一种重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的用途

技术领域

本发明属于抗病毒研究领域，并且具体地涉及一种重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在用于抑制冠状病毒科病毒活性中的用途；以及其在制备用于预防或治疗受试者中与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状的药物中的用途。

背景技术

冠状病毒是个大型病毒家族，其在系统分类上属于套式病毒目(Nidovirales) 冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。冠状病毒直径约为80～120nm，基因组5’端具有甲基化的帽状结构，3’端具有 poly(A)尾，基因组全长约27-32kb，是目前已知RNA病毒中基因组最大的病毒。然而，冠状病毒仅感染脊椎动物，例如人、鼠、猪、猫、犬、狼、鸡、牛、禽类，是许多家畜、宠物包括人类疾病的重要病原，引起多种急慢性疾病。

新型冠状病毒的传染性极强，传播途径主要为直接传播、气溶胶传播和接触传播。直接传播是指患者喷嚏、咳嗽、说话的飞沫，呼出的气体近距离直接吸入导致的感染；气溶胶传播是指飞沫混合在空气中，形成气溶胶，吸入后导致感染；接触传播是指飞沫沉积在物品表面，接触污染手后，再接触口腔、鼻腔、眼睛等粘膜，导致感染。人感染了新型冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。

目前，对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法，只能根据患者表现出来的症状进行处理。因此，提供一种可能适用于降低新型冠状病毒活性、甚至治疗新型冠状病毒引起的疾病的药物成为丞待解决的问题。申请人多年来致力于具有大分子结构的生物蛋白新药研发工作，特别是重组细胞因子基因衍生蛋白的研发，发现该类药物在肿瘤疾病的治疗，以及抑制慢性乙肝病毒活性具有良好的效果，2018年4月，申请人的相关产品“乐复能”治疗慢性乙型肝炎的适应症已获新药证书并投产。申请人的相关专利CN200910077177.0公开了这类生物蛋白应用于乙型肝炎、水疱性口炎病毒等多种病毒。出人意外地，申请人发现，其自主研发的重组细胞因子基因衍生蛋白对于冠状病毒科，特别是新型冠状病毒感染的疾病具有优异的治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于满足当前对有效抑制新型冠状病毒的药物的需求，提供一种适用于降低新型冠状病毒活性、甚至治疗新型冠状病毒引起的疾病的药物。因此，发明人在经过了大量实验研究后，发现了一种重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在抑制新型冠状病毒时表现出非常优异的效果，从而完成了本发明。

在一方面，本发明提供了一种重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在用于抑制冠状病毒科病毒活性中的用途，其中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白包含氨基酸序列SEQID NO：1、或与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在一个实施方式中，所述冠状病毒科病毒的聚合酶被抑制。

在一个实施方式中，所述冠状病毒科病毒可以为COVID-19、HCoV-229E、 HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、MERS-CoV或SARS-CoV。在另一个具体实施方式中，所述冠状病毒科病毒可以为COVID-19

在一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQID NO：1具有至少93％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少 95％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少98％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列 SEQ ID NO：1具有至少99.9％同一性的氨基酸序列。

在一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的50％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的70％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的90％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的99％以上的连续片段。

在一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段可以具有相比人干扰素α2b(HuIFN-α2b)而言增强的抗冠状病毒科病毒活性。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少2倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少5倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少10倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少 50倍。

在另一方面，本发明还提供了上述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在制备用于预防或治疗受试者中与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状的药物中的用途。

在一个实施方式中，所述药物可以包含治疗有效量的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。在另一个实施方式中，所述药物还可以包含治疗有效量的至少一种其他抗病毒剂或其组合物，所述抗病毒剂选自皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体或激动剂或支气管扩张剂、PD1抑制剂、IL6抑制剂、抗胆碱能药、粘液分解剂以及其它用于治疗冠状病毒感染的药物，以及它们的混合物。在另一个具体实施方式中，所述其它抗病毒剂为瑞德西韦、法匹拉韦、磷酸氯喹、阿比朵尔、达芦那韦、洛匹那韦、干扰素、利巴韦林、拉米夫定、恩曲他滨、替诺福韦、阿昔洛韦、伐昔洛韦、金刚烷胺、金刚乙胺、恩夫韦地、马拉韦罗、更昔洛韦、沙奎那韦、奥司他韦、扎那米韦、泛昔洛韦、齐多夫定、依法韦伦或奈韦拉平，以及它们的混合物。

在一个实施方式中，所述药物可以制备为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、雾化剂、喷雾剂或注射剂。

在一个实施方式中，所述受试者可以为人类。

在一个实施方式中，所述疾病可以包括急性呼吸疾病、病毒性肺炎、严重急性呼吸综合征、结膜炎和肾衰竭中的至少一种。在另一个实施方式中，所述症状可以包括鼻塞、流涕、发热、咳嗽、咽痛、胸闷、气促、乏力、食欲不佳、恶心呕吐、腹泻、肌肉酸痛、呼吸困难和低氧血症中的至少一种。

经过研究后发现，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段具有优异的抑制冠状病毒科病毒活性的效果，因而具备作为用于预防或治疗受试者中与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状的药物的潜力。具体地，与作为本领域中的常用抗病毒剂的人干扰素α2b相比，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少2倍、至少5倍、至少 10倍、至少50倍或更多。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1显示了乐复能药物对COVID-19病毒的抑制效果.

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

在详细描述本发明前，应当了解本发明不限于所述的特定蛋白质分子、方法、操作规程、细胞系、载体和试剂，因为都可以改变，还应了解，在此使用的术语只在于描述特定的实施方式，而不希望限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求书限定。

为了更完全地了解在此描述的本发明，采用以下术语，它们的定义如下所示。除非另外定义，在此使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员所理解的相同的含义，所有在此提及的出版物引入本文作为参考，以用于描述和公开在所述出版物中所报道的细胞系、载体和方法，其可用于本发明，在此没有任何事物可被认为承认了，本发明没有位于依据在前发明的此类公开内容之前的权利。

如本文所用的术语“干扰素”是指由多种真核细胞在暴露于各种不同的环境刺激(包括病毒感染或者接触促细胞分裂原)后产生的分泌型蛋白质家族，是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子，除了具有抗病毒特性以外，干扰素还显示出影响多种细胞功能。干扰素是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制，其类型主要分为三类，即α-(白细胞)型、β-(成纤维细胞) 型和γ-(淋巴细胞)型；同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力，它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。

如本文所用的术语“人干扰素α2b”或“HuIFN-α2b(Human Interferon-α2b)”是干扰素α亚型的一种常见类型，可以人为通过工程化的表达系统制备，被认为具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用，例如通常用于治疗某些病毒性疾病，例如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹或尖锐湿疣等；或者用于治疗某些肿瘤，例如毛细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、喉乳头状瘤、卡波氏肉瘤、卵巢癌、基底细胞癌或膀胱癌等。

如本文所用的术语“同一性”、“同源性”或“相似性”是指两个多核苷酸或多核苷酸部分之间的相似百分比(即与给定氨基酸序列或核苷酸序列匹配的程度)，并且它可以表示为百分比。在本发明中，将具有与给定氨基酸或核苷酸序列相同或相似活性的同源序列表示为“％同一性”。可以通过本领域已知的技术确定从一部分到另一部分序列之间的同一性。例如，可以使用标准软件(具体为BLAST 2.0)鉴定同一性以用于计算例如评分、同一性和相似性的参数，或者通过在限定的严格条件下由Southern杂交比较序列。可以在本领域范围内定义适当的杂交条件，并且可以通过本领域技术人员熟知的方法确定该杂交条件(例如J.Sambrook等人，Molecular Cloning,A Laboratory Manual,第二次编辑, ColdSpring Harbor Laboratory press,Cold Spring Harbor,纽约,1989；F.M. Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,纽约)。

如本文所用的术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。在本发明中，“药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂等。

如本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指对于治疗的受试者以适用于任何药物治疗的合理受益/风险比赋予治疗效果的治疗性试剂的量。这样的治疗效果可以是客观的(即可以通过某种测试或标记测量) 或主观的(即受试者给出指示或感觉到效果)。在一些实施方式中，“治疗有效量”是指诸如通过改善与疾病有关的症状、预防或延迟疾病发作和/或还减轻疾病症状的严重性或频率来有效治疗、改善或预防(例如延迟发作)相关疾病或病症和/或表现出可检测的治疗或预防效果的治疗性试剂或组合物的量。

如本文所用的术语“治疗”是指根据治疗性方案的治疗性试剂的任何施用，所述治疗性方案达到所需效果，即部分或完全减轻、改善、缓解、抑制、延迟发作、降低严重程度和/或降低特定疾病、障碍和/或病症(例如慢性或复发性免疫应答和胃肠道(GI)炎症、慢性或复发性高血糖症)的一种或多种症状或特征的发生率；在一些实施方式中，根据治疗性方案的治疗性试剂的施用与所需效果的实现相关。这种治疗可以针对没有表现出相关疾病、障碍和/或病症的受试者和/或针对仅表现出疾病、障碍和/或病症的早期迹象的受试者。替代地或另外地，这种治疗可以针对表现出相关疾病、障碍和/或病症的一种或多种所确定迹象的受试者。在一些实施方式中，治疗可以针对已被诊断患有相关疾病、障碍和/或病症的受试者。在一些实施方式中，治疗可以针对已知具有一种或多种易感因素的受试者，所述易感因素在统计学上与相关疾病、障碍和/或病症发展的风险增加相关。

如本文所用的术语“受试者”、“患者”和“个体”是指人或非人动物。这些术语包括哺乳动物，例如人，非人灵长类动物、家畜(例如牛、猪、绵羊、山羊、家禽)、伴侣动物(例如犬、猫、马、兔)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方式中，该术语是指人受试者。在示例性实施方式中，该术语是指患有例如与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状、或其任何组合的人受试者。

如本文所用的术语“药物”包括在人和兽医学中用于人和动物的药物。另外，本文所用的术语“药物”是指提供治疗性和/或有益效果的任何物质。如本文所用的术语“药物”不一定限于需要获得市场批准的物质，而是可以包括可用于化妆品、营养食品、食品(例如包括饲料和饮料)、益生菌培养物、营养补品和自然疗法的物质。另外，本文所用的术语“药物”包括设计用于掺入动物饲料(例如家畜饲料和/或宠物食品)中的产品。

重组细胞因子基因衍生蛋白是一种干扰素的类似物，通常是通过重组技术而人工合成的，并非天然存在的。例如，可以通过将包含编码该重组细胞因子基因衍生蛋白的DNA分子的重组载体转染宿主细胞，从而获得重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段。该重组载体可以是例如质粒、噬菌体、病毒或逆转录病毒载体。逆转录病毒载体可以是能够复制的或复制缺陷的。在后一种情况下，病毒繁殖通常只发生在补充性宿主细胞中。

在一方面，本发明提供了一种重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在用于抑制冠状病毒科病毒活性中的用途，其中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白包含氨基酸序列SEQID NO：1、或与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列。

本发明的发明人经过研究发现，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段至少可以通过抑制所述冠状病毒科病毒的聚合酶而达到抑制冠状病毒科病毒活性的效果。因此，在一些实施方式中，所述冠状病毒科病毒的聚合酶可以被抑制。另外，所述冠状病毒科病毒可以包括目前所有已知的所有冠状病毒科病毒，以及将来进一步发现的属于冠状病毒科的类似病毒。就目前而言，所述冠状病毒科病毒可以特别地包括已知可以感染人类的冠状病毒科病毒，例如所述冠状病毒科病毒可以为COVID-19、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、 HCoV-HKU1、MERS-CoV或SARS-CoV。在另一个实施方式中，所述冠状病毒科病毒可以进一步特别地为COVID-19。

尽管本发明的抗冠状病毒科病毒活性的蛋白质可以直接为包含氨基酸序列 SEQID NO：1的蛋白质，但它不排除在氨基酸序列SEQ ID NO：1的上游或下游添加序列、可天然发生的突变或其沉默突变，当蛋白质具有与包括氨基酸序列SEQ ID NO：1的蛋白质相同或相应的活性时，该蛋白质属于具有本发明的抗冠状病毒科病毒活性的蛋白质对于本领域技术人员是显而易见的。因此，具有本发明的抗冠状病毒科病毒活性的蛋白质可以是包含氨基酸序列SEQ ID NO：1，或与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质。另外，显而易见的是任何在部分序列中具有缺失、修饰、取代或添加的氨基酸序列的蛋白质也可以属于本发明的范围，只要该蛋白质具有任何上述同一性的氨基酸序列，并表现出对应于上述蛋白质的效果。

因此，在一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少91％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1 具有至少92％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少93％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少94％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1 具有至少95％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少96％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少97％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1 具有至少98％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少99％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白可以包含与氨基酸序列SEQ IDNO：1具有至少99.9％同一性的氨基酸序列。

另外，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白可以以其片段形式(或称为“其部分形式”)存在，只要该片段也能够表现出对应于上述蛋白质的效果即可。因此，在一个实施方式中，在不影响上述蛋白质的功能效果的情况下，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的一部分的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的 50％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的60％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的70％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的 80％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的90％以上的连续片段。在另一个实施方式中，所述片段可以为具有重组细胞因子基因衍生蛋白的全长序列的99％以上的连续片段。

如前所述，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在抑制新型冠状病毒时表现出非常优异的效果，可能适用于降低新型冠状病毒活性、甚至治疗新型冠状病毒引起的疾病的药物。在本发明中，发明人将该重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性与本领域中常见的广谱抗病毒剂人干扰素α2b(HuIFN-α2b)进行了对比，发现了该重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段具有相比人干扰素α2b(HuIFN-α2b)而言增强的抗冠状病毒科病毒活性。在一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少2倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少5倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少10倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b 的至少20倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少50倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为 HuIFN-α2b的至少100倍。在另一个实施方式中，所述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性可以为HuIFN-α2b的至少200倍。

在另一方面，本发明还提供了上述重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段在制备用于预防或治疗受试者中与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状的药物中的用途。在一个实施方式中，所述药物可以包含治疗有效量的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段，以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

在本发明中，待施用药物的受试者或患者可以为人或非人动物，具体地可以包括哺乳动物，例如人，非人灵长类动物、家畜(例如牛、猪、绵羊、山羊、家禽)、伴侣动物(例如犬、猫、马、兔)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方式中，所述受试者为人受试者。

本领域的技术人员将认识到，待施用的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的治疗有效量将根据以下各项而变化：受试者和疾病的性质和严重程度、受试者的身体状况、治疗方案(例如是否使用第二治疗剂)、以及所选择的施用途径；合适的剂量可以由本领域的技术人员容易地确定。另外，该药物的个体剂量的最佳数量和间隔将通过所治疗的病状的性质和程度、施用的形式、途径和位置、以及所治疗的特定受试者的年龄和病状确定，并且医师将最终确定待施用的合适剂量。此剂量可以视需要重复多次。如果出现副作用，则可以根据正常临床实践改变或减少剂量的量和/或频率。在一个实施方式中，该药物可以便利地以每剂量含有预定量的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的单位剂型存在。这类单位可以含有0.5mg至5g，例如但不限于1mg、10mg、20mg、30mg、 40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、750mg、1000mg，或前述值的任何两个之间的任何范围，例如10mg至1000mg、20mg至50mg、或30mg至300mg。

根据多种临床因素，包括疾病类型、疾病严重程度和患者的敏感性，治疗方案可以从每月一次至每日一次变化。在具体实施方式中，该药物经每日一次、一周两次、一周三次、每隔一天一次、每5天一次、一周一次、每10天一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次或每月一次施用，或在前述值的任何两者之间的任何范围内施用，例如经每四天一次至每月一次、每10天一次至每两周一次、或一周两至三次施用等。

另外，根据例如待治疗的病状或施用途径，药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂可以采取广泛范围的形式。在本发明中，所述药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂具有很多种类，可以包括但不限于，例如缓冲剂、稳定剂、等渗调节剂、非离子洗涤剂、抗氧化剂和其他各种添加剂。

缓冲剂有助于将pH维持在接近生理条件的范围内。缓冲剂可以以约2mM 至约50mM范围的浓度存在。适合的缓冲剂包括有机和无机酸及其盐，诸如柠檬酸盐缓冲液、柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液、富马酸盐缓冲液、葡糖酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液、乳酸盐缓冲液和乙酸盐缓冲液。此外，可以使用磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和三甲胺盐，诸如Tris。等渗调节剂可以确保液体组合物的等渗性并且所述等渗调节剂包括多羟基糖醇、优选地三羟基或更高级糖醇，诸如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露糖醇。稳定剂是指广泛类别的赋形剂，它们的功能范围可以从填充剂至溶解治疗剂或有助于防止变性或粘附到容器壁的添加剂。典型的稳定剂可以是多羟基糖醇、氨基酸、有机糖或糖醇、环多醇、氨基酸聚合物、含硫的还原剂、低分子量多肽(例如具有10个残基或更少个残基的肽)、蛋白质、亲水性聚合物、二糖和多糖等。稳定剂可以在每重量份活性蛋白0.1至10000重量的范围内存在。非离子表面活性剂或洗涤剂(也称为“润湿剂”)可以有助于溶解该治疗剂以及保护该治疗性蛋白免受搅动诱导的聚集，这也允许该制剂暴露于剪切表面应力而不引起该蛋白质的变性。适合的非离子表面活性剂包括聚山梨酸酯(20、80等)、泊洛沙姆(184、188等)、Pluronic多元醇、聚氧乙烯脱水山梨聚糖单醚(

根据本发明，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段还可以任选地与其他一种或多种抗病毒剂共同施用，以达到更高的治疗效果。因此，在一个实施方式中，所述药物还可以包含治疗有效量的至少一种其他抗病毒剂或其组合物，所述抗病毒剂选自皮质类固醇、抗炎信号转导调节剂、β2-肾上腺素受体或激动剂或支气管扩张剂、PD1抑制剂、IL6抑制剂、抗胆碱能药、粘液分解剂以及其它用于治疗冠状病毒感染的药物，以及它们的混合物。在一个更具体的实施方式中，所述其他抗病毒剂可以为瑞德西韦、法匹拉韦、磷酸氯喹、阿比朵尔、达芦那韦、洛匹那韦、干扰素、利巴韦林、拉米夫定、恩曲他滨、替诺福韦、阿昔洛韦、伐昔洛韦、金刚烷胺、金刚乙胺、恩夫韦地、马拉韦罗、更昔洛韦、沙奎那韦、奥司他韦、扎那米韦、泛昔洛韦、齐多夫定、依法韦伦或奈韦拉平，以及它们的混合物。当该药物包含多种有效成分时，各有效成分可以根据医师的判断同时、依次或分开施用。

另外，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段可以通过多种途径施用于患者，这些途径诸如口服、透皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、区域或局部(例如粘膜)。在任何给定情况下最适合的施用途径将取决于受试者和疾病的性质和严重程度、以及受试者的身体状况等。在一个实施方式中，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段可以经静脉内施用。在另一个实施方式中，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段可以口服施用。相应地，根据不同的施用方式，本发明的药物可以制备为不同的剂型。例如，在一个实施方式中，所述药物可以制备为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、雾化剂、喷雾剂或注射剂。在一个优选的实施方式中，所述药物制备为喷雾剂。在一个更优选的实施方式中，所述药物为乐复能(Novaferon)。

基于本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的作用机制，其可以预防或治疗大部分与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状。具体地，在一个实施方式中，所述疾病可以包括急性呼吸疾病、病毒性肺炎、严重急性呼吸综合征、结膜炎和肾衰竭中的至少一种。在另一个实施方式中，所述症状可以包括鼻塞、流涕、发热、咳嗽、咽痛、胸闷、气促、乏力、食欲不佳、恶心呕吐、腹泻、肌肉酸痛、呼吸困难和低氧血症中的至少一种。

经研究发现，由本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段所制备的药物在预防或治疗与冠状病毒科病毒相关的疾病或症状中具备巨大的潜力。具体地，与作为本领域中的常用抗病毒剂的人干扰素α2b相比，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的预防或治疗效果可以为HuIFN-α2b的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍或更多。

以下，将通过实施例对本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的抗冠状病毒科病毒活性效果进行详细描述。

实施例

在本实施例中，采用96孔板法开展了乐复能(Novaferon，由杰华生物技术 (青岛)有限公司提供)体外抑制新型冠状病毒的检测工作，具体如下：

选用Vero细胞作为细胞株，以10000个细胞/孔(100μl)的细胞浓度单层铺满平板24h，而后选用COVID-19病毒作为病毒株，并以100PFU/孔接种于各孔中。在细胞被病毒感染2h后，向各孔中加入不同浓度的乐复能药物(浓度分别为0.001ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml)作为治疗组，并以未加入乐复能药物的孔作为对照组。

在用不同浓度的药物处理细胞24h后，分别取各孔中100μl细胞上清液进行核酸提取(天隆生物科技有限公司的全自动核酸提取仪)，并对提取的核酸进行 RT-PCR(TaKaRa)、qRT-PCR实验(Roche 480，靶标为ORF1a/b，正向引物(F)： CCCTGTGGGTTTTACACTTAA；反向引物(R)：ACGATTGTGCATCAGCTGA；荧光探针(P)：5ˊ-FAM-CCGTCTGCG..........-BHQ1-3')，以测量不同浓度药物下病毒的Ct值，结果参见表1。

表1乐复能药物对COVID-19病毒的抑制效果

然后，根据表1中的病毒Ct值计算并绘制不同药物浓度对病毒的抑制率，结果参见图1。经初步计算得出，乐复能对COVID-19病毒体外半数抑制浓度 IC50为1.02ng/ml。

从该结果可以看出，本发明的重组细胞因子基因衍生蛋白药物(例如乐复能)在体外对新型冠状病毒致细胞病变确实具有有效的抑制作用，其IC50值为1.02ng/ml，并且在本发明的药物浓度达到10ng/ml和100ng/ml时，已无明显细胞病变(CPE)。

另外，由于乐复能产品的雾化浓度为20μg/ml，约相当于其半数抑制浓度的 2万倍，因此可以确保雾化吸入后乐复能产品在呼吸道中的有效浓度，以抑制冠状病毒的复制。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

序列表

<110> 杰华生物技术（青岛）有限公司

<120> 一种重组细胞因子基因衍生蛋白或其片段的用途

<130> PD200020N

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>