一种2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉含量的检测方法

技术领域

本发明涉及化学检测技术领域，具体涉及一种2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉含量的检测方法。

背景技术

2,6-二氯喹喔啉（CAS号：18671-97-1）作为精喹禾灵的重要中间体而备受关注，拥有广阔的前景及市场。目前，2,6-二氯喹喔啉的生产方法主要为以2-羟基6-氯喹喔啉为原料，氯化亚砜为氯化剂，在溶剂（如甲苯、1,2-二氯乙烷等）和催化剂（如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺等）下升温反应，反应完毕后脱出有机溶剂及部分未反应完全的氯化剂，转移至结晶釜结晶，过滤、干燥得成品，该反应过程中，会形成杂质2,3,6-三氯喹喔啉（CAS号：2958-87-4）。此外，以对氯邻硝基乙酰乙酰苯胺制备2-羟基-6-氯喹喔啉的过程中，以及2-羟基-6-氯喹喔啉的中间体氮氧化物在氯化反应条件下，都会生成2,3,6-三氯喹喔啉杂质。目前未见到有关报道对2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉的含量进行检测。

杂质是影响农药质量的主要因素之一。2,3,6-三氯喹喔啉直接影响精喹禾灵中间体2,6-二氯喹喔啉的品质及合成收率，且其会随着后续反应进入精喹禾灵原药中，直接影响精喹禾灵原药的品质，使除草效果降低。另一方面，2,6-二氯喹喔啉对人体眼睛、呼吸道和皮肤都有刺激作用。

基于此，为提高精喹禾灵产品的纯度，减少因杂质生成造成的成本浪费及纯化工艺费用，需要对精喹禾灵中间体2,6-二氯喹喔啉生产进行进一步研究，尽可能避免生产过程中生成杂质2,3,6-三氯喹喔啉。因此有必要对2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉的含量进行检测。

发明内容

针对目前缺少对2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉的含量进行检测的方法的技术问题，本发明提供一种2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉含量的检测方法。本发明方法节省了检测时间，且能够较为准确地得到2,3,6-三氯喹喔啉的含量，对评价2,6-二氯喹喔啉的质量有重要意义。

本发明技术方案如下：

一种2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉含量的检测方法，包括如下步骤：

（1）采用DMF和乙腈混合溶剂分别溶解标准物质和待测样品，得到标样和试样；

（2）设定高效液相色谱仪的检测波长至230-250nm，色谱柱温度为30-40℃，流动相为乙腈、水及乙酸的混合液，仪器基线稳定后按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，分别对标样和试样色谱图中2,3,6-三氯喹喔啉峰面积进行平均值计算，得峰面积平均值；

（3）计算试样中2,3,6-三氯喹喔啉的质量分数X

，

式中，

A

m

m

P

X

进一步的，高效液相色谱仪采用C18反相色谱柱。

进一步的，混合液中乙腈：水：乙酸的体积比为65：35：0.5-80：20：0.8。在该流动相比例范围内，样品中杂质分离度良好。

进一步的，流动相的流速为0.8-1.2mL/min。流速<0.8mL/min，分析时间增加，且会造成色谱峰拖尾从而导致峰展宽，对称性较差；流速>1.2mL/min，虽然对分离不会造成较大影响，分析时间有所减少，但是会造成色谱仪系统压力过高，长时间运行，压力过高，对仪器损害较大。

进一步的，色谱条件为：色谱柱的柱长为150mm，内径为4.0-4.6mm，粒径为3.0-5.0μm，色谱柱温度为35℃，混合液中乙腈：水：乙酸的体积比为70：30：0.8，流动相的流速为1.0mL/min，检测波长为245nm。

进一步的，标样和试样的每次进样量均为5μL。

进一步的，还包括步骤（4）：将计算得到的质量分数X

进一步的，校正系数F由如下方法确定：

取至少两个待测样品，按照步骤（1）-（3）计算各个待测样品中2,3,6-三氯喹喔啉的质量分数X

进一步的，更换高效液相色谱仪后，重新确定校正系数。

本发明的有益效果在于：

本发明以230-250nm为检测波长，在该波长范围下，2,3,6-三氯喹喔啉的紫外吸收合适且稳定，且样品的线性范围更宽、峰面积大小适宜、吸收稳定，有利于检测精度和稳定性的提高；色谱柱温度为30-40℃，符合色谱柱的使用温度范围且易于控制，色谱柱恒温保证了保留时间的稳定，提高了样品检测的重现性。

本发明提供的2,3,6-三氯喹喔啉含量的检测方法弥补了本领域的空白，采用上述方法检测2,6-二氯喹喔啉中杂质2,3,6-三氯喹喔啉含量得到的色谱峰形好，积分计算结果准确、重复性好，所得的结果可信度高且更加准确及时；本发明方法专属性强，精密度好，特别适用于中间产品的质量控制，对保证最终产品的质量具有重要作用和现实意义。

特别的，本发明在面积百分比法基础上，还将外标定量方法得到的含量与面积百分比法得到的百分比含量进行校正计算，得到校正系数，通过校正系数和面积百分比含量反推样品中2,3,6-三氯喹喔啉的真实质量分数，使检测结果更加准确。该方法相较于直接使用外标定量方法进行检测，不仅可以缩短检测时间，避免不同检测人员带来的称样、定容以及其他样品前处理带来的误差，还降低了溶剂使用量，有利于检测成本的降低，并减轻废水排放处理压力。将该方法应用于生产中，可以提高检测效率，更及时准确的为车间生产提供数据支持。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1中标样的液相色谱图。

图2是本发明实施例1中试样的液相色谱图。

图3是本发明试验例2中的线性关系图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

具体实施方式采用安捷伦公司的G7112B输液泵和DAD检测器，色谱柱为岛津VP-ODS，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5.0µm。

实施例1

对生产中得到的某批次570公斤2,6-二氯喹喔啉中2,3,6-三氯喹喔啉含量进行检测，步骤如下：

（1）标样和试样配制

准确称取2,3,6-三氯喹喔啉标准物质A

准确称取待测样品A

（2）高效液相色谱法检测

色谱条件：柱温为35℃，流动相为体积比=70：30：0.8的乙腈、水、冰乙酸混合溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为245nm，进样体积为5μL。

开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%之后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样检测。

标样、试样色谱图如图1和2所示，图1、图2中4.79min为2,6-二氯喹喔啉，7.16min处为2,3,6-三氯喹喔啉。

（3）含量计算

将图1、图2中2,3,6-三氯喹喔啉峰面积平均值、标准物质质量、待测样品质量及标准物质中2,3,6-三氯喹喔啉的质量分数代入如下公式：

，

计算待测样品中2,3,6-三氯喹喔啉含量，所得数据如表1所示。

表1 实施例1标样及试样色谱检测数据

实施例2

对生产中得到的某批次548公斤2,6-二氯喹喔啉中2,3,6-三氯喹喔啉含量进行检测，步骤如下：

（1）标样和试样配制

准确称取2,3,6-三氯喹喔啉标准物质A

准确称取待测样品A

（2）高效液相色谱法检测

色谱条件：柱温为35℃，流动相为体积比=70：30：0.8的乙腈、水、冰乙酸混合溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为245nm，进样体积为5μL。

开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%之后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样检测。

（3）含量计算

按照实施例1方法计算待测样品中2,3,6-三氯喹喔啉含量，所得数据如表2所示。

表2 实施例2标样及试样色谱检测数据

为验证本发明方法的重复性和准确性，进行了如下验证试验：

验证例1

采用实施例2同批次2,6-二氯喹喔啉进行重复性试验，步骤如下：

（1）标样和试样配制

准确称取2,3,6-三氯喹喔啉标准物质A

准确称取6份2，6-二氯喹喔啉试样，6份待测样品的具体质量如表3所示，6份试样分别置于100mL容量瓶中，各加10mL DMF，超声波振荡溶解后各加入70mL乙腈，冷至室温后，用乙腈稀释至刻度，得到标样备用；

（2）高效液相色谱法检测

色谱柱条件：柱温为35℃，流动相为体积比=70：30：0.8的乙腈：水：冰乙酸混合溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为245nm，进样体积为5μL。

对6份试样分别进行检测，检测方法为开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%之后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样检测。

（3）含量计算

按照实施例1方法计算待测样品中2,3,6-三氯喹喔啉含量，所得数据如表3所示。

表3 试验例1色谱检测数据

由表3中数据可见，本发明检测方法实验结果重复性良好。

试验例2

采用不同浓度标准品溶液进行线性试验，步骤如下：

（1）试样配制

称取7份2,3,6-三氯喹喔啉标准物质，分别置于100mL容量瓶中，各加10mL DMF，超声波振荡溶解后各加入70mL乙腈，冷至室温后，用乙腈稀释至刻度，得到浓度依次为203μg/mL、309μg/mL、413μg/mL、518 μg/mL、610μg/mL、672μg/mL、716μg/mL的一组2,3,6-三氯喹喔啉试样备用；

（2）高效液相色谱法检测

色谱柱条件：柱温为35℃，流动相为体积比=70：30：0.8的乙腈：水：冰乙酸混合溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为245nm，进样体积为5μL。

对7份试样分别进行检测，检测方法为开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%之后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样检测。

（3）线性回归方程确定

以y轴峰面积（A）对x轴样品浓度（μg/mL）作线性回归，得到回归方程如下：

y=5790x-9016.7，R

可见，2,3,6-三氯喹喔啉在200~700μg/mL范围内线性关系良好。

实施例3

采用本发明检测方法和外标法分别对生产中得到的六个批次的2,6-二氯喹喔啉中2,3,6-三氯喹喔啉含量进行检测，色谱条件：柱温为35℃，流动相为体积比=70：30：0.8的乙腈、水、冰乙酸混合溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为245nm，进样体积为5μL。统计两种方法得到的2,3,6-三氯喹喔啉含量，并进行对比计算，得到各个样品对应的校正系数，对校正系数取平均值，即为当前测试仪器下本发明测试方法的校正系数F，数据如表4所示。

表4 校正系数得计算数据统计表

后续检测2，3，6-三氯喹喔啉的含量时，将根据本发明方法得到的面积百分比含量与校正系数相乘，测试结果相对准确。

根据外标法的操作步骤，从称样、溶样、定容等样品前处理，仪器运行平稳至上机，计算结果，检测时长约60min；本发明将面积百分法与校正系数法结合，从样品前处理至仪器运行平稳上机，计算结果，检测时间不高于30min，有效缩短检测时长50%，大大了提高了检测效率，特别适用于实际生产中对2,6-二氯喹喔啉中2,3,6-三氯喹喔啉杂质的监测。

由于仪器的系统误差对校正系数得影响较大，若更换仪器检测，需重建立校正系数。

综上，本发明提供的2，6-二氯喹喔啉中杂质2，3，6-三氯喹喔啉含量的检测方法有良好的专属性和准确性，适用于生产中快速测定2，6-二氯喹喔啉中杂质2，3，6-三氯喹喔啉的含量，同时更好的监测中间体2，6-二氯喹喔啉的品质。

尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。