一种CDH23基因突变体及其检测的试剂盒与应用

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种CDH23基因突变体及其检测的试剂盒与应用。

背景技术

遗传性聋可分为综合征性耳聋和非综合征性耳聋，其中约80％的非综合征型耳聋为常染色体隐性遗传。伴随耳聋遗传病因学及分子生物学技术的快速发展，至今已有超过100个基因座与常染色体隐性耳聋相关联。由不同致病基因导致的非综合征型耳聋在发病年龄、听力损失程度、进行性等方面存在明显差异。确定耳聋发病的致病基因有助于为患者选取合适的听力干预手段，更好地提高耳聋患者的生活质量。虽然一些常见基因得到了深入的认识，并使得耳聋分子病因学诊断成为可能。但由于遗传性耳聋具有很强的遗传异质性，目前仍有大量的致病基因未被鉴定，所以这方面的研究还有很大的空间，仍需要加强基因鉴定方面的研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种CDH23基因突变体及其检测的试剂盒与应用，该CDH23基因突变体可以用于筛查常染色体隐性耳聋致病突变携带者；也可用于常染色体隐性耳聋患者的分子诊断及与相关疾病的鉴别诊断，并且快速、准确、高效、简便、早期诊断率高，检测结果可以为常染色体隐性耳聋的早期诊断、鉴别诊断及药物治疗提供科学依据。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种CDH23基因突变体，与野生型CDH23基因的核苷酸序列相比，所述CDH23基因突变体的核苷酸具有下列突变：c.3890G>T和/或c.6649A>G；所述野生型CDH23基因具有序列表SEQ.ID.No.5的核苷酸序列；与野生型CDH23基因表达的多肽的氨基酸序列相比，所述CDH23基因突变体的多肽具有下列突变：p.Cys1297Phe和/或p.Lys2217Glu。所述野生型CDH23基因具有序列表SEQ.ID.No.6的氨基酸序列。

通过高通量外显子组测序联合候选基因突变验证的方法确定了感音神经性耳聋疾病新的致病基因突变位点(CDH23基因的c.3890G>T、c.6649A>G突变)。

本发明提出了一种编码CDH23基因突变体的核酸。所述核酸与与野生型CDH23基因的核苷酸序列(SEQ.ID.No.5)相比，具有选自下列的至少一种突变：c.3890G>T、c.6649A>G。即相对于野生型CDH23基因，本发明的CDH23基因具有错义突变c.6649A>G或c.3890G>T的至少一种。根据本发明的实施例，发明人确定了CDH23基因的新突变体，该突变体与感音神经性耳聋疾病的发病密切相关，从而通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患感音神经性耳聋疾病。

本发明提出了一种多肽，该多肽与野生型CDH23基因表达的多肽的氨基酸序列(SEQ.ID.No.6)相比具有p.Cys1297Phe突变和/或p.Lys2217Glu突变，通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易患感音神经性耳聋疾病。该多肽是由上述核苷酸编码的，上述c.3890G>T突变编码的蛋白为p.Cys1297Phe，而c.6649A>G突变编码的蛋白为p.Lys2217Glu。

本发明提出了一种筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的方法，该方法包括以下步骤：从生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核苷酸序列；所述核酸样本的核苷酸序列与野生型CDH23基因的核苷酸序列(SEQ.ID.No.5)相比，具有选自c.3890G>T、c.6649A>G的至少一种突变是所述生物样品易患感音神经性耳聋疾病的指示。

优选地，所述生物样品为选自人体血液、皮肤、皮下组织的至少一种。

优选地，所述核酸样本为全基因组DNA。

优选地，所述感音神经性耳聋疾病是常染色体隐性遗传疾病。

通过根据筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的方法，可以有效地筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品。

本发明还提供了一种检测上述CDH23基因突变体的试剂盒，所述试剂盒中包括检测所述CDH23基因突变体的试剂为核酸探针或特异性引物；

当所述CDH23基因突变体为c.3890G>T突变时，检测所述CDH23基因突变体的试剂为引物对1，所述引物对包括引物A和引物B；当所述CDH23基因突变体为c.6649A>G突变时，检测所述CDH23基因突变体的试剂为引物对2，所述引物对包括引物C和引物D；

所述引物A具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；

所述引物B具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；

所述引物C具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；

所述引物D具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。

本发明还提供了上述的试剂盒的应用，所述试剂盒用于筛选易患感音神经性耳聋疾病。

优选地，所述感音神经性耳聋疾病为常染色体隐性遗传疾病。

对于本发明提及基因序列，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条或者两条。为了方便，在本说明书和权利要求书中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如提及CDH23基因的cDNA序列，实际上可以包括/或不包括该序列以及其互补序列。例如，提及野生型CDH23基因的核苷酸序列(SEQ.ID.No.5)，实际可以包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦然。

本发明中的基因序列包括DNA形式或RNA形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。例如提及CDH23基因的cDNA序列，实际也包括相应的RNA序列。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

本发明的CDH23基因突变体可以用于筛查常染色体隐性耳聋致病突变携带者；也可用于常染色体隐性耳聋患者的分子诊断及与相关疾病的鉴别诊断，并且快速、准确、高效、简便、早期诊断率高，检测结果可以为常染色体隐性耳聋的早期诊断、鉴别诊断及药物治疗提供科学依据。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1是本发明实施例2的感音神经性耳聋患者家系的家系图谱。

图2是本发明实施例3的Sanger法测序图。

具体实施方式

实施例1

本实施例的CDH23基因突变体，与野生型CDH23基因的核苷酸序列相比，所述CDH23基因突变体的核苷酸具有下列突变：c.3890G>T和/或c.6649A>G；所述野生型CDH23基因具有序列表SEQ.ID.No.5的核苷酸序列；上述错义突变c.3890G>T为相对于野生型CDH23基因的cDNA的第3890位由G突变成T，c.6649A>G为相对于野生型CDH23基因的cDNA的第6649位由A突变成G。

本实施例确定了CDH23基因的新突变体，该突变体与感音神经性耳聋疾病的发病密切相关，从而通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患感音神经性耳聋疾病。

该编码CDH23突变体的核酸，是通过全外显子测序、家系分析联合Sanger测序验证的方法进行致病突变检测和验证。最终确定了CDH23基因上两个突变位点，且该突变位点在现有技术中并未被提到。

与野生型CDH23基因表达的多肽的氨基酸序列相比，所述CDH23基因突变体的多肽具有下列突变：p.Cys1297Phe和/或p.Lys2217Glu，所述野生型CDH23基因具有序列表SEQ.ID.No.6的氨基酸序列。

本实施例提出了一种编码CDH23基因突变体的核酸。所述核酸与与野生型CDH23基因的核苷酸序列(SEQ.ID.No.5)相比，具有选自下列的至少一种突变：c.3890G>T、c.6649A>G。即相对于野生型CDH23基因，本实施例的CDH23基因具有错义突变c.6649A>G或c.3890G>T的至少一种。本实施例确定了CDH23基因的新突变体，该突变体与感音神经性耳聋疾病的发病密切相关，从而通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患感音神经性耳聋疾病。

本实施例提出了一种多肽，该多肽与野生型CDH23基因表达的多肽的氨基酸序列(SEQ.ID.No.6)相比具有p.Cys1297Phe突变和/或p.Lys2217Glu突变，该多肽是由上述核苷酸编码的，上述c.3890G>T突变编码的蛋白为p.Cys1297Phe，而c.6649A>G突变编码的蛋白为p.Lys2217Glu。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易患感音神经性耳聋疾病。

本实施例提出了一种筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的方法，该方法包括以下步骤：从生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核苷酸序列；所述核酸样本的核苷酸序列与野生型CDH23基因的核苷酸序列(SEQ.ID.No.5)相比，具有选自c.3890G>T、c.6649A>G的至少一种突变是所述生物样品易患感音神经性耳聋疾病的指示；所述生物样品为选自人体血液、皮肤、皮下组织的至少一种；所述核酸样本为全基因组DNA。

首先，从所述生物样品提取核酸样本。根据本实施例的实施例，生物样品的类型并不受特别限制，只要从该生物样品中能够提取到反映生物样品CDH23是否存在突变的核酸样本即可。根据本实施例的实施例，生物样品可以为选自人体血液、皮肤、皮下组织的至少一种。由此，可以方便地进行取样和检测，从而能够进一步提高筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的效率。根据本实施例的实施例，这里所使用的术语“核酸样本”应做广义理解，其可以是任何能够反映生物样品中CDH23是否存在突变的样本，例如可以是从生物样品中直接提取的全基因组DNA，也可以是该全基因组中包含CDH23编码序列的一部分，可以是从生物样品中提取的总RNA，也可以是从生物样品中提取的mRNA。根据本实施例的一个实施例，所述核酸样本为全基因组DNA。由此，可以扩大生物样品的来源范围，并且可以同时对生物样品的多种信息进行确定，从而能够提高筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的效率。另外，根据本实施例的实施例，针对采用RNA作为核酸样本，从生物样品提取核酸样本可以进一步包括：从生物样品提取RNA样本，优选RNA样本为mRNA；以及基于所得到的RNA样本，通过反转录反应，获得cDNA样本，所得到的cDNA样本构成核酸样本。由此，可以进一步提高利用RNA作为核酸样本筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的效率。

通过根据筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的方法，可以有效地筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品。

上述的感音神经性耳聋疾病是常染色体隐性遗传疾病。当在CDH23基因突变体中同时出现c.3890G>T和c.6649A>G突变时，检测生物样品都患有的常染色体隐性遗传型感音神经性耳聋；携带其中任何一种突变不致病，但后代换感音神经性耳聋的几率大大增加。通过检测具有2个突变位点的CDH23基因突变体在生物样品中是否存在，可以准确有效地预测生物体是否患常染色体隐性遗传型感音神经性耳聋。

需要说明的是，根据本实施例实施例的“筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品的方法”的用途不受特别限制，例如可以用作非诊断目的的筛选方法。

本实施例还提供了一种检测上述CDH23基因突变体的试剂盒，所述试剂盒中包括检测所述CDH23基因突变体的试剂为核酸探针或特异性引物；

当所述CDH23基因突变体为c.3890G>T突变时，检测所述CDH23基因突变体的试剂为引物对1，所述引物对包括引物A和引物B；当所述CDH23基因突变体为c.6649A>G突变时，检测所述CDH23基因突变体的试剂为引物对2，所述引物对包括引物C和引物D；

所述引物A具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；

所述引物B具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；

所述引物C具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；

所述引物D具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。

利用根据本实施例的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易患感音神经性耳聋疾病的生物样品。本实施例中使用的术语“检测所述CDH23基因突变体的试剂”应做广义理解，即可以是检测CDH23编码基因的试剂，也可以是检测CDH23突变体多肽的试剂，例如可以采用识别特异性位点的抗体。

本实施例还提供了上述的试剂盒的应用，所述试剂盒用于筛选易患感音神经性耳聋疾病。

所述易患感音神经性耳聋疾病是常染色体隐性遗传疾病。

对于本实施例提及基因序列，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条或者两条。为了方便，在本说明书和权利要求书中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如提及CDH23基因的cDNA序列，实际上可以包括/或不包括该序列以及其互补序列。例如，提及野生型CDH23基因的核苷酸序列(SEQ.ID.No.5)，实际可以包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦然。

本实施例中的基因序列包括DNA形式或RNA形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。例如提及CDH23基因的cDNA序列，实际也包括相应的RNA序列。

实施例2

本实施例为确定感音神经性耳聋疾病的致病基因。

收集到一个2代的中国感音神经性耳聋患者家系，以及该家系外的100名正常人的基因。图1显示了感音神经性耳聋患者家系的家系图谱。其中，□表示正常男性，○表示正常女性，●表示女性患者。该家系共有5名成员，其中第二代两个女儿为感音神经性耳聋患者，第一代的父母为正常成员。

DNA提取

分别采取2名家系内患者、2名家系内正常人及家系外100名正常人外周静脉血，利用QIAmp Bloodkit(Qiagen，Hilden，Germany)抽提外周血白细胞的基因组DNA，并利用QubitFluorometer和琼脂糖凝胶电泳测量DNA的浓度及纯度，所得的每个标本基因组DNAOD

捕获测序

使用Agilent SureSelect Human All Exon V6 DNA Kit全外显子捕获平台，结合Illumina Hiseq 4000的高通量测序技术，对两位患者及其表型正常的父母进行了全外显子组捕获测序，捕获范围包括全基因组外显子区域(约占全基因组1％)，捕获区域总长可达50M，测序数据量10-12Gb，100×有效测序深度。主要步骤包括打断、文库制备和上机测序。

测序数据下机后，使用内部定制流程进行变异检测、注释以及数据库比对，根据人群频率、软件预测结果、家系分析等手段，确定候选致病位点。

结果在两名患者的CDH23基因上发现复合杂合c.3890G>T/c.6649A>G突变。家系分析显示，患者的父亲和母亲分别为c.3890G>T突变和c.6649A>G杂合携带者。

实施例3

用Sanger法测序验证感音神经性耳聋疾病的致病基因。

分别对实施例2中的2名患者(图1中Ⅱ:1、Ⅱ:2)、2名家系内正常人(图1中Ⅰ:1、Ⅰ:2)以及100位家系外正常人基因进行检测，针对该CDH23基因复合杂合突变位点所在序列设计引物，通过PCR扩增，产物纯化，测序的方法获得有关序列，根据序列测定结果属于突变型还是野生型，以及突变是否与表型在家系内呈共分离来验证相关性。具体方法步骤如下：

1)DNA提取：

分别采取2名家系内患者、2名家系内正常人及家系外100名正常人外周静脉血提取基因组DNA、测定DNA含量和纯度。

2)引物设计及PCR反应

引物设计参考人类基因组序列数据库GRCh37/hg19，具体见下。

a)引物序列：

针对CDH23基因的c.3890G>T突变，所用到的特异性引物序列如下：

上游引物：引物A具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；

下游引物：引物B具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；

针对CDH23基因的c.6649A>G突变，所用到的特异性引物序列如下：

上游引物：引物C具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；

下游引物：引物D具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。

b)PCR反应体系：

表1 CDH23基因的PCR反应体系

c)PCR反应条件：

表2 CDH23基因PCR扩增产物的测序反应过程

3)将步骤2中获得的获自2例患者、2名家系内正常人的PCR扩增产物直接进行DNA测序。

在患者家族成员中对CDH23基因突变位点所在编码序列及侧翼序列进行突变排查，患者Ⅱ:1、Ⅱ:2均有c.6649A>G和c.3890G>T复合杂合突变，Ⅰ:1、Ⅰ:2均为携带者，即Ⅰ:1仅有c.6649A>G突变(图2D)；Ⅰ:2仅有c.3890G>T(图2B)，图2A、图2C分别为家系外正常人的c.3890G>T和c.6649A>G野生型突变基因作为对照，图2中箭头所指为突变位点。

本发明的CDH23基因中的新的复合杂合突变c.3890G>T(p.Cys1297Phe)和c.6649A>G(p.Lys2217Glu)错义突变，可判断此家族中未发病的成员患病的可能性，同时可用于该家族后代患病几率的评估与诊断。

研究证实CDH23基因突变可以引起常染色体隐性耳聋。我们的研究表明：CDH23c.6649A>G和c.3890G>T是引起常染色体隐性遗传性耳聋的突变，当在CDH23基因突变体中同时出现c.3890G>T和c.6649A>G突变时，检测生物样品都患有的常染色体隐性遗传型感音神经性耳聋；携带其中任何一种突变不致病，但后代换感音神经性耳聋的几率大大增加。通过检测具有2个突变位点的CDH23基因突变体在生物样品中是否存在，可以准确有效地预测生物体是否患常染色体隐性遗传型感音神经性耳聋。

本发明公开了耳聋基因(CDH23)的新突变，首次证实了其为常染色体隐性遗传性耳聋的分子病因，在100例中国正常听力人群中进行该位点的筛查，均为阴性。本研究丰富了耳聋基因突变谱，为开展遗传性耳聋分子诊断提供了基因学依据。

实施例4

本实施例为检测实施例1中的CDH23基因突变体的试剂盒，其中含有检测突变的c.6649A>G和c.3890G>T的引物对：

针对CDH23基因的c.3890G>T突变，所用到的特异性引物序列如下：

上游引物：引物A具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；

下游引物：引物B具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；

针对CDH23基因的c.6649A>G突变，所用到的特异性引物序列如下：

上游引物：引物C具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；

下游引物：引物D具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。

提取待测者DNA，以所提取的DNA为模板与上述引物进行PCR反应，对PCR产物纯化，将纯化的产物测序。观察测序所得到的序列是否有c.6649A>G和c.3890G>T突变。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

序列表

<110> 中国人民解放军空军军医大学

<120> 一种CDH23基因突变体及其检测的试剂盒与应用

<130> 2019.4.12

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 1

ggaccttgcc atccacattg 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 2

gaagcggtac gtgatttggt 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 3

ggagtcctac aggctaacgg 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 4

aaggacggtt ctggtttccc 20

<210> 5

<211> 10065

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 5

atggggcgcc atgttgccac cagctgccac gtggcctggc ttttggtgct gatctctgga 60

tgctggggcc aggtgaaccg gctgcccttc ttcaccaacc acttctttga tacatacctg 120

ctgatcagcg aggacacgcc tgtgggttct tctgtgaccc agttgctggc ccaagacatg 180

gacaatgacc ccctggtgtt tggcgtgtct ggggaggagg cctctcgctt ctttgcagtg 240

gagcctgaca ctggcgtggt gtggctccgg cagccactgg acagagagac caagtcagag 300

ttcaccgtgg agttctctgt cagcgaccac cagggggtga tcacacggaa ggtgaacatc 360

caggttgggg atgtgaatga caacgcgccc acatttcaca atcagcccta cagcgtccgc 420

atccctgaga atacaccagt ggggacgccc atcttcatcg tgaatgccac agaccccgac 480

ttgggggcag ggggcagcgt cctctactcc ttccagcccc cctcccaatt cttcgccatt 540

gacagcgccc gcggtatcgt cacagtgatc cgggagctgg actacgagac cacacaggcc 600

taccagctca cggtcaacgc cacagatcaa gacaagacca ggcctctgtc caccctggcc 660

aacttggcca tcatcatcac agatgtccag gacatggacc ccatcttcat caacctgcct 720

tacagcacca acatctacga gcattctcct ccgggcacga cggtgcgcat catcaccgcc 780

atagaccagg ataaaggacg tccccggggc attggctaca ccatcgtttc agggaatacc 840

aacagcatct ttgccctgga ctacatcagc ggagtgctga ccttgaatgg cctgctggac 900

cgggagaacc ccctgtacag ccatggcttc atcctgactg tgaagggcac ggagctgaac 960

gatgaccgca ccccatctga cgctacagtc accacgacct tcaatatcct ggttattgac 1020

atcaatgaca atgccccgga gttcaacagc tccgagtaca gcgtggccat cactgagctg 1080

gcacaggtcg gctttgccct tccactcttc atccaggtgg tggacaagga tgagaatttg 1140

ggcctgaaca gcatgtttga ggtgtacttg gtggggaaca actcccacca cttcatcatc 1200

tccccgacct ccgtccaggg gaaggcggac attcgtattc gggtggccat cccactggac 1260

tacgagaccg tggaccgcta cgactttgat ctctttgcca atgagagtgt gcctgaccat 1320

gtgggctatg ccaaggtgaa gatcactctc atcaatgaaa atgacaaccg gcccatcttc 1380

agccagccac tgtacaacat cagcctgtac gagaacgtca ccgtggggac ctctgtgctg 1440

acagtcctgg caactgacaa tgatgcaggc acctttgggg aagtcagcta cttcttcagt 1500

gatgaccctg acaggttctc gctggacaag gacacgggac tcatcatgct gattgccagg 1560

ctggactatg agctcatcca gcgcttcacc ctgacgatca ttgcccggga cgggggcggc 1620

gaggagacca caggccgggt caggatcaat gtgttggatg tcaacgacaa cgtgcccacc 1680

ttccagaagg atgcctacgt gggtgctctg cgggagaacg agccttctgt cacacagctg 1740

gtgcggctcc gggcaacaga tgaagactcc cctcccaaca accagatcac ctacagcatt 1800

gtcagtgcat ctgcctttgg cagctacttc gacatcagcc tgtacgaggg ctatggagtg 1860

atcagcgtca gtcgccccct ggattatgaa cagatatcca atgggctgat ttatctgacg 1920

gtcatggcca tggatgctgg caacccccct ctcaacagca ccgtccctgt caccatcgag 1980

gtgtttgatg agaatgacaa ccctcccacc ttcagcaagc ccgcctactt cgtctccgtg 2040

gtggagaaca tcatggcagg agccacggtg ctgttcctga atgccacaga cctggaccgc 2100

tcccgggagt acggccagga gtccatcatc tactccttgg aaggctccac ccagtttcgg 2160

atcaatgccc gctcagggga aatcaccacc acgtctctgc ttgaccgaga gaccaagtct 2220

gaatacatcc tcatcgttcg cgcagtggac gggggtgtgg gccacaacca gaaaactggc 2280

atcgccaccg taaacatcac cctcctggac atcaatgaca accaccccac gtggaaggac 2340

gcaccctact acatcaacct ggtggagatg acccctccag actctgatgt gaccacggtg 2400

gtggctgttg acccagacct gggggagaat ggcaccctgg tgtacagcat ccagccaccc 2460

aacaagttct acagcctcaa cagcaccacg ggcaagatcc gcaccaccca cgccatgctg 2520

gaccgggaga accccgaccc ccatgaggcc gagctgatgc gcaaaatcgt cgtctctgtt 2580

actgactgtg gcaggccccc tctgaaagcc accagcagtg ccacagtgtt tgtgaacctc 2640

ttggatctca atgacaatga ccccaccttt cagaacctgc cttttgtggc cgaggtgctt 2700

gaaggcatcc cggcgggggt ctccatctac caagtggtgg ccatcgacct cgatgagggc 2760

ctgaacggcc tggtgtccta ccgcatgccg gtgggcatgc cccgcatgga cttcctcatc 2820

aacagcagca gcggcgtggt ggtcaccacc accgagctgg accgcgagcg catcgcggag 2880

taccagctgc gggtggtggc cagtgatgca ggcacgccca ccaagagctc caccagcacg 2940

ctcaccatcc atgtgctgga tgtgaacgac gagacgccca ccttcttccc ggccgtgtac 3000

aatgtgtctg tgtccgagga cgtgccacgc gagttccggg tggtctggct gaactgcacg 3060

gacaacgacg tgggcctcaa tgcagagctc agctacttca tcacaggtgg caacgtggat 3120

gggaagttca gcgtgggtta ccgcgatgcc gttgtgagaa ccgtggtggg cctggaccgg 3180

gagaccacag ccgcctacat gctcatcctg gaggccatcg acaacggccc tgtagggaag 3240

cgacacacgg gcacagccac cgtgttcgtc actgtcctgg atgtgaatga caaccggccc 3300

atctttctgc agagcagcta tgaggccagc gtccctgagg acatccctga aggccacagc 3360

atcttgcagc tgaaagccac ggacgcagat gagggcgagt ttgggcgtgt gtggtaccgc 3420

atcctccatg gtaaccatgg caacaacttc cggatccatg tcagcaatgg gctcctgatg 3480

cgagggcccc ggcccctgga ccgggagcgg aactcatccc acgtgctgat agtggaggcc 3540

tacaaccacg acctgggccc catgcggagc tccgtcaggg tgattgtgta cgtggaggac 3600

atcaacgatg aggcccccgt gttcacacag cagcagtaca gccgtctggg gcttcgagag 3660

accgcaggca ttggaacgtc agtcatcgtg gtccaagcca cagaccgaga ctctggggat 3720

ggtggcctgg tgaactaccg catcctgtcg ggcgcagagg ggaagtttga gattgacgag 3780

agcacagggc ttatcatcac cgtgaattac ctggactacg agaccaagac cagctacatg 3840

atgaatgtgt cggccactga ccaggccccg cccttcaacc agggcttctg cagcgtctac 3900

atcactctgc tcaacgagct ggacgaggcc gtgcagttct ccaatgcctc atacgaggct 3960

gccatcctgg agaatctggc actgggtact gagattgtgc gggtccaggc ctactccatc 4020

gacaacctca accaaatcac gtaccgcttc aacgcctaca ccagcaccca ggccaaagcc 4080

ctcttcaaga tagacgccat cacgggtgtg atcacagtcc agggcctggt ggaccgtgag 4140

aagggcgact tctatacctt gacagtggtg gcagatgacg gcggccccaa ggtggactcc 4200

accgtgaagg tctacatcac tgtgctggac gagaatgaca acagcccccg gtttgacttc 4260

acctccgact cggcggtcag catacccgag gactgccctg tgggccagcg agtggctact 4320

gtcaaggcct gggaccctga tgctggcagc aatgggcagg tggtcttctc cctggcctct 4380

ggcaacatcg cgggggcctt tgagatcgtc accaccaatg actccattgg cgaagtgttt 4440

gtggccaggc ccctggacag agaagagctg gatcactaca tcctccaggt tgtggcttct 4500

gaccgaggca cccctccacg gaagaaggac cacatcctgc aggtgaccat cctggacatc 4560

aatgacaacc ctccagtcat cgagagcccc tttggataca atgtcagtgt gaatgagaac 4620

gtgggtggag gtactgctgt ggtccaggtg agagccactg accgtgacat cgggatcaac 4680

agtgttctgt cctactacat caccgagggc aacaaggaca tggccttccg catggaccgc 4740

atcagcggtg agatcgccac acggcctgcc ccgcctgacc gcgagcgcca gagcttctac 4800

cacctggtgg ccactgtgga ggacgagggc accccaaccc tgtcggccac cacgcacgtg 4860

tacgtgacca ttgtggatga gaatgataac gcgcccatgt tccagcagcc ccactatgag 4920

gtgctgctgg atgagggccc agacacgctc aacaccagcc tcatcaccat ccaggcactg 4980

gacctggatg agggtcccaa cggcacagtc acctatgcca tcgtcgcagg caacatcgtc 5040

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gagatcagcc acggccgcta caccctgatc gtcactgcca cagaccagtg ccccatctta 5160

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gtgcctacct tcccccggga ctatgaggga ccatttgaag tcactgaggg ccagccgggg 5280

cccagagtgt ggaccttcct ggcccatgac cgagactcag gacccaacgg gcaggtggag 5340

tacagcatca tggatggaga ccctctgggg gagtttgtga tctctcctgt ggagggggtg 5400

ctaagggtcc ggaaggacgt ggagctggac cgggagacca tcgccttcta caacctgacc 5460

atctgtgccc gtgaccgggg gatgccccca ctcagctcca caatgctggt ggggatccgg 5520

gtgctggaca tcaacgacaa cgaccctgtg ctgctgaacc tgcccatgaa catcaccatc 5580

agcgagaaca gccctgtctc cagctttgtc gcccatgtcc tggccagtga cgctgacagt 5640

ggctgcaatg cacgcctcac cttcaacatc actgcgggca accgcgagcg ggccttcttc 5700

atcaatgcca cgacagggat cgtcactgtg aaccggcccc tggaccgcga gcggatccca 5760

gagtacaagc tgaccatttc tgtgaaggac aacccggaga atccacgcat agccaggagg 5820

gattatgact tgcttctgat cttcctttct gatgagaatg acaaccaccc cctcttcact 5880

aaaagcacct accaggcaga ggtgatggaa aactctcccg ctggcacccc tctcacggtg 5940

ctcaatgggc ccatcctggc cctggatgca gaccaagaca tctacgccgt ggtgacctac 6000

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ctgctggctg aggacatcgg gctgctcaac agcacggccc acctgctcat caccatcctg 6180

gatgacaatg acaaccggcc cacctttagc cctgccaccc tcactgtcca tctgctagag 6240

aactgcccgc ctggattctc agtccttcaa gtcacagcca cagatgagga cagtggcctc 6300

aatggggagc tggtctaccg aatagaagct ggggctcagg accgcttcct cattcatctg 6360

gtcaccgggg tcatccgtgt tggtaatgcc accatcgaca gagaggagca ggagtcctac 6420

aggctaacgg tggtggccac cgaccggggc accgttcctc tctcgggcac agccattgtc 6480

accattctga tcgatgacat caatgactcc cgccccgagt tcctcaaccc catccagaca 6540

gtgagcgtgc tggagtcggc tgagccaggc actgtcattg ccaatatcac ggccattgac 6600

cacgacctca acccaaagct agagtaccac attgtcggca ttgtggccaa ggacgacact 6660

gatcgcctgg tgcccaacca ggaggacgcc tttgctgtga atatcaacac aggatctgta 6720

atggtgaagt cccccatgaa tcgggagctg gttgccacct atgaggtcac tctctcagtg 6780

attgacaatg ccagcgacct accagagcgc tctgtcagtg tgccaaatgc caagctgact 6840

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tacatggagc ggatcctgga gggggccacc cctgggacca cactcattgc tgtggcagcc 6960

gtggaccctg acaagggcct taatgggctg gtcacctaca ccctgctgga cctggtgccc 7020

ccagggtatg tccagctgga ggactcctcg gcagggaagg tcattgccaa ccggacagtg 7080

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atctttgacc agccctccta ccaggaggct gtctttgagg atgtgcctgt gggcacaatc 7260

atcctgacag tcactgccac tgatgctgac tcaggcaact ttgcactcat tgagtacagc 7320

cttggagatg gagagagcaa gtttgccatc aaccccacca cgggtgacat ctatgtgctg 7380

tcttctctgg accgggagaa gaaggaccac tatatcctga ctgccttggc caaagacaac 7440

cctggggatg tagccagcaa ccgtcgcgaa aattcagtgc aggtggtgat ccaagtgctg 7500

gatgtcaatg actgccggcc acagttctcc aagccccagt tcagcacaag cgtgtatgag 7560

aatgagccgg cgggcacctc ggtcatcacc atgatggcca ctgaccagga tgaaggtccc 7620

aatggagagt tgacctactc acttgagggc cctggcgtgg aggccttcca tgtggacatg 7680

gactcgggct tggtgaccac acagcggcca ctgcagtcct acgagaagtt cagtctgacc 7740

gtggtggcca cagatggtgg agagccccca ctctggggca ccaccatgct cctggtggag 7800

gtcatcgacg tcaatgacaa ccgccctgtc tttgtgcgcc cacccaacgg caccatcctc 7860

cacatcagag aggagatccc gctgcgctcc aacgtgtacg aggtctacgc cacggacaag 7920

gatgagggcc tcaacggggc ggtgcgctac agcttcctga agactgcggg caaccgggac 7980

tgggagttct tcatcatcga cccaatcagc ggcctcatcc agactgctca gcgcctggac 8040

cgcgagtcgc aggcggtgta cagcctcatc ttggtggcca gcgacctggg ccagccagtg 8100

ccatacgaga ctatgcagcc gctgcaggtg gccctggagg acatcgatga caacgaaccc 8160

cttttcgtga ggcctccaaa aggcagcccc cagtaccagc tgctgacagt gcctgagcac 8220

tcaccacgcg gcaccctcgt gggcaacgtg acaggcgcag tggatgcaga tgagggcccc 8280

aacgcgatcg tgtactactt catcgcagcc ggcaacgaag agaagaactt ccatctgcag 8340

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ttcatcgtca aggcctccag caatcgcagc tggacacctc cccgtggacc ctccccaacc 8460

ctcgacctgg ttgctgacct cacactgcag gaggtgcgcg ttgtgctaga ggacatcaac 8520

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gtgggccagg tcttcaccat ggggagcatg gacggcattc tgcgcacctt cgacctcttc 8760

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attaacgaga tccccgaccg tgtgcgcggc ttcgaggagg agttcatcca cctgctctcc 8940

aacatcactg gggccattgt caatactgac aatgtgcagt tccatgtgga caagaagggc 9000

cgggtgaact ttgcgcagac agaactgctt atccacgtgg tgaaccgcga taccaaccgc 9060

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gacatgtctg ccctgcagat ggcgatcatc gtcctggcta tcctcctgtt cctggccgcc 9240

atgctctttg tcctcatgaa ctggtactac aggactgtac acaagaggaa gctcaaggcc 9300

attgtggctg gctcagctgg gaatcgtggc ttcatcgaca tcatggacat gcctaacacc 9360

aacaagtact cctttgatgg agccaaccct gtgtggctgg atcccttctg tcggaacctg 9420

gagctggccg cccaggcgga gcatgaggat gacctaccgg agaacctgag tgagatcgcc 9480

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ctgggccaga tcattcgtga ggggccaatc aagggctcgc tgctgaaggt ggtcctggag 9660

gattacctgc ggctcaaaaa gctctttgca cagcggatgg tgcaaaaagc ctcctcctgc 9720

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actgccttcg agcgcaacgc ccgcacagaa tccgccaaat ccacacccct gcacaaactt 10020

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<210> 6

<211> 3354

<212> PRT

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 6

Met Gly Arg His Val Ala Thr Ser Cys His Val Ala Trp Leu Leu Val

1 5 10 15

Leu Ile Ser Gly Cys Trp Gly Gln Val Asn Arg Leu Pro Phe Phe Thr

20 25 30

Asn His Phe Phe Asp Thr Tyr Leu Leu Ile Ser Glu Asp Thr Pro Val

35 40 45

Gly Ser Ser Val Thr Gln Leu Leu Ala Gln Asp Met Asp Asn Asp Pro

50 55 60

Leu Val Phe Gly Val Ser Gly Glu Glu Ala Ser Arg Phe Phe Ala Val

65 70 75 80

Glu Pro Asp Thr Gly Val Val Trp Leu Arg Gln Pro Leu Asp Arg Glu

85 90 95

Thr Lys Ser Glu Phe Thr Val Glu Phe Ser Val Ser Asp His Gln Gly

100 105 110

Val Ile Thr Arg Lys Val Asn Ile Gln Val Gly Asp Val Asn Asp Asn

115 120 125

Ala Pro Thr Phe His Asn Gln Pro Tyr Ser Val Arg Ile Pro Glu Asn

130 135 140

Thr Pro Val Gly Thr Pro Ile Phe Ile Val Asn Ala Thr Asp Pro Asp

145 150 155 160

Leu Gly Ala Gly Gly Ser Val Leu Tyr Ser Phe Gln Pro Pro Ser Gln

165 170 175

Phe Phe Ala Ile Asp Ser Ala Arg Gly Ile Val Thr Val Ile Arg Glu

180 185 190

Leu Asp Tyr Glu Thr Thr Gln Ala Tyr Gln Leu Thr Val Asn Ala Thr

195 200 205

Asp Gln Asp Lys Thr Arg Pro Leu Ser Thr Leu Ala Asn Leu Ala Ile

210 215 220

Ile Ile Thr Asp Val Gln Asp Met Asp Pro Ile Phe Ile Asn Leu Pro

225 230 235 240

Tyr Ser Thr Asn Ile Tyr Glu His Ser Pro Pro Gly Thr Thr Val Arg

245 250 255

Ile Ile Thr Ala Ile Asp Gln Asp Lys Gly Arg Pro Arg Gly Ile Gly

260 265 270

Tyr Thr Ile Val Ser Gly Asn Thr Asn Ser Ile Phe Ala Leu Asp Tyr

275 280 285

Ile Ser Gly Val Leu Thr Leu Asn Gly Leu Leu Asp Arg Glu Asn Pro

290 295 300

Leu Tyr Ser His Gly Phe Ile Leu Thr Val Lys Gly Thr Glu Leu Asn

305 310 315 320

Asp Asp Arg Thr Pro Ser Asp Ala Thr Val Thr Thr Thr Phe Asn Ile

325 330 335

Leu Val Ile Asp Ile Asn Asp Asn Ala Pro Glu Phe Asn Ser Ser Glu

340 345 350

Tyr Ser Val Ala Ile Thr Glu Leu Ala Gln Val Gly Phe Ala Leu Pro

355 360 365

Leu Phe Ile Gln Val Val Asp Lys Asp Glu Asn Leu Gly Leu Asn Ser

370 375 380

Met Phe Glu Val Tyr Leu Val Gly Asn Asn Ser His His Phe Ile Ile

385 390 395 400

Ser Pro Thr Ser Val Gln Gly Lys Ala Asp Ile Arg Ile Arg Val Ala

405 410 415

Ile Pro Leu Asp Tyr Glu Thr Val Asp Arg Tyr Asp Phe Asp Leu Phe

420 425 430

Ala Asn Glu Ser Val Pro Asp His Val Gly Tyr Ala Lys Val Lys Ile

435 440 445

Thr Leu Ile Asn Glu Asn Asp Asn Arg Pro Ile Phe Ser Gln Pro Leu

450 455 460

Tyr Asn Ile Ser Leu Tyr Glu Asn Val Thr Val Gly Thr Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu Ala Thr Asp Asn Asp Ala Gly Thr Phe Gly Glu Val Ser

485 490 495

Tyr Phe Phe Ser Asp Asp Pro Asp Arg Phe Ser Leu Asp Lys Asp Thr

500 505 510

Gly Leu Ile Met Leu Ile Ala Arg Leu Asp Tyr Glu Leu Ile Gln Arg

515 520 525

Phe Thr Leu Thr Ile Ile Ala Arg Asp Gly Gly Gly Glu Glu Thr Thr

530 535 540

Gly Arg Val Arg Ile Asn Val Leu Asp Val Asn Asp Asn Val Pro Thr

545 550 555 560

Phe Gln Lys Asp Ala Tyr Val Gly Ala Leu Arg Glu Asn Glu Pro Ser

565 570 575

Val Thr Gln Leu Val Arg Leu Arg Ala Thr Asp Glu Asp Ser Pro Pro

580 585 590

Asn Asn Gln Ile Thr Tyr Ser Ile Val Ser Ala Ser Ala Phe Gly Ser

595 600 605

Tyr Phe Asp Ile Ser Leu Tyr Glu Gly Tyr Gly Val Ile Ser Val Ser

610 615 620

Arg Pro Leu Asp Tyr Glu Gln Ile Ser Asn Gly Leu Ile Tyr Leu Thr

625 630 635 640

Val Met Ala Met Asp Ala Gly Asn Pro Pro Leu Asn Ser Thr Val Pro

645 650 655

Val Thr Ile Glu Val Phe Asp Glu Asn Asp Asn Pro Pro Thr Phe Ser

660 665 670

Lys Pro Ala Tyr Phe Val Ser Val Val Glu Asn Ile Met Ala Gly Ala

675 680 685

Thr Val Leu Phe Leu Asn Ala Thr Asp Leu Asp Arg Ser Arg Glu Tyr

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Gly Gln Glu Ser Ile Ile Tyr Ser Leu Glu Gly Ser Thr Gln Phe Arg

705 710 715 720

Ile Asn Ala Arg Ser Gly Glu Ile Thr Thr Thr Ser Leu Leu Asp Arg

725 730 735

Glu Thr Lys Ser Glu Tyr Ile Leu Ile Val Arg Ala Val Asp Gly Gly

740 745 750

Val Gly His Asn Gln Lys Thr Gly Ile Ala Thr Val Asn Ile Thr Leu

755 760 765

Leu Asp Ile Asn Asp Asn His Pro Thr Trp Lys Asp Ala Pro Tyr Tyr

770 775 780

Ile Asn Leu Val Glu Met Thr Pro Pro Asp Ser Asp Val Thr Thr Val

785 790 795 800

Val Ala Val Asp Pro Asp Leu Gly Glu Asn Gly Thr Leu Val Tyr Ser

805 810 815

Ile Gln Pro Pro Asn Lys Phe Tyr Ser Leu Asn Ser Thr Thr Gly Lys

820 825 830

Ile Arg Thr Thr His Ala Met Leu Asp Arg Glu Asn Pro Asp Pro His

835 840 845

Glu Ala Glu Leu Met Arg Lys Ile Val Val Ser Val Thr Asp Cys Gly

850 855 860

Arg Pro Pro Leu Lys Ala Thr Ser Ser Ala Thr Val Phe Val Asn Leu

865 870 875 880

Leu Asp Leu Asn Asp Asn Asp Pro Thr Phe Gln Asn Leu Pro Phe Val

885 890 895

Ala Glu Val Leu Glu Gly Ile Pro Ala Gly Val Ser Ile Tyr Gln Val

900 905 910

Val Ala Ile Asp Leu Asp Glu Gly Leu Asn Gly Leu Val Ser Tyr Arg

915 920 925

Met Pro Val Gly Met Pro Arg Met Asp Phe Leu Ile Asn Ser Ser Ser

930 935 940

Gly Val Val Val Thr Thr Thr Glu Leu Asp Arg Glu Arg Ile Ala Glu

945 950 955 960

Tyr Gln Leu Arg Val Val Ala Ser Asp Ala Gly Thr Pro Thr Lys Ser

965 970 975

Ser Thr Ser Thr Leu Thr Ile His Val Leu Asp Val Asn Asp Glu Thr

980 985 990

Pro Thr Phe Phe Pro Ala Val Tyr Asn Val Ser Val Ser Glu Asp Val

995 1000 1005

Pro Arg Glu Phe Arg Val Val Trp Leu Asn Cys Thr Asp Asn Asp Val

1010 1015 1020

Gly Leu Asn Ala Glu Leu Ser Tyr Phe Ile Thr Gly Gly Asn Val Asp

1025 1030 1035 1040

Gly Lys Phe Ser Val Gly Tyr Arg Asp Ala Val Val Arg Thr Val Val

1045 1050 1055

Gly Leu Asp Arg Glu Thr Thr Ala Ala Tyr Met Leu Ile Leu Glu Ala

1060 1065 1070

Ile Asp Asn Gly Pro Val Gly Lys Arg His Thr Gly Thr Ala Thr Val

1075 1080 1085

Phe Val Thr Val Leu Asp Val Asn Asp Asn Arg Pro Ile Phe Leu Gln

1090 1095 1100

Ser Ser Tyr Glu Ala Ser Val Pro Glu Asp Ile Pro Glu Gly His Ser

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Ile Leu Gln Leu Lys Ala Thr Asp Ala Asp Glu Gly Glu Phe Gly Arg

1125 1130 1135

Val Trp Tyr Arg Ile Leu His Gly Asn His Gly Asn Asn Phe Arg Ile

1140 1145 1150

His Val Ser Asn Gly Leu Leu Met Arg Gly Pro Arg Pro Leu Asp Arg

1155 1160 1165

Glu Arg Asn Ser Ser His Val Leu Ile Val Glu Ala Tyr Asn His Asp

1170 1175 1180

Leu Gly Pro Met Arg Ser Ser Val Arg Val Ile Val Tyr Val Glu Asp

1185 1190 1195 1200

Ile Asn Asp Glu Ala Pro Val Phe Thr Gln Gln Gln Tyr Ser Arg Leu

1205 1210 1215

Gly Leu Arg Glu Thr Ala Gly Ile Gly Thr Ser Val Ile Val Val Gln

1220 1225 1230

Ala Thr Asp Arg Asp Ser Gly Asp Gly Gly Leu Val Asn Tyr Arg Ile

1235 1240 1245

Leu Ser Gly Ala Glu Gly Lys Phe Glu Ile Asp Glu Ser Thr Gly Leu

1250 1255 1260

Ile Ile Thr Val Asn Tyr Leu Asp Tyr Glu Thr Lys Thr Ser Tyr Met

1265 1270 1275 1280

Met Asn Val Ser Ala Thr Asp Gln Ala Pro Pro Phe Asn Gln Gly Phe

1285 1290 1295

Cys Ser Val Tyr Ile Thr Leu Leu Asn Glu Leu Asp Glu Ala Val Gln

1300 1305 1310

Phe Ser Asn Ala Ser Tyr Glu Ala Ala Ile Leu Glu Asn Leu Ala Leu

1315 1320 1325

Gly Thr Glu Ile Val Arg Val Gln Ala Tyr Ser Ile Asp Asn Leu Asn

1330 1335 1340

Gln Ile Thr Tyr Arg Phe Asn Ala Tyr Thr Ser Thr Gln Ala Lys Ala

1345 1350 1355 1360

Leu Phe Lys Ile Asp Ala Ile Thr Gly Val Ile Thr Val Gln Gly Leu

1365 1370 1375

Val Asp Arg Glu Lys Gly Asp Phe Tyr Thr Leu Thr Val Val Ala Asp

1380 1385 1390

Asp Gly Gly Pro Lys Val Asp Ser Thr Val Lys Val Tyr Ile Thr Val

1395 1400 1405

Leu Asp Glu Asn Asp Asn Ser Pro Arg Phe Asp Phe Thr Ser Asp Ser

1410 1415 1420

Ala Val Ser Ile Pro Glu Asp Cys Pro Val Gly Gln Arg Val Ala Thr

1425 1430 1435 1440

Val Lys Ala Trp Asp Pro Asp Ala Gly Ser Asn Gly Gln Val Val Phe

1445 1450 1455

Ser Leu Ala Ser Gly Asn Ile Ala Gly Ala Phe Glu Ile Val Thr Thr

1460 1465 1470

Asn Asp Ser Ile Gly Glu Val Phe Val Ala Arg Pro Leu Asp Arg Glu

1475 1480 1485

Glu Leu Asp His Tyr Ile Leu Gln Val Val Ala Ser Asp Arg Gly Thr

1490 1495 1500

Pro Pro Arg Lys Lys Asp His Ile Leu Gln Val Thr Ile Leu Asp Ile

1505 1510 1515 1520

Asn Asp Asn Pro Pro Val Ile Glu Ser Pro Phe Gly Tyr Asn Val Ser

1525 1530 1535

Val Asn Glu Asn Val Gly Gly Gly Thr Ala Val Val Gln Val Arg Ala

1540 1545 1550

Thr Asp Arg Asp Ile Gly Ile Asn Ser Val Leu Ser Tyr Tyr Ile Thr

1555 1560 1565

Glu Gly Asn Lys Asp Met Ala Phe Arg Met Asp Arg Ile Ser Gly Glu

1570 1575 1580

Ile Ala Thr Arg Pro Ala Pro Pro Asp Arg Glu Arg Gln Ser Phe Tyr

1585 1590 1595 1600

His Leu Val Ala Thr Val Glu Asp Glu Gly Thr Pro Thr Leu Ser Ala

1605 1610 1615

Thr Thr His Val Tyr Val Thr Ile Val Asp Glu Asn Asp Asn Ala Pro

1620 1625 1630

Met Phe Gln Gln Pro His Tyr Glu Val Leu Leu Asp Glu Gly Pro Asp

1635 1640 1645

Thr Leu Asn Thr Ser Leu Ile Thr Ile Gln Ala Leu Asp Leu Asp Glu

1650 1655 1660

Gly Pro Asn Gly Thr Val Thr Tyr Ala Ile Val Ala Gly Asn Ile Val

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Asn Thr Phe Arg Ile Asp Arg His Met Gly Val Ile Thr Ala Ala Lys

1685 1690 1695

Glu Leu Asp Tyr Glu Ile Ser His Gly Arg Tyr Thr Leu Ile Val Thr

1700 1705 1710

Ala Thr Asp Gln Cys Pro Ile Leu Ser His Arg Leu Thr Ser Thr Thr

1715 1720 1725

Thr Val Leu Val Asn Val Asn Asp Ile Asn Asp Asn Val Pro Thr Phe

1730 1735 1740

Pro Arg Asp Tyr Glu Gly Pro Phe Glu Val Thr Glu Gly Gln Pro Gly

1745 1750 1755 1760

Pro Arg Val Trp Thr Phe Leu Ala His Asp Arg Asp Ser Gly Pro Asn

1765 1770 1775

Gly Gln Val Glu Tyr Ser Ile Met Asp Gly Asp Pro Leu Gly Glu Phe

1780 1785 1790

Val Ile Ser Pro Val Glu Gly Val Leu Arg Val Arg Lys Asp Val Glu

1795 1800 1805

Leu Asp Arg Glu Thr Ile Ala Phe Tyr Asn Leu Thr Ile Cys Ala Arg

1810 1815 1820

Asp Arg Gly Met Pro Pro Leu Ser Ser Thr Met Leu Val Gly Ile Arg

1825 1830 1835 1840

Val Leu Asp Ile Asn Asp Asn Asp Pro Val Leu Leu Asn Leu Pro Met

1845 1850 1855

Asn Ile Thr Ile Ser Glu Asn Ser Pro Val Ser Ser Phe Val Ala His

1860 1865 1870

Val Leu Ala Ser Asp Ala Asp Ser Gly Cys Asn Ala Arg Leu Thr Phe

1875 1880 1885

Asn Ile Thr Ala Gly Asn Arg Glu Arg Ala Phe Phe Ile Asn Ala Thr

1890 1895 1900

Thr Gly Ile Val Thr Val Asn Arg Pro Leu Asp Arg Glu Arg Ile Pro

1905 1910 1915 1920

Glu Tyr Lys Leu Thr Ile Ser Val Lys Asp Asn Pro Glu Asn Pro Arg

1925 1930 1935

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