盐酸坦索罗辛杂质的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸坦索罗辛杂质的检测方法。

背景技术

盐酸坦索罗辛是由日本山之内公司研发的首个针对前列腺增生疾病的长效α1A肾上腺素受体拮抗药，也是目前唯一应用于临床的高选择性的1A/1D受体阻滞药，于1993年首次在日本上市，1996年在中国上市，商品名哈乐。

盐酸坦索罗辛的中文化学名为(-)-(R)-5-[2-[[2-(2-乙氧基苯氧基)乙基]氨基]丙基]-2-甲氧基苯磺酰胺盐酸盐，分子式为C

杂质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。杂质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其含量不仅反映药品纯度的直接指标，而且有重要的安全意义。欧洲药典中报道了盐酸坦索罗辛杂质如下：

目前，EP、USP、JP中收载的上述盐酸坦索罗辛杂质的高效液相色谱分析方法，均是通过盐酸坦索罗辛前、盐酸坦索罗辛后的两次杂质等度洗脱过程，两次洗脱所用流动相、流速等均不相同，操作较为繁琐，其中盐酸坦索罗辛前的杂质洗脱过程所用流动相为乙腈：高氯酸溶液＝3:7(高氯酸溶液配制：将8.7ml高氯酸和3g氢氧化钠溶解在1900ml水中，用氢氧化钠调节pH 2.0，加水至2000ml)，盐酸坦索罗辛后的杂质洗脱过程所用流动相为乙腈：高氯酸溶液＝1:1(高氯酸溶液配制同上)。现有文献中也未见有报道可以同时检测上述8种杂质的方法，A sensitive HPLC method for simultaneous estimation of tamsulosinhydrochloride and its impurity,Pak.J.Pharm.Sci.,2008,Vol.21(3),307-310.以磷酸二氢钾-乙腈为流动相进行等度洗脱，可有效分离盐酸坦索罗辛和杂质B；Impurity methoddevelopment and validation of tamsulosin hydrochloride by using RP-HPLC,WJPR,2014,Vol 3,Issue 9,998-1005.以缓冲液和乙腈(65:35)为流动相进行等度洗脱，可分离盐酸坦索罗辛缓释微丸中盐酸坦索罗辛及杂质H、I；Determination of the Enantiomersof Tamsulosin Hydrochloride and its Synthetic Intermediates by Chiral LiquidChromatography,Chromatographia,2004,Vol59,251-254.以高氯酸钠和乙腈(80:20)为流动相进行等度洗脱可分离盐酸坦索罗辛、其合成中间体以及杂质G、D(盐酸盐)。

因此，建立一种更高效、便利的能够同时分离上述8种杂质的方法，对控制盐酸坦索罗辛药品质量具有重要的意义。

发明内容

基于现有盐酸坦索罗辛杂质分离检测方法的局限性，本发明的目的是提供一种检测分离盐酸坦索罗辛及其相关杂质的高效液相色谱法，实现对盐酸坦索罗辛原料药杂质的快速、准确、低成本检测。

本发明具体通过如下技术方案实现：

一种盐酸坦索罗辛杂质的检测方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以硫酸盐为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。

优选的，所述色谱柱选自YMC-Pack ODS-A、YMC Triart C18、Waters xbridgeC18、Welch XB C18。

优选的，所述色谱柱规格为4.6×150mm，5μm。

优选的，所述流动相A中还含有的高氯酸。

优选的，所述流动相A中高氯酸的含量为0.08～0.20％(V/V)。

进一步优选的，所述流动相A中高氯酸的含量为0.15％(V/V)。

优选的，所述硫酸盐选自硫酸钠、硫酸钾、硫酸氢钠、硫酸氢钾中的一种或其组合。

进一步优选的，所述硫酸盐为硫酸钠。

优选的，所述硫酸盐浓度为0.02～0.05mol/L。

进一步优选的，所述硫酸盐浓度为0.04mol/L。

优选的，所述洗脱梯度为：

进一步优选的，所述洗脱梯度为：

优选的，流动相流速为0.8～1.2ml/min。

进一步优选的，流动相流速为1.0ml/min。

优选的，所述色谱柱柱温为20～40℃。

进一步优选的，所述色谱柱柱温为25～30℃。

优选的，使用紫外线检测器检测，所述检测波长为210～230nm。

进一步优选的，所述检测波长为225nm。

优选的，所述进样量为10～30μl。

进一步优选的，所述进样量为10μl。

在一个优选的试验方案中，该检测方法包括如下步骤：

(1)溶液配制

稀释液：乙腈-水，体积比10:90；

供试品溶液：精密称取盐酸坦索罗辛原料药适量，加稀释液适量溶解，并定量稀释成每lml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；

对照溶液：精密量取供试品溶液适量，用稀释液稀释至每lml中含1.0μg的溶液，摇匀，作为对照溶液；

杂质对照品储备液：精密称定盐酸坦索罗辛杂质A、杂质B、杂质D、杂质E、杂质H及杂质I各2mg，杂质C、杂质F各10mg，分别置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

选择性测试溶液：取盐酸坦索罗辛原料药10mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入杂质A、杂质B、杂质D、杂质E、杂质H及杂质I对照品储备液各500μl，杂质C、杂质F对照品储备液各100μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；

精密量取各溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按下表进行梯度洗脱：

供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0.1％)，总杂不得大于对照溶液主峰面积2倍(0.2％)。供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰忽略不计(0.01％)。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供了一种检测速度快、成本低、专属性强、灵敏度高、重复性好的盐酸坦索罗辛的杂质检测方法，实现了盐酸坦索罗辛原料药及其8种杂质的定位与分离，杂质B、杂质E、杂质F、杂质C、杂质D、盐酸坦索罗辛、杂质H、杂质A、杂质I依次出峰，各峰之间的分离度均在1.5以上，有利于准确快速的控制盐酸坦索罗辛原料药的内在质量，确保药品安全有效。

附图说明

图1：实施例1选择性测试溶液的HPLC图；

图2：实施例1供试品溶液的HPLC图；

图3：杂质A的定位图谱；

图4：杂质B的定位图谱；

图5：杂质C的定位图谱；

图6：杂质D的定位图谱；

图7：杂质E的定位图谱；

图8：杂质F的定位图谱；

图9：杂质H的定位图谱；

图10：杂质I的定位图谱；

图11：对比实施例5选择性测试溶液的HPLC图；

图12：对比实施例6选择性测试溶液的HPLC图。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明，应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属于本发明要求保护的范围。

实施例1

(1)溶液配制

稀释液：乙腈-水＝10:90；

供试品溶液：精密称定盐酸坦索罗辛原料药10mg，置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

对照溶液：精密量取供试品溶液适量，用稀释液稀释至每lml中含1.0μg的溶液，摇匀，作为对照溶液；

杂质对照品储备液：精密称定盐酸坦索罗辛杂质A、杂质B、杂质D、杂质E、杂质H及杂质I各2mg，杂质C、杂质F各10mg，分别置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

杂质定位溶液：分别精密量取杂质A、杂质B、杂质D、杂质E、杂质H及杂质I对照品储备液各500μl，杂质C、杂质F对照品储备液各100μl，分别置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；

选择性测试溶液：取盐酸坦索罗辛原料药10mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入杂质A、杂质B、杂质D、杂质E、杂质H及杂质I对照品储备液各500μl，杂质C、杂质F对照品储备液各100μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取上述溶液，按照色谱条件进行测定，记录色谱图。选择性测试溶液的组分如表1所示，出峰顺序依次为杂质B、杂质E、杂质F、杂质C、杂质D、盐酸坦索罗辛、杂质H、杂质A、杂质I，峰形较好，分离度大于2.5；所得选择性测试溶液的图谱如图1所示，供试品的图谱如图2所示，各杂质的定位图谱如图3-10所示。

表1选择性测试溶液组分

实施例2

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC Triart C18，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.02mol/L K

流动相B：乙腈；

流速：1.2ml/min；

检测波长：210nm；

进样量：20μ1；

柱温：30℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取各溶液，按照色谱条件进行测定，记录色谱图。选择性测试溶液的组分如表2所示，峰形良好，分离度大于1.5。

表2选择性测试溶液组分

实施例3

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：Waters xbridge C18，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.05mol/L NaHSO

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：230nm；

进样量：30μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取各溶液，按照色谱条件进行测定，记录色谱图。选择性测试溶液的组分见表3，各杂质峰形良好，分离度大于1.5。

表3选择性测试溶液组分

实施例4

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC Triart C18，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.03mol/L KHSO

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：30℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取各溶液，按照色谱条件进行测定。选择性测试溶液的出峰顺序依次为杂质B、杂质E、杂质F、杂质C、杂质D、盐酸坦索罗辛、杂质H、杂质A、杂质I，峰形较好，分离度大于2.0，具体见表4。

表4选择性测试溶液组分

实施例5

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取各溶液，按照色谱条件进行测定。该色谱条件下，选择性测试溶液中杂质C、杂质D峰部分重叠，并未完全分离，具体见表5。

表5选择性测试溶液组分

实施例6

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取各溶液，按照色谱条件进行测定。该色谱条件下，选择性测试溶液中杂质C、杂质D峰重叠，未能实现有效分离，且杂质I不能有效检出，具体见表6。

表6选择性测试溶液组分

实施例7

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取各溶液，按照色谱条件进行测定。该色谱条件下，杂质B、杂质E、杂质F、杂质H、杂质A、杂质I可以实现有效分离，但是杂质C、D峰重合，分离度分别为1.35、1.35。

实施例8

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取上述溶液，按照色谱条件进行测定。在该色谱条件下，选择性测试溶液中杂质B、杂质E、杂质F、杂质H、杂质A、杂质I可以实现有效分离，杂质C、D峰重叠，分离度为1.21、1.21，未能实现有效分离。

实施例9

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.06mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取上述溶液，按照色谱条件进行测定。该色谱条件下，选择性测试溶液的出峰顺序依次为杂质B、杂质E、杂质F、杂质C、杂质D、盐酸坦索罗辛、杂质H、杂质A、杂质I，其中杂质C、D分离度分别为1.57、1.57。

对比实施例1

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相：0.04mol/L Na

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：40℃；

精密量取上述溶液，按照上述等度洗脱色谱条件进行测定。该色谱条件下，仅可以将选择性测试溶液中盐酸坦索罗辛与杂质B、E实现有效分离(分离度均大于1.5)，其他杂质未检出，效果较差。

对比实施例2

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：Capcell Pak C18，MG，4.6×150mm，5μm；

流动相A：含0.5％三乙胺的0.04mol/L KH

流动相B：水：乙腈＝10:90；

流速：0.9ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：30℃；

按下表进行梯度洗脱：

精密量取上述溶液，按照色谱条件进行测定。该色谱条件下，选择性测试溶液中杂质B、E、I未洗脱出峰。

对比实施例3

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：高氯酸溶液(将8.7ml高氯酸和3g氢氧化钠溶解在1900ml水中，用氢氧化钠调节pH 2.0，加水至2000ml)；

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按下表进行梯度洗脱：

精密量取上述溶液，按照色谱条件进行测定。该色谱条件下，干扰峰较多，选择性测试溶液中的杂质C、D峰重叠严重，不能实现有效分离，杂质I未洗脱出峰，效果较差。

对比实施例4

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：25℃；

按如下梯度洗脱：

精密量取上述溶液，按照色谱条件进行测定。在该色谱条件下，选择性测试溶液中杂质C、杂质D峰重叠，杂质C、D分离度分别为1.34、1.34。

对比实施例5

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相：乙腈：高氯酸溶液(将8.7ml高氯酸和3g氢氧化钠溶解在1900ml水中，用0.5M氢氧化钠溶液调节pH 2.0，加水至2000ml)＝3:7；

流速：1.3ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：40℃；

精密量取上述溶液，按照上述等度洗脱色谱条件进行测定。该色谱条件下，选择性测试溶液的图谱如图11所示。

对比实施例6

(1)溶液配制

同实施例1。

(2)液相色谱条件

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相：乙腈：高氯酸溶液(将8.7ml高氯酸和3g氢氧化钠溶解在1900ml水中，用0.5M氢氧化钠溶液调节pH 2.0，加水至2000ml)＝1:1；

流速：1.0ml/min；

检测波长：225nm；

进样量：10μ1；

柱温：40℃；

精密量取上述溶液，按照上述等度洗脱色谱条件进行测定。该色谱条件下，选择性测试溶液的图谱如图12所示。

验证实施例

液相色谱条件：

仪器：高效液相色谱仪-紫外检测器；

色谱柱：YMC-Pack ODS-A，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.04mol/L Na

流动相B：乙腈；

按下表进行梯度洗脱：

验证实施例中稀释液为乙腈-水，体积比10:90。

1、系统适用性试验

杂质对照品储备液：精密称定盐酸坦索罗辛杂质A、B、D、E、H、I各2mg，杂质C、F各10mg，分别置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得各杂质对照品储备液；

系统适用性溶液：精密称定盐酸坦索罗辛10mg，置10ml量瓶中，加入杂质A、B、D、E、H、I对照品储备液各50μl，杂质C、F对照品储备液各10μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得盐酸坦索罗辛系统适用性溶液；

精密量取系统适用性溶液，连续进样6次，按照上述色谱条件进行测定，记录色谱图，分别计算峰面积、保留时间的平均值、相对标准偏差。测定结果见表7。

表7系统适用性试验结果

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由表5可知，盐酸坦索罗辛主峰与杂质峰的分离度均大于1.5，盐酸坦索罗辛保留时间平均值为21.951min，相对标准偏差为0.050％，峰面积相对标准偏差为0.080％，该色谱条件下，盐酸坦索罗辛与各杂质可以完全分离，而且峰面积和保留时间的相对标准偏差均较小，本法系统适用性良好。

2、检测限、定量限测定试验

盐酸坦索罗辛对照储备液：精密称定盐酸坦索罗辛对照品2.127mg，置于10ml量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得盐酸坦索罗辛对照储备液；

杂质对照品储备液：精密称定盐酸坦索罗辛杂质A、B、C、D、E、H、I各2mg，杂质F10mg，分别置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得各杂质对照品储备液；

分别取盐酸坦索罗辛对照储备液、各杂质对照品储备液，采用逐步稀释法，以S/N≈10时的浓度作为定量限浓度，连续进样6次，以S/N≈3时的浓度作为检测限浓度，连续进样3次，依法测定。测定结果见表8。

表8检测限试验结果

表9定量限试验结果

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当盐酸坦索罗辛进样浓度为1mg/ml时，样品中分别含有0.009％的杂质A、0.008％的杂质B、0.009％的杂质C、0.009％的杂质D、0.008％的杂质E、0.008％的杂质F、0.009％的杂质G、0.009％的杂质H、0.009％的杂质I能被有效检出；样品中分别含有0.025％的杂质A、0.026％的杂质B、0.026％的杂质C、0.025％的杂质D、0.025％的杂质E、0.027％的杂质F、0.026％的杂质H、0.027％的杂质I能被定量检出，且定量限的重复性良。

3、线性与范围试验

线性与范围1

线性与范围溶液：精密量取“检测限、定量限测定试验”项下配制的各杂质对照品储备液(杂质A、B、C、D、E、H、I)1.0ml、杂质F储备液0.2ml同置于10ml量瓶中，加稀释液并定容至刻度，摇匀后作为线性储备溶液；精密量取线性储备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、2.5ml、3.75ml、5.0ml、7.5ml，分别置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得“线性与范围溶液1、2、3、4、5、6、7”。

线性与范围2

线性与范围溶液：精密称定盐酸坦索罗辛对照品20.52mg，置于10ml量瓶中，加稀释液超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为盐酸坦索罗辛线性与范围储备液；精密量取盐酸坦索罗辛线性储备液100μl、200μl、400μl、500μl、600μl、750μl，分别置进样小瓶中，加稀释液稀释至1ml，摇匀，即得“线性与范围溶液2、3、4、5、6、7”，精密量取“线性与范围溶液2”25μl置20ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得线性与范围溶液1。

精密量取线性与范围溶液，依法测定。以浓度(X，ug/mL)为横坐标，峰面积(Y，mAU)为纵坐标，绘制标准曲线，并计算相关系数r，结果见表10。

表10标准曲线

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由上表可知，盐酸坦索罗辛以及各杂质在上述浓度范围内线性关系良好。

4、准确度试验

准确度考察设计了3个浓度点，分别为杂质限度的50％、100％和150％。

供试品溶液：精密称取盐酸坦索罗辛原料药适量，加稀释液适量溶解，并定量稀释成每lml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；

供试品溶液1‰对照溶液：精密移取供试品溶液50μl，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；

各杂质对照品储备液：精密称定杂质A、B、C、D、E、H、I各2mg，分别置10ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质A、B、C、D、E、H、I对照品储备液；精密称定杂质F10mg，置10ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取该溶液2ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得关物质F对照品储备液；

混合杂质对照溶液：分别精密量取杂质对照品储备液各50μl，置同一10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；

50％测试溶液：精密称定盐酸坦索罗辛原料药10mg，置10ml量瓶中，加入各杂质对照品储备液各25μl，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，同法配置3份；

100％测试溶液：精密称定盐酸坦索罗辛原料药10mg，置10ml量瓶中，加入各杂质对照品储备液各50μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得，同法配置3份；

150％测试溶液：精密称定盐酸坦索罗辛原料药10mg，置10ml量瓶中，加入各杂质对照品储备液各75μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得，同法配置3份；

分别精密量取各对照溶液、测试溶液，依法测定，计算杂质的回收率、平均回收率及相对标准偏差。试验结果见表11。

表11准确度试验结果

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由上表可知，在三个浓度下，杂质A、B、C、D、E、F、H、I的回收率在95％～110％之间，相对标准偏差均小于4％，符合验证要求，说明该方法准确度良好。

5、重复性试验

杂质对照品储备液：精密称定盐酸坦索罗辛杂质A、B、C、D、E、H、I各2mg，杂质F10mg，分别置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得各杂质对照品储备液；

混合杂质对照溶液：分别精密量取杂质A、B、C、D、E、H、I对照品储备液各50μl，杂质F对照品储备液10μl，置同一10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；

测试溶液：精密称定盐酸坦索罗辛原料药10mg，置10ml量瓶中，精密加入上述杂质A、B、C、D、E、H、I对照品储备液各50μl，杂质F对照品储备液10μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得，同法配置6份；

分别精密量取上述各溶液，依法测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算测试溶液中各杂质含量的RSD，要求6份测试溶液中，各已知杂质测得量的RSD应不得过10％。试验结果见表12。

表12重复性试验结果

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由上表可知，6份重复性测试溶液中，各杂质测试溶液中测得含量的RSD均符合验证要求，说明该方法重复性良好。

6、中间精密度试验

由另一名分析人员，于不同日期使用不同的仪器，同重复性试验操作。综合重复性试验的结果，评估2人所得结果。要求两位分析人员12份测试溶液中，各杂质测得量的RSD均应不得过15％。试验结果见表13。

表13中间精密度试验结果

由上表可知，12份测试溶液中，各杂质测试溶液中测得含量的RSD均符合验证要求，说明该方法精密度良好。

7、耐用性试验

供试品溶液：精密称取盐酸坦索罗辛原料药适量，加稀释液适量溶解，并定量稀释成每lml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；

杂质对照品储备液：精密称定盐酸坦索罗辛杂质A、B、C、D、E、H、I各2mg，杂质F10mg，分别置10ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得各杂质对照品储备液；

测试溶液：精密称定盐酸坦索罗辛原料药10mg，置10ml量瓶中，精密加入上述杂质A、B、C、D、E、H、I对照品储备液各50μl，杂质F对照品储备液10μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；

精密量取上述各溶液，分别改变柱温、流速、同品牌不同批次色谱柱，依法测定，记录色谱图。试验结果见表14。

表14耐用性试验结果

由上表可知，改变柱温、流速、同品牌不同批次色谱柱后，供试品中主物质峰面积RSD为2.8％(限度10％)；测试溶液中主物质及各杂质峰面积RSD分别为：2.8％、3.3％、3.3％、3.2％、3.4％、3.8％、3.3％、3.5％、3.6％(限度10％)。主物质与相邻色谱峰分离度最小为10.49，各已知杂质峰与相邻杂质峰分离度最小为1.62。符合验证方案的要求，由此可见，本方法的耐用性良好。