粉末洗涤剂组合物

序列表的引用

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技术领域

本发明涉及中性pH粉末洗涤剂组合物，特别涉及包含蛋白酶的中性pH粉末洗涤剂组合物。

背景技术

枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)是来自S8家族，特别是来自S8A亚家族的丝氨酸蛋白酶，如由MEROPS数据库所定义的(https://www.ebi.ac.uk/merops/index.shtml)。在S8A亚家族中，关键活性位点残基Asp、His和Ser通常发生在与S8B亚家族不同的那些基序中。

在洗涤剂工业中，酶已经在洗涤配制品中实施了几十年。用于此类配制品中的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露糖苷酶以及其他酶或其混合物。商业上，最重要的酶是蛋白酶。

数量不断增长的商用蛋白酶(用于例如衣物和餐具洗涤剂)是天然存在的野生型蛋白酶的蛋白质工程化变体。本领域已经描述了许多相对于亲本蛋白酶具有改变的蛋白酶变体，所述改变产生例如更好的洗涤性能、热稳定性、储存稳定性或催化活性方面的改善。

粉末洗涤剂配制品通常是高度碱性的，且pH值高于9，并且通常高于10，如高达约10.5。因此，通常设计用于这种配制品的蛋白酶不仅能够耐受高pH值，而且还能够在碱性条件下以最佳方式发挥作用。然而，在许多情况下，希望在较低的pH值下洗涤，因此需要在这种条件下适用并表现良好的蛋白酶。

本发明提供了具有较低pH并包含蛋白酶的粉末洗涤剂组合物，其中即使存在相对较低的pH值，蛋白酶也表现出令人惊讶的良好性能。

发明内容

本发明涉及中性pH粉末洗涤剂组合物，其包含蛋白酶，其中该组合物中蛋白酶的存在令人惊讶地发现产生了改善的清洁性能。

本发明还涉及本文所述的组合物在清洁过程如衣物洗涤或餐具洗涤中的用途，涉及使用中性pH洗涤剂组合物进行清洁的方法，并且涉及本文描述的蛋白酶在中性pH粉末洗涤剂组合物中的用途。

序列说明

SEQ ID NO:1是来自迟缓芽孢杆菌的

SEQ ID NO:2是来自解淀粉芽孢杆菌的BPN’蛋白酶多肽的序列。

SEQ ID NO:3是来自芽孢杆菌属物种的TY145蛋白酶多肽的序列。

定义

枯草杆菌酶/蛋白酶：术语“枯草杆菌酶”和“蛋白酶”在本文可以可互换地使用，并且是指水解蛋白质中的肽键的酶，即具有“蛋白酶活性”的酶。它包括属于EC 3.4酶组(包括其13个亚类中的每一个)的任何酶，并且特别是内肽酶(EC 3.4.21)。EC编号是指来自NC-IUBMB的Enzyme Nomenclature 1992[1992年酶命名法],学术出版社(Academic Press),圣地亚哥,加利福尼亚州，分别包括在Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊],1994,223,1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊],1995,232,1-6；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊],1996,237,1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊],1997,250,1-6；以及Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊],1999,264,610-650中出版的增刊1-5。

蛋白酶活性：术语“蛋白酶活性”是指蛋白水解活性(EC 3.4)，特别是内肽酶活性(EC 3.4.21)。存在几种蛋白酶活性类型，三种主要活性类型是：胰蛋白酶样，其中在P1处的Arg或Lys之后存在酰胺底物的裂解；胰凝乳蛋白酶样，其中在P1处的一个疏水性氨基酸之后发生裂解；和弹性蛋白酶样，其中在P1处的Ala之后发生裂解。蛋白酶活性可以根据WO2016/087619中描述的程序确定。

粉末洗涤剂组合物：术语“粉末洗涤剂组合物”是指其中全部或大部分成分呈固体干燥形式的洗涤剂组合物。“粉末”通常由包含一种或多种粉末和或颗粒的混合物组成。术语粉末洗涤剂组合物包括单位剂型例如洗涤块(tab)，其是已通过将一种或多种粉末或颗粒组合、压制或附聚成呈干燥形式的较大结构的洗涤片(tablet)。粉末洗涤剂组合物的含水量应足够低，以防止组合物的粘附或意外附聚。

为了简单起见，本说明书和权利要求书中通常称为“粉末”组合物。除非从上下文中另有说明或是明显的，否则本文使用的术语“粉末”应理解为还包括如上所述的固体形式，例如颗粒和洗涤块。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：

(相同的残基x100)/(比对长度-比对中的空位总数)

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：

(相同的脱氧核糖核苷酸x100)/(比对长度-比对中的空位总数)

变体：术语“变体”意指具有蛋白酶活性的、在一个或多个位置处包括改变(即，取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；而插入意指在邻接并且紧随占据某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。

变体命名惯例

出于本发明的目的，使用SEQ ID NO:2的多肽来确定SEQ ID NO:1的变体中相应的氨基酸残基编号。将SEQ ID NO:1的变体的氨基酸序列与SEQ ID NO:2对齐，并基于比对，将氨基酸位置编号对应于SEQ ID NO:1的多肽中的任何氨基酸残基。进一步的信息，参见下文段落“氨基酸位置/残基的编号”。

SEQ ID NO:3的变体的编号是基于SEQ ID NO:3。

另一种枯草杆菌酶中的相对应的氨基酸残基的鉴别可以通过多个多肽序列使用若干种计算机程序使用其对应的缺省参数的一个比对来测定，这些计算机程序包括(但不限于)MUSCLE通过对数-期望的多序列比较；3.5版或更新版；Edgar,2004,Nucleic AcidsResearch[核酸研究]32:1792-1797)，MAFFT(版本6.857或更新版本；Katoh和Kuma,2002,Nucleic Acids Research[核酸研究]30:3059-3066；Katoh等人,2005,Nucleic AcidsResearch[核酸研究]33:511-518；Katoh和Toh,2007,Bioinformatics[生物信息学]23:372-374；Katoh等人,2009,

在描述本发明的变体中，为了便于参考，对以下所述的命名法进行了改编。采用了已接受的IUPAC单字母或三字母的氨基酸缩写。术语“改变”或“突变”可以在本文中可互换地使用，是指取代、插入和缺失。

在此类情况下，通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号而对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此会是：

例如，取代和插入的组合可以表示如下：S99AD，其代表用丙氨酸残基取代位置99中的丝氨酸残基以及插入天冬氨酸残基。

“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”、和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。

在一个位置中的不同的改变还可以用斜杠(“/”)表示，例如如“T220A/V/L”，解释如上。可替代地，不同的改变或可以用括号表示，例如Arg170[Tyr,Gly]或一字母编码R170[Y,G]。

对于SEQ ID NO:3及其变体，编号基于SEQ ID NO:3。

具体实施方式

一方面本发明涉及一种粉末洗涤剂组合物，其包含蛋白酶和至少一种洗涤剂组分，其中该组合物的pH不超过约9，其中pH通常是在20℃、在该组合物在去离子水中的5g/l溶液中确定的。

在优选的实施例中，粉末洗涤剂组合物的电导率不超过约4.5mS/cm，优选不超过约4.0mS/cm，其中电导率是在20℃、在该组合物在去离子水中的5g/l溶液中确定的。

分别使用用于pH和电导率测量的常规技术和设备进行溶液中pH和电导率的测量。

从本说明书中显而易见的是，如本文所用的术语“中性pH”是指相对于常规粉末洗涤剂如用于衣物洗涤的那些(如上所述，其通常具有使用中高于9且经常高于10的pH)较低的pH。

如上所述，本文使用的术语“粉末”应理解为指固体干燥形式的组合物。本发明的“粉末”通常由包含一种或多种粉末和/或颗粒的混合物组成，但也包括例如单位剂型、如洗涤块。

在一个实施例中，本发明的组合物的pH低于约9.0、如不超过约8.9、如不超过约8.8、如不超过约8.7、如不超过约8.6、如不超过约8.5、如不超过约8.4、如不超过约8.3、如不超过约8.2、如不超过约8.1、或不超过约8.0。另一方面，组合物通常具有至少约7的pH，如至少约7.1、至少约7.2、至少约7.3、至少约7.4、至少约7.5、至少约7.6、至少约7.7、至少约7.8、或至少约7.9。在所有情况下，如上所述在5g/l溶液中确定pH。

在一些实施例中，pH可以是例如在从约7.0至不超过约9.0的范围内，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8、如从约7.6至约8.7、如从约7.8至约8.6。

在一个实施例中，如上所述在5g/l溶液中确定的，pH可以在从约7.0至约8.2的范围内，如从约7.2至约8.0。

在另一个实施例中，如上所述在5g/l溶液中确定的，pH可以在从约7.8至约8.8的范围内，如从约8.0至约8.6。

应当注意，尽管如上所述pH通常在5g/l溶液中确定，但预期对于单位剂型、例如洗涤块，可以通过在20℃将一单位(例如一个洗涤块)溶解于15l的去离子水中并测量该溶液的pH来确定pH。

在一些优选的实施例中，组合物的电导率不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.9mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.7mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.5mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.3mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.1mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.8mS/cm、如不超过约2.6mS/cm、如不超过约2.4mS/cm、如不超过约2.2mS/cm或不超过约2.0mS/cm。

类似于pH的情况，预期对于单位剂型、例如洗涤块，可以通过在20℃将一单位(例如一个洗涤块)溶解于15l的去离子水中并测量该溶液的电导率来确定电导率。

在一个方面，本发明涉及中性pH粉末洗涤剂组合物，其中该蛋白酶选自由以下组成的组：

a)SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中该变体具有蛋白酶活性并且与SEQ ID NO:1具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％但少于100％的序列同一性；

b)SEQ ID NO:2的多肽或其变体，其中该变体具有蛋白酶活性并且与SEQ ID NO:2具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％但少于100％的序列同一性；以及

c)SEQ ID NO:3的多肽或其变体，其中该变体具有蛋白酶活性并且与SEQ ID NO:3具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％但少于100％的序列同一性。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S99AD的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S99AD的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S99D+S103A+V104I+G160S以及任选的一个或多个另外的突变(例如选自S3T、V4I、S101E、S101R、V199M、V105I和L217D)的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体。

在一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，蛋白酶是包含突变

S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体，例如其中蛋白酶包含具有突变S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在另一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，蛋白酶是包含突变S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体，例如其中蛋白酶包含具有突变S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在另一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，蛋白酶是包含突变S99D+S101E+S103A+V104I+G160S的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％序列同一性的变体，例如其中蛋白酶包含具有突变S99D+S101E+S103A+V104I+G160S的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在另一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，蛋白酶是包含突变S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体，例如其中蛋白酶包含具有突变S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S99SE的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S99SE的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变Y167A+R170S+A194P的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变Y167A+R170S+A194P的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含选自下组的三个或更多个突变的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，该组由以下组成：S9E、N43R、N76D、V205I、Q206L、Y209W、S259D、N261W和L262E(例如，包含所述突变中的4、5、6、7或8个)，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体。在特定实施例中，蛋白酶可以是包含突变S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S87N+S101G+V104N的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S87N+S101G+V104N的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶包含SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变Y217L的、SEQ ID NO:2的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变Y217L的、SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q的、SEQID NO:2的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q的、SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q的、SEQID NO:2的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q的、SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶包含SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。

在一个实施例中，蛋白酶是SEQ ID NO:3的多肽的变体，与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的序列同一性。蛋白酶可以是例如包含选自下组的一个或多个突变的SEQ ID NO:3的多肽的变体，该组由以下组成：S27K、N109K、S111E、S171E、S173P、G174K、S175P、F180Y、G182A、L184F、Q198E、N199K和T297P，例如，包含所述突变中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个或全部。

在一个实施例中，蛋白酶是包含突变S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297P的、SEQ ID NO:3的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体。在一个实施例中，蛋白酶包含具有突变S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297P的、SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。

在一些实施例中，据信该组合物具有如上所述的pH是足够的，即不一定需要低电导率。下面提供此类实施例的非限制性实例。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S99AD的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S99AD的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S99D+S103A+V104I+G160S以及任选的一个或多个另外的突变(例如选自S3T、V4I、S101E、S101R、V199M、V105I和L217D)的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体。

在一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D的、SEQ IDNO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在另一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在另一个这样的、包含突变S99D+S103A+V104I+G160S的实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S99D+S101E+S103A+V104I+G160S的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S99D+S101E+S103A+V104I+G160S的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S99SE的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S99SE的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变Y167A+R170S+A194P的、SEQ IDNO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变Y167A+R170S+A194P的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含选自下组的三个或更多个突变的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，该组由以下组成：S9E、N43R、N76D、V205I、Q206L、Y209W、S259D、N261W和L262E(例如，包含所述突变中的4、5、6、7或8个)，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体。在特定实施例中，蛋白酶可以是包含突变S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ IDNO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的；例如，其中蛋白酶包含具有突变S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且蛋白酶是包含突变S87N+S101G+V104N的、SEQ IDNO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S87N+S101G+V104N的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在上述任何实施例中(其中组合物的pH不超过约9)，优选地组合物与具有10的pH的参比组合物相比具有改善的洗涤性能，其中pH是在20℃、在去离子水中的5g/l溶液中确定的。洗涤性能可以是例如使用AMSA测定如以下实例中所述确定的。

在其他实施例中，优选地组合物具有如上指明的pH以及低电导率两者。下面提供此类实施例的非限制性实例。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶是包含突变S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽的变体，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置，例如是与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E的、SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶包含SEQ IDNO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶是包含突变Y217L的、SEQ ID NO:2的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％或至少98％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变Y217L的、SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶是包含突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q的、SEQ ID NO:2的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q的、SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶是包含突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q的、SEQ ID NO:2的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少96％序列同一性的变体；例如，其中蛋白酶包含具有突变S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q的、SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶是SEQ IDNO:3的多肽的变体，与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的序列同一性；例如，其中蛋白酶是包含选自下组的一个或多个突变的SEQ ID NO:3的多肽的变体，该组由以下组成：S27K、N109K、S111E、S171E、S173P、G174K、S175P、F180Y、G182A、L184F、Q198E、N199K和T297P，例如，包含所述突变中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个或全部。

在一个实施例中，组合物的pH(如上所述确定的)是从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9、如从约7.4至约8.8并且电导率(如上所述确定的)是不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.5mS/cm或不超过约2.0mS/cm，并且蛋白酶是包含突变S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297P的、SEQ ID NO:3的多肽的变体，例如是与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的变体，例如其中蛋白酶包含具有突变S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297P的、SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。

在本文任何实施例中(其中组合物的pH不超过约9并且电导率不超过约4.0mS/cm)，该组合物优选地与具有4.2mS/cm的电导率的参比组合物相比、以及优选地与具有4.5mS/cm的电导率的参比组合物相比具有改善的洗涤性能，其中pH和电导率是在20℃、在去离子水中的5g/l溶液中确定的。洗涤性能可以是例如使用AMSA测定如以下实例中所述确定的。

除了本文具体披露的氨基酸改变之外，本发明组合物中的蛋白酶变体可包括在一个或多个其他位置处的另外的改变。这些另外的改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。

保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。通常不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见的保守取代基团包括但不限于：G＝A＝S；I＝V＝L＝M；D＝E；Y＝F；以及N＝Q(其中例如“G＝A＝S”表示这三个氨基酸可以彼此取代)。

可替代地，这些氨基酸改变具有这样的性质：改变多肽的物理化学特性。例如，氨基酸改变可以提高多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH，等等。

可以根据本领域已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的蛋白酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可以通过对结构的物理分析来确定，如通过诸如下述技术来确定：核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。

洗涤剂组合物

在一个实施例中，本发明涉及如上所述的中性pH和优选地低电导率粉末组合物，所述组合物包含蛋白酶，还包含选自下组的一种或多种另外的酶，该组由以下组成：淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶(例如内切葡聚糖酶)、角质酶、卤代过氧合酶(haloperoxygenase)、脂肪酶、甘露聚糖酶、果胶酶、果胶裂合酶、过氧物酶、蛋白酶、黄原胶酶、地衣多糖酶和木葡聚糖酶，或其任何混合物。

洗涤剂组合物可以是例如呈常规的或压制的粉末、颗粒、均匀的片剂、或具有两层或更多层的片剂的形式。组合物(例如粉末、颗粒或片剂)也可以形成在多个隔室小袋或荚中的复合组合物(例如隔室)的一部分。

本发明还涉及本发明的组合物在清洁过程，如衣物洗涤或硬表面清洁如餐具洗涤中的用途。

洗涤剂组合物的另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。对于织物护理，组分的选择可以包括以下考虑：待清洁的织物的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制。

在具体实施例中，洗涤剂组合物包含蛋白酶和一种或多种非天然存在的洗涤剂组分，如表面活性剂、水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelatingagent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂以及增溶剂。洗涤剂组合物通常包括至少表面活性剂和助洗剂。

在一个实施例中，可以将蛋白酶以对应于以下的量添加至洗涤剂组合物中：0.01-200mg酶蛋白/升洗涤液，优选0.05-50mg酶蛋白/升洗涤液，特别是0.1-10mg酶蛋白/升洗涤液。

用于衣物洗涤的颗粒状组合物可以例如包括按该组合物的重量计0.001％-20％、如0.01％-10％、如0.05％-5％的酶蛋白。

自动餐具洗涤(ADW)组合物例如可以包括按该组合物的重量计0.001％-30％，例如0.01％-20％、如0.1％-15％、如0.5％-10％的酶蛋白。

可以使用常规的稳定剂来稳定酶，如蛋白酶，这些稳定剂例如多元醇如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物例如芳香族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸，并且可以如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中所述配制该组合物，或者如在WO 2005/105826和WO 2009/118375中所述的可使用肽醛或酮对蛋白酶进行稳定。

该洗涤剂组合物可以配制在用于衣物洗涤的颗粒洗涤剂中。例如，这类洗涤剂可包含：

a)每克组合物至少0.01mg蛋白酶

b)阴离子表面活性剂，优选地5wt％至50wt％

c)非离子表面活性剂，优选地1wt％至8wt％

d)助洗剂，优选地5wt％至40wt％，如碳酸盐、沸石、磷酸盐助洗剂、钙掩蔽助洗剂或络合剂。

尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被本领域技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。

洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子型和/或阳离子型和/或非离子型和/或半极性型和/或兼性离子型、或其混合物。在特定的实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％(如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择所述一种或多种表面活性剂，并且所述表面活性剂包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。表面活性剂降低洗涤剂中的表面张力，这使得清洁的污渍被提起并分散，并且然后洗去。

当包括于其中时，洗涤剂通常将含有按重量计从约1％至约40％，如从约5％至约30％，包含从约5％至约15％或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(例如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括磺酸甲酯(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯、及其组合。

当包括于其中时，洗涤剂通常将含有按重量计从约0％至约10％的阳离子表面活性剂。阳离子型表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、及其组合。

当包括于其中时，洗涤剂通常将含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％、特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％、如从约3％至约5％或从约8％至约12％。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。

当包括在其中时，洗涤剂通常将含有按重量计从约0％至约10％的半极性表面活性剂。半极性型表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)(例如烷基二甲基氧化胺)、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。

当包括在其中时，洗涤剂通常将含有按重量计从约0％至约10％的两性离子表面活性剂。兼性离子型表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。

洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65％(如约5％至约45％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％，特别是50％-65％。助洗剂和螯合剂例如通过从液体中除去金属离子来软化洗涤水。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合试剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氨基三乙醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)及其组合。

在优选的实施例中，洗涤剂组合物不含磷酸盐。

洗涤剂组合物还可以含有按重量计0％-20％，如约5％至约10％的洗涤剂共助洗剂或其混合物。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂，或与助洗剂(例如沸石助洗剂)组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四-(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMPA或DTMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 2009/102854和US 5,977,053中。

本发明的枯草杆菌酶变体也可以配制在餐具洗涤组合物中，优选是自动餐具洗涤组合物(ADW)，该组合物包含：

a)至少0.01mg的根据本发明的活性蛋白酶变体，和

b)10wt％-50wt％的助洗剂，优选地选自柠檬酸、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)及其混合物，和

c)至少一种漂白组分。

洗涤剂可以含有按重量计0-50％，如约0.1％至约25％的漂白系统。漂白系统去除经常因氧化所致的褪色，并且许多漂白剂还具有强的杀菌特性，并且用于消毒和灭菌。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源，例如过碳酸钠和过硼酸钠，预成型过酸及其混合物。合适的预成型过酸包括但不限于：过氧羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acids)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))、及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白系统，其可以包含例如无机盐，包括碱金属盐例如过硼酸盐的钠盐(通常为单或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。

术语漂白活化剂在本文意指与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。在此将使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧月桂酸、4-(十二酰基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰基氧基)-苯磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。目的漂白活化剂的具体家族披露于EP624154中并且该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酯如三乙酸甘油酯具有环境友好的优点，因为它最终降解成柠檬酸和醇。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在存储时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，ATC为衣物洗涤添加剂提供良好的助洗能力。可替代地，漂白系统可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜类型的过氧酸。漂白系统还可以包含过酸，例如6-(苯二甲酰亚氨基)过己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂或促进剂。

可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；特别优选的是锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物，特别是Me3-TACN，如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2”-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物，如铁或钴络合物。

在一些实施例中，漂白组分可以是选自下组的有机催化剂，该组由具有下式的有机催化剂组成：

(iii)及其混合物；其中每个R

水溶助剂是溶解水溶液中的疏水化合物(或相反地，非极性环境中的极性物质)的化合物。通常，水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲特性，如由表面活性剂已知的)；然而水溶助剂的分子结构一般并不有利于自发自聚集，参见例如Hodgdon和Kaler的综述,2007,Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体&界面科学新见]12:121-128。水溶助剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他明确定义的中间相。相反，许多水溶助剂显示连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。通常地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中使用水溶助剂。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，例如相分离或高黏度。

所述洗涤剂可以含有按重量计0％-5％，如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠及其组合。

洗涤剂可以含有按重量计0-10％(如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。

本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当该织物与一种洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包括该洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变该织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成的组的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如如WO 2005/003274、WO 2005/003275、WO 2005/003276以及EP 1876226(通过引用并入本文)中所描述的。该洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt.％至约0.2wt.％、从约0.00008wt.％至约0.05wt.％、或甚至从约0.0001wt.％至约0.04wt.％的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt.％至0.2wt.％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。

洗涤剂添加剂或洗涤剂组合物可以包括一种或多种酶，如淀粉酶、阿拉伯糖酶、糖酶、纤维素酶(例如，内切葡聚糖酶)、角质酶、半乳聚糖酶、卤代加过氧酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、氧化酶(例如漆酶和/或过氧化物酶)、果胶酶、果胶裂合酶、蛋白酶、木聚糖酶、黄原胶酶、或木葡聚糖酶。

选择的一种或多种酶的特性应当与所选择的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶成分或非酶成分的相容性等)。

合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、枝顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。

尤其适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。这类纤维素酶的实例为在EP 495257、EP 531372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中描述的纤维素酶。其他实例为纤维素酶变体，例如在WO 94/07998、EP 531315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及PCT/DK 98/00299中描述的那些。

表现出内切-β-1,4-葡聚糖酶活性(EC 3.2.1.4)的纤维素酶的实例描述于WO 02/99091中。

纤维素酶的其他实例包括描述于WO 96/29397中的家族45纤维素酶，并且尤其是在对应于WO 02/99091的SEQ ID NO:8中的以下位置的一个或多个位置处具有取代、插入和/或缺失的其变体：2、4、7、8、10、13、15、19、20、21、25、26、29、32、33、34、35、37、40、42、42a、43、44、48、53、54、55、58、59、63、64、65、66、67、70、72、76、79、80、82、84、86、88、90、91、93、95、95d、95h、95j、97、100、101、102、103、113、114、117、119、121、133、136、137、138、139、140a、141、143a、145、146、147、150e、150j、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160c、160e、160k、161、162、164、165、168、170、171、172、173、175、176、178、181、183、184、185、186、188、191、192、195、196、200、和/或20，优选地从P19A、G20K、Q44K、N48E、Q119H或Q146 R中选择。

可商购的纤维素酶包括

该组合物可包含一种或多种另外的蛋白酶，这些蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源，例如植物或微生物来源的那些。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如属于S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，例如来自M5、M7或M8家族的那些。

金属蛋白酶的实例是如描述于WO 2007/044993(杰能科国际公司(GenencorInt.))中的中性金属蛋白酶，如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。

合适的可商购的蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：

合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如，如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、假单胞菌属物种菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 2010/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 2010/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 2011/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 2011/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 2011/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO 2011/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 2012/137147)。

其他实例是例如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 2007/87508以及WO 2009/109500中所描述的那些脂肪酶变体。

优选的商业化脂肪酶产品包括Lipolase

另外其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 2010/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 2005/056782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 2009/067279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(尤其是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 2010/100028)。

可以与蛋白酶一起使用的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。

适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/19467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。

不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/10355中的SEQ ID NO 6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。

其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：

M197T；

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或

G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。

其他适合的淀粉酶是具有WO 99/19467中的SEQ ID NO:6序列的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。

可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/23873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/23873的SEQ ID 2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。

可以使用的其他淀粉酶是具有WO 2008/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 2008/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 2009/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，

其中所述变体是C-末端截短的并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 2013/184577的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K、以及G477K中具有取代，和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体包含以下取代：

E187P+I203Y+G476K

E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K

并且任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 2010/104675的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。

SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K和G478K，和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体包含取代N21D+D97N+V128I，并且任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K及R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置处另外具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。

其他实例是例如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078及WO2013/001087中的那些淀粉酶变体。可商购的淀粉酶包括Duramyl

一种优选的淀粉酶是WO 2016/180748中具有SEQ ID NO:13的淀粉酶的变体，具有改变H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K。

另一种优选的淀粉酶是WO 2013/001078中具有SEQ ID NO:1的淀粉酶的变体，具有改变D183*+G184*+W140Y+N195F+V206Y+Y243F+E260G+G304R+G476K。

另一种优选的淀粉酶是WO 2018/141707中具有SEQ ID NO:1的淀粉酶的变体，具有改变

H1*+G7A+G109A+W140Y+G182*+D183*+N195F+V206Y+

Y243F+E260G+N280S+G304R+E391A+G476K。

另一种优选的淀粉酶是WO 2017/191160中具有SEQ ID NO:1的淀粉酶的变体，具有改变L202M+T246V。

合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属，例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。

可商购的过氧化物酶包括Guardzyme

还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇，例如丙二醇)、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。

洗涤剂产品的配制

一种或多种洗涤剂酶，即蛋白酶和任选地一种或多种另外的酶可以通过添加含有一种或多种酶的单独的添加剂，或通过添加包含这些酶的组合添加剂而被包含于洗涤剂组合物中。可以配制包含一种或多种酶的洗涤剂添加剂，例如，配制为颗粒，特别是无粉尘颗粒。

本发明的洗涤剂组合物可以呈任何方便的形式，例如，常规的或压制的粉末、颗粒、均匀的片剂、具有两层或更多层的片剂。粉末组合物(例如粉末、颗粒或片剂)也可以形成在多个隔室小袋或荚中的复合组合物(例如隔室)的一部分。

小袋(荚)可以被配置为单个或多个隔室，并且可以是适用于保存该组合物的任何形式、任何形状、和任何材料，不允许该组合物在与水接触之前从该小袋中释放出。袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。该内体积可以分成小袋的区室。优选的膜是聚合材料，优选地被成型为膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量典型地将是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物，该共混物组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商标名称(Tradereference)M8630下，如由美国印第安纳州盖里(Gary,Indiana,US)的克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。小袋可以包含例如由水溶性膜分隔的固体衣物洗涤剂组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同。参见，例如US 2009/0011970。

可以由水可溶的小袋中或片的不同层中的隔室来将洗涤剂成分物理地彼此分离，从而避免了部件之间的负储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

颗粒(粉末)洗涤剂中通常使用呈颗粒形式的酶，包含含酶的核芯和任选的一个或多个包衣。用于制备核芯的各种方法在本领域中是众所周知的，并且包括例如a)喷雾干燥含液体酶的溶液，b)产生分层产物，其中酶被包衣为围绕预形成的惰性核芯颗粒的层，例如使用流化床装置进行，c)将酶吸收到预形成的核芯的表面上和/或其中，d)挤出含酶的糊剂，e)将含酶的粉末悬浮在熔融蜡中并雾化以产生粒状产品，f)通过将含酶的液体添加到制粒组分的干粉组合物中来进行混合制粒，g)通过研磨或粉碎较大的颗粒、小丸等对含酶的核芯进行粒度减小，以及h)流化床制粒。可以干燥含酶的核芯(例如使用流化床干燥器或用于在进料或酶工业中干燥颗粒的其他已知方法)，导致通常为0.1-10％w/w水的含水量。

含酶的核芯可任选地提供涂层以改善储存稳定性和/或减少粉尘形成。通常用于洗涤剂的酶颗粒的一种涂层是盐涂层，通常是无机盐涂层，其可以是例如用流体床以盐的溶液施加的。可以使用的其他包衣材料是例如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)和聚乙烯醇(PVA)。颗粒可含有多于一个涂层，例如盐涂层，然后是诸如PEG、MHPC或PVA的材料的另外的涂层。

有关酶颗粒及其制备的更多信息，参见WO 2013/007594以及例如：WO 2009/092699、EP 1705241、EP 1382668、WO 2007/001262、US 6,472,364、WO 2004/074419和WO2009/102854。

用途

本发明还涉及用于在纺织品和织物的洗涤例如家用衣物洗涤和工业衣物洗涤中使用洗涤剂组合物的方法。

本发明还涉及洗涤剂组合物在清洁过程如衣物洗涤和/或硬表面清洁如餐具洗涤中的用途。

本发明的洗涤剂组合物可以配制为(例如)手洗或机洗衣物洗涤剂组合物，包括适用于预处理有污迹的织物的洗衣添加剂组合物，和漂洗添加的织物软化剂组合物，或配制为用于一般家用硬表面清洁操作的洗涤剂组合物，或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。

该清洁过程或纺织品护理过程可以例如是衣物洗涤过程、餐具洗涤过程或硬表面(例如浴室瓷砖、地板、桌面、排水管、水槽以及脸盆)清洁。衣物洗涤过程可以例如是家用衣物洗涤，但是也可以是工业衣物洗涤。此外，本发明涉及用于洗涤织物和/或衣物的方法，其中该方法包括用含有本发明的洗涤剂组合物的洗涤溶液处理织物。例如，可以在机器洗涤或者在手动洗涤中进行清洁过程或纺织品保养过程。洗液可以是例如含有洗涤剂组合物的水性洗液。

本发明进一步涉及洗涤剂组合物在去除蛋白质污渍过程中的用途。蛋白质污渍可以是如以下的污物，如：食物污渍，例如婴儿食品、可可、蛋或奶，或其他污渍如皮脂、血液、墨水或草、或其组合。

另一方面，本发明涉及包含5-100g含有蛋白酶和至少一种洗涤剂组分的粉末洗涤剂的洗涤剂组合物，及其在清洁过程如衣物洗涤或餐具洗涤中的用途，其中当将15g该洗涤剂在20℃溶解于15l去离子水中(对应于1g/l溶液)时，该组合物的pH不超过约9。在这一方面，组合物可以例如包含8-80g，如10-60g的粉末洗涤剂。在一个实施例中，这一方面的洗涤剂组合物是压制的组合物，例如呈高度压制的粉末或洗涤块的形式，包括例如10-50g、如10-40g、如10-30g或10-20g的粉末洗涤剂。

该方面的组合物的pH是如上文进一步概述的，即a)从约7.0至不超过约9.0，例如从约7.2至约8.9，如从约7.4至约8.8、如从约7.6至约8.7、如从约7.8至约8.6；b)从约7.0至约8.2，如从约7.2至约8.0；或c)从约7.8至约8.8，如从约8.0至约8.6。同样地在这方面，尽管pH通常是使15g洗涤剂溶解于15l的去离子水中(1g/L)来确定，但预期对于单位剂型、例如洗涤块，可以通过在20℃将一单位(例如一个洗涤块)溶解于15l的去离子水中并测量该溶液的pH来确定pH。

当将15g该洗涤剂在20℃溶解于15l去离子水中(即1g/l)时，优选地这一方面的组合物的电导率不超过约4.0mS/cm，如不超过约3.9mS/cm，如不超过约3.8mS/cm、如不超过约3.7mS/cm、如不超过约3.6mS/cm、如不超过约3.5mS/cm、如不超过约3.4mS/cm、如不超过约3.3mS/cm、如不超过约3.2mS/cm、如不超过约3.1mS/cm、如不超过约3.0mS/cm、如不超过约2.8mS/cm、如不超过约2.6mS/cm、如不超过约2.4mS/cm、如不超过约2.2mS/cm或不超过约2.0mS/cm。对于单位剂型、例如洗涤块，可以通过在20℃将一单位(例如一个洗涤块)溶解于15l的去离子水中并测量该溶液的电导率来确定电导率。

在另一个实施例中，本发明涉及包含蛋白酶和至少一种洗涤剂组分的粉末洗涤剂组合物的用途，其中该组合物的pH不超过约9并且电导率不超过约4.0mS/cm，其中pH和电导率是在20℃、在该组合物在去离子水中的5g/l溶液中确定的，该组合物用于提供与具有4.2mS/cm的电导率的参比组合物相比、以及优选与具有4.5mS/cm的电导率的参比组合物相比改善的洗涤性能，所述电导率是在20℃、在去离子水中的5g/l溶液中确定的。在此实施例中，参比组合物与本发明组合物的区别在于其具有指出的更高的电导率，除此之外，其与本发明的组合物基本上类似(例如，在pH方面)。

该方面还涉及一种清洁方法，特别是用于清洁织物或纺织品，或用于餐具洗涤，该方法包括在适于清洁所述织物/纺织品或餐具的条件下使本方面的洗涤剂组合物与织物/纺织品或餐具接触。

根据该方面的组合物及其用途和清洁方法中的蛋白酶可以是上文进一步描述的任何蛋白酶。

本发明的另一方面涉及本文所述的蛋白酶在中性pH粉末洗涤剂组合物中的用途。

该方面的一个实施例涉及蛋白酶在粉末洗涤剂组合物中的用途，其中该组合物的pH不超过约9，其中pH是在20℃、在该组合物在去离子水中的5g/l溶液中确定的，并且其中该蛋白酶选自下组，该组由以下组成：

a)SEQ ID NO:1的多肽的变体，该变体包含以下突变组中的一组，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置：

·S99AD；

·S99D+S101E+S103A+V104I+G160S；

·S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I；

·S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D；

·Y167A+R170S+A194P；

·S99SE；

·S87N+S101G+V104N；

·S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E；或

·S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E；

b)SEQ ID NO:2的多肽或其变体，其包含以下突变组中的一组，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置：

·Y217L；

·S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Q；或

·S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Q；以及

c)SEQ ID NO:3的多肽或其变体，其包含突变S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297P，其中位置编号对应于SEQ ID NO:3的多肽的位置。

在该方面的另一个实施例中，本发明涉及蛋白酶在粉末洗涤剂组合物中的用途，其中该组合物的pH不超过约9，其中pH是在20℃、在该组合物在去离子水中的5g/l溶液中确定的，并且其中该组合物电导率还不超过约4.0mS/cm，其中电导率是在20℃、在该组合物在去离子水中的5g/l溶液中确定的，并且其中该蛋白酶是SEQ ID NO:1的多肽的变体，该变体包含以下突变组中的一组，其中位置编号对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置：

·S99AD；

·S99D+S101E+S103A+V104I+G160S；

·S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I；

·S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D；

·Y167A+R170S+A194P；

·S99SE；

·S87N+S101G+V104N；或

·S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E。

在上述涉及本文所述的蛋白酶在中性pH粉末洗涤剂组合物中的用途的实施例中，显而易见的是，蛋白酶以及pH值和电导率值可以适当地选自本文其他地方更详细描述的任何内容。

洗涤方法

本发明提供一种使用本发明的包含蛋白酶的洗涤剂组合物的清洁方法，特别是用于清洁织物或纺织品，或用于餐具洗涤。

清洁方法包括在适于清洁物体的条件下使物体与包含蛋白酶变体的洗涤剂组合物接触。在优选实施例中，洗涤剂组合物用于衣物或餐具洗涤过程中。

另一个实施例涉及用于从织物或纺织品去除污渍的方法，该方法包括在适合于清洁该物体的条件下将该织物或纺织品与本发明的组合物接触。

另一个实施例涉及用于从餐具去除污渍的方法，该方法包括在适合于清洁该物体的条件下将该餐具与本发明的组合物接触。

可以在溶液中按以下浓度使用组合物：从约100ppm，优选地500ppm至约15,000ppm。水温范围典型地是从约5℃至约95℃，包括约10℃、约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃和约90℃。水与织物比率典型地是从约1:1至约30:1。

可以使用常规稳定剂和蛋白酶抑制剂来稳定本发明的洗涤剂组合物的一种或多种酶，例如多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、不同的盐(例如NaCl、KCl)、乳酸、甲酸、硼酸、或硼酸衍生物(例如，芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物(如4-甲酰苯基硼酸))、或肽醛(如二肽醛、三肽醛或四肽醛或醛类似物)(或者具有形式B1-B0-R，其中R是H、CH3、CX3、CHX2、或CH2X(X＝卤素)，B0是单个氨基酸残基(优选地具有一个任选取代的脂肪族或芳香族侧链)；并且B1由一个或多个氨基酸残基组成(优选一个、两个或三个)，任选地包含一个N-末端保护基团，或者如描述于WO 2009/118375、WO 98/13459中的)或者蛋白类型的蛋白酶抑制剂，例如RASI、BASI、WASI(水稻、大麦和小麦的双功能α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或CI2或SSI。该组合物可以例如如WO 92/19709、WO 92/19708和US 6,472,364中所述进行配制。在一些实施例中，本文采用的这些酶由存在于为这些酶提供此类离子的成品组合物中的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子的水溶性来源，连同其他金属离子(例如，钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)以及氧钒(IV))稳定化。

通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应当理解为对本发明的范围进行限制。

实例

材料与方法

通过本领域已知的标准方法进行突变和将表达盒引入枯草芽孢杆菌中。所有DNA操纵都是通过PCR(例如，描述于Sambrook等人,2001,见上文)使用本领域技术人员已知的标准方法进行的。

将编码枯草杆菌酶多肽的重组枯草芽孢杆菌构建体接种到复合培养基(TBgly)中培养，并在37℃下培养24h进行抗生素选择。将过夜培养物以1:100的比例接种到含有丰富培养基(PS-1：100g/L蔗糖(丹尼斯克(Danisco)目录号109-0429)、40g/L大豆壳(大豆粉)、10g/L Na

如下进行培养上清液的纯化：将培养液在26000x g离心20分钟，并且将上清液小心地与沉淀物倾析分开。上清液通过耐洁(Nalgene)0.2μm过滤装置过滤以便去除剩余宿主细胞。用3M Tris碱将0.2μm滤液中的pH调节至pH 8，并将pH调节的滤液应用于在20mMTris/HCl、1mM CaCl

为了评定衣物洗涤性能，在洗涤中使用自动机械应力测定(AMSA)进行洗涤实验。使用AMSA，可以检査大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有许多用于测试溶液的槽和盖子，盖子针对所有槽开口强力挤压衣物洗涤样品(待洗涤的纺织品)。在洗涤时间期间，板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈摇动以使测试溶液与纺织品接触并以规则的、周期性摆动方式施加机械应力。关于进一步描述，参见WO 02/42740，尤其是第23-24页的“Special method embodiments”[特殊方法实施例]段落。

在以下指定的实验条件下进行衣物洗涤实验：

模式洗涤剂、蛋白酶和测试材料如下：

测试了以下蛋白酶：

测试材料获得自EMPA试验材料AG(EMPA Testmaterials AG

通过将CaCl

将洗涤性能作为所洗涤的纺织品的颜色的亮度进行测量。也可以将亮度表示为当用白光照射样品时从样品反射的光的强度。当样品受污时，反射光的强度低于干净样品。换言之，更清洁的样品将反射更多的光线，并将具有更高的强度。因此，反射光的强度可以用来衡量洗涤性能。

颜色测量使用专业平台式扫描仪(Kodak iQsmart,Kodak,Midtager 29,DK-2605

为了从扫描的图像中提取光强度的值，将来自图像的24-位像素值转化为红色、绿色以及蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int)：

实例1

蛋白酶在不同模式洗涤剂中的洗涤性能

使用上述AMSA方法在不同模式洗涤剂中研究了蛋白酶编号1(SEQ ID NO:1+S99AD)的洗涤性能。在20℃确定的Δ强度值在表1中示出。

使用上述“材料与方法”部分中指明的剂量，即对于粉末模式洗涤剂2、3和4为大约5g/l(5和5.3g/l之间)和对于粉末模式洗涤剂1为2.5g/l，在20℃，在洗涤剂组合物于硬度为15°dH的水中的溶液里，测量粉末模式洗涤剂的指明的pH值。

从表1中清楚地是，蛋白酶编号1在低pH粉末洗涤剂洗衣粉模式洗涤剂1、2和3中均显示出良好的洗涤性能，而在高pH粉末洗涤剂洗衣粉模式洗涤剂4中可检测到显著降低的性能，在低酶剂量尤其如此。这是令人惊讶的，因为已知蛋白酶编号1是具有高pI的蛋白酶，其在高pH餐具洗涤洗涤剂中显示出优异的洗涤性能，因此不预期其在用于衣物洗涤的较低pH粉末洗涤剂中表现同样良好。

实例2

不同蛋白酶在不同模式洗涤剂中的相对洗涤性能

使用AMSA方法，在四种不同模式粉末洗涤剂中研究了具有上文所示的序列和突变的蛋白酶1-15的相对洗涤性能。将性能与参比蛋白酶

除了洗涤剂溶液的pH值之外，表2还示出了在上文于材料与方法部分中指明的剂量下的测量的电导率。参照在上文于材料与方法部分中指明的洗涤剂剂量，明显地，洗衣粉模式洗涤剂1的剂量与5g/L的“标准”剂量不同。这是因为为了确定洗涤性能，在本文中已加入了不同模式洗涤剂，其用量近似于制造商针对相关市场中所讨论的洗涤剂类型推荐的典型剂量。同样，使用15°dH水和各个洗涤剂剂量(而不是去离子水)确定电导率。

表2中的结果表明，与参比蛋白酶

据信这与模式洗涤剂3具有4.2mS/cm的相对较高的电导率这一事实有关。相比之下，其他两种低pH模式洗涤剂1和2分别具有1.4和2.5mS/cm的低得多的电导率。因此，对于一些蛋白酶，洗涤剂组合物具有相对较低的pH足以获得改善的相对洗涤性能，而对于其他蛋白酶，不仅需要低pH，而且似乎也需要低电导率。在任何情况下，在模式洗涤剂1和2中相对较低的pH和相对较低的电导率的组合导致所有蛋白酶1-15的相对性能改善。

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> 粉末洗涤剂组合物

<130> 14937-WO-PCT

<160> 3

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 269

<212> PRT

<213> 迟缓芽孢杆菌

<400> 1

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 2

<211> 275

<212> PRT

<213> 解淀粉芽孢杆菌

<400> 2

Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu

1 5 10 15

His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp

20 25 30

Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala

35 40 45

Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His

50 55 60

Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly

65 70 75 80

Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu

85 90 95

Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu

100 105 110

Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly

115 120 125

Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala

130 135 140

Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly

145 150 155 160

Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala

165 170 175

Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val

180 185 190

Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr

195 200 205

Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser

210 215 220

Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn

225 230 235 240

Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys

245 250 255

Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala

260 265 270

Ala Ala Gln

275

<210> 3

<211> 311

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 3

Ala Val Pro Ser Thr Gln Thr Pro Trp Gly Ile Lys Ser Ile Tyr Asn

1 5 10 15

Asp Gln Ser Ile Thr Lys Thr Thr Gly Gly Ser Gly Ile Lys Val Ala

20 25 30

Val Leu Asp Thr Gly Val Tyr Thr Ser His Leu Asp Leu Ala Gly Ser

35 40 45

Ala Glu Gln Cys Lys Asp Phe Thr Gln Ser Asn Pro Leu Val Asp Gly

50 55 60

Ser Cys Thr Asp Arg Gln Gly His Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val

65 70 75 80

Leu Ala His Gly Gly Ser Asn Gly Gln Gly Val Tyr Gly Val Ala Pro

85 90 95

Gln Ala Lys Leu Trp Ala Tyr Lys Val Leu Gly Asp Asn Gly Ser Gly

100 105 110

Tyr Ser Asp Asp Ile Ala Ala Ala Ile Arg His Val Ala Asp Glu Ala

115 120 125

Ser Arg Thr Gly Ser Lys Val Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Ser Ser

130 135 140

Ala Lys Asp Ser Leu Ile Ala Ser Ala Val Asp Tyr Ala Tyr Gly Lys

145 150 155 160

Gly Val Leu Ile Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Ser Gly Ser Asn

165 170 175

Thr Ile Gly Phe Pro Gly Gly Leu Val Asn Ala Val Ala Val Ala Ala

180 185 190

Leu Glu Asn Val Gln Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Val Ala Asp Phe Ser

195 200 205

Ser Arg Gly Asn Pro Ala Thr Ala Gly Asp Tyr Ile Ile Gln Glu Arg

210 215 220

Asp Ile Glu Val Ser Ala Pro Gly Ala Ser Val Glu Ser Thr Trp Tyr

225 230 235 240

Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His

245 250 255

Val Ala Gly Leu Ala Ala Lys Ile Trp Ser Ala Asn Thr Ser Leu Ser

260 265 270

His Ser Gln Leu Arg Thr Glu Leu Gln Asn Arg Ala Lys Val Tyr Asp

275 280 285

Ile Lys Gly Gly Ile Gly Ala Gly Thr Gly Asp Asp Tyr Ala Ser Gly

290 295 300

Phe Gly Tyr Pro Arg Val Lys

305 310