一种仔猪饲料添加剂及其制备方法
文献发布时间:2023-06-19 11:24:21
技术领域
本发明涉及一种猪饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
黄芩以根入药,味苦、性寒,有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床抗菌性比黄连好,而且不产生抗药性;因此黄芩的用量较大,但随之产生的大量黄芩废渣带来了新问题。黄芩废渣中还含有部分功能活性成分,若是直接丢弃造成资源浪费,可处理方式不当又会造成环境污染。
发明内容
本发明提供了一种用黄芩废渣制成的饲料添加剂及其制备方法,既可以不良费黄芩废渣中残留的活性成分,又避免环境污染,还可以促进养殖业发展。
本发明仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005制成,其中植物乳杆菌植物亚种Lac2020005菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.20963。
上述仔猪饲料添加剂的制备方法:
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌,再灭菌;
二、灭菌后降温至35℃~37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005,厌氧发酵48±3h,即得到仔猪饲料添加剂;
植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.20963。
本发明将黄芩废渣变废为宝,有效的利用了黄芩废渣又避免了环境污染。食用了添加本发明添加剂的仔猪饲料,仔猪增重快、腹泻率低,大幅提高了仔猪的品质。
植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005为植物乳杆菌,属于乳杆菌属(Lactobacillus);保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,保藏编号为CGMCCNo.20963,保藏日期为2020年10月29日。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式仔猪饲料添加剂由黄芩废渣和植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005制成,其中植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.20963。
本实施方式中保藏号为CGMCC No.20963的植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005,于2019年11月8日分离自哈药集团双黄连生产过程中产生的黄芩药渣。植物乳杆菌Lac2020005最适生长温度为30℃,兼性厌氧,单菌为直杆状,多菌时镜下多成链状,最适pH6.5左右。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一的不同点是:黄芩废渣为黄芩浸提后残渣。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式仔猪饲料添加剂的制备方法:
一、黄芩废渣粉碎后加水搅拌,再灭菌;
二、灭菌后降温至35℃~37℃接种植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005,厌氧发酵48±3h,即得到仔猪饲料添加剂;
植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.20963。
本实施方式发酵结束后仔猪饲料添加剂pH值为4.5,其中植物乳杆菌植物亚种菌株Lac2020005菌数≥10
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式三的不同点是:步骤一中水的加入量为黄芩废渣总重量的80%~100%。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式三或四的不同点是:步骤一中黄芩废渣粉碎粒径小于20目。其它步骤及参数与实施方式三或四相同。
具体实施方式六:本实施方式与具体实施方式三或四或五的不同点是:步骤一中灭菌温度为120℃、灭菌时间为30分钟;黄芩废渣铺垫厚度≤30cm进行灭菌。其它步骤及参数与实施方式三或四或五相同。
具体实施方式七:本实施方式与具体实施方式三、四、五或六的不同点是:步骤二中植物乳杆菌植物亚种菌株植物乳杆菌接种量5%。其它步骤及参数与实施方式三、四、五或六相同。
实施例1
植物乳杆菌Lac2020005(CGMCC No.20963)活化后接种于MRS液体培养基,控制温度37℃~43℃,时间24h~36h,制备植物乳杆菌Lac2020005发酵液,发酵液中植物乳杆菌Lac2020005的含量≥10
本实施例分3组进行实验,第一组饲料添加剂中不接种菌株,第二组饲料添加剂接种市售的植物乳杆菌(CGMCC1.557),第三组饲料添加剂接种植物乳杆菌Lac2020005(CGMCCNo.20963)。
第一组所用饲料添加剂的制备方法:一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80%~100%的水搅拌,再120℃、灭菌30分钟。
第二组所用饲料添加剂的制备方法:一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80%~100%的水搅拌,再120℃、灭菌30分钟,其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm;
二、灭菌后降温至35℃~37℃,按5%接种植物乳杆菌植CGMCC1.557发酵液,厌氧发酵48h。
第三组所用饲料添加剂的制备方法:一、黄芩废渣粉碎粒径小于20目后加入黄芩废渣总重量80%~100%的水搅拌,再120℃、灭菌30分钟,其中黄芩废渣铺垫厚度≤30cm;
二、灭菌后降温至35℃~37℃,按5%接种植物乳杆菌Lac2020005发酵液,厌氧发酵48h。
第二组和第三组发酵后得到的饲料添加剂中菌数均≥10
动物实验:
选取28日龄、体重相近、健康无病的杜长大三元杂交仔猪160头,随机分为5个试验。每个实验中第一组、第二组和第三组饲料添加剂的添加量为2kg/吨,另设原始组饲料中不加入饲料添加剂。每个试验组32头,试验期28天,免疫和管理按猪场常规进行。
试验饲粮:基础日粮采用玉米、豆粕型,参照NRC(1998)猪饲养标准配制而成,具体日粮组成和营养水平见表1。
表1基础日粮组成及营养水平
注:预混料向每kg日粮提供Cu 180mg,Fe 220mg,Mn 55mg,Zn 210mg,I 0.3mg,Se0.3mg,Co 0.3mg,VA 15000IU,VD 33700IU,VE 50IU,VK 4.5mg,VB
断奶仔猪日增重情况测定:
试验仔猪分别于0、14和28天空腹12h后进行称重、记录,以计算不同时期及全期仔猪的增重情况。
对0~28d仔猪腹泻情况评定:观察并记录试验期每头仔猪每天的腹泻情况,其计算公式为:腹泻率=试验期腹泻仔猪头次/(试验猪头次×试验天数)×100%。
仔猪日增重情况及腹泻情况如表2所示。
表2
注:同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05),肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表2可知,0~14d日增重,第一组较原始组提高5.94%,但无显著性差异(P>0.05);第二组、第三组比原始组分别显著提高7.63%和7.69%(P<0.05),较第一组分别提高1.55%和1.62%,但无显著性差异(P>0.05)。
15~28d日增重,第一组较原始组提高6.45%(P>0.05);第二、第三组较原始组显著提高45.16%和45.96%,(P<0.05),较第一组显著提高36.37%,和37.16%(P<0.05)。
0~28d日增重,第一组比原始组提高6.16%(P>0.05);第二、第三组较原始组显著提高27.76%和29.38%(P<0.05),较第一组显著提高20.35%和21.89%(P<0.05)。
0~28d仔猪腹泻率,各试验组均低于原始组,其中第三组仔猪腹泻率最低。
断奶仔猪盲肠微生物菌群的测定:
试验结束后,每组随机选取仔猪5头,打开腹腔,结扎盲肠两端,切下盲肠。在无菌操作台中,准确称取盲肠内容物1g放于盛有99mL灭菌生理盐水的三角瓶中,充分振荡,取稀释液进行10倍的倍比稀释,吸取0.1mL稀释液接种于选择性培养基上。
其中,大肠杆菌用伊红美蓝琼脂培养基37℃培养48h后进行菌落计数;乳酸菌用MRS培养基37℃培养48h后进行菌落计数;双歧杆菌用BL培养基37℃厌氧培养48h后进行菌落计数。
各组断奶仔猪盲肠微生物菌群的影响如表3所示。
表3
注:同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05),肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表3可知,大肠杆菌数量第二组、第三组显著低于原始组(P<0.05);第一组大肠杆菌数量低于原始组但无显著性差异(P>0.05)。
乳酸菌和双歧杆菌数量第二组、第三组显著高于原始组(P<0.05),其中乳酸菌数量显著高于第一组(P<0.05)。第一组乳酸菌和双歧杆菌数量高于原始组,但差异不显著(P>0.05)。
断奶仔猪血清抗氧化指数的测定:
试验第21天,各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头,空腹前腔静脉采血30mL,静置,3000rpm离心10min,离心后血清分装于离心管中,-30℃保存待测。抗氧化指标的测定:采用黄嘌呤氧化酶法来测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、采用比色法来测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、采用硫代巴比妥酸法(TBA)来测定丙二醛(MDA),试验所用试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买(具体步骤按试剂盒说明书操作)。
各组对断奶仔猪抗氧化性能的影响如表4所示。
表4
注:同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05),肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表4可知,断奶仔猪血清中T-SOD含量第一组较原始组提高14.66%,无显著性差异(P>0.05);第二组、第三组较原始组显著提高了39.88%和40.51%(P<0.05),较第一组显著提高了22.01%和22.57%(P<0.05)。
断奶仔猪血清中GSH含量试验组与原始组之间无显著性差异(P>0.05)。
断奶仔猪血清中MDA含量第一组较原始组降低51.65%,无显著性差异(P>0.05);第二组、第三组较原始组分别显著降低62.75%和62.97%(P<0.05),较第一组分别降低22.98%和23.41%(P>0.05)。
断奶仔猪血清免疫指标的测定:
试验第28d,各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头,空腹前腔静脉采血30mL,静置,3000rpm离心10min,离心后血清分装于离心管中,-30℃保存待测。血清免疫指标IgA、IgG、IL-4采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。
各组对断奶仔猪免疫器官指数的影响如表5所示。
表5
注:同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05),肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表5可知,仔猪血清中IgA含量第二组、第三组高于原始组和第一组但无显著性差异(P>0.05)。
IgG含量第一组较原始组提高2.42%,差异不显著(P>0.05);第二组、第三组较原始组分别显著提高30.85%和42.11%(P<0.05),较第一组分别显著提高27.77%和38.75%(P<0.05)。
IL-4含量第一组较原始组提高3.99%,差异不显著(P>0.05);第二组、第三组组较原始组分别显著提高31.57%和38.24%(P<0.05),较第一组分别显著提高26.53%和32.95%(P<0.05)。
药理学毒性试验:
试验方法:选取体重为18~22g的ICR鼠100只,经3天适应性饲养后,随机均分为4组,第一组、第二组、第三组和原始组(同上),每组各25只;原始组灌胃生理盐水,第一组、第二组、第三组将制备的饲料添加剂加水中灌服,第一组、第二组、第三组的饲料添加剂添加量为0.1g/mL,0.4mL/次,一天3次,连续7天。
测定指标及方法:
(1)临床症状观察:每日观察试验鼠的精神状态、饮食情况,每日记录发病死亡情况。
(2)病理学观察:对于死亡鼠进行剖检观察内脏变化。
(3)生长指标观察:对试验鼠进行定期称重;试验结束,扑杀鼠称量体重、脏器重脏器指数测定:剖检大鼠,取心脏、脾脏、肝脏、肾脏、睾丸、卵巢,称重,按照下式计算脏器指数:脏器指数=脏器重/体重×100。
(4)肝脏功能变化观察:试验结束后,扑杀鼠,采取血液分离血清,测定AST、ALT。
临床症状观察各组鼠发病和死亡情况如下表6。
表6
病理学观察:原始组和试验组,鼠扑杀后进行剖检眼观未见观察内脏器官明显的病理变化。
生长指标观察:试验结束,扑杀鼠称量体重、脏器重分析见表7。
表7
注:同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05),肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表7可知,各脏器指数分析,各试验组与原始组之间无显著性差异(P>0.05)。
肝脏功能变化观察,试验结束后,扑杀鼠,采取血液分离血清,测定AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)见表8。
表8
注:同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05),肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表8可知,各组数据与空白原始组相比差异不显著,都处于正常范围内。
根据第三组制备的本发明发酵制剂,20g/kg、100g/kg给1月龄ICR鼠连续灌胃给药1个月,动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常;动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围,且正常动力无差异;病理组织学检查表明,心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检查以上各项指标均无明显毒性反应,表明无蓄积毒性。
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