一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法及其应用

技术领域

本发明涉及检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法及其应用。

背景技术

D-氨基葡萄糖盐酸盐原工艺是由天然的甲壳质提取的，是一种海洋生物制剂，能促进人体粘多糖的合成，提高关节滑液的粘性，能改善关节软骨的代谢；具有促进抗生素注射效能的作用，用于合成水溶性抗癌药物氯脲霉素，其具有亚硝基脲类化合物的抗癌性，同时又具有抑制骨髓毒性较小的特点，对黑色素瘤，肺癌，肾癌等显示一定疗效。D-氨基葡萄糖硫酸钠盐可治疗口内炎、化脓性湿疹、关节炎、毒蛇咬伤等临床功能。D-氨基葡萄糖硫酸钠盐为抗风湿性关节炎的原料药，近年发现有吸收自由基、抗衰老、减肥、调节内分泌等多种有益的生理作用，故被广泛用于食品添加剂和保健食品的生产中。

目前D-氨基葡萄糖盐酸盐的生产方法主要有2种，(1)化工合成法：该方法是由甲壳类动物(如虾、蟹、昆虫外壳等)经酸碱处理得到甲壳素，甲壳素再酸解得到D-氨基葡萄糖盐酸盐，再经过分离纯化而得到最终产品。然而，以甲壳类为原料生产的D-氨基葡萄糖盐酸盐存在着甲壳类过敏的担忧。从生产工序来看，虽然引起甲壳类过敏的过敏元素的蛋白质已经基本分解，但是对于甲壳类过敏的人群来说还是不得不慎重摄取甲壳类来源的D-氨基葡萄糖盐酸盐。(2)生物发酵法：是微生物(如枯草芽孢杆菌、黑曲霉菌和大肠杆菌等工程菌)经培养发酵产生代谢物(N-乙酰-D-氨基葡萄糖)，代谢物再和盐酸反应生成D-氨基葡萄糖盐酸盐，再经分离纯化而得到最终产品。此方法得到的D-氨基葡萄糖盐酸盐由于并不是以甲壳类生物作为原料，所以有不用担心发生甲壳类过敏的优点和满足素食主义者的需求。同样D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐与D-氨基葡萄糖盐酸盐的化工合成方法类似，都需要从甲壳类动物(如虾、蟹、昆虫外壳等)经酸碱处理得到甲壳素，再经酸解得到中间产品D-氨基葡萄糖盐酸盐，然后经化学合成得到D-氨基葡萄糖硫酸钾盐或D-氨基葡萄糖硫酸钠盐。

对于化工合成和生物发酵法得到的D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐都属于高纯度产品，其纯度高于99％，这两种方法得到的D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐具有非常相似的物理和化学特性，然而，目前还没有相关的方法从D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐的粉末或者含有D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐的产品来判别是生物发酵法工艺来源还是化工合成法工艺来源。

发明内容

针对现有技术中存在的一些问题，本发明第一个方面提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

作为本发明的一种优选的技术方案，当D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐中任一种时，δ

作为本发明的一种优选的技术方案，当D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐中任一种时，δ

作为本发明的一种优选的技术方案，当D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐时，δ

作为本发明的一种优选的技术方案，当D-氨基葡萄糖衍生物包括(a)D-氨基葡萄糖盐酸盐和(b)D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和/或D-氨基葡萄糖硫酸钠盐时，δ

作为本发明的一种优选的技术方案，所述燃烧-同位素质谱技术包括：将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中燃烧，燃烧产物形成的CO

作为本发明的一种优选的技术方案，所述测试样品D-氨基葡萄糖衍生物使用锡筒纸包裹密闭好之间，先将D-氨基葡萄糖衍生物在温度为60-80℃的烘箱中处理24h。

作为本发明的一种优选的技术方案，所述元素分析仪的燃烧炉的温度为1300～1350℃。

作为本发明的一种优选的技术方案，所述还原管的温度为820～840℃。

本发明第二个方面提供了一种所述鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法在食品安全、生物医药检测中的应用。

本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

本申请中鉴定D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法简单，准确，当D-氨基葡萄糖衍生物为几种的混合物时，其鉴定方法同样不受影响；同时，本申请人通过首先将D-氨基葡萄糖衍生物经过60-80℃的烘箱中处理24h后再次进行燃烧-同位素质谱技术测定，燃烧后灰烬造成的污渍颜色较浅，清洗方便。

具体实施方式

以下通过具体实施方式说明本发明，但不局限于以下给出的具体实施例。

本发明第一个方面提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

在一种实施方式中，当D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐中任一种时，δ

在一种实施方式中，当D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐、D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和D-氨基葡萄糖硫酸钠盐中任一种时，δ

在一种实施方式中，当D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐时，δ

在一种实施方式中，当D-氨基葡萄糖衍生物包括(a)D-氨基葡萄糖盐酸盐和(b)D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和/或D-氨基葡萄糖硫酸钠盐时，δ

本申请人意外的发现，本申请中当D-氨基葡萄糖衍生物包含D-氨基葡萄糖盐酸盐在内的两种或者3种D-氨基葡萄糖衍生物物质时，单一通过δ

当D-氨基葡萄糖衍生物包括(a)D-氨基葡萄糖盐酸盐和(b)D-氨基葡萄糖硫酸钾盐和/或D-氨基葡萄糖硫酸钠盐时，若(a)和(b)属于不同的生产来源不在本申请中范围中。

作为本申请中的一种实施方式，生物发酵法生产D-氨基葡萄糖盐酸盐，生物发酵法指的是微生物(如枯草芽孢杆菌、黑曲霉菌和大肠杆菌等工程菌)经培养发酵产生代谢物(N-乙酰-D-氨基葡萄糖)，代谢物再和盐酸反应生成D-氨基葡萄糖盐酸盐，再经分离纯化而得到最终产品的一种方法。

作为本申请中的一种实施方式，化工合成法生产D-氨基葡萄糖盐酸盐，化工合成法指的是由甲壳类动物(如虾、蟹、昆虫外壳等)经酸碱处理得到甲壳素，甲壳素再酸解得到D-氨基葡萄糖盐酸盐，再经过分离纯化而得到最终产品的一种方法。

在一种实施方式中，所述燃烧-同位素质谱技术包括：将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中燃烧，燃烧产物形成的CO

优选地，所述元素分析仪的燃烧炉的温度为1300～1350℃；更优选地，所述元素分析仪的燃烧炉的温度为1320℃。

在一种实施方式中，所述测试样品D-氨基葡萄糖衍生物使用锡筒纸包裹密闭好之间，先将D-氨基葡萄糖衍生物在温度为60-80℃的烘箱中处理24h。

优选的，先将D-氨基葡萄糖衍生物在温度为70℃的烘箱中处理24h。

本申请人意外的发现，当元素分析仪的燃烧炉的温度大于等于1300℃时，可以进一步获得准确的鉴定率，然而本申请在该温度下对D-氨基葡萄糖衍生物燃烧后发现燃烧后的灰烬对容器器壁造成了较难处理的污渍，此外，本申请人发现，当D-氨基葡萄糖衍生物首先经过60-80℃的烘箱中处理24h后，意外的发现灰烬造成的污渍颜色较浅，清洗方便。

优选地，所述还原管的温度为820～840℃；更优选地，所述还原管的温度为830℃。

优选地，所述还原管中的物质为金属单质；更优选地，所述金属单质为铜单质。

本申请在使用同位素质谱联用仪对测试样品D-氨基葡萄糖衍生物进行测定碳同位素丰度值之前首先对标有

本申请中碳同位素丰度值δ

本申请使用的同位素质谱联用仪型号为Vario ELⅢ/Isoprime。

使用本申请中的方法进行鉴别的过程中，对于本申请未给出的测试条件，本领域技术人员可作常规选择。

本申请中δ

其中，δ

本申请中δ

本发明第二个方面提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法在食品安全、生物医药检测中的应用。

实施例

在下文中，通过实施例对本发明进行更详细地描述，但应理解，这些实施例仅仅是示例的而非限制性的。如果没有其它说明，下面实施例所用原料都是市售的。

本发明的实施例1提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，其为使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物在70℃的烘箱中处理24h后，使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中于1300℃燃烧，燃烧产物形成的CO

所述D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖盐酸盐。

本发明的实施例2提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，其为使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物在70℃的烘箱中处理24h后，使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中于1350℃燃烧，燃烧产物形成的CO

所述D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖硫酸钾盐。

本发明的实施例3提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，其为使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物在70℃的烘箱中处理24h后，使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中于1320℃燃烧，燃烧产物形成的CO

所述D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖硫酸钠盐和D-氨基葡萄糖硫酸钾盐。

本发明的实施例4提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，其为使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中于1320℃燃烧，燃烧产物形成的CO

所述D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖硫酸钠盐和D-氨基葡萄糖硫酸钾盐。

本发明的实施例5提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，其为使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物在70℃的烘箱中处理24h后，使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中于1320℃燃烧，燃烧产物形成的CO

所述D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖硫酸钠盐和D-氨基葡萄糖硫酸钾盐。

本发明的实施例6提供了一种鉴别D-氨基葡萄糖衍生物生产来源的方法，其为使用燃烧-同位素质谱技术测定碳同位素丰度值δ

将测试样品D-氨基葡萄糖衍生物在70℃的烘箱中处理24h后，使用锡筒纸包裹密闭好置于元素分析仪的燃烧炉中于1250℃燃烧，燃烧产物形成的CO

所述D-氨基葡萄糖衍生物为D-氨基葡萄糖硫酸钠盐和D-氨基葡萄糖硫酸钾盐。

性能评估

1.精确度：分别提供50个确定由生物发酵法制得的相应的D-氨基葡萄糖衍生物样品和50个由化工合成制得的相应的D-氨基葡萄糖衍生物样品，分别使用实施例1～6提供的方法对100个样品进行鉴定，记录准确率，准确率(％)＝准确鉴定的样品数/100*100％。

表1

2.燃烧后灰烬导致污渍颜色：分别记录使用实施例1-4的方法鉴定后，燃烧炉内灰烬导致的污渍颜色深浅，发现实施例4灰烬导致的污渍颜色较实施例1-3颜色深。

前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。