用于治疗脱发或促进毛发生长的组合物

技术领域

本发明涉及一种用于治疗脱发或促进毛发生长的组合物，其包含丝蛋白和血浆或血清组分；并且更具体地涉及一种用于治疗脱发或促进毛发生长的组合物，其包含分子量为5至300kDa的丝蛋白以及血浆或血清组分。

背景技术

脱发是一个长期困扰男性和部分女性的问题，并且男性中最常见的脱发类型是男性型秃发或脱发症。在一般脱发症的情况下，脱发在若干年内逐渐发生，最明显的开始于头顶，继而是额区。在患有脱发症的女性的情况下，随着毛发变得稀疏，脱发比男性脱发症更均匀，并且经常发生在更年期之后。为了减轻或治疗脱发症，在化妆品和制药行业中，开发用于刺激毛发生长或减少脱发的物质的努力已经持续了很长时间。

迄今为止，作为尝试生产毛发生长促进剂的结果，已经开发了多种化合物作为候选物。包括医学、科学和专利文献在内的出版物披露了在治疗和/或预防脱发以及恢复和/或促进毛发生长、特别是关于人头皮上的毛发方面已经做出各种努力。实际上，已经提出了许多不同的活性化合物，其代表性例子包括2,4-二氨基-6-哌啶基嘧啶-3-氧化物(也称为“米诺地尔”)和作为II型还原酶的特异性抑制剂的非那雄胺(美国专利号4,139,619和美国专利号4,596,812)。使用米诺地尔作为活性成分的药物是以商品名落健(Rogaine)(Pharmacia&Upjohn Company的商标)可商购的。据报道，落健使脱发减少多达10％，并促进患有男性型秃发的男性中的毛发生长。落健是从外部直接施加至头皮区域的溶液，并且已知治疗性施加应有规律地持续很长一段时间。使用非那雄胺作为活性成分的药物是以名称保发止(Propecia)(Merck&Co.,Inc.的商标)可商购的。保发止是口服施用的丸剂。其也需要持续且有规律的施用。

最近，已经提出动物来源的血清或血浆具有促进毛发生长的作用(韩国专利号0,617,644)。同时，已经提出许多基于天然植物提取物的组合物(包括草药)可以用于治疗脱发症。通常称为用于毛发生长的组合物的药物的各种提取物用作毛发生长刺激剂或促进剂。然而，实际上，这些提取物通常不会对毛发生长产生积极作用，因为毛发的状况或脱发症的严重程度因人而异。尽管一些用于毛发生长的组合物在一定程度上是有效的，但它们伴随着缺点，包括由于皮肤刺激和难闻的气味而难以长时间持续使用。

另一种用于脱发症的疗法是毛发移植。通常，该方法涉及将天然毛发从毛发生长的头皮区域移植到秃发区域。然而，移植的毛发通常在移植后约2至4周脱落。尽管大多数移植的毛发在3至4个月后再次生长，但可能需要进行另外的移植手术。因此，移植是昂贵、耗时、痛苦的且具有有限的成功的可能性。因此，迫切需要开发用于毛发生长的方法和组合物，所述方法和组合物展现出在较短的时间段内对于脱发症优异的治疗作用或促进毛发生长的作用而不引起副作用。

因此，作为开发具有对脱发的优异治疗作用和毛发生长作用的组合物的广泛努力的结果，本发明人发现包含丝蛋白以及源自动物的血浆或血清组分的组合物具有诱导和促进脱发症患者中毛发生长的作用。基于该发现，已经完成本发明。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于促进毛发生长或抑制脱发的组合物，所述组合物具有诱导和促进脱发症患者中毛发生长的作用而不引起副作用。

本发明的另一个目的是提供一种用于治疗或预防脱发症的方法，所述方法包括向受试者施用血浆或血清组分和丝蛋白。

本发明的另一个目的是提供一种用于促进毛发生长和抑制脱发的方法，所述方法包括向受试者施用血浆或血清组分和丝蛋白。

本发明的另一个目的是提供所述血浆或血清组分和所述丝蛋白用于促进毛发生长和抑制脱发的用途。

本发明的另一个目的是提供所述血浆或血清组分和所述丝蛋白用于制备促进毛发生长和抑制脱发的治疗剂的用途。

为了实现上述目的，本发明提供了一种用于促进毛发生长和抑制脱发的药物组合物，所述药物组合物包含血浆或血清组分和丝蛋白作为活性成分。

本发明还提供了一种用于促进毛发生长和抑制脱发的化妆品组合物，所述化妆品组合物包含血浆或血清组分和丝蛋白作为活性成分。

本发明还提供了一种用于治疗或预防脱发症的方法，所述方法包括向受试者施用血浆或血清组分和丝蛋白。

本发明还提供了一种用于促进毛发生长和抑制脱发的方法，所述方法包括向受试者施用血浆或血清组分和丝蛋白。

本发明还提供了所述血浆或血清组分和所述丝蛋白用于促进毛发生长和抑制脱发的用途。

本发明还提供了所述血浆或血清组分和所述丝蛋白用于制备促进毛发生长和抑制脱发的治疗剂的用途。

附图说明

图1显示了证实血浆和重组蜘蛛丝蛋白对脱毛小白鼠的毛发生长促进作用的结果。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语的含义与由本发明所属领域中的技术人员所理解的含义相同。通常，本文所用的命名法是本领域中熟知的，并且是通常使用的。

在本发明中，证实了当将含有人或动物来源的血浆或血清组分和丝蛋白的组合物施加至脱毛小鼠时，其展现出优异的毛发生长作用；并且当生产含有人或动物来源的血浆或血清组分和丝蛋白的洗发水并将其施加至脱发患者时，脱发被抑制并促进了毛发生长。

因此，在一方面，本发明涉及一种用于促进毛发生长和抑制脱发的药物组合物，所述药物组合物包含血浆或血清组分和丝蛋白作为活性成分。

在本发明中，所述血浆或血清可以源自人或家畜。

在本发明中，所述丝蛋白可以是天然来源的，或者可以是重组丝蛋白，并且所述丝蛋白可以是构成选自拖丝蛋白、弹性蛋白、丝素蛋白、足丝蛋白、丝胶、鞭毛样丝蛋白和胶原蛋白的蛋白质的重复肽单元。

在本发明中，所述丝蛋白可以具有这样的结构，其中具有1％或更多的甘氨酸或丝氨酸含量的重复丝肽单元重复1至160次，并且所述丝蛋白可以具有5至300kDa的分子量。

近年来，丝蛋白已被积极研究用于各种生化和药物应用，因此作为新型生物材料正在引起关注。在本发明中，当基于其优异的保湿作用和对角蛋白的优越吸附而将丝蛋白和丝肽包含在用于促进毛发生长和防止脱发的组合物中时，存在使毛发丰富的作用。

本发明的组合物可以以选自洗发水、乳膏、洗剂、滋补剂、喷雾剂、气溶胶、油、溶液、悬浮液、凝胶和软膏的配制品的形式制备。

另一方面，本发明涉及一种用于促进毛发生长和抑制脱发的化妆品组合物，所述药物组合物包含血浆或血清组分和丝蛋白作为活性成分。

另一方面，本发明涉及所述血浆或血清用于治疗脱发症和/或促进毛发生长的用途。

另一方面，本发明涉及一种用于治疗或预防脱发症的方法，所述方法包括向受试者施用血浆或血清组分和丝蛋白。

另一方面，本发明涉及一种用于促进毛发生长和抑制脱发的方法，所述方法包括向受试者施用血浆或血清组分和丝蛋白。

另一方面，本发明涉及所述血浆或血清组分和丝蛋白用于促进毛发生长和抑制脱发的用途。

另一方面，本发明涉及所述血浆或血清组分和丝蛋白用于制备促进毛发生长和抑制脱发的治疗剂的用途。

本发明的特征在于通过将包含血浆或血清作为活性成分的组合物局部施加至头皮的脱发部位持续约1至约8周来促进、诱导和刺激毛发生长和/或减少脱发。

如本文所用，术语“脱发抑制”是指预防、抑制、阻止或减少部分或全部脱发。

如本文所用，术语“毛发生长”旨在涵盖：哺乳动物中毛发发育的维持、诱导、刺激、促进和再生；有缺陷的毛发的生长；毛发周期中毛发生长初期(生长期)的延长；或毫毛向终毛的转变。

如本文所用，术语“脱发症”是指有缺陷的毛发生长和部分或全部脱发，并且包括但不限于男性激素性脱发症或雄激素性脱发症、毒性脱发症、斑秃、休止期脱发症、由于内分泌异常、代谢障碍和营养障碍导致的脱发症、药物性脱发症、机械性脱发症、由于皮肤病导致的脱发症、瘢痕性脱发症、先天性脱发症以及拔毛癖。脱发症在毛发周期破坏时发生。脱发症最常见的现象是由于细胞增殖停止而导致的缩短的毛发生长或毛发生长初期(生长期)。这是由于毛发生长中期的提早开始而引起的，并最终导致许多毛发进入休止期。在休止期的期间，毛囊从真皮乳突剥离，并使毛发脱落。脱发症有许多病因，包括遗传因素、衰老、局部和全身疾病、发热症状、精神压力、激素问题和药物的副作用。

如本文所用，术语“脱发症疗法(脱发症治疗)”是指如下作用，即预防在能够患上脱发症的动物中的脱发症，和/或抑制、延迟或减少脱发症，和/或促进毛发生长，和/或延长毛发周期中的毛发生长初期(生长期)，和/或将毫毛转变为终毛。终毛是浓密的有色长发，且毛囊根深深植入真皮中。同时，毫毛是稀疏、光滑、褪色的短毛发，且毛囊根位于真皮的表面。随着脱发症的进展，毛发从终毛变成毫毛。

在本发明中用作活性成分的血浆通常是指淡黄色液体组分，从中分离出哺乳动物血液中的有形组分即细胞和细胞碎片，并且其组分和组成是熟知的(Philip Westerman,Plasma Proteins,VII-1to VII-13,2002年9月17日；以及Wendy Y.Craig等人,PlasmaProteins Pocket Guide,Foundation for Blood Research，将其全部内容通过引用并入本文)。血清也具有明确定义，并且通常是通过从血浆去除纤维蛋白原和其他凝血因子而获得的。

本发明中的血浆或血清的来源包括所有哺乳动物物种，包括人和非人类灵长类动物，例如家畜(包括绵羊、山羊、猪、马、狗、牛)以及其他灵长类动物和啮齿动物。

在本发明中，通过熟知的常规方法(如离心、沉降(沉淀)或过滤)，可以容易地从血液分离血浆或血清。所述离心可以在适合从血浆沉降血细胞的条件下进行。例如，将血液以约3,000rpm离心约10分钟，这足以沉淀血细胞和白细胞以及几乎所有细胞碎片(包括血小板)。

通过标准技术可以容易地将含有血浆的上清液与沉降的细胞分离。所述过滤可以通过使血液穿过适合从血浆分离血细胞的过滤器来进行。所述过滤器可以是使蛋白质能够易于穿透其的微孔膜。

除了在采血后通过离心或沉降获得的新鲜液体血浆或液体配制品外，还已知血浆或血清在使用前以各种形式保存。此类形式的例子包括新鲜冷冻配制品、冷冻沉淀配制品、冻干配制品、浓缩配制品等。在本发明中，可以使用如上所述的任何类型的血浆或血清。新鲜冷冻血浆是通过以下方式制备的：在采血后6小时内以约2,800rpm离心约15分钟以将血浆从血细胞分离，并将其在约-18℃至-40℃的温度下冷冻。它在30℃至37℃的热水中解冻后使用。

冷冻沉淀(低温沉淀)血浆是通过以下方式获得的：在约4℃下解冻一个单位的新鲜冷冻血浆，分离所得的白色沉淀物(含有大量因子如VIII:C、纤维蛋白原、XIII和纤连蛋白的冷沉淀蛋白)，并在-18℃至-40℃的温度下再次冷冻残留物。冷冻沉淀的配制品可以通过在1℃至6℃的冰箱中放置过夜来解冻，或者可以在约4℃的水浴中更快地解冻。浓缩血浆可以通过以下方式来获得：从血液分离血浆，将所分离的血浆与浓缩剂如聚糖酐、塞法戴克斯(Sephadex)、dextramin、聚丙烯酰胺、生物凝胶P、硅胶、沸石、利皮生(Debrisan)、交联琼脂糖、淀粉或藻酸盐凝胶混合，然后将所述浓缩剂与浓缩产物分离。

在本发明的一个实施方案中，所述血浆或血清可以选自可商购产品。例如，所述血浆或血清可以选自通过血库可商购的粉末配制品、由Invitrogen Corporation生产的液体配制品(例如，Gibco

在其他实施方案中，所述配制品是使用独立的(并且因此任选的)纯化(即，用溶剂洗涤剂进行纳米过滤)或巴氏杀菌来制备的。所述纯化可以在血液或血浆状态下进行。

可以通过加热、冻干或另一种合适的干燥方法将所得的血浆或血清级分粉化。例如，所述血浆或血清可以在低于-40℃的温度下冻干若干天(例如，约7天)。可以使用本领域技术人员已知的常规方法和参数。

为了有效治疗脱发症或有效促进毛发生长，应促进本发明的方法和药物组合物中所使用的血浆或血清在目标位点处的活性。为了这一目的，适合用于根据本发明所述用途的组合物包括包含作为本发明活性成分的血浆或血清与药学上可接受的载体的组合的配制品。基于所述组合物的重量，所述血浆或血清可以以0.001％至99.999％的量存在。作为另一种方法，所述血浆或血清可以作为不含载体的配制品使用。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指其中一种成分可与配制品的其他成分混溶并且不损害接受者(患者)的状态。

在本发明中，所述组合物优选地包含0.01％至10％的所述血浆组分和0.001％至10％的所述丝蛋白、更优选地0.1％至2％的所述血浆组分和0.01％至1％的所述丝蛋白、并且甚至更优选地0.2％至1％的所述血浆组分和0.02％至0.1％的所述丝蛋白。

当所述组合物含有10％或更多的量的所述血浆时，预期不能与所添加的血浆的量成比例地改善脱发治疗作用，并且当所述组合物含有小于0.01％的量的所述血浆时，预期没有脱发治疗作用。当所述组合物含有10％或更多的量的所述丝蛋白时，预期不能与所添加的丝蛋白的量成比例地改善脱发治疗作用，并且当所述组合物含有小于0.001％的量的所述丝蛋白时，预期没有脱发治疗作用。

通常以局部形式施用根据本发明的血浆或血清。适合局部施用的配制品包括液体或半液体制剂，如洗剂、乳液、乳膏、软膏、擦剂、喷雾剂、气溶胶、油、糊剂、凝胶、滋补剂、溶液或悬浮液。为了制备这些毛发生长制剂，可以混合和溶解各种成分，或者可以将所得混合物进行揉合，然后使用药物和/或化妆品领域中常用或熟知的任何装置或方法配制[参考文献：Remington's Pharmaceutical Science,第15版,1975,Mack Publishing Company,Easton,Pennsylvania 18042(第87章:Blaug,Seymour)]。优选的配制品包括凝胶、软膏、洗剂和乳膏。

在软膏的情况下，所述血浆或血清例如悬浮或溶解于一种或多种以下组分的混合物中：矿物油、石蜡、矿物油、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯、甘油、硬脂醇、乳化蜡、鲸蜡醇、十二烷基硫酸钠、对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丁酯、盐水和水。在洗剂或乳膏的情况下，所述血浆或血清例如悬浮或溶解于一种或多种以下组分的混合物中：矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、凡士林、羊毛脂、盐水、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。除了上述成分之外，本发明的配制品还可以包含一种或多种另外的成分，如稀释剂、缓冲液、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂、pH调节剂、杀真菌剂、抗氧化剂、乳化剂、稳定剂、香料和着色剂。

根据本发明的血浆或血清的剂量应考虑性别、年龄、脱发症的症状和毛发状况而适当地确定。通常，对于成年人，将所述血浆或血清以约0.1至约5mg/cm

在下文中，将参考实施例更加详细地描述本发明。然而，对本领域技术人员明显的是，提供这些实施例仅用于举例说明本发明，而不应解释为限制本发明的范围。

实施例1：含有牛血浆和血清的软膏的制备

将500ml的胎牛血清(FBS；Biofluids.Inc，马里兰州罗克维尔)装入用于冻干的小瓶中，并在-80℃的冰箱(Forma Scientific,Inc.，美国俄亥俄州)中冷冻6小时。此时，所使用的FBS具有0.1ng/ml或更少的内毒素含量和30ng/100ml或更少的血红蛋白含量。将装有冷冻FBS的小瓶安装在冻干/外壳冷冻系统(Labconco,Co.，美国密苏里州堪萨斯城)上，操作所述系统并在-48℃下进行冻干持续7天以制备粉末。此时，所有过程均在无菌条件下进行。

将5g上述制备的粉末与95g半基乳膏(Sam-A Pharmaceutical Co.Ltd.)混合，之后向其中添加适量的生理盐水并混合，并在搅拌的同时向其中添加1N HCl(盐酸)或1NNaOH(氢氧化钠)。用pH计(Orion)测量pH以制备pH调节至5.5的软膏。

实施例2：含有牛血浆或血清和丝蛋白的凝胶的制备

将5份(按重量计)实施例1中制备的粉末与95份(按重量计)组分(包含38mg卡波普ETD 2020、116mg甘油、38mg丙二醇、192mg三乙醇胺和适量的纯净水)混合以得到pH为5.8至6.0的透明凝胶。卡波普ETD 2020是具有C10-C30丙烯酸烷基酯交联聚合物的丙烯酸酯。

根据现有专利(韩国专利号10-1317420B1)中所述的方法制备重组丝蛋白。

使用具有如下结构的高分子量重组丝蛋白或丝样蛋白，在所述结构中具有下列SEQ ID NO:1序列的肽重复48次。

SEQ ID NO:1：

NH2-SGRGGLGGQGAGMAAAAAMGGAGQGGYGGLGSQGT-COOH

对于生产，进行补料分批发酵，并使用透析提取目标蛋白质。

将含有2.5％(25g/L)血浆和血清以及4g/L所述重组丝蛋白的精华溶解于80ml 1xPBS缓冲液中以制备5％原液，并且稀释所述原液以调节终浓度至0.05％从而制备凝胶。

实施例3：牛血浆和血清以及重组丝蛋白的毛发生长促进作用的比较

为了使八只5周龄小白鼠(400-500g，Sprague-Dawley物种)的背部区域完全脱毛，通过剃毛去除毛发，然后通过向每只小鼠施加20至30g脱毛膏(Veet)并在5分钟后去除脱毛膏来完全去除毛发。每天早晚两次将40mg睾酮和2g所述凝胶施加至每只小鼠的脱毛区域，持续3周。3周后，选择四只未经历毛发生长的小鼠，并重复脱毛。

用对照凝胶、含有血浆(2.5％)(仅血浆)的凝胶、仅含有重组蜘蛛丝蛋白(0.05％)(仅SS)的凝胶、以及含有血浆(2.5％)和重组蜘蛛丝蛋白(0.05％)二者(血浆+SS)的凝胶以3g/小鼠/天处理四只实验小白鼠的脱发部位，持续1周。

8天后，观察实验动物。作为结果，如可从图1看出，与对照组中相比，在施加了含有血浆和重组蜘蛛丝蛋白二者的凝胶的区域中自然生长的毛发明显更浓密且更多。另外，发现与施加了含有血浆和丝蛋白二者的软膏的区域中生长的毛发相比，在施加了仅含有牛血浆的软膏和仅含有丝蛋白的软膏的区域中生长的毛发更稀疏且数量更少。

实施例4：牛血清和丝胶肽的毛发生长促进作用的比较

用对照凝胶、含有血浆和血清的凝胶、仅含有丝胶的凝胶(Sigma-Aldrich)、以及含有血浆、血清和丝胶的凝胶以3g/小鼠/天处理以实施例3中相同的方式制备的四只实验小白鼠的脱发部位，持续1周。

8天后，观察实验动物。作为结果，与对照组中相比，在施加了含有血浆、血清和丝胶蛋白的凝胶的区域中自然生长的毛发明显更浓密且更多。另外，发现与施加了含有血清和丝蛋白二者的软膏的区域中生长的毛发相比，在施加了仅含有牛血清的软膏和仅含有丝蛋白的软膏的区域中生长的毛发更稀疏且数量更少。

实施例5：用于检测抗脱发作用的含有牛血清和丝蛋白的洗发水的制备

将5g实施例2中制备的牛血清粉末、50g重组蜘蛛丝蛋白、150g作为表面活性剂的

将5g实施例2中制备的牛血清粉末、150g作为表面活性剂的

50g丝蛋白、150g作为表面活性剂的

洗发水1至3和阳性对照洗发水(Ts洗发水，http://www.talmo.com)各自用于总共80名受试者(20名受试者/组)，并且80名受试者由20岁至60岁的60名男性和20名女性组成，并且包括10名已经经历脱发的受试者和30名正在经历脱发的受试者。每组的受试者每天使用一次相应的洗发水，持续30天。

作为结果，含有牛血清和丝蛋白的洗发水1展现出显著优异的抗脱发和毛发生长作用。

工业实用性

根据本发明，通过丝蛋白和血浆或血清组分的协同作用，可以预期促进毛发生长和治疗脱发的更好作用。

尽管已经详细描述了本发明的具体配置，但本领域技术人员应理解，本说明书是为了阐述用于说明性目的的优选实施方案而提供，并且不应理解为限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围由所附权利要求书和其等同物进行限定。

序列表自由文本

附有电子文件。

SEQUENCE LISTING

<110> 麦迪克斯生物科技股份有限公司

韩国科学技术院

<120> 用于治疗脱发或促进毛发生长的组合物

<130> PF-B2555

<140> PCT/KR2019/016012

<141> 2019-11-21

<150> KR 10-2018-0146288

<151> 2018-11-23

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 35

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 蜘蛛丝蛋白肽（spider silk peptide）

<400> 1

Ser Gly Arg Gly Gly Leu Gly Gly Gln Gly Ala Gly Met Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ala Met Gly Gly Ala Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Leu Gly Ser

20 25 30

Gln Gly Thr

35

<210> 2

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 丝胶蛋白肽(sericin silk peptide)

<400> 2

Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Asn Thr Asp Ser Asn Ser Asn Ser Val

1 5 10 15

Gly Ser Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Gly Tyr Ser Ser Asn

20 25 30

Ser Arg Asp Gly Ser Val

35