一种水稻抗氧化能力相关基因BRHIS1及其应用

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，更具体地，涉及一种水稻抗氧化能力相关基因BRHIS1及其应用。

背景技术

水稻在农业生产过程中会遇到多种不良环境胁迫，影响水稻自身生理环境的变化，最终造成农作物减产。如冷、热、干旱和水淹等胁迫，造成水稻过氧化物酶活性升高，进而造成水稻生长减缓甚至死亡。

水稻耐氧化胁迫是一个数量性状，存在多个调控位点，例如：专利CN101838653A公开了一种水稻分泌型硫氧还蛋白基因，该编码调控水稻体内氧化还原水平相关蛋白，通过抗氧化功能可以降低正常及盐胁迫下水稻体内氧化还原水平，具有延缓水稻衰老的效果；但现在已知的调控水稻耐氧化胁迫性的基因依然还很少。因此，还需要提供更多的与水稻抗氧化能力相关基因，为育种提供更多的选择。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种水稻抗氧化能力相关基因BRHIS1。

本发明的第二个目的在于提供水稻抗氧化能力相关蛋白BRHIS1。

本发明的第三个目的在于提供所述水稻稻抗氧化能力相关基因BRHIS1的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种水稻抗氧化能力相关基因BRHIS1，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

一种水稻抗氧化能力相关蛋白BRHIS1，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供含有上述BRHIS1基因的表达载体。

优选地，所述表达载体为含有上述BRHIS1基因的超表达载体。

本发明还提供含有上述表达载体的重组细胞。

本发明还提供一种用于扩增、检测上述水稻抗氧化能力相关基因BRHIS1的引物组，所述引物对包括上游引物和下游引物，其序列分别如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示。

本发明从水稻粳稻品种中花11的cDNA中扩增出的核苷酸序列SEQ ID NO：1并克隆到植物超表达转化载体，通过农杆菌粳稻转化到水稻中花11，所获得的转基因材料具有提高中花11抗氧化胁迫的能力。

因此，本发明请求保护所述BRHIS1基因在提高植物抗氧化能力中的应用。

本发明还提供所述BRHIS1在培育耐氧化胁迫的植物新品种中的应用。

一种提高植物耐氧化胁迫的方法，所述方法包括用上述表达载体转化植物的细胞或组织，并且将转化的植物细胞或组织培育成植株。

当本发明的BRHIS1基因被用于改变植物耐氧化性状时，包括以下步骤：(1)将本发明的水稻耐氧化基因BRHIS1克隆到植物转化载体中；(2)将所构建的植物转化载体转化可再生水稻组织(或器官)并使本发明的水稻耐氧化基因在转化的组织中表达；(3)将被转化的组织(或器官)培养成植株。

优选地，所述转化通过农杆菌介导法或基因枪法进行。

优选地，所述植物为禾本科植物。

进一步优选地，所述禾本科植物为水稻。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了的水稻调控氧化胁迫基因BRHIS1，是一个新的水稻响应环境胁迫基因，该基因可以调控水稻耐氧化胁迫能力。所述BRHIS1基因对培育耐氧化胁迫植物新品种，特别是培育耐氧化胁迫水稻新品种具有重要意义。为水稻育种及发育机制研究提供了新的基因资源，可以在调控水稻耐氧化胁迫方面得到应用。

附图说明

图1为pUbi：：BRHIS1表达载体构建示意图。

图2为野生型中花11和pBRHIS1超表达载体转化中花11株系BRHIS1表达水平检测。

图3为BRHIS1超表达转基因水稻响应氧化胁迫的表型分析。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1 pUbi：：BRHIS1超表达载体构建

本发明通过NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)网站中的BLAST工具进行BRHIS1核酸序列与氨基酸序列的同源性分析BRHIS1基因的结构特征，通过与水稻粳稻品种日本晴(Oryz asativa L sp.Japanic)和水稻籼稻品种中花11(Oryz asativa Lsp.Indica)基因组序列比对，选择编码区起始密码子至终止子共3200bp序列，通过引物对F：5′-ATGGCTGCCTCGGTGGAGGCG-3′(SEQ ID NO:3)和R：5′-TTAGAATGCCGAGCGCCCTTTTG-3′(SEQ ID NO.4)从水稻品种中花11cDNA中扩增出的核苷酸序列SEQ ID NO：1并克隆到植物超表达转化载体中，挑取已合成的含有BRHIS1的目的片段的克隆，于5mL含Kna抗生素的LB液体培养基中，37℃摇床中培养过夜。再提取BRHIS1超表达载体质粒。将提取的质粒用Sanger法测序鉴定。BRHIS1超表达载体中如图1所示。

实施例2 BRHIS1超表达载体的遗传转化

(1)农杆菌感受态细胞的制备

取保存于-80℃的根癌农杆菌EHA105，将其在含有利福平(50μg/mL)的YEB平板上划线，置于28℃培养2天。从YEB平板上挑取农杆菌的单菌落，将其接种于5mL的YEB液体培养基中，置于摇床200rpm，28℃振荡培养过夜。取过夜培养的菌液2mL，接种于50ml的YEB液体培养基中，同样处于200rpm，28℃振荡培养，直到OD600达到0.5。将菌液移至无菌离心管中，冰浴30min，再5000rpm，离心10min，弃上清，收集菌体。再将收集的菌体悬浮于10mL，0.15mol/L预氧化的NaCl中，5000rpm，离心10min，弃去上清。将收集的菌体重悬浮于1mL，20mmol/L预氧化的CaCl

(2)表达载体转入农杆菌感受态细胞

将农杆菌EHA105感受态细胞置于冰上，取1uL含有目的基因的重组质粒载体加入到其中，充分混匀后，在冰上放置30min。再将其置于液氮中快速氧化冻1min，然后迅速转至水浴锅中，37℃水浴3min，待其融化。向其中加入1mLYEB液体培养基，充分混匀后，放入摇床中，220rpm，28℃恢复培养3h。将恢复培养后的菌液在5000rpm，离心3min，收集菌体，保留200uL菌液。将菌液均匀涂布于含卡那霉素(50μg/mL)，利福平(50μg/mL)的YEB固体培养基上，晾干后封口。将平板放在培养箱中，28℃条件下培养2天。待长出农杆菌单菌落后，挑取进行菌落PCR检测。

(3)农杆菌菌落PCR鉴定

挑取农杆菌单菌落，用菌落PCR方法检测是否正确转入根癌农杆菌EHA105中。

实施例3 农杆菌介导的水稻转化

(1)水稻愈伤组织的诱导培养

选取饱满，无霉变的中花11成熟种子，采用糙米机除去种子的颖壳，注意保持成熟胚的完整性。首先用70％乙醇浸泡消毒2min，再浸泡于含有0.1％Tween20的30％次氯酸钠溶液中，置于摇床中，100rpm，振荡消毒30min。于超净工作台中，利用无菌水洗涤消毒后的种子5次。将其转移至铺有无菌滤纸的培养皿中，吸干水分后，再将成熟胚愈伤接种于诱导培养基中，处于持续光照(100μmol·m-2·s-1)，32℃条件下培养。

(2)农杆菌的培养

将鉴定为阳性的含有目的基因表达载体的农杆菌，于含有kana和Rif的YEB培养基上划线，28℃培养2天。将收集到的菌体，用适量添加有AS(100μmol/L)的AAM培养基洗涤。洗涤完成后，悬浮于添加有AS(100μmol/L)的AAM培养基中，剧烈摇动，并且调整菌液浓度为OD600值在0.3-0.5之间。

(3)水稻愈伤组织与农杆菌的共培养

挑取诱导7天，且生长状态良好的愈伤组织，放入50mL灭菌的离心管中。将30ml农杆菌浸泡液加入其中，浸泡2min，期间要不断晃动离心管，使菌液与愈伤组织充分接触。再将浸染完成后的愈伤组织置于无菌滤纸上，吸干菌液。同时，事先在共培养基平板上铺上1张无菌滤纸，并用1mL的AAM培养基浸湿，除去上面的气泡。把吸干菌液后的愈伤组织置于铺有滤纸的共培养基上，置于25℃黑暗环境下，培养3天。通常一个表达载体需要100粒左右的愈伤。将共培养3天后的愈伤组织放入50mL的灭菌离心管中。用无菌水洗涤4-5次，直至洗涤液变清澈透明为止。再加入30mL灭菌的羧苄青霉素溶液(500mg/L)，置于摇床上，100rpm，振荡洗涤15min。洗涤完成后，倒掉洗涤液，将愈伤组织置于无菌滤纸上，吸干洗涤液。

(4)抗性愈伤组织的筛选

将共培养后，农杆菌洗脱的愈伤组织置于含有羧苄青霉素和潮霉素的筛选培养基上，处于32℃，持续光照下培养，筛选14天，每7天继代一次。筛选2-3个循环，愈伤组织一般在10天左右褐化，在褐化的愈伤组织中重新生长出抗性愈伤组织。

(5)抗性愈伤组织的分化

将含抗性的颜色鲜黄色的愈伤组织转移至不含筛选剂的分化培养基上，置于28℃，持续光照环境下培养，分化14天，每7天继代一次。一般经过15-25天左右，抗性愈伤出现绿芽，进而长出幼芽。直到30-40天后继续分化出小苗。

(6)转基因植株的生根和移栽

将转基因再生植株幼苗移栽于生根培养基中，置于32℃，持续光照条件下，培养7天。待幼苗生根长成后，选取根系发达的小苗，用温水洗净根上的培养基后，在温室内移至土中栽种。

(7)转基因植株的鉴定

提取T

实施例4 BRHIS1转基因水稻响应氧化胁迫的表型分析

选取中花11和T

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 一种水稻抗氧化能力相关基因BRHIS1及其应用

<141> 2020-12-02

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3387

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 1

atggctgcct cggtggaggc ggcggcggcg gcggtggtgg ccccgcccgc ctccgtgggc 60

ggtgacgagg tcgtcgtcgg cggcggcggc ggcggggcgt cggagcaggc caggacgctc 120

atcggcgcgc tcaacctgct ctcccgcaac ctcccgctgc cgcccgccgt cctgcacgcc 180

gtctcgtcca tctaccacgg cggcgacgcg tgggaggggg aaggggagga ggggggtgaa 240

gaggaggtgg cggcggcggc ggcggctgtc ggggatggat gcggcgagag cggggagggg 300

gaggaggacc gcgcggatgc ttctcccggt gcggatgagg gagtcacctt gattcaagag 360

cttgaagatg ctgtattgaa gaatcaagga ccgtatatgt catactcaga gttgactgct 420

ttaaaagaag accgcttcaa cacttccatt cagcataggc tgactgaact tgaaggatta 480

ccatctacta ggggtgaaga tttgcaaatg aagtgtttgc ttgaattgta cgggcttaag 540

ttattagact tgcagaagaa agtaaggact gatatcagtg cagaatactg gctacacaaa 600

aaatgtgcac accctgatag gcaattgttt gactggggga tgatgcgtat acggtatcct 660

tttaccatgt atggaattgg agatagtttt tcaatggatg ctgatgatat caaccgcaaa 720

aagagattct cagagaggat ctcaagactt gaagaggagg aaaagaacca ggcagagatc 780

aggaagagga aatttttttc agaaattctt aatgctgcta gggagtatca gctacaagta 840

ccggcttctt acaaacgaaa aaaacagcgc aatgatggag ttctggcatg gcatgttcgt 900

gcacgtcaac gtataaatcg catggaaaag agtagattac aagttttgaa ggctggtgac 960

caagaagctt atttgcgtat ggttgaggag agcaagaacg agcgcctgaa actgctcctt 1020

ggaaaaacaa atgagcttct tgaaggaata gggaaagctg tgcagagaca aaaagatgct 1080

gagcatgtta gtcgccctga tggatctgaa ctgccaaaag ggtcagaatc tgatgattgt 1140

tctcaaatat caggcctcaa ggttgaatcc cctgatgaag agtccccatc agatgttgat 1200

gcagaccatc atagttctgc tgatcatagt aaatttaatg ctggccatag gcttgattct 1260

accgtccact ctattgaaga gaaggtaacg gaacaaccat cagctcttga aggtggggag 1320

ttaagaccat atcaattaga gggcctgcaa tggatgcttt ctttattcaa caataatttg 1380

aatggtattc tggctgatga aatgggtttg gggaaaacaa ttcagaccat agctttgatc 1440

gcctatctat tggagaagaa ggaggttaca ggaccacact taataatagc accaaaggcc 1500

gtgttaccaa attggtctaa tgaattcaaa acttgggctc ctagcattgg gacaattctg 1560

tatgatggtc gtccagatga taggaaggct ctaagggaaa agaattttgg acaacggcag 1620

tttaatgttt tgctcacgca ctatgacttg atactgaaag atctgaagtt cctgaagaag 1680

gttcactggc attatctgat agttgatgaa ggacatcgtt tgaaaaacca tgaatgtgcg 1740

cttgctcgca cactagtttc tagatatcaa atccgtcgcc gattactttt gactggcact 1800

ccaatccaaa atagcctaca agagctgtgg tctttgctga actttattct tcccaatatt 1860

tttaattcat cacagaattt tgaggaatgg tttaatgcac catttgcatg tgaagtcagc 1920

cttaatgatg aggaacagct gctaattata catcgtttgc atcaagtgct gcgtccattt 1980

ttgctgagga ggaagaaaga tgaagtggaa aaatatcttc ctgtgaaaac acaagtaata 2040

ctcaagtgtg acatgtctgc ttggcaaaaa gcatactatg aacaagtcac tagcaatgga 2100

agggttagtc taggatctgg actcaaatca aaggctttgc aaaatctgtc gatgcaactt 2160

agaaaatgtt gcaatcatcc ctatctattc gttgagcatt ataacatgta tcaacggcag 2220

gaaattgtta gatcatcagg gaagtttgaa ttgcttgacc ggctacttcc aaaattgcag 2280

agagctggtc acagggttct gcttttctct cagatgacaa aactgcttga tatcttagaa 2340

gtatatttgc aaatgtacca gttcaagtac atgaggcttg atggatctac gaagactgaa 2400

gagcgaggga gattattggc agattttaac aagaaggact cagaatattt cttgtttctt 2460

ctcagcaccc gagctggagg ccttgggttg aacttgcaga ctgcagacac tgttattatt 2520

tttgacagtg actggaatcc tcaaatggat cagcaggctg aagaccgtgc ccaccgtatt 2580

ggacaaaaga atgaagtgcg tgtattcgtt cttgttagtg ttggctcaat tgaagaagag 2640

atcttggacc gtgcaaaaca gaagatgggt attgatgcaa aagttatcca ggctgggctg 2700

ttcaacacaa cctccacagc tcaggatagg cgagcattgc tgcaggagat cctgaggaga 2760

ggaacaagct cactgggaac tgatatccct agtgagcgtg aaataaatcg tttggctgct 2820

cgtaatgatg aagaattctg gttgtttgag aagatggatg aagaaaggcg gcaaagagaa 2880

aactacaaac cgaggctcat ggagggaatt gaggttccag actgggtgtt tgccaatgat 2940

actttaacag agaagatacc tgcagatgaa ccccagaatg ttctgctaac tacgaagaga 3000

cgcaggaaag aggttgtcta ctcagactct tttggtgatc agtggatgaa agcagatgat 3060

gtagttgaag agactccaag gatggctcca agagcaaagc ggagcgctta ttcgtctgat 3120

gtacaagaag tcgatttcag tgagaggagg aaaaggcata aatctctagt gaacattgca 3180

gatgatgcca gcattccaat gtggacacca gaaaaagtaa gggctggggt ttcttcatat 3240

agcaaggatg agaatgaaga cgatgccgaa gatgaatcca ccacaagtgt tttgcagggg 3300

ggcagtttta catggaagac ccttagaagg aaaaggtcaa gccacttctc caattcctca 3360

gattcaaaag ggcgctcggc attctaa 3387

<210> 2

<211> 1128

<212> PRT

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 2

Met Ala Ala Ser Val Glu Ala Ala Ala Ala Ala Val Val Ala Pro Pro

1 5 10 15

Ala Ser Val Gly Gly Asp Glu Val Val Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly

20 25 30

Ala Ser Glu Gln Ala Arg Thr Leu Ile Gly Ala Leu Asn Leu Leu Ser

35 40 45

Arg Asn Leu Pro Leu Pro Pro Ala Val Leu His Ala Val Ser Ser Ile

50 55 60

Tyr His Gly Gly Asp Ala Trp Glu Gly Glu Gly Glu Glu Gly Gly Glu

65 70 75 80

Glu Glu Val Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Gly Asp Gly Cys Gly Glu

85 90 95

Ser Gly Glu Gly Glu Glu Asp Arg Ala Asp Ala Ser Pro Gly Ala Asp

100 105 110

Glu Gly Val Thr Leu Ile Gln Glu Leu Glu Asp Ala Val Leu Lys Asn

115 120 125

Gln Gly Pro Tyr Met Ser Tyr Ser Glu Leu Thr Ala Leu Lys Glu Asp

130 135 140

Arg Phe Asn Thr Ser Ile Gln His Arg Leu Thr Glu Leu Glu Gly Leu

145 150 155 160

Pro Ser Thr Arg Gly Glu Asp Leu Gln Met Lys Cys Leu Leu Glu Leu

165 170 175

Tyr Gly Leu Lys Leu Leu Asp Leu Gln Lys Lys Val Arg Thr Asp Ile

180 185 190

Ser Ala Glu Tyr Trp Leu His Lys Lys Cys Ala His Pro Asp Arg Gln

195 200 205

Leu Phe Asp Trp Gly Met Met Arg Ile Arg Tyr Pro Phe Thr Met Tyr

210 215 220

Gly Ile Gly Asp Ser Phe Ser Met Asp Ala Asp Asp Ile Asn Arg Lys

225 230 235 240

Lys Arg Phe Ser Glu Arg Ile Ser Arg Leu Glu Glu Glu Glu Lys Asn

245 250 255

Gln Ala Glu Ile Arg Lys Arg Lys Phe Phe Ser Glu Ile Leu Asn Ala

260 265 270

Ala Arg Glu Tyr Gln Leu Gln Val Pro Ala Ser Tyr Lys Arg Lys Lys

275 280 285

Gln Arg Asn Asp Gly Val Leu Ala Trp His Val Arg Ala Arg Gln Arg

290 295 300

Ile Asn Arg Met Glu Lys Ser Arg Leu Gln Val Leu Lys Ala Gly Asp

305 310 315 320

Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Met Val Glu Glu Ser Lys Asn Glu Arg Leu

325 330 335

Lys Leu Leu Leu Gly Lys Thr Asn Glu Leu Leu Glu Gly Ile Gly Lys

340 345 350

Ala Val Gln Arg Gln Lys Asp Ala Glu His Val Ser Arg Pro Asp Gly

355 360 365

Ser Glu Leu Pro Lys Gly Ser Glu Ser Asp Asp Cys Ser Gln Ile Ser

370 375 380

Gly Leu Lys Val Glu Ser Pro Asp Glu Glu Ser Pro Ser Asp Val Asp

385 390 395 400

Ala Asp His His Ser Ser Ala Asp His Ser Lys Phe Asn Ala Gly His

405 410 415

Arg Leu Asp Ser Thr Val His Ser Ile Glu Glu Lys Val Thr Glu Gln

420 425 430

Pro Ser Ala Leu Glu Gly Gly Glu Leu Arg Pro Tyr Gln Leu Glu Gly

435 440 445

Leu Gln Trp Met Leu Ser Leu Phe Asn Asn Asn Leu Asn Gly Ile Leu

450 455 460

Ala Asp Glu Met Gly Leu Gly Lys Thr Ile Gln Thr Ile Ala Leu Ile

465 470 475 480

Ala Tyr Leu Leu Glu Lys Lys Glu Val Thr Gly Pro His Leu Ile Ile

485 490 495

Ala Pro Lys Ala Val Leu Pro Asn Trp Ser Asn Glu Phe Lys Thr Trp

500 505 510

Ala Pro Ser Ile Gly Thr Ile Leu Tyr Asp Gly Arg Pro Asp Asp Arg

515 520 525

Lys Ala Leu Arg Glu Lys Asn Phe Gly Gln Arg Gln Phe Asn Val Leu

530 535 540

Leu Thr His Tyr Asp Leu Ile Leu Lys Asp Leu Lys Phe Leu Lys Lys

545 550 555 560

Val His Trp His Tyr Leu Ile Val Asp Glu Gly His Arg Leu Lys Asn

565 570 575

His Glu Cys Ala Leu Ala Arg Thr Leu Val Ser Arg Tyr Gln Ile Arg

580 585 590

Arg Arg Leu Leu Leu Thr Gly Thr Pro Ile Gln Asn Ser Leu Gln Glu

595 600 605

Leu Trp Ser Leu Leu Asn Phe Ile Leu Pro Asn Ile Phe Asn Ser Ser

610 615 620

Gln Asn Phe Glu Glu Trp Phe Asn Ala Pro Phe Ala Cys Glu Val Ser

625 630 635 640

Leu Asn Asp Glu Glu Gln Leu Leu Ile Ile His Arg Leu His Gln Val

645 650 655

Leu Arg Pro Phe Leu Leu Arg Arg Lys Lys Asp Glu Val Glu Lys Tyr

660 665 670

Leu Pro Val Lys Thr Gln Val Ile Leu Lys Cys Asp Met Ser Ala Trp

675 680 685

Gln Lys Ala Tyr Tyr Glu Gln Val Thr Ser Asn Gly Arg Val Ser Leu

690 695 700

Gly Ser Gly Leu Lys Ser Lys Ala Leu Gln Asn Leu Ser Met Gln Leu

705 710 715 720

Arg Lys Cys Cys Asn His Pro Tyr Leu Phe Val Glu His Tyr Asn Met

725 730 735

Tyr Gln Arg Gln Glu Ile Val Arg Ser Ser Gly Lys Phe Glu Leu Leu

740 745 750

Asp Arg Leu Leu Pro Lys Leu Gln Arg Ala Gly His Arg Val Leu Leu

755 760 765

Phe Ser Gln Met Thr Lys Leu Leu Asp Ile Leu Glu Val Tyr Leu Gln

770 775 780

Met Tyr Gln Phe Lys Tyr Met Arg Leu Asp Gly Ser Thr Lys Thr Glu

785 790 795 800

Glu Arg Gly Arg Leu Leu Ala Asp Phe Asn Lys Lys Asp Ser Glu Tyr

805 810 815

Phe Leu Phe Leu Leu Ser Thr Arg Ala Gly Gly Leu Gly Leu Asn Leu

820 825 830

Gln Thr Ala Asp Thr Val Ile Ile Phe Asp Ser Asp Trp Asn Pro Gln

835 840 845

Met Asp Gln Gln Ala Glu Asp Arg Ala His Arg Ile Gly Gln Lys Asn

850 855 860

Glu Val Arg Val Phe Val Leu Val Ser Val Gly Ser Ile Glu Glu Glu

865 870 875 880

Ile Leu Asp Arg Ala Lys Gln Lys Met Gly Ile Asp Ala Lys Val Ile

885 890 895

Gln Ala Gly Leu Phe Asn Thr Thr Ser Thr Ala Gln Asp Arg Arg Ala

900 905 910

Leu Leu Gln Glu Ile Leu Arg Arg Gly Thr Ser Ser Leu Gly Thr Asp

915 920 925

Ile Pro Ser Glu Arg Glu Ile Asn Arg Leu Ala Ala Arg Asn Asp Glu

930 935 940

Glu Phe Trp Leu Phe Glu Lys Met Asp Glu Glu Arg Arg Gln Arg Glu

945 950 955 960

Asn Tyr Lys Pro Arg Leu Met Glu Gly Ile Glu Val Pro Asp Trp Val

965 970 975

Phe Ala Asn Asp Thr Leu Thr Glu Lys Ile Pro Ala Asp Glu Pro Gln

980 985 990

Asn Val Leu Leu Thr Thr Lys Arg Arg Arg Lys Glu Val Val Tyr Ser

995 1000 1005

Asp Ser Phe Gly Asp Gln Trp Met Lys Ala Asp Asp Val Val Glu Glu

1010 1015 1020

Thr Pro Arg Met Ala Pro Arg Ala Lys Arg Ser Ala Tyr Ser Ser Asp

1025 1030 1035 1040

Val Gln Glu Val Asp Phe Ser Glu Arg Arg Lys Arg His Lys Ser Leu

1045 1050 1055

Val Asn Ile Ala Asp Asp Ala Ser Ile Pro Met Trp Thr Pro Glu Lys

1060 1065 1070

Val Arg Ala Gly Val Ser Ser Tyr Ser Lys Asp Glu Asn Glu Asp Asp

1075 1080 1085

Ala Glu Asp Glu Ser Thr Thr Ser Val Leu Gln Gly Gly Ser Phe Thr

1090 1095 1100

Trp Lys Thr Leu Arg Arg Lys Arg Ser Ser His Phe Ser Asn Ser Ser

1105 1110 1115 1120

Asp Ser Lys Gly Arg Ser Ala Phe

1125

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 3

atggctgcct cggtggaggc g 21

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 4

ttagaatgcc gagcgccctt ttg 23

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 5

atggttgagg agagcaag 18

<210> 6

<211> 18

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 6

atcaagccta tggccagc 18