳制品，适用于双歧杆菌和非肠球菌乳酸菌(LAB)的抗生素最低抑菌浓度(MIC)测定方法进行。

(1)培养基配制

MRS-Cys液体培养基：同实施例1

LSM-Cys液体培养基：称取Iso-Sensitest培养基(货号：CM0473B，英国OXOID公司)21.06g，称取MRS Broth 5.2g，L-半胱氨酸盐酸盐0.3g，加水至0.5L，调节pH 6.85±0.1，121℃灭菌15min，pH应为6.7±0.1，备用，2-8℃避光保存一周。

(2)动物双歧杆菌乳亚种活化与增殖

将实施例1中制备的-80℃冷冻保存的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的液体培养基(MRS-Cys)中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液。将活化的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119在MRS-Cys琼脂培养基上繁殖，37℃静置厌氧培养48小时。

(3)抗生素微稀释板制备

称取抗生素0.0512g，加入溶剂10mL，氯霉素和红霉素用乙醇溶解(无需过滤)，氨苄西林用磷酸盐缓冲液(pH 8.0，0.1mol/L)，其它抗生素用水溶解，震荡溶解后0.22μm滤膜过滤，分装至EP管中，浓度为5120μg/mL(5.12mg/mL)，-20℃保存备用。将抗生素母液用水(氨苄西林用磷酸盐缓冲液)稀释到合适的浓度范围。将50μL稀释液加入到微量稀释板的孔中。

(4)制备细菌悬浮液

从琼脂平板中拾取单个菌落。将获得的菌落悬浮在装有2mL至5mL无菌盐水的无菌培养管中。将获得的菌落悬浮于预先还原的LSM-Cys液体培养基中。悬浮菌落直至溶液浊度达到McFarland标准1或用分光光度计在625nm处的光密度为0.16～0.2。悬浮液大约相当于3×10

(5)读取MIC结果

孵育48小时后，目视读取MIC。孵育后，检查阴性对照孔是否存在可见的菌的生长。如果发现有污染，则拒绝有关菌株产生的所有数据。注意：若阳性对照孔中无生长现象，表明所测试的菌株对用于溶解抗生素的溶剂敏感。在这种情况下，读取该特定抗生素的MIC没有意义。若阴性和阳性对照检查正常，则通过与阳性对照进行比较，目测确定每种抗生素中菌的生长。最好将微量稀释板放置于含有放大镜机架的顶部，提供间接光线的工作台灯便于阅读。细菌的生长很容易在放大镜下检测到，是孔底部的沉淀。丢弃观察到生长不连续的任何系列孔(例如，在16μg/mL和64μg/mL生长，而在32μg/mL不生长)。终点定义为目测无生长的最低抗生素浓度。该浓度即为该特定菌株的该抗生素的MIC。每个样品做3次重复，植物乳植杆菌ATCC14917，动物双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33为阳性对照菌株。动物双歧杆菌乳亚种HOM1119的抗生素敏感性结果见表6。植物乳植杆菌ATCC14917的MIC结果与ISO10932-2010附录所示的结果是一致的，说明该实验方法是准确的(植物乳杆菌是MIC方法推荐的对照菌株，做这个菌株是为了证明该方法的准确性)。根据2012年欧洲食品安全局(European Food Safety Authority，EFSA)制定了在食品中使用菌种的抗生素耐药标准，可知动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对红霉素，氯霉素，万古霉素，氨苄西林，克林霉素，链霉素都是敏感的，其结果与对照菌株动物双歧杆菌乳亚种BH13-25，BH13-33一致。因此，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株是相对安全的。

表6动物双歧杆菌乳亚种HOM1119抗生素敏感性结果

实施例7抗氧化活性检测试验

(1)菌株的活化

选择商业菌株鼠李糖乳酪杆菌GG(ATCC53103)菌株(购买于中国工业微生物保藏中心)(GG是商业菌株，是文献中具有抗氧化效果的菌株)及乳双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33为对照菌株。分别将动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，BH13-25和BH13-33和鼠李糖乳酪杆菌GG菌株以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液，8000rpm离心10min，用无菌0.9％氯化钠溶液将菌株浓度调整到1×10

(2)抗氧化活性测定

按照南京建成生物工程研究所生产的总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒，总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，DPPH自由基清除能力试剂盒和羟自由基测试试剂盒的说明书，测定其氧化能力。每个处理3个平行，数据采用SPSS25.0软件进行单因素方差(ANOVA)分析及邓肯多重比较，结果如表7所示。

表7.动物双歧杆菌乳亚种HOM1119体外抗氧化活性结果

注：同列肩标为不同大写字母的表示差异极显著(p<0.01)

由表7可知，与对照菌株相比，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株的羟自由基清除能力、DPPH自由基清除能力和SOD酶活性极显著(p<0.01)高于鼠李糖乳酪杆菌GG；总抗氧化能力(T-AOC)、自由基清除能力、DPPH自由基清除能力和SOD酶活性均极显著(p<0.01)高于动物双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33。说明动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株具有缓解机体活性氧过多带来的损伤，进而保护产生胰岛素的β细胞。

实施例8 DPP-4抑制性和α-葡萄糖苷酶抑制性试验

(1)菌株的活化

选择商业菌株鼠李糖乳酪杆菌GG(ATCC53103)菌株(购买于中国工业微生物保藏中心)及乳双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33为对照菌株。分别将动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，BH13-25和BH13-33和鼠李糖乳酪杆菌GG菌株以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液，8000rpm离心10min，用无菌0.9％氯化钠溶液将菌株浓度调整到4×10

(2)DPP-4抑制性和α-葡萄糖苷酶抑制性测定

采用DPP-4抑制剂筛选试剂盒(Abnova#KA1311)和α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选试剂盒(Biovision#K938)进行降糖功能的体外筛选。计算菌株样品对以上两种酶的抑制率，每个处理3个平行，数据采用SPSS25.0软件进行单因素方差(ANOVA)分析及邓肯多重比较，结果见表8。

表8动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对DPP-4抑制和α-葡萄糖苷酶抑制结果

注：同列肩标为不同大写字母的表示差异极显著(p<0.01)

由表8可见，与对照菌株动物双歧杆菌乳亚种BH13-25、BH13-33及鼠李糖乳酪杆菌GG相比，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株对DPP-4和α-葡萄糖苷酶均具有较高的抑制率，差异极显著(p<0.01)。说明HOM1119菌株可通过产生较高水平的DPP-4抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂，达到降低血糖值的功能。

实施例9动物双歧杆菌乳亚种HOM1119菌株刺激NCI-H716细胞分泌GLP-1

(1)NCI-H716细胞的培养

本实验选择NCI-H716细胞，(购自中国科学院细胞库)，NCI-H716细胞生长在含有10％胎牛血清(Hyclone)，1％双抗(青霉素和链霉素，Hyclone)的RPMI-1640(Gibco)培养基中，37℃，5％ CO

(2)菌株的培养

选择商业菌株鼠李糖乳酪杆菌GG(ATCC53103)菌株(购买于中国工业微生物保藏中心)及乳双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33为对照菌株。分别将动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，BH13-25和BH13-33和鼠李糖乳酪杆菌GG菌株以占培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置厌氧培养24小时，活化两次后得菌株发酵液，8000rpm离心10min，用无菌0.9％氯化钠溶液将菌株浓度调整到1×10

(3)GLP-1内分泌实验

将NCI-H716细胞以1.5×10

2天后，DMEM培养基用Krebs-Ringer缓冲液代替，缓冲液中分别包含1×10

表9动物双歧杆菌乳亚种刺激NCI-H716细胞分泌GLP-1产量

注：同列肩标为不同大写字母的表示差异极显著(p<0.01)

由表9可见，与对照菌株动物双歧杆菌乳亚种BH13-25、BH13-33及鼠李糖乳酪杆菌GG相比，HOM1119菌株可刺激NCI-H716细胞分泌高含量的GLP-1，浓度达到2413.02pg/mL，差异极显著(p<0.01)。具有降低血糖的功效，降糖机制可能是通过刺激肠道L细胞产生高含量的GLP-1。

实施例10动物双歧杆菌乳亚种HOM1119体外抑制脂肪生成试验1

(1)细胞培养基配制

完全培养基1：高糖DMEM培养基，其中添加10％灭活的小牛血清(NBS)及1％(v/v)的抗生素(100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素)，混合后于4℃储存。

完全培养基2：高糖DMEM培养基，其中添加10％灭活的胎牛(FBS)混合后于4℃储存。

细胞分化培养基1：在完全培养基2中分别加入3-异丁基1-甲基黄嘌呤(IBMX)，使其终浓度达到0.5mol/L，地塞米松(DEX)终浓度达到1μmol/L，胰岛素的终浓度达到10μg/mL；

细胞分化培养基2：在完全培养基2中加入胰岛素，使其终浓度达到10μg/mL，4℃备用。

(2)供试菌体样品准备

将动物双歧杆菌乳亚种HOM1119，以点培养基总量1％的接种量接入到已灭菌的实施例1所述的MRS-Cys液体培养基中，37℃静置有氧培养24小时，连续活化两代后，8000r/min离心10min收集菌体，再用PBS洗涤2次，并重悬浮于PBS溶液中(0.1mol/L，pH7.2～7.4)，成为菌悬液。将细菌悬液置置于水浴中，70℃处理30分钟后为热灭活菌体，于-80℃贮存，备用。

(3)3T3-L1前脂肪细胞的培养

将3T3-L1前脂肪细胞(购买于中国医学科学院基础医学研究所)接种于完全培养基1中按照1:3的比例进行传代，选择3～10代的细胞用于试验。

(4)细胞活力检测

用完全培养基2调节细胞数为2×10

图3示出了动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对3T3-L1前脂肪细胞活力的影响。

由图3结果可知，当死菌体浓度不大于1×10

(5)3T3-L1前体脂肪细胞分化

将培养好的细胞用完全培养基2×10

(6)油红O染色

用适量PBS将已经分化成熟的脂肪细胞轻洗3次，加入0.5mL 4％多聚甲醛固定30min，用超纯水轻洗3次；每孔加入0.5mL油红O工作液，37℃避光染色30min，弃染液，并用超纯水轻洗3次；将培养板置于倒置显微镜下观察结果，拍照。拍照结束后每孔加入等量1mL100％异丙醇萃取脂滴中的油红O染液，室温放置20min，吸取萃取出的染液转移至洁净的96孔培养板中，于500nm处测定吸光度值。使用100％异丙醇为空白，于500nm处测定吸光度值。脂质相对含量计算如下：脂质相对含量(％)＝(OD

3T3-L1细胞在分化成熟后会在细胞内聚集大量脂滴，油红O染色可以直直观反应脂肪分化后，脂质累积量。由图4可知，模型组细胞在诱导的第8天90％的细胞都分化为成熟的脂肪细胞，表现为细胞进一步增大，呈圆形，胞内布满红色脂滴，密集于核周，形成“指坏样”结构，呈典型的成熟脂肪的形态。与模型对照组相比，经动物双歧杆菌乳亚种HOM1119的死菌体处理的前脂肪细胞诱导分化8天后，1×10

(6)3T3-L1细胞内甘油三酯(TG)含量测定

按照南京建成生物工程研究所生产的甘油三酯(TG)检测试剂盒说明测定细胞内甘油三酯含量。简要步骤为每孔加入2.5μL样本，250μL工作液，混匀，37℃孵育10分钟，使用酶标仪在510nm处读取吸光值。使用总蛋白定量试剂盒(BCA法)进行蛋白浓度的测定。简要步骤为每孔加入10μL样本，250μL工作液，混匀，37℃孵育10分钟，使用酶标仪在562nm处读取吸光值。根据公式计算出每克蛋白的甘油酯含量。

计算公式：

每个处理3个平行，数据采用GraphPad prism9软件进行单因素方差(ANOVA)及邓尼特t检验即多个实验组和一个对照组间均数的两两比较分析。3T3-L1细胞内甘油三酯(TG)含量如图6所示。随着动物双歧杆菌乳亚种HOM1119的无细胞提取物浓度的升高，3T3-L1前脂肪细胞内甘油三酯(TG)含量先降低后增加。动物双歧杆菌乳亚种HOM1119死菌体浓度为1×10

实施例11动物双歧杆菌乳亚种HOM1119体外抑制脂肪生成试验2

按照实施例10的方法，以动物双歧杆菌乳亚种BH13-25和BH13-33为对照菌株，死菌浓度选择1×10

实施例12动物双歧杆菌乳亚种HOM1119活性菌粉的制备工艺

(1)菌种的培养

将-80℃冷冻保存的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119以1％的接种量接种于无菌的MRS-Cys液体培养基中，37℃培养16～24小时，如此传代培养两次得到活化后的种子培养液体。将种子培养液以1％的接种量接种于发酵培养基M473中，35～37℃恒温厌氧培养，转速100rpm，氮气保压，压力为200～500mbar。发酵过程中自动流加氢氧化钠溶液保持pH恒定在5.0～5.5，发酵至16～24小时下罐，得到动物双歧杆菌乳亚种HOM1119高密度培养液，活菌数可达150～200亿CFU/mL。表10示出了发酵培养基M473的配方。

表10发酵培养基M473配方

(2)冷冻干保护剂的制备

使用无菌水与保护剂原料混合制备得到含有100～150g/L变性淀粉、20～50g/L海藻糖、0.2～1g/L维生素C、0.2～1g/L甘油的保护剂。

(3)冷冻干燥

将培养结束的动物双歧杆菌乳亚种HOM1119发酵菌液，在2～8℃，6500rpm离心处理15min，弃上清液，收集菌泥，用0.9％无菌生理盐水洗涤菌泥1～2次，将洗涤后菌泥与上述保护剂混合，使混合后菌液菌浓度达到10

实施例13动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对由四氧嘧啶诱导的胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型大鼠血糖影响

(1)选用北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK-(京)2019-0008]繁殖的140g-160g健康SPF级SD雄性大鼠55只，实验动物饲养于北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心SPF级动物室，实验动物使用许可证号：SYXK(京)2017-0038。共分为两批进行实验。实验一批10只进行对正常大鼠空腹血糖影响实验；实验二批45只进行四氧嘧啶诱导胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型大鼠空腹血糖实验；糖耐量实验；血清甘油三酯、总胆固醇实验；血清胰岛素实验。其中高热能饲料配方：52.6％基础饲料、15％蔗糖、15％蛋黄粉、10％猪油、5％酪蛋白、1.2％胆固醇、0.2％胆酸钠、0.6％碳酸氢钙、0.4％石粉。

(2)正常大鼠空腹血糖影响实验：普通饲料适应饲养3天，禁食4h，取血，静置10min后，3000r/min离心10min分离出血清，使用生化分析仪测定给葡萄糖前(即0h)血糖值，给2.5g/kg体重(BW)葡萄糖后0.5、2h血糖值，作为该批次动物基础值。设正常对照组(0CFU/只)和HOM1119组(5×10

(3)四氧嘧啶诱导胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠空腹血糖实验：设立空白对照组、模型组和HOM1119菌株组，每组15只老鼠，HOM1119组灌胃剂量为5×10

(4)数据处理：用SPSS软件进行数据处理。空白对照组与模型对照组，模型对照组与受试物组各指标均用独立样本t检验。

表11.正常大鼠的实验前、后体重

由表11可见，正常大鼠的实验前、后体重在两组间比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表12.HOM1119菌株对正常大鼠空腹血糖的影响

由表12可见，正常大鼠实验前和给受试物后，血糖值及血糖下降百分率在各正常动物剂量组与正常对照组间比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表13.空白、模型对照组大鼠体重

由表13可见，模型对照组与空白对照组比较，实验前后大鼠体重均无显著性差异(p>0.05)。

表14.大鼠脂代谢紊乱模型血糖及糖耐量

**：与空白对照组比较有显著性差异(p<0.01)

表15.大鼠糖脂代谢紊乱模型血脂及胰岛素抵抗指数

*：与空白对照组比较有显著性差异(p<0.05)

由表14、15可见，模型对照组与空白对照组比较，给葡萄糖后0h、0.5h血糖值及血糖曲线下面积升高均有非常显著性差异(p<0.01)，且模型对照组0.5h血糖值≥10mmol/L，表明模型糖代谢紊乱成立。模型对照组与空白对照组比较，血清总胆固醇升高有显著性差异(p<0.05)，判定模型脂代谢紊乱成立；模型对照组与空白对照组比较，胰岛素抵抗指数明显下降(p<0.05)，综合判定胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型成功。

表16.动物双歧杆菌乳亚种HOM1119对大鼠胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠体重的影响

由表16可见，经口给予模型大鼠不同益生菌菌粉后，大鼠的体重在各组与模型对照组间比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表17.HOM1119菌株对胰岛素抗糖脂代谢紊乱模型大鼠空腹血糖的影响

*：与模型对照组比较有显著性差异(p<0.05)

由表17和图10可见，经口给予胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠动物双歧杆菌乳亚种HOM1119后，与模型对照组比较，空腹血糖下降，有显著性差异(p<0.05)。

表18.HOM1119菌株对胰岛素抗糖脂代谢紊乱模型大鼠糖耐量的影响

由表18和图10可见，经口给予胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠动物双歧杆菌乳亚种HOM1119后，给葡萄糖后0.5h、2h血糖值与模型对照组比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表19.HOM1119菌株对胰岛素抗糖脂代谢紊乱模型大鼠血糖曲线下面积的影响

由表19可见，经口给予大鼠动物双歧杆菌乳亚种HOM1119后，给葡萄糖后0-2h血糖曲线下面积与模型对照组比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表20.HOM1119菌株对胰岛素抗糖脂代谢紊乱模型大鼠血清胆固醇及甘油三酯的影响

由表20可见，经口给予大鼠动物双歧杆菌乳亚种HOM1119后，血清总胆固醇及血清甘油三酯与模型对照组比较，差异均无显著性(p>0.05)。

表21.HOM1119对胰岛素抗糖脂代谢紊乱模型大鼠血清胰岛素抵抗指数的影响

由表21可见，经口给予大鼠动物双歧杆菌乳亚种HOM1119后，血清胰岛素抵抗指数对照组比较，差异均无显著性(p>0.05)。

综上所述，经口给予胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型大鼠动物双歧杆菌乳亚种HOM1119后，与模型对照组(0g/kg BW)比较，HOM1119组空腹血糖下降，有显著性差异(p<0.05)，糖耐量均无显著性差异(p>0.05)，且大鼠血脂(总胆固醇、甘油三酯)无明显升高。受试物双歧杆菌乳亚种HOM1119对正常大鼠空腹血糖和体重均无不良影响。因此认为，动物双歧杆菌乳亚种HOM1119具有辅助降血糖功能。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此，在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的细节。