一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法

技术领域

本发明属于一种菌种的制备技术领域，具体涉及到一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法。

背景技术

山楂果，果实酸甜可口，能生津止渴，亦可入药，入药归脾、胃、肝经，有消食化积、活血散瘀的功效，可食用部分76％。

据测定，山楂含有18种氨基酸，特别是维生素C的含量较高，达到89毫克/100克，比苹果高17倍，比梨高30倍。此外，每100g中含能量397kJ,水分73g、蛋白质0.5g、脂肪0.6g、膳食纤维3.1g、碳水化合物22g、胡萝卜素100μg、维生素A17μg、硫胺素0.02mg、核黄素0.02mg、尼克酸0.4mg、维生素C 53mg、维生素E 7.32mg、钾299mg、钠5.4mg、钙52mg、镁19mg、铁0.9mg,锰0.24mg、锌0.28mg、铜0.11mg、磷24mg、硒1.22μg，还含有山楂酸、黄酮、SOD等生物活性物质和营养成分，尚含解脂酶、鞣质等以及对大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌有抑制作用的成分。山楂中果胶含量居所有水果之首，达6.4％，而据最新研究，果胶有防辐射物质的作用，它能从体内带走一半的放射性元素(锶、钴、钯等)。果胶还有吸附和抗菌性质，可从肠子上去除细菌、毒素并束缚住水分，因此，可治泻肚。山楂中含有的牡荆素等化合物具有抗癌作用，常用山楂有利于防癌。山楂中还含有丰富的钙和胡萝卜素，钙含量居水果之首，胡萝卜素的含量仅次于枣和猕猴桃，最适于小儿食用。山楂可单味或与其他食物、药物配伍以提高其食疗作用。山楂由于山楂富含多种有机酸，能保持山楂中的维生素C，即使在加热的情况下，也不致被破坏，所以，制成山楂糕等制品后，维生素C仍能保存。山楂还富含胡萝卜素、钙、齐墩果酸、鸟素酸、山楂素等三萜类烯酸和黄酮类等有益成分(黄酮类多聚黄烷、三聚黄烷、鞣质等多种化学成分)，能舒张血管、加强和调节心肌，增大心室和心运动振幅及冠状动脉血流量，降低血清胆固醇和降低血压；此外，山楂对心脏活动功能障碍、血管性神经官能症、颤动性心律失常等症也有辅助治疗作用；山植还含有槲皮苷，它有扩张血管、促进气管纤毛运动、排痰平喘之功能，故山楂是防治心血管病的理想保健食品和有较好疗效的食品，可用于用于高血压、高血脂、冠心病等的防治，均有较好效果。

山楂有重要的药用价值，自古以来，就成为健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药。山楂以果实作药用，性微温，味酸甘，入脾、胃、肝经，有消食健胃、活血化淤、收敛止痢之功能。对肉积痰饮、痞满吞酸、泻痢肠风、腰痛疝气、产后儿枕痛、恶露不尽、小儿乳食停滞等，均有疗效。

另外，山楂叶的产量和果实的产量是同等的，一株能产100斤山楂果实的山楂树株亦可产100斤的山楂叶子。可见，山楂叶的原料资源也十分丰富。目前山楂叶除了自然落地腐烂，就只是当作柴火焚烧，尚未对其进行有效的开发利用。2005年1月山西大学生命科学与技术学院的李晓玲、张小民等作者在《山西林业》发表了“山楂叶的营养及开发价值”一文中。对山楂叶的营养成分及作用功效做了比较详细的阐述，如下为该文的主要内容：

①山楂叶的氨基酸组成：山楂叶中含有17种氨基酸，其中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、胱氨酸、异亮氨酸含量远高于山楂果实，各种氨基酸的总含量是山楂叶比山楂果高36.38％。同一山楂叶样品不同，其氨基酸的含量高低顺序大致为：谷＞亮、天脯、酪＞组、蛋＞胱。组成人体蛋白质的氨基酸共有20种，其中有8种在人体内不能合成，必须由食物供给，故称必须氨基酸。山楂果中有17种氨基酸，其中包括人体必须的8种氨基酸。一般树叶中氨基酸含量，幼叶高于成熟叶，新采集的高于较长时间存放的。氨基酸是组成人和动物肌体蛋白质及维持正常代谢不可缺少的营养成分，具有重要的生理作用。

②山楂叶的微量元素：孙树英先生对山楂叶和山楂果的25种元素进行了测定，结果表明，山楂叶中所含的Ca、Mg、K、P以及山楂叶中所含的Fe、A1属于常量，其余元素均属于微量。山楂叶中多数元素的含量高于山楂果。Be、Bi、Pb、Cd、As、Hg的含量均甚微。山楂叶中的残留有害成分六六六、DDT、砷、铜和铅的含量均低于国家食品卫生标准值，对人体无毒害。最近有人分析总结了60个类型心血管疾病的死亡率，发现sr、Ca、Mg、Li、Si等可降低此类疾病的死亡率，其作用机制可能与上述元素在肠内与Na竞争吸收部位，从而减少Na的吸收及增加Na的排泄有关，而体内Na过多与高血压等心血管疾病有关。因此，我们认为，山楂果和山楂叶对高血压、冠心病、心绞痛等心血管疾病有治疗作用，除黄酮类成分外，还可能与Sr、Ca、Mg、K的高含量和Na的低含量有关。山楂叶中含有一定量的Mn(45.5mg/kg)。据报道，缺锰与动脉硬化有关。锰能改善动脉粥样硬化病人脂质的代谢，有去脂作用。因此，这可能是山楂果和山楂叶降血脂、防治动脉粥样硬化症的原因之一。山楂的叶子中含有相当量的P(2150mg/kg)、Fe(420mg/kg)和Zn(682mg/kg，这些元素都是人体所需要的。可见，山楂叶中有益元素的含量高于或接近于山楂果中的含量。此外，氨基酸的总含量也是山楂叶(10.30％)高于山楂果(2.40％)，同时还含有多种黄酮类成分，对心血管疾病具有显著疗效。现代研究表明，微量元素与人体的生命活动有着极其重要的生理和病理意义，对维持人体健康极为重要。山楂叶不仅资源丰富，而且是微量元素的天然宝库。我们认为，山楂叶和银杏叶相类似，也应加以开发利用。

③山楂叶的Vc含量：成熟期山楂叶Vc含量为820mg～1224mg/1009，是果实的10倍左右(89mg/1009)。从5月到11月落叶前，其Vc含量呈上升趋势，落地的棕色叶片，其Vc含量极低。11月初Vc含量最高，这时正是山楂果的收获季节，为不影响山楂果的生长和产量，可在收果后采收叶子。维生素c可促进胶原蛋白的合成。胶原蛋白是构成结缔组织的重要蛋白质，从而加速伤口的愈合，防止小血管出血。同时，Vc可促进肾上腺皮质素合成、铁的吸收和抗体生成。Vc易与致癌物亚硝胺结合，有防癌的效应。缺乏Vc时，会引起毛细血管变脆，通透性增大，从而引起皮下、黏膜、肌肉、牙龈等处出血，以及骨折等。

④山楂叶的VB

⑤山楂叶黄酮含量：山楂叶中总黄酮含量为3.18％～9.17％，其中牡荆素的含量为8.705mg/g。牡荆素是黄酮类化合物中有效的天然生物活性成分之一，具有良好的抗癌作用。山楂叶含有芦丁、金丝桃苷、槲皮素、牡荆素等多种黄酮类化合物。药理及临床实验表明：山楂叶黄酮类化合物对心血管系统疾病具有降压、降血脂、增加冠脉流量、改善心肌供血供氧等功效，对高血压、高血脂、冠心病及心绞痛等心血管疾病均具有良好疗效。此外，山楂叶黄酮类化合物较高的抗氧化、抗自由基活性，是生产天然保健食品理想的添加剂。秋季山楂叶不仅黄酮含量最高，而且含水率低，便于储存。采摘山楂叶最好在秋季采收山楂果之后，这样既不会影响山楂树正常的生长，也不会影响山楂果的产量。山楂叶含有较多的黄酮化合物，其含量与大嘴桉(E.macrorrhyncha)和尤曼桉(E.yomani)等桉类树叶相近，而且这些树叶的黄酮化合物的提取已工业化生产。由于山楂叶黄酮具有良好的药理作用，广泛应用于临床治疗，因此山楂叶可作为一种很有希望的天然药物的提取原料，具有生产价值。

综上所述，山楂全身是宝，将山楂果、山楂枝叶充分利用起来，并加工成附加值更高的产品，意义十分重大。

发明内容

本发明是基于山楂果和山楂枝叶所既有丰富的养分，利用山楂果和山楂枝叶为主要原料培育一种虫草为目的而提供全新的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法。具体包括：以山楂果和山楂枝叶为主要原料，以市售的蛹虫草菌种为菌源，将虫草菌种经过多个阶段的驯化培育，培育出适合在山楂基质良好生长的虫草菌种。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法，技术方案中在于包括如下步骤：

1、第一阶段试管菌种培育：准备850-900毫升清水、100-150毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氢钾2-3克、硫酸镁1-2克、蛋白胨5-6克、琼脂粉15-20克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液，将基质液的PH调到7.5-8.5后分装于试管中，接着灭菌、摆斜面得斜面试管，在无菌环境下将蛹虫草菌种接入斜面试管中，并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管，再将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第一阶段试管菌种。

2、第一阶段液体菌种培育：准备750-800毫升清水、200-250毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，将营养液的PH调到6.5-7.5后分装于液体菌种培养容器中并灭菌得液体菌种培养基，在无菌环境下将步骤1中培养而得的第一阶段试管菌种接到液体菌种培养基中，最后在15-20度及暗光环境下通过深层发酵培养至液体菌种培养基长满菌球或菌丝得第一阶段液体菌种。

3、第一阶段子实体培育：准备650-700毫升清水、300-350毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，并将营养液的PH调到6-7备用；取糯米50-70份、山楂果渣15-20份、山楂枝叶粉碎物10-25份、蚕蛹粉3-5份，将糯米、山楂果渣、山楂枝叶粉碎物、蚕蛹粉混合起来得混合物料，再把营养液拌入混合物料中，把混合物料的含水量调整到55-60％得培养基质，把培养基质分装到培养容器中并灭菌，在无菌环境下将步骤2中培育得到的第一阶段液体菌种接到培养基质中，并将接好种的培养基质放置在温度是15-20度、湿度是70-75％及暗光环境下培养至虫草菌丝长满培养料，接着将长满虫草菌丝的培养基质放置于在温度是20-25度、湿度是80-90％及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色，最后在温度是20-25度、湿度是80-90％及见光环境下培养至虫草子实体长成。

4、第二阶段试管菌种培育：550-600毫升清水、400-450毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氢钾2-3克、硫酸镁1-2克、蛋白胨5-6克、琼脂粉15-20克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液，将基质液的PH调到5.5-6后分装于试管中，接着灭菌、摆斜面得斜面试管，在无菌环境下将步骤3中培育得到的第一阶段蛹虫草子实体分离到斜面试管中，并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管，再将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第二阶段试管菌种。

5、第二阶段液体菌种培育：450-500毫升清水、500-550毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，将营养液的PH调到5-5.5后分装于液体菌种培养容器中并灭菌得液体菌种培养基，在无菌环境下将步骤4中培养而得的第二阶段试管菌种接到液体菌种培养基中，最后在15-20度及暗光环境下通过深层发酵培养至液体菌种培养基长满菌球或菌丝得第二阶段液体菌种。

6、第二阶段子实体培育：350-400毫升清水、600-650毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，再将营养液的PH调到4.5-5备用；取山楂果渣50-70份、山楂枝叶粉碎物20-25份、糯米10-20份、蚕蛹粉3-5份，将山楂果渣、山楂枝叶粉碎物、糯米、蚕蛹粉混合起来得混合物料，再把营养液拌入混合物料中，把混合物料的含水量调整到55-60％得培养基质，把培养基质分装到培养容器中并灭菌，在无菌环境下将步骤5中培育得到的第二阶段液体菌种接到培养基质中，并将接好种的培养基质放置在温度是15-20度、湿度是70-75％及暗光环境下培养至虫草菌丝长满培养料，接着将长满虫草菌丝的培养基质放置于在温度是20-25度、湿度是80-90％及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色，最后在温度是20-25度、湿度是80-90％及见光环境下培养至虫草子实体长成。

7、第三阶段试管菌种培育：650-700毫升新鲜山楂果汁、300-350毫升清水、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氢钾2-3克、硫酸镁1-2克、蛋白胨5-6克、琼脂粉15-20克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液，接着将基质液分装于试管中，再将试管进行灭菌、摆斜面得斜面试管，在无菌环境下将步骤6中培育得到的第二阶段蛹虫草子实体分离到斜面试管中，并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管，最后将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第三阶段试管菌种。

进一步的，上述步骤1、2、3、4、5、6和7中所述的山楂果汁制备方法如下：

(1)原料采集：采集成熟适度、品质良好、新鲜的山楂果为原料；

(2)原料处理：剔出病虫果，腐烂果以及杂质，并将山楂果清洗干净；

(3)煮制：将山楂果放入锅中，加入清水淹没，然后煮至山楂软烂；

(4)打浆：将果肉打成果酱；

(5)汁渣分离：按照常规方法把果酱压榨得果汁。

进一步的，上述步骤1、2、3、4、5、6和7中所述的玉竹粉制备方法如下：

(1)原料采集：采集干透、无霉变的玉竹为原料；

(2)原料处理：将玉竹粉碎得能过120-200目得玉竹粉。

进一步的，上述步骤1、2、3、4、5、6和7中所述的灭菌方法如下：

(1)高压灭菌：在压力灭菌容器内、在121度、0.15个兆帕下灭菌30分钟；

(2)常压灭菌：在常压灭菌容器内、在100度下灭菌240-300分钟。

进一步的，上述步骤1中所述的蛹虫草菌种为市售的蛹虫草试管菌种。

进一步的，上述步骤3和步骤6中所述的山楂枝叶粉碎物制备方法如下：

(1)原料采集：采集干透、无霉变的山楂枝叶为原料；

(2)原料处理：将山楂枝叶粉碎得能过50-60目的山楂枝叶粉。

进一步的，上述步骤3和步骤6中所述的山楂果渣是步骤1、2、3、4、5、6和7中制备山楂果汁时得到的山楂果渣。

进一步的，上述步骤1、3、4、6和7中所述的见光培养是给予100-600lux光照。

所述的蛹虫草富含虫草素、虫草酸、多糖等物质。中医认为，蛹虫草既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是一种能同时平衡、调节阴阳的中药。蛹虫草的保健功能成分不仅有虫草素，还有虫草多糖是国际医学公认的人体免疫增强剂。中医认为其起扶正固本作用，对老年性慢性支气管炎、肺原性心脏病有显著疗效，能提高肝脏解毒能力，起护肝作用，提高身体抗病毒和抗辐射能力。虫草酸即D-甘露醇是治疗心脑血管疾病的基本药物，具有清除自由基、扩张血管、降低血压的作用。核苷酸具有抑制血小板聚集、防止心脑血栓形成，消除黄褐斑、老年斑、青春痘，抗衰防皱，养颜美容等。蛹虫草是一种子囊菌，通过异宗配合进行有性生殖。其无性型为蛹草拟青霉。其子实体成熟后可形成子囊孢子(繁殖单位)，孢子散发后随风传播，孢子落在适宜的虫体上，便开始萌发形成菌丝体。菌丝体一面不断地发育，一面开始向虫体内蔓延，于是蛹虫就会被真菌感染，分解蛹体内的组织，以蛹体内的营养作为其生长发育的物质和能量来源，最后将蛹体内部完全分解。当蛹虫草的菌丝把蛹体内的各种组织和器官分解完毕后，菌丝体发育也进入了一个新的阶段。形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座(子实体)。蛹虫草在人工条件下也能育成了完整子座，而且，培育蛹虫草的培养基也不局限于昆虫体，人工培养蛹虫草目前应用最多的培养基是大米、小麦、玉米等。

所述的玉竹，(学名：Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)为百合科多年生草本植物。玉竹营养丰富，每100克玉竹含蛋白质12-15克，粗纤维30-36克，尼克酸2-3克，还含有铃兰甙、铃兰苦甙、山茶酚、槲皮素、黏液质、碳水化合物、纤维素。同时还含有丰富的胡萝卜素、维生素B、维生素C，是一种极有经济价值的特种蔬菜和中药。

本发明既有如下优点：

1、本发明所提出以山楂为基质培育虫草菌种的方法构思新颖，生产工艺简单、容易实施。

2、通过实施本发明，用山楂、玉竹粉和玉米粉等作为培养基，山楂含有18种氨基酸、多种维生素及钾、钠、钙、镁、硒等多种微量元素，还含有山楂酸、黄酮、SOD等生物活性物质，玉竹含有丰富的蛋白质、多种维生素、胡萝卜素和多种微量元素，玉米粉同样富含蛋白质、维生素、糖类和钙、磷、铁等微量元素，将三种物质组成营养丰富、全面的培基质，虫草菌丝在这样的营养滋养下生长迅猛、菌丝粗壮，虫草子实体个体也生长粗壮，生物转化率高。

3、由于山楂果实偏酸，其PH是3-4左右，虫草菌种很难在山楂培养基上生长。通过实施本发明，将虫草试管菌种、虫草液体菌种、培育虫草子实体的工序上进行几个阶段的培训驯化，主要是从培养基质中的山楂内含物逐量增加和PH逐步降低来进行驯化，让虫草菌丝从逐步适应到完全适应在山楂培养基生长，最终让山楂培养基质中长出高品质、高产量的虫草子实体。

4、山楂果实和枝叶中纤维含量高，而且山楂果中含大量单宁、黄酮类物质，所以有苦涩味。通过实施本发明，虫草菌丝体在山楂基质中萌发生长，虫草菌丝体可以有效的把山楂进行分解、分化，使山楂变成小分子，人食用山楂产品后更有利于人体吸收。而山楂的苦涩味也被随着分解掉。另外，通过发酵，还能去除山楂果和枝叶中的重金属和农药残留，告别是药三分毒的时代。

5、通过实施本发明，改变了目前市场上山楂产物深加工产品稀少的现状，解决了山楂的产后出路，并带动山楂果相关产业的发展，形成新的经济增长点，具有巨大的经济效益和社会效益。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的方法进一步说明。

一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法，具体包括：以山楂果和山楂枝叶为主要原料，以市售的蛹虫草菌种为菌源，将虫草菌种经过多个阶段的驯化培育，培育出适合在山楂基质良好生长的虫草菌种。

具体工艺步骤如下：

1、采集市场上销售、优质的蛹虫草试管菌种作为菌源。

2、山楂果渣和山楂果汁的制备方法如下：

(1)原料采集：采集成熟适度、品质良好、新鲜的山楂果为原料；

(2)原料处理：剔出病虫果，腐烂果以及杂质，并将山楂果清洗干净；

(3)煮制：将山楂果放入锅中，加入清水淹没，然后煮至山楂软烂；

(4)打浆：将果肉打成果酱；

(5)汁渣分离：按照常规方法把果酱压榨得果渣和果汁。

3、山楂枝叶粉碎物制备方法如下：

(1)原料采集：采集干透、无霉变的山楂枝叶为原料；

(2)原料处理：将山楂枝叶粉碎得能过50-60目的山楂枝叶粉。

4、玉竹粉制备方法如下：

(1)原料采集：采集干透、无霉变的玉竹为原料；

(2)原料处理：将玉竹粉碎得能过120目的玉竹粉。

5、玉米粉制备方法如下：

(1)原料采集：采集干透、无霉变的玉米为原料；

(2)原料处理：将玉米粉碎得能过120目得玉米粉。

6、菌种制备方法如下

(1)第一阶段试管菌种培育：准备900毫升清水、100毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉30克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1克、蛋白胨5克、琼脂粉16克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液，将基质液的PH调到8.5后分装于试管中，接着将试管放置在压力灭菌容器内，在121度、0.15个兆帕下灭菌30分钟，取出试管后摆斜面得斜面试管，在无菌环境下将蛹虫草菌种接入斜面试管中，并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管，再将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度，并给予200lux光照环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第一阶段试管菌种。

(2)第一阶段液体菌种培育：准备800毫升清水、200毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉60克、葡萄糖20克、蛋白胨5克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，将营养液的PH调到7.5后分装于液体菌种培养容器中，在121度、0.15个兆帕下灭菌30分钟得液体菌种培养基，在无菌环境下将步骤1中培养而得的第一阶段试管菌种接到液体菌种培养基中，最后在15-20度及暗光环境下通过深层发酵培养至液体菌种培养基长满菌球或菌丝得第一阶段液体菌种。

(3)第一阶段子实体培育：准备700毫升清水、300毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉60克、葡萄糖30克、蛋白胨6克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，在将营养液的PH调到6.5备用；取糯米60份、山楂果渣20份、山楂枝叶粉碎物15份、蚕蛹粉5份，将糯米、山楂果渣、山楂枝叶粉碎物、蚕蛹粉混合起来得混合物料，再把营养液拌入混合物料中，把混合物料的含水量调整到55-60％得培养基质，把培养基质分装到培养容器中，并放置在常压灭菌容器内、在100度下灭菌300分钟，在无菌环境下将步骤2中培育得到的第一阶段液体菌种接到培养基质中，并将接好种的培养基质放置在温度是15-20度、湿度是70-75％及暗光环境下培养至虫草菌丝长满培养料，接着将长满虫草菌丝的培养基质放置于在温度是20-25度、湿度是80-90％，并给予300lux光照环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色，最后在温度是20-25度、湿度是80-90％，并给予500lux光照下环境下培养至虫草子实体长成。

4、第二阶段试管菌种培育：600毫升清水、400毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉25克、葡萄糖25克、磷酸二氢钾2.5克、硫酸镁1.5克、蛋白胨5.5克、琼脂粉16克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液，将基质液的PH调到6，接着将基质液分装于试管中，再将试管进行灭菌、摆斜面得斜面试管，在无菌环境下将步骤3中培育得到的第一阶段蛹虫草子实体分离到斜面试管中，并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管，最后将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度，并给予200lux光照环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第二阶段试管菌种。

5、第二阶段液体菌种培育：500毫升清水、500毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50克、葡萄糖20克、蛋白胨5克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，将营养液的PH调到5.5后分装于液体菌种培养容器中，在121度、0.15个兆帕下灭菌30分钟得液体菌种培养基，在无菌环境下将步骤4中培养而得的第二阶段试管菌种接到液体菌种培养基中，最后在15-20度及暗光环境下通过深层发酵培养至液体菌种培养基长满菌球或菌丝得第二阶段液体菌种。

6、第二阶段子实体培育：400毫升清水、600毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉60克、葡萄糖30克、蛋白胨6克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液，再将营养液的PH调到5备用；取山楂果渣65份、山楂枝叶粉碎物20份、糯米10份、蚕蛹粉5份，将山楂果渣、山楂枝叶粉碎物、糯米、蚕蛹粉混合起来得混合物料，再把营养液拌入混合物料中，把混合物料的含水量调整到55-60％得培养基质，把培养基质分装到培养容器中，并放置在常压灭菌容器内、在100度下灭菌300分钟，在无菌环境下将步骤5中培育得到的第二阶段液体菌种接到培养基质中，并将接好种的培养基质放置在温度是15-20度、湿度是70-75％及暗光环境下培养至虫草菌丝长满培养料，接着将长满虫草菌丝的培养基质放置于在温度是20-25度、湿度是80-90％，并给予300lux光照下环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色，最后在温度是20-25度、湿度是80-90％，并给予600lux光照下环境下培养至虫草子实体长成。

7、第三阶段试管菌种培育：700毫升新鲜山楂果汁、300毫升清水、玉竹粉30克、葡萄糖30克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、蛋白胨6克、琼脂粉18克，将上述各种物料一并放入加热容器中，然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液，接着将基质液分装于试管中，再把试管进行灭菌、摆斜面得斜面试管，在无菌环境下将步骤6中培育得到的第二阶段蛹虫草子实体分离到斜面试管中，并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管，最将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度，并给予200lux光照环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第三阶段试管菌种。

以上所述，对于本领域的普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和技术构思作出其他各种相应的改变，而所有这些改变都应属于本发明后附的权利要求保护范围。