血浆神经丝轻链蛋白在帕金森病日间过度嗜睡相关产品制备或筛选中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及血浆神经丝轻链蛋白在帕金森病日间过度嗜睡相关产品制备或筛选中的应用。

背景技术

帕金森病是最常见的神经退行性疾病之一，主要临床表现包括运动迟缓、静止性震颤、肌强直等运动症状，以及便秘、嗅觉减退、焦虑抑郁、认知下降、睡眠障碍等非运动症状。其中日间过度嗜睡是帕金森病患者常见的非运动症状之一，其可严重影响患者的生活质量，增加意外发生风险。帕金森病日间过度嗜睡的发病机制目前尚不清楚，且缺乏有效的生物标志物，因此寻找便于获取的血液学生物标志物迫切而重要。

近年来，越来越多的研究致力于探索能早期预测帕金森病患者发生日间过度嗜睡的潜在生物标志物。其中脑脊液阿尔兹海默症相关的病理蛋白，包括脑脊液磷酸化tau蛋白(p-tau181)、脑脊液β淀粉样蛋白(Aβ42)被证实具有预测帕金森病日间过度嗜睡的潜力。然而，腰椎穿刺是一种有创性检查，导致脑脊液获取困难。因此亟需寻找一种可替代腰椎穿刺等有创性检查，且可快捷并有效预测帕金森病患者发生日间过度嗜睡的血液学生物标志物。

发明内容

针对上述技术问题，本发明首次提供了血浆神经丝轻链蛋白在帕金森病日间过度嗜睡相关产品制备或筛选中的应用。本发明收集了大样本的帕金森病患者外周血，使用超敏单分子阵列(simoa)技术检测了所有参与者的基线血浆神经丝轻链蛋白(neurofilamentlight chain，NfL)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、p-tau181、Aβ40和Aβ42水平，使用Epworth嗜睡评估量表(Epworth Sleepiness Scale，ESS)评估患者是否有日间过度嗜睡及其严重程度(ESS≥10分则为有日间过度嗜睡)。对患者进行每年一次的随访，连续随访3年。随访时再次使用ESS量表对患者的日间过度嗜睡进行评估及测量患者的血浆生物标志物水平。使用广义估计方程和线性混合模型进行统计分析，结果显示，在长期随访中，血浆NfL水平与日间过度嗜睡具有显著相关性，即血浆NfL水平可作为帕金森病患者日间过度嗜睡的血液学生物标志物。

为达上述目的，本发明采用如下的技术方案：

本发明目的之一是提供了血浆神经丝轻链蛋白在帕金森病日间过度嗜睡预防、检测、诊断和/或治疗产品制备和/或筛选中的应用。

进一步的，所述帕金森病日间过度嗜睡检测产品为一种试剂，所述试剂能够检测血浆中神经丝轻链蛋白的表达水平。

进一步的，所述帕金森病日间过度嗜睡诊断产品为一种试剂盒，所述试剂盒中含有能够检测血浆中神经丝轻链蛋白表达水平的试剂。

进一步的，所述帕金森病日间过度嗜睡诊断产品为一种芯片，所述芯片中含有能够检测血浆中神经丝轻链蛋白表达水平的试剂。

进一步的，所述帕金森病日间过度嗜睡治疗产品为一种药物组合物，所述药物组合物中包含神经丝轻链蛋白抑制剂，所述抑制剂可降低神经丝轻链蛋白表达水平。

更进一步的，所述药物组合物还包括与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的辅料。

本发明目的之二是提供了一种筛选治疗帕金森病日间过度嗜睡候选物质的方法，所述方法包括用待筛选物质处理表达或含有神经丝轻链蛋白基因的体系以及检测所述体系中神经丝轻链蛋白基因的表达；其中，若待筛选物质可降低神经丝轻链蛋白基因的表达水平，则表明该物质是治疗帕金森病日间过度嗜睡的候选物质。

本发明目的之三是提供了所述方法在治疗帕金森病日间过度嗜睡候选物质筛选中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

此前研究发现，脑脊液p-tau181及Aβ42具有预测帕金森病日间过度嗜睡的潜力。然而，腰椎穿刺是一种有创性检查，导致脑脊液获取困难。而本发明发现，血浆NfL水平与日间过度嗜睡具有显著相关性，即血浆NfL水平可作为帕金森病患者日间过度嗜睡的血液学生物标志物。本发明首次成功寻找到了另外一种全新、快捷且有效预测帕金森病患者发生日间过度嗜睡的血液学生物标志物，这在帕金森病日间过度嗜睡生物标志物的拓展以及对患者伤害降低方面的意义十分重大。

附图说明

图1为本发明实施例1中帕金森病患者中日间过度嗜睡相关指标的评估结果；

图2为本发明实施例1中有无日间过度嗜睡的帕金森病患者基线血浆生物标志物的比较结果，其中，(A)伴有和不伴有日间过度嗜睡的帕金森病患者基线血浆生物标志物的比较，采用Mann-Whitney U检验检验显著性；(B)帕金森病患者血浆生物标志物与ESS评分的相关性，采用Spearman相关分析检验显著性；

图3为本发明实施例1中随访期间各指标的变化情况；

图4为本发明实施例1中随访期间随访期间ESS分数的变化情况；

图5为本发明实施例1中长期随访期间血浆生物标志物与帕金森病患者日间过度嗜睡发生的相关性结果；

图6为本发明实施例1中长期随访期间血浆生物标志物与帕金森病患者ESS分数的相关性结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和本质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。以下实施例中使用的试剂和仪器等均可由市售获得，实施例中使用的方法如无特别说明，与常规使用的方法一致。

下面结合实施例，对本发明的技术方案进行进一步详细阐述。

实施例1

1)基线纳入159例帕金森病患者，采集患者性别、年龄、身高、体重等人口学特征及病程、用药情况等临床特征，使用Epworth嗜睡评估量表(Epworth Sleepiness Scale，ESS)评估患者是否有日间过度嗜睡(ESS≥10分则为有日间过度嗜睡)。采用UPDRS-III评估患者运动症状。采用帕金森病睡眠质量量表(Parkinson’s disease sleep scale 2ndversion，PDSS-2)评估患者睡眠质量。采用汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression ratingscale，HDRS，24条目版本)和汉密尔顿焦虑量表(Hamilton anxiety rating scale，HARS)评估患者抑郁和焦虑症状。采用蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitiveassessment，MoCA)评估患者认知功能。评估结果如图1所示。然后使用simoa技术检测患者的血浆NfL、GFAP、p-tau181、Aβ40和Aβ42水平，检测结果如图2所示。

图2显示：基线时，与无日间过度嗜睡的患者相比，有日间过度嗜睡的患者血浆NfL水平更高，且血浆NfL水平与ESS分数正相关(图2)。

2)对纳入的帕金森病患者进行年度随访，每年随访一次，共随访3年(临床指标的随访时间为3年)，随访时再次评估患者的ESS分数，确定患者是否发生日间过度嗜睡，并再次评估患者的运动症状、抑郁和焦虑症状、认知功能、以及血浆NfL、GFAP、p-tau181、Aβ40和Aβ42水平。其中随访期间各指标变化情况如图3所示，随访期间ESS分数变化如图4所示。

3)使用广义估计方程和线性混合模型分析血液学指标与日间过度嗜睡的相关性，具体操作如下：

在2年的随访(血液学指标的随访时间为2年)中，使用广义估计方程(GEE)模型研究血浆生物标志物与临床特征和EDS存在的关联，该模型允许对同一患者进行重复测量的关联。在该模型中，EDS是否存在作为因变量。我们建立了两种类型的模型：i)未校正模型：重复测量每个生物标志物(血浆中p-tau181、a-β40和a-β42的水平，a-β42/a-β40和p-tau181/a-β42的比值)作为独立重复变量。ii)校正模型：对每个生物标志物进行分析，分别控制性别、年龄、疾病持续时间、BMI、LEDD、DA、MoCA、UPDRS-II和UPDRS-III评分以及随访时间。

使用线性混合效应模型研究2年随访期间血浆生物标志物与临床特征和ESS评分之间的关系，考虑重复测量和不同随访时间之间的关联。我们进行了两种类型的模型：i)未调整模型：将时变ESS评分作为每个模型的因变量，将每个生物标志物的重复测量作为固定效应，将截距作为随机效应。ii)调整模型：对每个生物标志物进行分析，分别控制性别、年龄、疾病持续时间、BMI、LEDD、DA、MoCA、UPDRS-II和UPDRS-III评分以及随访时间。

随访分析结果如图5和图6所示。

校正后的广义估计方程模型显示，随访期间血浆NfL水平较高(OR 1.047[1.002-1.094]，p＝0.042)与EDS的发生具有显著相关性。校正后的线性混合效应模型显示，随访期间血浆NfL水平较高(β0.097[0.012-0.183]，p＝0.026)与ESS评分更高相关(图5-图6)。即血浆NfL水平可作为帕金森病患者日间过度嗜睡的血液学生物标志物。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。