分离测定(S)-2-甲氧基-1-丙醇中异构体的方法

技术领域

本发明涉及药物合成原料的分析技术领域，特别涉及一种分离测定(S)-2-甲氧基-1-丙醇中异构体的方法。

背景技术

(S)-2-甲氧基-1-丙醇是合成药物的常见原料，CAS号：91191-95-6，其2位的碳具有手性，其异构体(R)-2-甲氧基甲氧基-1-丙醇，CAS号：159350-97-7，其结构式分别为：

通常在使用(S)-2-甲氧基-1-丙醇合成后续产物时，需要拆分或者定向合成获得单一手性构型的产物，为保证原料的异构体纯度，需要开发科学有效的分析方法。

(S)-2-甲氧基-1-丙醇结构中没有具有紫外吸收的基团，因此此类化合物的手性分离主要是靠手性气相色谱法来进行，但气相可供选择的色谱柱极为有限，且分离不易实现。因此，开发具有专属性分析能力的异构体检测方法变得非常有意义。

醇与酰氯可以反应生成酯，酰氯是常用的衍生试剂。用苯甲酰氯将(S)-2-甲氧基-1-丙醇和异构体(R)-2-甲氧基甲氧基-1-丙醇衍生后即可用手性液相色谱柱对两者的衍生产物进行分离检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高效专属的分离测定(S)-2-甲氧基-1-丙醇中异构体的方法。该方法具有步骤简单、灵敏度高、耐用性好、重现性好、测定结果准确性高并且分离速度快的优点。

为解决上述技术问题，本发明提供一种分离测定(S)-2-甲氧基-1-丙醇中异构体的方法，所述异构体是(R)-2-甲氧基-1-丙醇，其结构式为：

1)空白液配制：取2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置50mL量瓶中，加入约20mL稀释剂,将其置于60℃水浴15min，取出放冷至室温，用稀释剂稀释至刻度，混匀，作为空白溶液；

2)配制异构体储备溶液：取异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇约25mg，精密称定，置50mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为储备溶液；

3)配制分离度溶液：取(S)-2-甲氧基-1-丙醇约50mg，精密称定，置50mL量瓶中，加入约20mL乙腈，准确移取1ml异构体储备溶液，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min。取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为分离度溶液；

4)供试品溶液配制：取供试品置于量瓶中，先加入部分稀释剂、2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，放入60℃加热约15～30分钟，取出冷却至室温，用稀释剂定容至刻度并摇匀，制得1mg/mL的供试品溶液；

5)配制流动相A与流动相B：流动相A是含0.01％～0.1％三氟乙酸的水：乙腈的体积比为100:0～90:10的水溶液，流动相B为含0.01％～0.1％三氟乙酸的乙腈：水的体积比为100:0～90:10的乙腈溶液；

6)采用高效液相色谱法进行测定：采用高效液相色谱仪对空白液、分离度溶液、供试品溶液进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的检测波长为210～220nm，色谱柱为纤维素类手性色谱柱，采用梯度洗脱，流速为0.5～1.5mL/min，色谱柱温度为20～40℃，进样量5μL；

7)计算：通过与分离度溶液谱图对比，供试品溶液的高效液相色谱图上如分别有(R)-2-甲氧基-1-丙醇和(S)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生产物的色谱峰，则供试品中异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的含量计算公式是：

其中：

(R)表示(R)-2-甲氧基-1-丙醇；

(S)表示(S)-2-甲氧基-1-丙醇；

(R)衍生产物的峰面积表示供试品溶液的色谱图上与分离度溶液的色谱图中相同保留时间下出现的色谱峰的峰面积；

(S)衍生产物的峰面积表示供试品溶液的色谱图上与分离度溶液的色谱图中不同保留时间下出现的色谱峰的峰面积。

具体来说，所述稀释剂为乙腈或者乙腈和水的混合液，其中乙腈和水的混合液中乙腈：水的体积比为60:30～80:20。

具体来说，所述加热可采用水浴加热或烘箱加热。

具体来说，所述流动相A和流动相B中三氟乙酸浓度为0.03％。

具体来说，所述流动相A的水溶液为水：乙腈体积比95:5的水溶液，所述流动相B的乙腈溶液为乙腈：水的体积比为95:5的乙腈溶液。

具体来说，所述色谱柱的固定相为纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。

具体来说，所述色谱柱为大赛璐

具体来说，所述色谱柱温度为40℃。

具体来说，所述检测波长为210nm。

具体来说，所述流速为0.8～1.0mL/min。

具体来说，所述梯度洗脱的程序如下：

本发明通过衍生试剂苯甲酰氯将(S)-2-甲氧基-1-丙醇衍生后即可用手性液相色谱柱对异构体(R)-2-甲氧基甲氧基-1-丙醇进行分离检测，经方法学验证，本发明可以对药物合成原料(S)-2-甲氧基-1-丙醇中的异构体(R)-2-甲氧基甲氧基-1-丙醇准确控制，峰型良好，分离良好，稳定性好，回收率高。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面对本发明所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1中得到的空白溶液高效液相色谱图；

图2是本发明实施例1中得到的供试品溶液高效液相色谱图；

图3是本发明实施例1中得到的分离度溶液高效液相色谱图；

图4是本发明实施例2中定量限实验的色谱图；

图5是本发明实施例3中得到的供试品溶液高效液相色谱图；

图6是本发明实施例4中得到的分离度溶液高效液相色谱图；

图7是本发明实施例5中得到的分离度溶液高效液相色谱图。

图8是本发明实施例2中回收率实验的色谱图；

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

分离测定(S)-2-甲氧基-1-丙醇中异构体的方法，具体包括如下内容：

1)仪器与条件：

仪器：高效液相色谱仪：Agilent 1260ⅡHPLC，DAD检测器，检出波长210nm；色谱柱：Chiralpak IC(250mmx4.6 mm,5μm)；流动相：流动相A是0.03％三氟乙酸的水：乙腈(95:5)溶液；流动相B为0.03％三氟乙酸的水：乙腈(5:95)溶液；流速：1.0mL/min，柱温：40℃；梯度洗脱程序如下表1：

表1.梯度洗脱程序

进样量：5μL

2)实验步骤

(1)配制空白溶液：取2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置50mL量瓶中，加入约20mL稀释剂(采用乙腈作为稀释剂),将其置于60℃水浴15min.取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为空白溶液。

(2)配制供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置50mL量瓶中。加入约20mL乙腈，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min。取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。

(3)配制异构体储备溶液：取异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇约25mg，精密称定，置50mL量瓶中。用乙腈稀释至刻度，混匀，作为储备溶液。

(4)配制分离度溶液：取(S)-2-甲氧基-1-丙醇约50mg，精密称定，置50mL量瓶中。加入约20mL乙腈，准确移取1ml异构体储备溶液，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min。取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为分离度溶液。

(5)取上述空白溶液、供试品溶液、分离度溶液各5μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，按表1所示的数据进行线性梯度洗脱，记录色谱图，结果见图1-3。

(6)计算：通过与分离度溶液谱图的对比，供试品溶液的高效液相色谱图上如分别有(R)-2-甲氧基-1-丙醇和(S)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生产物的色谱峰，则供试品中异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的含量计算公式是：

其中：

(R)表示(R)-2-甲氧基-1-丙醇；

(S)表示(S)-2-甲氧基-1-丙醇；

(R)衍生产物的峰面积表示供试品溶液的色谱图上与分离度溶液的色谱图中相同保留时间下出现的色谱峰的峰面积；

(S)衍生产物的峰面积表示供试品溶液的色谱图上与分离度溶液的色谱图中不同保留时间下出现的色谱峰的峰面积。

分离度溶液的色谱图能帮助判断异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的色谱峰，通过与其对比可判断供试品溶液的色谱图上是否有异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的色谱峰。

结果：空白溶液无干扰，色谱图见图1，供试品中未检出异构体，色谱图见图2、分离度溶液检出异构体，分离度溶液中异构体的含量是0.43％，色谱图见图3。

实施例2：方法学确认

1)专属性实验：

根据实施例1中空白溶液、供试品溶液和分离度溶液的配制方法制备测定溶液；另制备异构体定位溶液如下：

异构体定位溶液配制：取供试品(R)-2-甲氧基-1-丙醇置于量瓶中，先加入部分稀释剂、2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，放入60℃加热约15～30分钟，取出冷却至室温，用稀释剂定容至刻度并摇匀，制得0.05～0.15mg/mL的异构体定位溶液；

将配置的溶液采用高效液相色谱法进行检测分析，记录色谱图，详见图1-3。

实验结果表明，在(S)-2-甲氧基-1-丙醇衍生物峰保留时间处，空白无干扰；(S)-2-甲氧基-1-丙醇的拖尾因子1.05，峰型良好；(S)-2-甲氧基-1-丙醇与(R)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生物峰的分离度约为1.0，可以满足对异构体含量的测定。

2)定量限实验

根据实施例1中对照溶液的配制方法制备测定溶液，精密量取对照溶液，用稀释剂逐级稀释制成定量限检测溶液，取上述溶液用高效液相色谱法进行检测分析，记录色谱图，详见图4。

实验结果表明，当(S)-2-甲氧基-1-丙醇浓度达到0.5μg/mL时，(S)-2-甲氧基-1-丙醇衍生化产物峰高与基线噪音的比值(信噪比S/N＝39.5)，灵敏度良好。

3)线性与范围

根据实施例1中对照溶液的配制方法制备对照溶液，精密量取对照溶液，用稀释剂逐级稀释制成浓度为0.0005mg/mL、0.001mg/mL、0.002mg/mL、0.005mg/mL、0.01mg/mL的线性与范围测试溶液，将上述测试溶液采用高效液相色谱法进行检测分析，记录色谱图，并以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，并计算回归方程和相关性系数r，如表2所示。

表2.线性与范围实验结果

实验结果表明：在0.0005266mg/mL～0.010532mg/mL的范围内，(S)-2-甲氧基-1-丙醇衍生化产物线性良好。

4)溶液稳定性实验

根据实施例1中对照溶液的配制方法制备供试品溶液，作为稳定性考察溶液，采用高效液相色谱法进行检测分析，分别于0，10，24，26，28小时注入色谱仪，记录保留时间和峰面积，并对结果进行评价。

实验结果表明，常温条件下放置28小时内进样，主峰峰面积的RSD％≤2.0，异构体峰出峰位置均未检出色谱峰。

5)回收率实验

根据实施例1中供试品溶液的配制方法制备回收率测定溶液；取50mg供试品，50mL量瓶中，平行制备4份，上述量瓶中分别加入0.5ml，1ml，1.2ml和2ml储备溶液，再分别加入20mL稀释剂，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min.取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，制成50％，100％，120％和200％的加标回收溶液；将加标回收溶液采用高效液相色谱法进行检测分析，记录结果，结果详见表4，色谱图见图8。

表3.回收率实验结果

实验结果表明，(S)-2-甲氧基-1-丙醇的异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇加样回收率良好。

实施例3：样品检测

基于实施例1的色谱条件，进行样品检测。

1)配制空白溶液：取2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置50mL量瓶中，加入约20mL稀释剂(采用乙腈做稀释剂),将其置于60℃水浴15min.取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为空白溶液。

2)配制异构体储备溶液：取异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇约25mg，精密称定，置50mL量瓶中。用乙腈稀释至刻度，混匀，作为储备溶液。

3)配制分离度溶液：取(S)-2-甲氧基-1-丙醇约50mg，精密称定，置50mL量瓶中。加入约20mL乙腈，准确移取1ml异构体储备溶液，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min。取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为分离度溶液。

4)配制供试品溶液：精密称定(S)-2-甲氧基-1-丙醇供试品54.51mg，置50mL量瓶中。加入约20mL乙腈，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min。取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。

5)取上述空白溶液、分离度溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，按实施例1的色谱条件进行测定，按表1所示的数据进行线性梯度洗脱，记录色谱图。

6)计算：通过与分离度溶液谱图的对比，供试品溶液的高效液相色谱图上如分别有(R)-2-甲氧基-1-丙醇和(S)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生产物的色谱峰，则供试品中异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的含量计算公式是：

其中：

(R)表示(R)-2-甲氧基-1-丙醇；

(S)表示(S)-2-甲氧基-1-丙醇；

(R)衍生产物的峰面积表示供试品溶液的色谱图上与分离度溶液的色谱图中相同保留时间下出现的色谱峰的峰面积；

(S)衍生产物的峰面积表示供试品溶液的色谱图上与分离度溶液的色谱图中不同保留时间下出现的色谱峰的峰面积。

结果：空白无干扰，供试品中检出异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇，(R)-2-甲氧基-1-丙醇含量为1.4％，图谱见图5。

实施例4：不同色谱柱型号的分离度

在实施例1的仪器条件中将色谱柱由Chiralpak IC(250mmx4.6 mm,5μm)变更为同类型色谱不同规格的色谱柱Chiralpak IC-3(250mmx4.6 mm,3μm)

1)配制空白溶液：取2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置50mL量瓶中，加入约20mL稀释剂(采用乙腈做稀释剂),将其置于60℃水浴15min.取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为空白溶液。

2)配制异构体储备溶液溶液：取异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇约25mg，精密称定，置50mL量瓶中。用乙腈稀释至刻度，混匀，作为储备溶液。

3)配制分离度溶液：取(S)-2-甲氧基-1-丙醇约50mg，精密称定，置50mL量瓶中。加入约20mL溶剂(乙腈)，准确移取1ml异构体储备溶液，2.5mL苯甲酰氯和0.2mL TEA，置上述量瓶中，将其置于60℃水浴15min。取出放冷至室温，用乙腈稀释至刻度，混匀，作为分离度溶液。

4)取上述空白溶液、分离度溶液，注入液相色谱仪，将实施例1的仪器条件中将色谱柱由Chiralpak IC(250mmx4.6 mm,5μm)变更为同类型色谱不同规格的色谱柱ChiralpakIC-3(250mmx4.6 mm,3μm)，其他不变进行测定，按表1所示的数据进行线性梯度洗脱，记录色谱图。

5)计算：分离度溶液的高效液相色谱图上如分别有(R)-2-甲氧基-1-丙醇和(S)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生产物的色谱峰，则分离度溶液中异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的含量计算公式是：

其中：

(R)表示(R)-2-甲氧基-1-丙醇；

(S)表示(S)-2-甲氧基-1-丙醇；

(R)衍生产物的峰面积表示分离度溶液的色谱图上(R)衍生产物的色谱峰的峰面积；

(S)衍生产物的峰面积表示分离度溶液的色谱图上(S)衍生产物的色谱峰的峰面积。

结果：对(S)-2-甲氧基-1-丙醇与(R)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生物峰的分离没有明显变化，分离度为1.0。图谱见图6。

实施例5：不同色谱柱的流速

在实施例4的仪器条件中将流速由1.0mL/min调整为0.8mL/min。

取实施例4中的空白溶液、分离度溶液，注入液相色谱仪，将实施例1的仪器条件中将流速由1.0mL/min调整为0.8mL/min，其他不变进行测定，按表1所示的数据进行线性梯度洗脱，记录色谱图。

计算：分离度溶液的高效液相色谱图上如分别有(R)-2-甲氧基-1-丙醇和(S)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生产物的色谱峰，则分离度溶液中异构体(R)-2-甲氧基-1-丙醇的含量计算公式是：

其中：

(R)表示(R)-2-甲氧基-1-丙醇；

(S)表示(S)-2-甲氧基-1-丙醇；

(R)衍生产物的峰面积表示分离度溶液的色谱图上(R)衍生产物的色谱峰的峰面积；

(S)衍生产物的峰面积表示分离度溶液的色谱图上(S)衍生产物的色谱峰的峰面积。

结果：对(S)-2-甲氧基-1-丙醇与(R)-2-甲氧基-1-丙醇的衍生物峰的分离没有明显变化，分离度为1.0。图谱见图7。