双氢麦角胺在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及双氢麦角胺在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC，简称肝癌)是临床上最常见的恶性肿瘤之一，发病率居恶性肿瘤第4位，死亡率高居第3位。肝癌具有发病隐匿，进展迅速的特点，大部分患者确诊即为晚期，失去外科手术等根治性治疗机会，5年生存率仅为14.1％，严重威胁我国人民生命健康。索拉非尼和仑伐替尼等靶向药物治疗是晚期肝癌的一线治疗方案，但治疗获益人群少，且患者于治疗后常出现获得性耐药；而免疫检查点抑制剂单药总体有效率仅在20％左右。因此，迫切需要新的抗肝癌药物面市。

双氢麦角胺(Dihydroergotamine)，又称二氢麦角胺、氢麦角胺等。现有文献报导的主要药理作用有：(1)α-受体拮抗药：对脑血管具选择性松弛作用，可缓解脑血管痉挛。本药还可使扩张的颈外动脉血管收缩并降低其搏动的幅度。(2)治疗适应证：临床上用于老年人退化性脑循环障碍、老年性痴呆、脑动脉硬化症及中风后遗症等引起的头晕、头痛、注重力不集中、记忆力减退、抑郁、疲惫感等症状。(3)其他临床应用参考：用于偏头痛急性发作、丛集性头痛、本药胃肠外给药可用于治疗直立性低血压、髋关节手术预防深静脉血栓、盆腔充血伴疼痛、继发于抗抑郁药的口干。至今为止，未有双氢麦角胺具有抗肿瘤治疗作用的有关报导。

发明内容

本发明第一方面的目的，在于提供双氢麦角胺及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明第二方面的目的，在于提供一种药物。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供双氢麦角胺和/或其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

优选地，所述双氢麦角胺的分子式是C

优选地，所述衍生物包括双氢麦角胺在药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

优选地，所述肿瘤为肝癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、乳腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、脑瘤和胰腺癌中的至少一种；进一步为肝癌。

优选地，所述抗肿瘤药物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。

优选地，所述的辅料为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂和润滑剂中的至少一种。

优选地，所述抗肿瘤药物的剂型为固体制剂、液体制剂和半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包括片剂、颗粒剂、粉剂和胶囊剂。

优选地，所述液体制剂包括注射剂。

优选地，所述半固体制剂包括软膏剂和霜剂。

优选地，所述双氢麦角胺的给药剂量为2～6mg/kg小鼠。

优选地，所述双氢麦角胺的给药方式为注射。

本发明的第二方面，提供一种药物，包含：

(1)双氢麦角胺和/或其衍生物；和

(2)药学上可接受的辅料。

优选地，所述双氢麦角胺的分子式是C

优选地，所述衍生物包括双氢麦角胺在药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

优选地，所述的辅料为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂和润滑剂中的至少一种。

优选地，所述药物的剂型为固体制剂、液体制剂和半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包括片剂、颗粒剂、粉剂和胶囊剂。

优选地，所述液体制剂包括注射剂。

优选地，所述半固体制剂包括软膏剂和霜剂。

本发明的有益效果是：

本发明首次公开了双氢麦角胺和/或其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，双氢麦角胺和/或其衍生物可以显著抑制肿瘤组织的增殖，并且对给药动物的体重无显著影响，同时，给药期间，未观察到药物治疗副作用；表明：双氢麦角胺和/或其衍生物可以显著抑制肿瘤组织的增殖，且无副作用，可用于制备抗肿瘤药物。

附图说明

图1是实施例1中双氢麦角胺对肝癌细胞存活率的影响图：其中，A是双氢麦角胺对Huh7细胞存活率的影响图；B是双氢麦角胺对MHCC-97H细胞存活率的影响图。

图2是实施例2中0～12天内小鼠体内肿瘤组织的大小变化图：**表示p<0.01。

图3是实施例2中经过12天后小鼠体内肿瘤组织的直观图。

图4是实施例2中经过12天后小鼠体内肿瘤组织的重量图：*表示p<0.05。

图5是实施例2中0～12天内小鼠体重变化图。

图6是实施例2中经过12天后小鼠大小的直观图。

图7是实施例2中小鼠治疗前后的体重对比图：NS表示p>0.05。

具体实施方式

以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。

本实施例中所采用的原料，除特殊说明外，均通过常规手段制备或者通过商业渠道购买。

BALB/c裸鼠：BALB/c裸鼠(4～6周龄，雌雄不限)，由南方医科大学实验动物中心提供，饲养于南方医科大学南方医院SPF级动物房内，鼠笼和所用器皿均严格消毒，自由采食和饮用纯净水；实验前观察裸鼠有无临床症状，备用。

药物：双氢麦角胺，购自MedChemExpress(MCE)公司，货号：HY-B0670A。实验组注射药物配置：先将双氢麦角胺50mg溶于1.25mL DMSO原液中，配置成40μg/μL储存液，-80℃避光保存。20％磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)溶剂：将2g磺丁基醚-β-环糊精(购自MCE公司，货号：HY-17031)加入5mL生理盐水中，再用生理盐水定容至10mL至完全溶解澄清透明，-20℃保存。将20μL双氢麦角胺储存液溶于180μL 20％SBE-β-CD溶剂中，于注射前与800μL生理盐水混合配置成双氢麦角注射液。对照组注射药物配置：将20μL DMSO溶于180μL 20％SBE-β-CD溶剂中，于注射前与800μL生理盐水混合配置成对照注射液。

实施例1

1.细胞培养及铺板：含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基用于培养Huh7及MHCC-97H肝癌细胞，将对数生长期的Huh7及MHCC-97H肝癌细胞以6000个/孔接种至96孔板中。

2.药物处理：待肝癌细胞贴壁，梯度稀释双氢麦角胺药物后处理细胞，使双氢麦角胺终浓度分别达到0.078125μM，0.15625μM，0.3125μM，0.625μM，1.25μM，2.5μM，5μM，10μM，20μM，40μM，80μM，160μM，320μM，640μM及1280μM，每组设3个复孔，每孔培养基终体积为100μL，使药物作用细胞24小时和72小时。

3.检测细胞存活率：按照CCK-8试剂(东仁化学科技)：完全培养基＝1:10的比例配制CCK-8工作液，弃去各孔内细胞培养基后，加入100μL CCK-8工作液，并于细胞培养箱中孵育2小时，孵育完成后，用酶标仪检测450nm波长处各孔的OD值，记录OD值并计算细胞存活率；细胞存活率＝[(药物处理组吸光度—空白孔吸光度)/(对照组吸光度—空白孔吸光度)]×100％，空白孔吸光度(100μL CCK-8工作液同等检测条件下的吸光度，不含细胞及药物)；对照组吸光度(0.078125μM DMSO处理细胞后，同等检测条件下的吸光度)。利用Graphpad Prism软件计算Huh7及MHCC-97H细胞中双氢麦角胺的IC50，结果如图1所示：双氢麦角胺抑制肝癌细胞存活，随着药物浓度的增加，肝癌细胞的存活率逐渐下降，在药物处理24小时后，双氢麦角胺在Huh7和MHCC-97H中的IC50分别为43.93μM和65.83μM；处理72小时后，双氢麦角胺在Huh7和MHCC-97H中的IC50分别为39.77μM和33.07μM；可见，双氢麦角胺具有抗肿瘤活性。

实施例2

1.构建裸鼠皮下瘤模型：体外培养人肝癌细胞(MHCC-97H)，将对数生长期细胞用胰酶消化，800rpm×3min离心，用PBS试剂洗涤肝癌细胞3遍，计数后调整细胞数为1×10

2.分组：待荷瘤小鼠的肿瘤长至约200mm

3.处理：根据小鼠体重，实验组(DHE/DHE 4mg/kg)每天给与腹腔注射5μL/g双氢麦角注射液；对照组(control/97H control)每天给与腹腔注射5μL/g对照注射液，每种处理重复6次。每2天用游标卡尺测量肿瘤体积，称量小鼠体重，并每天观察并记录小鼠的精神状况、皮肤状态、采食量等基本情况。

4.药效判定方法：记录小鼠肿瘤体积，及小鼠体重。12天后处死小鼠并解剖分离肿瘤后，称量各组小鼠瘤子重量。对比对照组及实验组两组荷瘤小鼠的体重变化、瘤子体积及重量的差异，使用Two-way ANOVA方法对结果进行统计分析。

0～12天内小鼠体内肿瘤组织的大小变化如图2所示：与对照组相比，给与双氢麦角胺注射液治疗小鼠的肿瘤增殖明显受抑制(p＝0.002)，经过12天后小鼠体内肿瘤组织的直观图、肿瘤重量如图3、图4所示：相对于对照组，双氢麦角胺注射液治疗小鼠的肿瘤重量明显减少(p＝0.013)，可见，双氢麦角胺可抑制肿瘤组织的增殖。

0～12天内小鼠体重变化如图5所示，经过12天后小鼠大小的直观图、治疗前后的小鼠的体重如图6、图7所示：对照小鼠的治疗前(control-before)后(control-after)体重与实验组小鼠的治疗前(DHE 4mg/kg-before)后(DHE 4mg/kg-after)体重无明显变化，且药物处理期间未观察到药物治疗副作用，可见，双氢麦角胺对动物无副作用，可用于抗肿瘤。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。