一种仔猪饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种猪饲料添加剂及其制备方法。

背景技术

黄芩以根入药，味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床抗菌性比黄连好，而且不产生抗药性；因此黄芩的用量较大，但随之产生的大量黄芩废渣带来了新问题。黄芩废渣中还含有部分功能活性成分，若是直接丢弃造成资源浪费，可处理方式不当又会造成环境污染。

发明内容

本发明提供了一种用黄芩废渣制成的饲料添加剂及其制备方法，既可以不良费黄芩废渣中残留的活性成分，又避免环境污染，还可以促进养殖业发展。

本发明仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005制成，其中植物乳杆菌植物亚种Lac2020005菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。

上述仔猪饲料添加剂的制备方法：

一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；

二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005，厌氧发酵48±3h，即得到仔猪饲料添加剂；

植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。

本发明将黄芩废渣变废为宝，有效的利用了黄芩废渣又避免了环境污染。食用了添加本发明添加剂的仔猪饲料，仔猪增重快、腹泻率低，大幅提高了仔猪的品质。

植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005为植物乳杆菌，属于乳杆菌属(Lactobacillus)；保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.20963，保藏日期为2020年10月29日。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005制成，其中植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。

本实施方式中保藏号为CGMCC No.20963的植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005，于2019年11月8日分离自哈药集团双黄连生产过程中产生的黄芩药渣。植物乳杆菌Lac2020005最适生长温度为30℃，兼性厌氧，单菌为直杆状，多菌时镜下多成链状，最适pH6.5左右。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：黄芩废渣为黄芩浸提后残渣。其它步骤及参数与实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式仔猪饲料添加剂的制备方法：

一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌，再灭菌；

二、灭菌后降温至35℃～37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005，厌氧发酵48±3h，即得到仔猪饲料添加剂；

植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.20963。

本实施方式发酵结束后仔猪饲料添加剂pH值为4.5，其中植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005菌数≥10

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤一中水的加入量为黄芩废渣总重量的80％～100％。其它步骤及参数与实施方式三相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式三或四的不同点是：步骤一中黄芩废渣粉碎粒径小于20目。其它步骤及参数与实施方式三或四相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式三或四或五的不同点是：步骤一中灭菌温度为120℃、灭菌时间为30分钟；黄芩废渣铺垫厚度≤30cm进行灭菌。其它步骤及参数与实施方式三或四或五相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式三、四、五或六的不同点是：步骤二中植物乳杆菌植物亚种菌株植物乳杆菌接种量5％。其它步骤及参数与实施方式三、四、五或六相同。

实施例1

植物乳杆菌Lac2020005(CGMCC No.20963)活化后接种于MRS液体培养基，控制温度37℃～43℃，时间24h～36h，制备植物乳杆菌Lac2020005发酵液，发酵液中植物乳杆菌Lac2020005的含量≥10

本实施例分3组进行实验，第一组饲料添加剂中不接种菌株，第二组饲料添加剂接种市售的植物乳杆菌(CGMCC1.557)，第三组饲料添加剂接种植物乳杆菌Lac2020005(CGMCCNo.20963)。

第一组所用饲料添加剂的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟。

第二组所用饲料添加剂的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟，其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm；

二、灭菌后降温至35℃～37℃，按5％接种植物乳杆菌植CGMCC1.557发酵液，厌氧发酵48h。

第三组所用饲料添加剂的制备方法：一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80％～100％的水搅拌，再120℃、灭菌30分钟，其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm；

二、灭菌后降温至35℃～37℃，按5％接种植物乳杆菌Lac2020005发酵液，厌氧发酵48h。

第二组和第三组发酵后得到的饲料添加剂中菌数均≥10

动物实验：

选取28日龄、体重相近、健康无病的杜长大三元杂交仔猪160头，随机分为5个试验。每个实验中第一组、第二组和第三组饲料添加剂的添加量为2kg/吨，另设原始组饲料中不加入饲料添加剂。每个试验组32头，试验期28天，免疫和管理按猪场常规进行。

试验饲粮：基础日粮采用玉米、豆粕型，参照NRC(1998)猪饲养标准配制而成，具体日粮组成和营养水平见表1。

表1基础日粮组成及营养水平

注：预混料向每kg日粮提供Cu 180mg，Fe 220mg，Mn 55mg，Zn 210mg，I 0.3mg，Se0.3mg，Co 0.3mg，VA 15000IU，VD 33700IU，VE 50IU，VK 4.5mg，VB

断奶仔猪日增重情况测定：

试验仔猪分别于0、14和28天空腹12h后进行称重、记录，以计算不同时期及全期仔猪的增重情况。

对0～28d仔猪腹泻情况评定：观察并记录试验期每头仔猪每天的腹泻情况，其计算公式为：腹泻率＝试验期腹泻仔猪头次/(试验猪头次×试验天数)×100％。

仔猪日增重情况及腹泻情况如表2所示。

表2

注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

由表2可知，0～14d日增重，第一组较原始组提高5.94％，但无显著性差异(P>0.05)；第二组、第三组比原始组分别显著提高7.63％和7.69％(P<0.05)，较第一组分别提高1.55％和1.62％，但无显著性差异(P>0.05)。

15～28d日增重，第一组较原始组提高6.45％(P>0.05)；第二、第三组较原始组显著提高45.16％和45.96％，(P<0.05)，较第一组显著提高36.37％,和37.16％(P<0.05)。

0～28d日增重，第一组比原始组提高6.16％(P>0.05)；第二、第三组较原始组显著提高27.76％和29.38％(P<0.05)，较第一组显著提高20.35％和21.89％(P<0.05)。

0～28d仔猪腹泻率，各试验组均低于原始组，其中第三组仔猪腹泻率最低。

断奶仔猪盲肠微生物菌群的测定：

试验结束后，每组随机选取仔猪5头，打开腹腔，结扎盲肠两端，切下盲肠。在无菌操作台中，准确称取盲肠内容物1g放于盛有99mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡，取稀释液进行10倍的倍比稀释，吸取0.1mL稀释液接种于选择性培养基上。

其中，大肠杆菌用伊红美蓝琼脂培养基37℃培养48h后进行菌落计数；乳酸菌用MRS培养基37℃培养48h后进行菌落计数；双歧杆菌用BL培养基37℃厌氧培养48h后进行菌落计数。

各组断奶仔猪盲肠微生物菌群的影响如表3所示。

表3

注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

由表3可知，大肠杆菌数量第二组、第三组显著低于原始组(P<0.05)；第一组大肠杆菌数量低于原始组但无显著性差异(P>0.05)。

乳酸菌和双歧杆菌数量第二组、第三组显著高于原始组(P<0.05)，其中乳酸菌数量显著高于第一组(P<0.05)。第一组乳酸菌和双歧杆菌数量高于原始组，但差异不显著(P>0.05)。

断奶仔猪血清抗氧化指数的测定：

试验第21天，各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。抗氧化指标的测定：采用黄嘌呤氧化酶法来测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、采用比色法来测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、采用硫代巴比妥酸法(TBA)来测定丙二醛(MDA)，试验所用试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买(具体步骤按试剂盒说明书操作)。

各组对断奶仔猪抗氧化性能的影响如表4所示。

表4

注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

由表4可知，断奶仔猪血清中T-SOD含量第一组较原始组提高14.66％，无显著性差异(P>0.05)；第二组、第三组较原始组显著提高了39.88％和40.51％(P<0.05)，较第一组显著提高了22.01％和22.57％(P<0.05)。

断奶仔猪血清中GSH含量试验组与原始组之间无显著性差异(P>0.05)。

断奶仔猪血清中MDA含量第一组较原始组降低51.65％，无显著性差异(P>0.05)；第二组、第三组较原始组分别显著降低62.75％和62.97％(P<0.05)，较第一组分别降低22.98％和23.41％(P>0.05)。

断奶仔猪血清免疫指标的测定：

试验第28d，各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。血清免疫指标IgA、IgG、IL-4采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。

各组对断奶仔猪免疫器官指数的影响如表5所示。

表5

注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

由表5可知，仔猪血清中IgA含量第二组、第三组高于原始组和第一组但无显著性差异(P>0.05)。

IgG含量第一组较原始组提高2.42％，差异不显著(P>0.05)；第二组、第三组较原始组分别显著提高30.85％和42.11％(P<0.05)，较第一组分别显著提高27.77％和38.75％(P<0.05)。

IL-4含量第一组较原始组提高3.99％，差异不显著(P>0.05)；第二组、第三组组较原始组分别显著提高31.57％和38.24％(P<0.05)，较第一组分别显著提高26.53％和32.95％(P<0.05)。

药理学毒性试验：

试验方法：选取体重为18～22g的ICR鼠100只，经3天适应性饲养后，随机均分为4组，第一组、第二组、第三组和原始组(同上)，每组各25只；原始组灌胃生理盐水，第一组、第二组、第三组将制备的饲料添加剂加水中灌服，第一组、第二组、第三组的饲料添加剂添加量为0.1g/mL，0.4mL/次，一天3次，连续7天。

测定指标及方法：

(1)临床症状观察：每日观察试验鼠的精神状态、饮食情况，每日记录发病死亡情况。

(2)病理学观察：对于死亡鼠进行剖检观察内脏变化。

(3)生长指标观察：对试验鼠进行定期称重；试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重脏器指数测定：剖检大鼠，取心脏、脾脏、肝脏、肾脏、睾丸、卵巢，称重，按照下式计算脏器指数：脏器指数＝脏器重/体重×100。

(4)肝脏功能变化观察：试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST、ALT。

临床症状观察各组鼠发病和死亡情况如下表6。

表6

病理学观察：原始组和试验组，鼠扑杀后进行剖检眼观未见观察内脏器官明显的病理变化。

生长指标观察：试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重分析见表7。

表7

注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

由表7可知，各脏器指数分析，各试验组与原始组之间无显著性差异(P>0.05)。

肝脏功能变化观察，试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)见表8。

表8

注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

由表8可知，各组数据与空白原始组相比差异不显著，都处于正常范围内。

根据第三组制备的本发明发酵制剂，20g/kg、100g/kg给1月龄ICR鼠连续灌胃给药1个月，动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常；动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围，且正常动力无差异；病理组织学检查表明，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检查以上各项指标均无明显毒性反应，表明无蓄积毒性。