一种增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法及测试方法

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，尤其涉及一种增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法及测试方法。

背景技术

目前，根腐病病原较为复杂，真菌被认为是根腐病的最主要致病因素，其中镰刀菌(Fusarium spp.)所占比例最高，其寄生性和致病力也较强，是根腐病中危害性最大的病原菌。其中尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)都能引发多作物根腐病的发生。

病原菌侵染寄主主要是吸附于寄主表面，镰刀菌属病原真菌未分化出明显的侵染结构，而是依靠释放某些酶类和产生降解植物防御反应的物质和毒素达到侵染目的，其中，孢子萌发是病原菌侵染的第一步。

薄荷(Mentha canadensis Linnaeus)是唇形科、薄荷属植物，因其是多年生草本，在全国各地均有分布，对环境条件适应能力较强，栽培管理较为简单，资源丰富。薄荷是中国常用中药，具有药用和食用双重功能，作为香料植物，已有研究主要集中于其挥发油的医用价值应用，但其在农业连作障碍中的价值却少见报道。《神农本草经百种录》言：“香者气之正，正气盛则除邪辟秽也”。芳香药物借其清气之正，鼓舞人体正气，辟除秽浊邪气，从而达到养生防病的目的。近年来，芳香疗法，以萃取自植物的精油，通过吸嗅、按摩、熏蒸等各种方式使身体吸收，杀灭有害微生物，启动身体的自愈能力，在英国、法国、德国、日本，中国被推崇推广，是主流医学的补充和辅助疗法。“芳香”主要由挥发油起效，植物精油属于天然产物类化合物，是环境友好型产物，它将是替代传统合成药物的新手段，从自然中来回归到自然中去，是这类物质最好的归宿。由于挥发油具有浓烈的香气、低的水溶性和在可变环境中的不稳定性，且有些精油只有在高浓度下才发挥抑菌活性，所以其实际应用受到了极大的限制。纳米乳剂是近些年来研究较多的一种剂型，由水相、油相、表面活性剂、助表面活性剂等成分组成，是一个均一的乳剂体系。挥发油纳米乳剂是利用纳米技术将挥发油纳米化后得到的一类乳剂产品，一般小于100nm的就可称作纳米乳剂。由于纳米乳的粒径小于可见光的波长范围，故一般看起来都是澄清透明的。纳米乳化技术是一种新型药物制剂技术，属于纳米技术的一种，由于药物粒子达到了纳米级别，如此小的粒径使其很容易穿透病原菌细胞膜或细胞间隙而发挥抑菌活性。这种小尺寸效应是纳米乳剂型有别于其他剂型的重要一点，加上粒径变小后药物的比表面积大幅增加，和靶蛋白的接触面也得到增大，最终使得药物生物利用度提高。这种小尺寸效应直接解决了很多传统技术无法解决的难题。

当前主流的防治根腐病是依靠施用化学农药，化学抑菌剂虽具有良好的抑菌效果，但长期重复使用化学抑菌剂使得致病菌产生了抗药性；此外，化学抑菌剂对生态环境具有破坏性，威胁生物生命安全。因此，寻找安全环保的抑菌剂迫在眉睫。许多研究表明，植物精油具有抑制病原菌生长的潜力，目前在抑菌机理研究上已取得一定成果。植物精油是一类在植物体内广泛存在的具有芳香气味的次生代谢物质，其组成成分的复杂性与植物的种类、生长条件及采集部位和采收季节等密切相关。精油组成的复杂多样性使其具有多靶标和广谱抗菌的生物活性。中药精油的主要成分是单萜类、倍半萜类、芳香族类、脂肪族类等低沸点的化合物。挥发油会抑制孢子的产生、萌发和菌丝生长，从而降低病原菌的危害性。精油含有多种组成成分，因此抗菌作用不能由单一化合物的作用来完全概括。和化学农药相比，挥发油来源于天然植物，具有使用安全，补偿药物残留，对人体安全不造成威胁，来源广泛，提取工艺简单的特点。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的通过防治根腐病化学抑菌剂使得致病菌产生了抗药性，效果不明显，现有的提取工艺简单提取的有效成分含量不多，效率差。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法及测试方法。

本发明是这样实现的，一种增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法，所述增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法包括筛选表面活性剂、助表面活性剂和Km值的筛选；制备纳米乳剂；将阴干的薄荷与蒸馏水放入圆底烧瓶内，采用水蒸气蒸馏，将收集到的精油用无水硫酸钠去除多余水分，脱水到无水硫酸钠既有结晶又有粉末为止，进行精密称重即得薄荷挥发油。

进一步，将阴干的薄荷与蒸馏水分别以1:10的比例放入10L圆底烧瓶内，采用水蒸气蒸馏法蒸馏8h后，将收集到的精油用无水硫酸钠去除多余水分。

进一步，薄荷挥发油保存于棕色瓶中，封口膜封口，放置于-20℃冰箱备用。

进一步，所述表面活性剂、助表而活性剂和Km值的筛选，包括以下步骤：

(1)选定表面活性剂和助表面活性剂，通过伪三元相图法确定Km值；

(2)室温下，将确定的表面活性剂和助表面活性剂混匀；

(3)混合表面活性剂与确定的油相进行混合，然后逐滴加入蒸馏水，不断搅拌直至溶液变浑浊，静置30min后溶液仍呈浑浊，记录体系的滴水量，并计算体系中各成分在转变点时的质量分数；

(4)分别以表面活性剂/助表面活性剂、油相、水相作为相图的3个顶点绘制伪三元相图，根据乳区的大小来确定Km值。

进一步，将确定的表面活性剂和助表面活性剂按Km值分别为1:1、2:1、3:1、4:1的比例混匀。

进一步，混合表面活性剂与确定的油相分别按质量比9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、6:4、3:7、2:8、1:9，总质量为5g进行混合。

进一步，所述纳米乳剂的制备方法具体为：

(1)室温下，将确定的表面活性剂和助表面活性剂混匀于烧杯中，称量好后在转速为中速；

(2)在300W工作功率下，冰浴超声波处理20min后室温放置5min；

(3)然后将混合表面活性剂与确定的油相分别按质量比8:2，总质量为5g进行混匀；

(4)保鲜膜密封后放置于转速为中速，温度为25℃的多头磁力加热搅拌器上搅拌，后逐滴加入蒸馏水并不断搅拌，使其含水量达80％；

(5)冰浴超声波处理，即可制成薄荷精油纳米乳剂。

进一步，将确定的表面活性剂和助表面活性剂按Km值为3∶1的比例混匀于烧杯中，称量好后在转速为中速，温度为25℃的多头磁力加热搅拌器上搅拌5min。

进一步，冰浴超声波处理30min，即制成薄荷精油纳米乳剂。

本发明的另一目的在于提供一种所述的增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法的纳米乳剂稳定性测试方法，所述纳米乳剂稳定性测试方法具体设有如下步骤：

(1)温度试验：将制备的薄荷精油纳米乳剂液封装如玻璃瓶中，密封后置于-20℃、4℃、20℃、30℃、40℃、50℃的环境中，放置12h取样，恢复室温，观察其性状，测定纳米乳剂乳的吸光度并计算透光率；

(2)盐浓度对纳米乳剂稳定性的影响：取5ml纳米乳剂置于4支洁净的试管中，以室温下的薄荷纳米乳剂为对照组，其余三组分别向其中加入氯化钠，使氯化钠的质量分数分别为0％、1％、2％、3％、4％、5％，振荡试管使溶解，观察纳米乳剂的变化情况并测定吸光度；

(3)不同离心力下稳定性将配置好的薄荷精油微乳，于2000r/min、4000r/min、6000r/min和8000r/min条件下离心15min，观察是否分层，测定离心前后595nm下的吸光度；

(4)pH对纳米乳剂稳定性的影响：取5mL纳米乳剂置于离心管中，以室温下的薄荷纳米乳剂为对照组，用精密pH计测量对照组的pH值，然后向离心管中逐渐滴加浓度为0.1mol/L的氯化氢溶液，采用精密pH计测量体系pH值为5、6时纳米乳剂的变化情况，测定纳米乳剂乳的吸光度并计算透光率；取5ml纳米乳剂置于离心管中，以室温下的薄荷纳米乳剂为对照组，然后向离心管中逐渐滴加浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，采用精密pH计测量体系pH值为8、9时纳米乳剂的变化情况，测定纳米乳剂乳的吸光度。

结合上述的技术方案和解决的技术问题，本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：

第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：

本发明提供了薄荷挥发油纳米乳剂的制备，使得挥发油生物活性大大增强，提高挥发油药效期，挥发油的获取：选取阴干的薄荷全草，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油。

表面活性剂(Tween 80)和助表面活性剂(无水乙醇)联用溶解薄荷挥发油，可增加乳化剂的稳定性，与水溶液更易互溶；纳米乳剂粒径小于100nm，小的粒径使得挥发油更易穿透病原菌细胞膜，发挥抑菌效应，可大大降低化学农药使用。

第二，把技术方案看做一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：

薄荷挥发油纳米乳剂，来源于天然植物，属于生物农药，对环境友好，挥发油是多成分起效，病原菌不易产生抗性，克服了化学农药多次使用病原菌产生抗性的现象。

第三，作为本发明的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：

(1)本发明的技术方案转化后的预期收益和商业价值为：

可将此制剂作为植物源添加物加入到叶面肥当中喷施，起到既促进植物生长，同时也能提高植物防病抗病的能力。此制剂也可以直接用于植物源农药开发利用，植物源农药与化学合成农药相比，具有毒性较低、易降解、作用方式多样、病原菌不易产生抗药性等特点。该原料来源广泛，成本低廉，制备工艺简单，推广应用前景较好。

(2)本发明的技术方案填补了国内外业内技术空白：由于挥发油与水的极性相反，油和水不会自然形成均匀的混合物并倾向于分离。由于精油的低毒低残留和天然抗菌特性，开发利用一直是人们探寻的主题。然而，挥发油的生物活性由于环境的波动而丧失是限制其开发利用的主要因素。纳米乳剂通过扩大挥发油的分散性，提高其水溶性，实现挥发油在农业中的应用。

(3)本发明的技术方案是否解决了人们一直渴望解决、但始终未能获得成功的技术难题：挥发油是一种非常复杂的天然混合物，由于多种成分共同起效，挥发油似乎没有特定的细胞靶点。由于挥发油是许多分子的复杂混合物，从这个意义上讲，研究挥发油比研究它的某些成分能提供更多的信息，因为协同作用的概念似乎更有意义。为了使挥发油成为新一代植物源农药，使其田间应用成为可能，纳米乳剂的制备被认为是更有效，使用范围更广的一种剂型。纳米乳剂拥有很多优势，比如可以提高水溶性、有效成分的稳定性以及更大的比表面积等从而提高生物利用度。

(4)本发明的技术方案是否克服了技术偏见：纳米乳剂是近些年来研究较多的一种剂型，由水相、油相、表面活性剂、助表面活性剂等成分组成，是一个均一的乳剂体系。纳米乳化技术是一种新型药物制剂技术，属于纳米技术的一种，由于药物粒子达到了纳米级别，如此小的粒径使其很容易穿透病原菌细胞膜或细胞间隙而发挥抑菌活性。这种小尺寸效应是纳米乳剂型有别于其他剂型的重要一点，加上粒径变小后药物的比表面积大幅增加，和靶蛋白的接触面也得到增大，最终使得药物生物利用度提高。这种小尺寸效应直接解决了很多传统技术无法解决的难题。纳米乳剂比传统工艺粒径更小，大大减少施用量，有效降低使用成本。

附图说明

图1是本发明实施例提供的增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法流程图；

图2是本发明实施例提供的不同Km值对薄荷纳米乳剂形成的影响数据图；

图3是本发明实施例提供的薄荷挥发油原油、纳米乳剂和传统乳剂GC-MS分析图；

图4是本发明实施例提供的不同条件对薄荷纳米乳剂稳定性的影响数据图；

图5是本发明实施例提供的传统工艺(a图)和制备方法(b图)制备的薄荷精油电镜照片；

图6是本发明实施例提供的传统工艺(a图)和制备方法(b图)制备的薄荷精油溶剂粒径图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现，该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明实施例。

如图1所示，本发明实施例提供的一种增强薄荷挥发油抑菌活性剂的方法包括以下步骤：

S101：挥发油的获取：选取阴干的薄荷全草，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油；

S102：表面活性剂、助表面活性剂和Km值的筛选；

S103：纳米乳剂的制备。

进一步，所述薄荷挥发油的制备方法具体为：

将阴干的薄荷与蒸馏水分别以1:10的比例放入10L圆底烧瓶内，采用水蒸气蒸馏法蒸馏8h后，将收集到的精油用无水硫酸钠去除多余水分，脱水到无水硫酸钠既有结晶又有粉末为止，进行精密称重即得薄荷挥发油。保存于棕色瓶中，封口膜封口，放置于-20℃冰箱备用。

进一步，所述表面活性剂与助表而活性剂质量比(Km值)的筛选包括以下步骤：

(1)：选定表面活性剂(Tween 80)和助表面活性剂(无水乙醇)，通过伪三元相图法来确定Km值；

(2)：室温下，将确定的表面活性剂和助表面活性剂按Km值分别为1:1、2:1、3:1、4:1的比例混匀；

(3)：混合表面活性剂与确定的油相(薄荷精油)分别按质量比9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、6:4、3:7、2:8、1:9，总质量为5g进行混合，然后逐滴加入蒸馏水，不断搅拌直至溶液变浑浊，静置30min后溶液仍呈浑浊，记录体系的滴水量，并计算体系中各成分在转变点时的质量分数；

(4)：分别以表面活性剂/助表面活性剂、油相、水相作为相图的3个顶点绘制伪三元相图，根据乳区的大小来确定Km值。

进一步，所述薄荷精油纳米乳剂的制备方法具体为：

(1)：室温下，将确定的表面活性剂和助表面活性剂按Km值为3∶1的比例混匀于烧杯中，称量好后在转速为中速，温度为25℃的多头磁力加热搅拌器上搅拌5min；

(2)：在300W工作功率下，冰浴超声波处理20min后室温放置5min；

(3)：然后将混合表面活性剂与确定的油相(薄荷精油)分别按质量比8:2，总质量为5g进行混匀；

(4)：保鲜膜密封后放置于转速为中速，温度为25℃的多头磁力加热搅拌器上搅拌，后逐滴加入蒸馏水并不断搅拌，使其含水量达80％；

(5)：冰浴超声波处理30min，即可制成薄荷精油纳米乳剂。

本发明另一目的在于提供一种纳米乳剂稳定性测试方法，具体设有如下步骤：

(1)温度试验：将制备的薄荷精油纳米乳剂液封装如玻璃瓶中，密封后置于-20℃、4℃、20℃、30℃、40℃、50℃的环境中，放置12h取样，恢复室温，观察其性状，测定纳米乳剂乳的吸光度并计算透光率。

(2)盐浓度对纳米乳剂稳定性的影响：取5ml纳米乳剂置于4支洁净的试管中，以室温下的薄荷纳米乳剂为对照组，其余三组分别向其中加入氯化钠，使氯化钠的质量分数分别为0％、1％、2％、3％、4％、5％，振荡试管使溶解，观察纳米乳剂的变化情况并测定吸光度；

(3)不同离心力下稳定性将配置好的薄荷精油微乳，于2000r/min、4000r/min、6000r/min和8000r/min条件下离心15min，观察是否分层，测定离心前后595nm下的吸光度；

(4)pH对纳米乳剂稳定性的影响：取5mL纳米乳剂置于离心管中，以室温下的薄荷纳米乳剂为对照组，用精密pH计测量对照组的pH值，然后向离心管中逐渐滴加浓度为0.1mol/L的氯化氢溶液，采用精密pH计测量体系pH值为5、6时纳米乳剂的变化情况，测定纳米乳剂乳的吸光度并计算透光率。取5ml纳米乳剂置于离心管中，以室温下的薄荷纳米乳剂为对照组，然后向离心管中逐渐滴加浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，采用精密pH计测量体系pH值为8、9时纳米乳剂的变化情况，测定纳米乳剂乳的吸光度。

传统工艺：所述药剂包括溶剂和分散剂，溶剂为DMSO，用量占挥发油总质量的2％，所述分散剂为吐温80，吐温的用量挥发油总质量的0.1％。将挥发油用2％DMSO和0.1％吐温80(2-DMSO-T)混悬液进行溶解。

将传统工艺制备的乳剂和实施例3薄荷挥发油纳米乳剂进行GC-MS分析，采用型号为Agilengt Technologies 7890B-5977B气象色谱仪进行检测。

色谱柱：HP-5MS 30m×250μm×0.25μm。EI源电离源温度：230℃；四级杆温度：150℃，扫描范围：30～500m/z；进样口温度：285℃，分流比10:1；进样量：1μL；电子能量：70eV；柱温箱升温程序：50℃保持4min，5℃/min升温至120℃，1℃/min升温至180℃，10℃/min升温至280℃保持16min；其中RI值根据正构烷烃连续碳(C9-C25)的保留时间计算得到，将化合物的保留时间和质谱与NIST 17.L数据库进行数据比对，并结合有关文献，确定最终化合物，鉴定结果如图3所示。纳米乳剂中鉴定出24种主要成分，占化合物总量的98.29％，其中薄荷脑(77.852％)、薄荷酮(10.429％)、乙酸薄荷酯(2.848％)和D-柠檬烯(2.02％)占比较多。传统乳剂中共鉴定出18主要化合物，精油主要成分仅有42.897％，薄荷脑(32.294％)、薄荷酮(3.279％)。原油中共鉴定出24种主要化合物，其中薄荷脑(72.819％)、薄荷酮(12.381％)、乙酸薄荷酯(3.348％)和D-柠檬烯(2.386％)。经分析，纳米乳剂比传统乳剂成分更复杂、主要成分含量更多，与原油相比成分相似度大，主要成分占比相似，极大还原了原油的成分。

如图4所示，薄荷纳米乳剂在温度分别为-20℃、4℃、30℃、40℃、50℃、条件下透光率与对照组20℃透光率相比无显著性差异；盐浓度分别为1％、2％、3％、4％、5％时的透光率与对照组无显著性差异，说明在此条件下薄荷纳米乳剂稳定性良好。纳米乳剂经不同转速离心10min后仍保持澄清、透明且pH为5-9变化时，未出现分层或药物沉淀析出的现象。

透射电镜(JEM-1011，JEOL，Co.Ltd.，Tokyo，Japan)下观察乳剂粒径形态和激光粒度分析仪测定粒径大小。

筛选配方制备的乳液为澄清透明的淡黄色液体，离心后外观仍澄清透明，无絮状沉淀和分层现象，并可用水无限稀释，表明所制备的样品为纳米乳剂。传统薄荷精油溶剂为浑浊的乳白色液体。

在透射电镜下，薄荷精油纳米乳剂呈规则的球形，纳米乳剂液滴分布非常均匀，没有粘连和团聚，与用传统薄荷精油溶剂相比颗粒较小(如图5)。

激光粒度分析仪的结果显示传统薄荷精油溶剂平均粒径为375.54±11.5nm，薄荷精油纳米乳平均粒径为23.39±3.66nm(图6)

传统工艺制备的乳剂和纳米乳剂对尖孢镰刀菌最低抑菌浓度(MIC)测定

步骤1：用1/4PDB液体培养基冲洗菌落，八层纱布过滤菌丝，用血球计数板在显微镜下计数，最终配置浓度为1×104个/毫升的孢子悬浮液。

步骤2：将传统工艺制备的乳剂和纳米乳剂分别通过0.22μm的有机滤头进行过滤，得到无菌滤液。

步骤3：将传统工艺制备的乳剂和纳米乳剂分别采用二倍稀释法进行稀释，初始浓度为15mg/mL，通过二倍稀释法稀释得到一系列浓度为15～0.0146mg/mL。在96-孔板中，每个孔加入已过滤的挥发油溶液(50μL)和真菌悬浮液(150μL)。其中，以200μL的1/4PDB溶液作为空白对照，200μL真菌悬浮液作为阳性对照。96-孔板在28℃微生物培养箱中恒温培养36h。采用酶标仪(Thermo.Model:1510)在吸光度为595nm处测定每个孔的吸光度，当样品孔吸光度与空白对照孔吸光度差值为0时视为不出现真菌生长，此时对应的挥发油浓度值为MIC值。每个处理设置8个复孔。

如下表所示传统工艺制备的乳剂和纳米乳剂对2种镰刀菌最低抑菌浓度(MIC)测定

注：MIC是最小抑菌浓度。数据进行了8次重复，每个值代表8个数据用平均值±标准差进行了分析。差异用ANOVA(方差分析)检验显著性，显着性水平为p<0.05。同一列不同字母表示具有显著性差异。

结果表明，薄荷挥发油制备成纳米乳剂之后，明显提高了抑菌效果，对尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、层出镰刀菌的抑菌效果都高于其传统乳剂。

纳米乳剂对盆栽三七根腐病防控作用测定

步骤1：选取长势一致的一年生三七幼苗(株高为10cm左右)，植株茎基部周围土壤用注射器注入10mL孢子浓度为2*106个/mL混合的菌悬液(尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、层出镰刀菌三种菌体积比1:1:1)，每个处理40株。

步骤2：配制浓度为200mg/mL的纳米乳剂，用无菌水稀释400倍，在每个植物茎基部倒入10mL，空白对照倒入10mL无菌水；每7天一次。

步骤3：三七植株放于24℃的温室中12h光照/12h黑暗培养间中培养，观察发病状况并记录数据。

发病率(DI)＝发病株数目/总株数目×100％

病情分级如下：

0级：植株健康；

1级：植株叶片出现病斑；

2级：植株萎蔫；

3级：植株死亡

病情指数(Di)＝∑I(Dn×Dg)/(Tn×Mg)|×100

Dn表示同一病情等级的植株数目，Dg表示相应的病情等级，Tn表示总植株数目，Mg表示最高病情等级。

步骤4：在采集三七叶片，用蒸馏水清洗掉表面污浊，并擦干表面水分，剪成碎片后混合，然后从中随机称取0.1g置于试管中，加95％乙醇丙酮(V:V＝1:1)混合溶液25ml，将试管用封口膜密封阴暗处放置24h以上，待叶片完全发白后再用酶标仪测量其光密度(在波长663、645nm处的光密度)，然后计算各样品的叶绿素含量。

叶绿素a的浓度：C

叶绿素b的浓度：C

总叶绿素的浓度：C

如下表所示挥发油对三七接种尖孢镰刀菌防控效果

注：每个值代表20个数据用平均值±标准差进行了分析。差异用ANOVA(方差分析)检验显著性，显着性水平为p<0.05。同一列不同字母表示具有显著性差异。

本发明的技术原理：

1、薄荷是一种非常重要的香料，气芳香，芳香走窜，善于辟秽。挥发油由于都是由小分子物质组成，土壤里面易扩散。

2、纳米乳体系由油相、水相、表面活性剂以及助表面活性剂等成分组成，其中表面活性剂其分子结构中，一端亲水，一端亲油，这种特殊的结构可使得体系在表面活性剂作用下，将油相溶解于水或将水相溶解于油中。

3、表面活性剂本身的亲水亲油平衡值(HLB值)和油相乳化所需的亲水亲油平衡值相同或相近，做出来的体系比较稳定，能使油相和水相非均匀地共为一体，而不是油相漂浮在水相上面出现分层现象。

4、挥发油制备成纳米乳剂之后，提高了挥发油在水中的溶解度。

5、挥发油制备成纳米乳剂粒径变小后更容易穿透病原菌细胞膜或细胞间隙，同时比表面积大幅增加，和靶蛋白接触面也得到增大，增强了挥发油的抑菌活性。

6、挥发油为植物源提取物，且薄荷是药食同源中药和常用的香料，对人体无害，解决了目前常用化学农药对人体肝肾毒性等威胁。

7、挥发油易挥发，故本发明解决了化学农药残留降低农产品品质、威胁农业可持续发展的棘手问题。

为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值，该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。

本发明实施例应用在增强薄荷挥发油抑菌活性剂的制备中。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。