多孔Co3O4过氧化物酶应用于草甘膦快速比色检测方法

技术领域

本发明属于农产品中有机磷农药残留检测领域，尤其涉及在水相缓冲液体系中，运用比色法测定检测体系在650nm处的特征吸收峰变化，并通过肉眼判定草甘膦农药的检测方法。

背景技术

草甘膦是一种广谱性的有机磷除草剂，它通过抑制植物重要代谢途径中5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸酶的活性，导致植物死亡，在过去几十年间，由于其较高的除草活性，被广泛应用于农业的植被控制当中。虽然评估机构将其列为一种低危害的化合物，但是已有研究表明，草甘膦能够影响细胞调节、导致慢性肾病，甚至引起癌症。目前，草甘膦的滥用，已经导致了土壤、水、农产品的污染。这种有害的微量残留物很容易通过农产品进入人体内，对人类建康造成潜在威胁。因此，中国农业部和美国环境保护署(EPA)发布相关的标准，规定农产品中草甘膦残留最大限量标准为500μg/L。

传统的农药检测方法有气相色谱法、液相色谱法、色谱-质谱联用法，这些方法虽然具有灵敏度高、可靠性强的优势，但检测仪器价格昂贵、检测时间长、需专业人士操作等缺点，所以不能满足现场检测的需求。现场快速检测方法有免疫分析法和酶抑制法,免疫分析法包括酶免疫法、荧光免疫法、放射免疫法和流动注射免疫法，但由于抗原抗体的开发过程需要投入较多资金和较长时间，所以免疫分析方法的应用也有一定的局限性。酶抑制法是基于农药靶向酶，乙酰胆碱脂酶的抑制反应和水解反应所发展起来的农药快速检测方法，但这些方法利用乙酰胆碱酶、植物脂酶等，这些生物蛋白具有制备成本高、受天然蛋白工作条件限制等缺点，无法实现长远的应用。

多孔Co

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种肉眼可辨的草甘膦比色检测方法，具有肉眼可辨、灵敏度高、特异性强、操作便捷，检测快速等优势，可广泛应用于农产品中草甘膦残留的快速检测。

本发明的目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种多孔Co

(1)将含有草甘膦的样品与1ug/mL浓度的多孔Co

(2)随后向混合溶液中加入pH为6.0、浓度为5mM的NaAc缓冲溶液和浓度为8mM的H

进一步地，具体步骤包含以下内容：

(1)制备已知草甘膦浓度的检测体系：取11支1.5mL刻度离心管，分别加入10uL草甘膦标准溶液和40uL浓度为1ug/mL的Co

(2)另取1支按步骤(1)制备的检测溶液，加入10μL超纯水替代草甘膦标准溶液，处理后作为空白对照体系溶液；

(3)分别取200μL步骤(1)和步骤(2)制备的标准溶液和空白对照液置于96孔酶标板中，用酶标仪进行扫描测定650nm处吸收峰，获得其吸收光谱；

(4)以不同浓度的草甘膦与测定的⊿A作图，绘制标准曲线；⊿A为待测样品的吸光值-空白样品的吸光值；

(5)制备样品检测体系：取10μL实际茶叶、蔬菜、水果样液，按步骤(1)制备的检测溶液，充分混匀后按步骤(3)测定其吸收峰值；

(6)根据样品在NaAc缓冲液体系中测得的吸光度值，查标准曲线，求得不同样品中草甘膦的含量。

所述步骤(1)整个检测体系中的草甘膦含量维持在5-800ug/L。

本发明的基本原理是：草甘膦的加入可以阻止多孔Co

与现有技术相比，本发明提供的检测方法不需要依赖大型仪器设备，检测灵敏度高，选择性好，且操作简单快速，肉眼可辨，可以广泛应用于农产品等中草甘膦农药残留的快速检测。

附图说明

图1.基于抑制多孔Co

图2.草甘膦浓度变化时传感溶液的颜色变化(由蓝色逐渐变成浅蓝色或无色)；

图3.草甘膦浓度变化时传感溶液的标准曲线(反映线性)；

图4.其它有机磷农药对检测草甘膦的影响(反映特异性)。

具体实施方式

以下结合附图和较佳实施例，对依据本发明的具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。

实施例1：

一种多孔Co3O4过氧化物酶应用于草甘膦快速比色检测方法，包括以下步骤：

(1)制备已知草甘膦浓度的检测体系：取11支1.5mL刻度离心管，分别加入10uL草甘膦标准溶液(整个检测体系中的草甘膦含量维持在5-800ug/L)和40uL浓度为1ug/mL的Co

(2)另取1支按步骤(1)制备的检测溶液，加入10μL超纯水替代草甘膦标准溶液，处理后作为空白对照体系溶液。

(3)分别取200μL步骤(1)和步骤(2)制备的标准溶液和空白对照液置于96孔酶标板中，用酶标仪进行扫描测定650nm处吸收峰，获得其吸收光谱。

(4)以不同浓度的草甘膦与测定的⊿A(待测样品的吸光值-空白样品的吸光值)作图，绘制标准曲线，得到线性范围5-80ug/L，其对应的回归方程为y＝0.13655+0.00793x，x为草甘膦浓度(ug/L)。

(5)制备样品检测体系：取10μL实际茶叶样品，按步骤(1)制备的检测溶液，充分混匀后按步骤(3)测定其吸收峰值。

(6)根据样品在NaAc缓冲液体系中测得的吸光度值，查标准曲线，求得茶叶中草甘膦的含量，检测结果见下表：

实际样本检测效果验证：用本发明方法测定3份不同茶叶样品，往样品中加入1mg/kg的草甘膦，得到的回收率为91.8％-93.2％，证明本方法可靠性。

实施例2：

用番茄、黄瓜和卷心菜为实际样品，重复实施例1步骤，见下表：

实际样本检测效果验证：用本发明方法测定番茄、黄瓜和卷心菜为实际样品，得到的回收率为86.4％-95.2％之间。

以上回收率计算方式为：

综上，本发明在一种NaAc缓冲液中，将多孔Co

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。