一种检测氯化胆碱含量的分析方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种药物的分析检测方法，特别涉及一种氯化琥珀胆碱原料药的起始物料中氯化胆碱含量的分析方法。

背景技术

新药或仿制药研发，含量是影响产品的关键质量属性，因此含量的分析方法研究常常是药品研发中的重点之一。药品在临床使用过程中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关，与杂质的影响也密不可分。为保证临床安全用药，必须严格控制氯化琥珀胆碱原料药的起始物料中氯化胆碱的含量，从而减小氯化琥珀胆碱原料药的有关物质。

氯化胆碱，英文名称为Choline Chloride，化学名称为氯化2-羟基-N,N,N-三甲基乙铵，分子式为C

氯化琥珀胆碱原料药用于生产的制剂剂型属注射剂，是去极化型骨骼肌松弛药，可用于全身麻醉时气管插管和术中维持肌松。

经过文献检索，对于氯化琥珀胆碱原料药中氯化胆碱的检测，国外药典如欧洲药典和英国药典及<中国药典>2020年版均采用的是薄层色谱法，难以精确检测氯化胆碱的含量；美国药典采用的是离子色谱法，用于检测氯化胆碱中胆碱的含量。

结合原料药合成工艺过程中起始物料属于关键物料，需进行严格质控的现状，起始物料的含量是影响产品的关键质量属性，原供应商方法为滴定法，不满足药品研发现阶段的要求。

郑洪国等(离子色谱法检测氯化琥珀胆碱注射液中的氯化胆碱的含量，药物分析杂志，2009,29(12)：2147-2149)采用IonPac CS17分析柱，甲磺酸梯度洗脱，流速为1mL/min的方法对氯化胆碱的含量进行检测，该分析方法的准确度差，峰面积RSD值大于0.5％。

郑洪国等(离子色谱法检测氯化胆碱及杂质胺/铵的含量，饲料工业，2009，30(5))也采用了淋洗液为27mmol/L MSA，0-42min，lmL/min等度淋洗的方法检测氯化胆碱，该方法准确度差，峰面积RSD值大于2.5％。

马骋远等(离子色谱法测定胞磷胆碱钠注射液中氯化胆碱的含量，科技经济导刊，2016，(6))采用18mmol/L甲烷磺酸溶液，lmL/min等度淋洗的方法测定氯化胆碱的含量。该方法准确度差，峰面积RSD值为0.45％。

专利CN201710618843.1中公开了采用分析柱为IonPac CS12A，4×250mm：保护柱为IonPac CG12A，4×50mm：淋洗液：18mmol/L硫酸水溶液：流速：lmL/min的方法检测氯化胆碱。该方法准确度也较差，相对标准偏差大于3％。因此急需寻找一种更加适用的氯化胆碱含量的检测方法。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明旨在提供一种检测氯化胆碱含量的分析方法。

本发明提供了一种检测氯化胆碱含量的分析方法，其包括以下步骤：采用离子色谱法，阳离子色谱柱，以3.5～4.5mmol/L甲磺酸淋洗液为流动相，色谱柱温度为10～20℃，流速为0.23～0.27ml/min，进行等度洗脱。

优选地，阳离子色谱柱为Thermo Dionex IonPac CS19，更优选地，阳离子色谱柱的内径为2mm×25cm。

优选地，所述阳离子色谱柱柱前使用的保护柱为Thermo Dionex IonPac CG19，更优选地，保护柱的内径为2mm×5cm。

优选地，阳离子色谱柱温度为15℃。

优选地，流速为0.25ml/min。

优选地，流动相为4mmol/L甲磺酸淋洗液。

优选地，进样量为25μl。

在本发明某些实施方案中，所述的检测氯化胆碱含量的分析方法，其包括以下步骤：采用离子色谱法；色谱柱为Thermo Dionex IonPac CS19，色谱柱的内径为2mm×25cm；色谱柱柱前使用的保护柱为Thermo Dionex IonPac CG19，保护柱的内径为2mm×5cm；以4mmol/L甲磺酸淋洗液为流动相，色谱柱温度为15℃，流速为0.25ml/min，进样量为25μl，进行等度洗脱。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：采用这种新型的氯化胆碱含量的分析方法，对含量检测的准确度高，精密度高，重复性和回收率良好，对起始物料的含量进行控制，保障氯化琥珀胆碱原料药及其注射液终产品的质量，在实际生产中贯彻质量源于设计的理念。本发明方法采用法定对照品对起始物料进行外标法，极大的提高了氯化胆碱含量的准确性。

附图说明

图1为本发明实施例1空白溶剂的图谱；

图2为本发明实施例1对照品溶液的图谱；

图3为本发明实施例1供试品溶液的图谱；

图4为本发明实施例2氯化胆碱线性图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

氯化胆碱对照品和氯化胆碱供试品的来源

实施例1系统适用性

仪器：Thermo Fisher ICS6000型离子色谱仪；

色谱柱：Thermo Dionex IonPac CS19(2mm×25cm)；

保护柱：Thermo Dionex IonPac CG19(2mm×5cm)；

流动相：4mmol/L甲磺酸淋洗液；

流速：0.25ml/min；

色谱柱温度：15℃；

进样量为25μl；

等度洗脱。

空白溶液(稀释剂)：水。

对照品溶液的配制：取氯化胆碱对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为氯化胆碱对照品储备液；精密量取氯化胆碱对照品储备液5ml置200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法配制2份。

供试品溶液的配制：取氯化胆碱供试品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品储备液；精密量取该溶液5ml置200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，同法配制2份。

测定：分别取空白溶剂，对照品溶液，供试品溶液各25μl，分别注入离子色谱仪，记录色谱图。结果如下：见表1，空白溶剂的图谱见图1，对照品溶液的图谱见图2，供试品溶液的图谱见图3。

表1氯化胆碱专属性及系统适用性试验结果

结果：空白溶剂对测定无干扰，第1份对照品溶液连续测定5次，主峰的峰面积RSD％为0.3％，符合可接受标准(≤2.0％)；第2份对照品溶液的回收率为100.9％，符合可接受标准(98.0～102.0％)；由此可见，结果符合系统适用性要求。

表2氯化胆碱供试品试验结果

结果：氯化胆碱供试品检测含量为99.4％。

实施例2线性

实验的条件，液相色谱方法和溶液的配制如实施例1，溶液的配制也可以按照本领域技术人员熟知的方法进行配制。

对于氯化胆碱，用氯化胆碱对照品，在80％～120％限度浓度水平范围内，取5个浓度点进行研究。

以测得的响应信号(峰面积)对被分析成分浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归，至少报告相关系数r来证实良好的线性关系。

线性回归系数r的数值应不小于0.998；Y轴截距应不得过100％指标响应值的±2.0％。

利用该分析方法，测定氯化胆碱的线性关系及结果见表3。

表3线性及范围试验结果

氯化胆碱在4.29～6.43μg/ml范围内，线性方程为y＝0.154x-0.012，线性相关系数r为0.999，Y轴截距与100％指标响应值为-1.5％，均符合可接受标准(r≥0.998；Y轴截距应不得过100％指标响应值的±2.0％)，线性关系良好。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些改动和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。