检测重排酯含量的液相色谱分析方法

技术领域

本发明涉及制药技术领域，尤其涉及一种检测重排酯含量的液相色谱分析方法。

背景技术

布洛芬作为一种有效的非甾体消炎镇痛药，其生产工艺目前国内普遍采用的是芳基1,2-转位重排法，该法以异丁苯为原料，经与2-氯丙酰氯的付克酰化、与新戊二醇的催化缩酮化、催化重排、水解、酸化等步骤制得。其中该流程水解反应为一定浓度的重排酯和氢氧化钠反应生成布洛芬钠盐和氯代醇，布洛芬钠盐经酸化得到布洛芬，同时副产物氯代醇在75℃碱性环境下可发生醚化反应，醚化成环后酸水解可制备新戊二醇，浓缩后套用到缩合反应中，可以大幅降低工业新戊二醇的消耗，节约了原料和成本，同时物料循环使用也符合绿色化学的要求。其中重排酯(II，α-甲基-4-(2-甲基丙基)苯乙酸-3-氯-2,2-二甲基丙基酯)是该方法中的中间体，简称重排酯(II)，重排酯作为氯代物，为疑似基因毒杂质，其残留需要在布洛芬成品中严格控制。

目前，针对重排酯含量的测定，绝大部分文献中使用液相色谱面积归一化方法，色谱柱条件并不清晰，实际生产中产品杂质比较复杂，各组分之间在液相色谱中响应因子差距较大，因此简单用面积归一化法不能准确测定重排酯的含量，对生产工艺影响比较大。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种快速、高效、准确的重排酯的分析方法，用以解决目前检测重排酯含量使用液相色谱面积归一化方法导致色谱条件并不清晰，以及实际生产中产品杂质比较复杂带来各组分之间在液相色谱中响应因子差距较大的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供一种检测重排酯含量的液相色谱分析方法，其包括步骤：

S1、配置待测样品溶液步骤，将含有重排酯的待测样品加入流动相溶解，配置成待测样品溶液；

S2、色谱检测待测样品溶液步骤，将所述待测样品溶液注入液相色谱仪中，进行色谱检测，以保留时间定性，测得重排酯的含量；

S3、计算待测样品含量步骤，根据标准曲线，计算获得待测样品中重排酯的含量。

进一步地，所述待测样品溶液中的所述待测样品的浓度为(1-20)g/L。

进一步地，所述流动相包括第一原料以及第二原料，所述第一原料与所述第二原料的比例为4:1-3:1；所述第一原料为乙腈或者甲醇，所述第二原料为1％磷酸或醋酸水溶液。

进一步地，所述配置成待测样品溶液步骤S1具体包括：取待测样品0.1g-2g，置于100mL容量瓶中，用流动相定容摇匀配置成所述待测样品溶液。

进一步地，所述计算待测样品含量步骤S3具体包括：

S31、配置不同浓度梯度的标准液步骤，取重排酯标准品，按依次增加或减少重量的顺序分为多份，用流动相定容摇匀调制为多份不同浓度梯度的标准液；

S32、绘制标准曲线步骤，分别取一定量的所述标准液注入液相色谱仪中，根据色谱图取所述重排酯标准品的峰面积为纵坐标，取所述重排酯标准品的重量为横坐标，制成标准曲线。

进一步地，所述配置不同浓度梯度的标准液步骤S31具体包括：分别称取重排酯标准品0.0050g，0.0075g，0.0100g，0.0150g，0.0200g置于100mL容量瓶中，用流动相定容摇匀配置成多份不同浓度梯度的所述标准液。

进一步地，所述液相色谱仪的色谱条件为：

a)流动相：第一原料：乙腈或者甲醇；第二原料:1％磷酸或醋酸水溶液

b)流动相比例第一原料:第二原料＝80:20；

c)进样体积：20.0μL；

d)柱温箱：30℃；

e)流速：1mL/min；

f)检测种类：紫外检测器；

g)检测波长：222nm；

h)色谱柱：C18液相色谱柱，150mm×4.6mm×2.6μm；

进一步地，所述液相色谱仪为紫外检测器。

进一步地，所述液相色谱仪包括色谱柱。

进一步地，所述色谱柱为C18液相色谱柱，其规格为150mm×4.6mm×2.6μm。

本发明的有益效果在于，提供了一种采用液相色谱法定量分析重排酯方法，该方法使用液相色谱仪，并且选择了C18，150mm×4.6mm×2.6μm色谱柱，该可以得到更好的出峰效果，线性范围更宽，更短的分析时间，适用于不同未知浓度的重排酯样品的分析；同时考虑到样品中有一些在液相色谱条件下不能出峰的杂质，特别采用的外标准法进行定量分析，填补了相应领域的技术空白，具有简单、快速、稳定、色谱峰形好、准确性高、重现性好等优点，在重排酯的质量分析和质量控制等领域具有重要的现实意义。

附图说明

下面结合附图，通过对本申请的具体实施方式详细描述，将使本申请的技术方案及其它有益效果显而易见。

图1为本发明实施例提供的一种检测重排酯含量的液相色谱分析方法的流程图；

图2为重排酯标样的分析谱图；

图3为实施例1的分析谱图；

图4为实施例2的分析谱图。

具体实施方式

下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

如图1所示，本发明实施例提供一种检测重排酯含量的液相色谱分析方法，其包括步骤S1-S3。

S1、配置待测样品溶液步骤，将含有重排酯的待测样品溶解，配置成待测样品溶液。

所述配置成待测样品溶液步骤S1具体包括：取待测样品0.1g-2g，置于100mL容量瓶中，用流动相定容摇匀配置成所述待测样品溶液。

其中，所述待测样品溶液中的所述待测样品的浓度为(1-20)g/L。所述流动相包括第一原料A以及第二原料B，所述第一原料A与所述第二原料B的比例为4:1-3:1；所述第一原料A为乙腈或者甲醇，所述第二原料B为1％磷酸或醋酸水溶液。

S2、色谱检测待测样品溶液步骤，将所述待测样品溶液注入液相色谱仪中，进行色谱检测，以保留时间定性，测得重排酯的含量。

S3、计算待测样品含量步骤，根据标准曲线，计算获得待测样品中重排酯的含量。

所述计算待测样品含量步骤S3具体包括S31-S32。

S31、配置不同浓度梯度的标准液步骤，取重排酯标准品，按依次增加或减少重量的顺序分为多份，用流动相定容摇匀调制为多份不同浓度梯度的标准液。所述配置不同浓度梯度的标准液步骤S31具体包括：分别称取重排酯标准品0.0050g，0.0075g，0.0100g，0.0150g，0.0200g置于100mL容量瓶中，用流动相定容摇匀配置成多份不同浓度梯度的所述标准液。

S32、绘制标准曲线步骤，分别取一定量的所述标准液注入色谱柱注入液相色谱仪中，根据色谱图取所述重排酯标准品的峰面积的比值为纵坐标，取所述重排酯标准品的重量为横坐标，制成标准曲线。

进一步地，所述液相色谱仪的色谱条件为：

a)流动相：A：乙腈或者甲醇；B:1％磷酸或醋酸水溶液

b)流动相比例A:B＝80:20；

c)进样体积：20.0μL；

d)柱温箱：30℃；

e)流速：1mL/min；

f)检测种类：紫外检测器；

g)检测波长：222nm；

h)色谱柱：C18液相色谱柱，150mm×4.6mm×2.6μm；

进一步地，所述液相色谱仪为紫外检测器。

进一步地，所述液相色谱仪包括色谱柱。

进一步地，所述色谱柱为C18液相色谱柱，其规格为150mm×4.6mm×2.6μm。

本发明所述液相色谱法定量分析重排酯方法，使用的液相色谱仪选择了C18，150mm×4.6mm×2.6μm色谱柱，该可以得到更好的出峰效果，线性范围更宽，更短的分析时间，适用于不同未知浓度的重排酯样品的分析；同时考虑到样品中有一些在液相色谱条件下不能出峰的杂质，填补了相应领域的技术空白，具有简单、快速、稳定、色谱峰形好、准确性高、重现性好等优点，在重排酯的质量分析和质量控制等领域具有重要的现实意义。

下面列举具体的实施例进行说明，值得注意的是，在实际生产过程中可根据下列实施例的内容按等效比例扩大以此进行生产重排酯。

实施例1

1.1试剂和仪器

甲醇：HPLC；

重排酯标样：自制纯度98.9％；

分析天平：0.0001g；

有机相微孔滤膜：0.22μm；

液相色谱仪：U3000，塞默飞世儿公司，配置紫外检测器，配置

自动进样器；

毛细管色谱柱：C18液相色谱柱，150mm×4.6mm×2.6μm，赛默

飞公司；

1.2色谱方法

a)流动相：A：乙腈或者甲醇；B:1％磷酸或醋酸水溶液

b)流动相比例A:B＝80:20；

c)进样体积：20.0μL；

d)柱温箱：30℃；

e)流速：1mL/min；

f)检测种类：紫外检测器；

g)检测波长：222nm；

h)色谱柱：C18液相色谱柱，150mm×4.6mm×2.6μm；

1.3绘制标准曲线

分别取标准工作液，按照1.2的色谱条件进行色谱分析测定。

以浓度梯度中每个浓度所测的样品峰面积的大小与标样重量的对应关系绘制标准曲线，所得标准曲线y＝0.2338x-0.00002，回归系数为0.9999。

1.4样品的测定及计算结果

取水解工艺阶段中的样品，该阶段样品加热时才能保证样品的均一性，样品中含有重排酯还有33％左右的盐类物质，趁热取样，精确称量质量为1.0025g于100mL容量瓶中，加入流动相定容摇匀，用0.22μm滤膜过滤后进样分析。

重排酯的分析谱图如图3所示，其中，重排酯的停留时间6.925min，根据标准曲线得重排酯含量为0.0543％。

1.5方法重复性

精密量取样品溶液注入液相色谱仪检测，连续5次检测，计算含量的相对标准偏差(RSD)，结果见表1。表1为本实施例中重排酯的相对标准偏差。

表1

1.6准确度实验

在示例样品1中加入不同量重排酯标样，在相同色谱操作条件下定量分析，计算加标回收率，数据见表2。表2为本实施例中重排酯的加标回收率实验。

表2

综上可知，重排酯的停留时间为6.925min；所用定量方法为外标标准曲线法法。本发明方法操作简单，成本低，可以快速、高效、准确地对重排酯进行分析。

实施例2

实施例2包括实施例1的大部分技术特征，与实施例1的区别在于，在实施例2中取样位置为生产中解工艺的原料，该物料中70％左右为重排酯，因此前处理方式如下：取样品1.0258g，于100mL容量瓶中，加入流动相定容摇匀作为样品储备液，然后再去样品储备液1mL于100mL容量瓶中用流动相稀释定容，用0.22μm滤膜过滤后进样分析。

本实施例分析色谱图如图4，根据本方法计算重排酯的含量为69.511％。

其中，在图2-图4的纵轴表示吸光度或吸收率，在图2-图4中用Absorbance表示。

由此可见，本发明可适用于不同未知浓度的重排酯样品的分析，并且可实现可以得到更好的出峰效果，线性范围更宽；填补了相应领域的技术空白，具有简单、快速、稳定、色谱峰形好、准确性高、重现性好等优点，在重排酯的质量分析和质量控制等领域具有重要的现实意义。

在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详述的部分，可以参见其他实施例的相关描述。以上对本申请实施例所提供的一种检测重排酯含量的液相色谱分析方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的技术方案及其核心思想；本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例的技术方案的范围。