一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法

技术领域

本发明属于荷叶铁线蕨的种植技术领域，涉及一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法。

背景技术

荷叶铁线蕨(Adiantum nelumboides X.C.Zhang)，又名“荷叶金钱草”，为凤尾蕨科(Pteridaceae)书带蕨亚科(Vittarioideae)铁线蕨属(Adiantum)的常绿植物，是一个独立的物种，为亚洲铁线蕨属植物中唯一的单叶型植物，因叶片类似于荷叶而得名。

该植物为中国特有珍稀濒危蕨类植物。依据国际自然保护联盟(TheInternational Union for Conservation of Nature，IUCN)标准，荷叶铁线蕨受威胁等级被评估为极危(Critically Endangered，CR)。研究表明，在过去近30年中，荷叶铁线蕨遭破坏严重，一方面由于荷叶铁线蕨的药用价值而遭到过度采集，野外资源大幅度减少；另一方面由于工程的建设，生境的改变，导致荷叶铁线蕨原生境的栖息地被破坏和片段化，野外种群数量急剧减少而面临野外灭绝的风险。

因此人工繁育已成为挽救及保护荷叶铁线蕨的重要措施。在自然环境中，荷叶铁线蕨主要有无性繁殖(根状茎萌蘖)和有性繁殖(孢子繁殖)两种方式。无性繁殖只需在根部人工分离，繁殖效率低；采用无菌培养和组培技术，可用孢子产生的配子体进行大量扩繁，但无菌培养技术和条件要求高、组培产生的配子体适应力差等原因导致其技术应用性差。

孢子繁殖成为重要途径，筛选适宜孢子萌发条件、基质配方，提高孢子萌发率的方法对该植物繁殖、发展及应用有着重要意义，故有必要研究荷叶铁线蕨的孢子萌发新方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1.一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，所述方法包括如下步骤：

(1)撒播孢子：在育苗盒中铺上厚度为3～5cm的经过处理的基质，压实后喷水至含水量为40～50％，按照1.0～1.5m

(2)孢子培养：将撒播孢子后的育苗盒置于空气湿度为80％以上条件下进行孢子萌发培养，所述培养的方法包括方法一或方法二中的任意一种，其中方法一为光照培养，方法二为进行黑暗培养和光照培养的周期性重复变温培养方法；

所述黑暗培养为：将育苗盒置于温度为20～22℃的黑暗条件下培养1d；所述光照培养为：将育苗盒置于温度为25±2℃、光照强度为1000～3000Lx、时间为10～12h/d的光照条件下培养1～2d。

优选的，所述育苗盒的高≥5cm，所述育苗盒含有透明的育苗盒盖、开2～3个沥水小孔的育苗盒底以及底部托盘。

优选的，所述基质由河沙和腐殖土按照1:3～3:1的体积比混合形成。

优选的，所述基质的处理方法为：将所述基质用无纺布包好后用间隙湿热灭菌法处理，所述间隙湿热灭菌法具体为：在121℃下消毒1h后冷却至室温，然后重复消毒2～3次即可。

优选的于，所述基质的处理方法为：将所述基质添加到质量分数为0.4～0.5％的高锰酸钾水溶液中浸湿后放置1～2d即可。

优选的，所述荷叶铁线蕨孢子的采集方法为：在8-9月采集荷叶铁线蕨孢子叶，在通风阴凉地通风保存至荷叶铁线蕨孢子叶风干，收集散落的荷叶铁线蕨孢子，用种子袋包好，置于4～5℃下的冰箱中保存1～2月。

本发明的有益效果在于：本发明公开了一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，主要是将荷叶铁线蕨孢子撒播在铺有基质的育苗盒中，然后进行光照培养使荷叶铁线蕨的孢子萌发。本发明的方法具有育苗条件可控性强、萌发率高、原叶体和孢子苗生长良好等优点。

本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作优选的详细描述，其中：

图1为8～9月采集结实孢子的荷叶铁线蕨孢子叶；

图2为荷叶铁线蕨孢子叶上散落的孢子；

图3为撒播了荷叶铁线蕨孢子的育苗盒；

图4为通过实施例1的方法培养的荷叶铁线蕨原叶体；

图5为通过实施例1的方法培养的荷叶铁线蕨孢子苗。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需要说明的是，以下实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。

实施例1

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

(1)收集荷叶铁线蕨孢子：在8～9月采集结实孢子的荷叶铁线蕨孢子叶(如图1所示)，在通风阴凉地通风保存至荷叶铁线蕨孢子叶风干，收集荷叶铁线蕨孢子叶上散落的荷叶铁线蕨孢子(如图2所示)，用牛皮信封包好，置于4℃冰箱保存1～2月；

(2)撒播孢子：在育苗盒(高≥5cm且该育苗盒含有透明的育苗盒盖、开2～3个沥水小孔的育苗盒底以及底部托盘)中铺上厚度为3～5cm的经过处理(将准备的基质用无纺布包好后用间隙灭菌法，即升温至121℃下消毒1h后冷却至室温，然后升温至121℃下消毒1h后冷却至室温，继续升温至121℃下消毒1h后冷却1h至室温即可)的基质(由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成)，压实后喷水至含水量为40～50％，拌匀后在11月按照1.0～1.5m

(3)孢子培养：将撒播孢子后的育苗盒在空气湿度为80％以上的条件下进行培养(将该育苗盒置于温度为25±2℃下进行照度为1000～3000Lx、时间为10～12h/d的光照条件下2d)使孢子萌发。

图4为通过实施例1的方法培养的荷叶铁线蕨原叶体，图5为通过实施例1的方法培养的荷叶铁线蕨孢子苗。

实施例2

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例1的培养方法由“光照培养即将该育苗盒置于温度为25±2℃下进行照度为1000～3000Lx、时间为10～12h/d的光照”修改为“周期性地将育苗盒进行黑暗培养(将该育苗盒置于温度为20～22℃的黑暗条件下培养1d)和光照培养(将育苗盒置于温度为25±2℃下进行照度为1000～3000Lx、时间为10～12h/d的光照条件下培养2d)”，其余与实施例1相同。

实施例3

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例2中的基质由“由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成”修改为“由河沙和腐殖土按照2:1的体积比混合形成”，其余与实施例2相同。

实施例4

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例2中的基质由“由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成”修改为“由河沙和腐殖土按照3:1的体积比混合形成”，其余与实施例2相同。

实施例5

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例2中的基质由“由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成”修改为“由河沙和腐殖土按照1:2的体积比混合形成”，其余与实施例2相同。

实施例6

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例2中的基质由“由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成”修改为“由河沙和腐殖土按照1:3的体积比混合形成”，其余与实施例2相同。

对比实施例1

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例1的培养方法由“光照培养即将该育苗盒置于温度为25±2℃下进行照度为1000～3000Lx、频率为10～12h/d的光照”修改为“将该育苗盒置于室内自然条件下，每隔10～15d，喷湿表面”，其余与实施例1相同。

对比实施例2

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例2中的基质由“由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成”修改为“100％河沙”，其余与实施例2相同。

对比实施例3

一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，具体方法如下所示：

将实施例2中的基质由“由河沙和腐殖土按照1:1的体积比混合形成”修改为“100％腐殖土”，其余与实施例2相同。

萌发效果

按照实施例1、实施例2和对比实施例1的方法进行荷叶铁线蕨的孢子播种85天，对比不同培养方法下荷叶铁线蕨的孢子萌发的效果，具体如表1所示。

表1不同培养方法下荷叶铁线蕨的孢子萌发的效果

从上述表1可以看出，以当年的孢子(8～9月份采集)及时(11月份)播种，并采用实施例1、实施例2和对比实施例中三种不同的方法进行对比培养，发现相比于对比实施例1中“将该育苗盒置于室内自然条件下，每隔10～15d，喷湿表面”的培养方式，实施例1中采用的直接光照培养“将育苗盒置于温度为25±2℃下进行照度为1000～3000Lx、频率为10～12h/d的光照”和实施例2中采用的黑暗培养和光照培养交替进行的周期性培养(先将育苗盒置于温度为20～22℃的黑暗条件下培养1d，然后将育苗盒置于温度为25±2℃下进行照度为1000～3000Lx、频率为10～12h/d的光照)方法能够促进荷叶铁线蕨的孢子萌发，其中实施例2中的培养方法下荷叶铁线蕨的孢子萌发率最高(90.2％)、孢子萌发整齐、原叶体生长好且萌发时间短。由此可以看出，在孢子早期萌发过程中，需要一定光照和温度，并且温度变化和光照变化都对荷叶铁线蕨孢子萌发有促进作用。

按照实施例2、对比实施例2、对比实施例3和对比实施例4的方法进行荷叶铁线蕨的孢子播种85天和110天，对比不同培养基质下荷叶铁线蕨的孢子萌发的效果，具体如表2所示。

表2不同基质培养下荷叶铁线蕨的孢子萌发的效果

从以上表2可以看出，荷叶铁线蕨的孢子萌发中采用的基质中随着腐殖土含量的增加其萌发率呈先上升后有所下降的趋势，而原叶体生长势也随腐殖土体积比增加表现较好，在110天时统计1～2叶孢子苗的占比呈现先上升而后有所下降的趋势。由此可以初步看出，荷叶铁线蕨孢子萌发基质中腐殖土对原叶体长势和孢子苗的生长有一定的促进作用。而河沙在其中有促进透气、沥水等作用。所以从表2可以看出，以河沙和腐殖土按照一定的体积比(3:1～1:3)形成的基质其萌发率、原叶体长势及孢子小苗等方面较好。

从以上研究可以看出，荷叶铁线蕨孢子在变化培养条件、合适萌发基质上，可提高萌发率、整齐度，有利于该植物的保护和发展。

综上所述，本发明公开了一种荷叶铁线蕨的孢子萌发方法，主要是将荷叶铁线蕨孢子撒播在铺有基质的育苗盒中，然后进行光照培养使荷叶铁线蕨的孢子萌发。本发明的方法具有育苗条件可控性强、萌发率高、原叶体和孢子苗生长良好等优点。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。