一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法

技术领域

本发明涉及一种能够测定甲醛脱氢酶活性及其评价的方法，尤其涉及电位滴定法测定植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小。

背景技术

甲醛是一种室内空气首要的污染物之一，其严重危害人类的身体健康。去除室内甲醛常用的方法可分纤维过滤、膜分离、静电补集、活性炭吸附和臭氧灭菌等，由于甲醛释放过程缓慢、持续时间长等特点，使得一些商品化的技术，存在操作复杂，成本高，还可能会产生二次污染的风险问题。而植物净化技术相比于其它净化技术，具有操作简易、无污染、成本低、能耗低，还能起到美观与装饰室内的作用。

文献调研表明，植物净化甲醛时，甲醛在甲醛脱氢酶的作用下转化为甲酸，甲酸在甲酸脱氢酶的作用下转化为CO

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、成本低廉、高效评价植物叶中甲酸脱氢酶活性大小的方法。

本发明采用的技术方案如下：

植物叶中的甲酸脱氢酶热稳定性较差，高温时易失去活性。因此，以高温处理的方式，消除叶提取液中甲酸脱氢酶的活性，制得植物叶失活提取液。采用电位滴定法，通过测定外加甲醛前后植物叶新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，进而定量评估植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小。

一种测定植物叶中甲酸脱氢酶活性及其评价的方法，步骤如下：

(1)植物样品均在校内草坪、花园、荒地及校外公园空气清新、土壤无污染历史处采集，由识花君软件鉴别植物名称；

(2)将步骤(1)中的新鲜植物经冰盒保鲜短途运送回来后，经过仔细地与土壤分离，快速用去离子水彻底冲洗、拭干、准确称量样品；

(3)将步骤(2)中植物质量与蒸馏水提取剂体积的比例(固-液比，g: mL；设为1:4、1:10、1:20)，在瓷研钵中充分快速研磨、提取出新鲜植物叶中的有效成份，转移至预冷的100mL离心管中；

(4)摇匀步骤(3)中所得的上清液，一部分迅速置于0-4℃条件下离心、待用，另一部分置于试管中放于100℃水中加热10 min，取出冷却、离心后待用。结果表明在100℃的水中加热10 min后植物叶提取液中酶完全失活；

(5)吸取步骤(4)中离心好的新鲜或失活植物叶提取液20.00 mL于4个100 mL离心管中、再分别加入8.00 mL水和甲醛溶液浓度(350 mg·L

(6)吸取步骤(4)中离心好的新鲜或失活植物叶提取液0.50 mL于12个具塞比色管中，分别加入0 mg·L

(7)根据标准曲线和步骤(6)中吸光度的变化值，计算出净化反应完成后新鲜提取液(m

对比植物空白实验结果，根据步骤(5)滴定曲线中突跃范围对应的氢氧化钠浓度和体积计算出新鲜提取液外加甲醛后混合液中甲酸含量的实际值(m

甲酸脱氢酶活性评价：Δm

甲酸含量计算公式如下:

式中： V—植物混合液消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积的数值，mL；C—氢氧化钠浓度，mol·L

植物质量和提取液比例为1:4时，当甲醛浓度为350 mg·L

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明所使用的植物材料价廉易得，所采用的方法能够有效的评价植物叶中甲酸脱氢酶活性大小，有效地解决了操作步骤繁杂、耗时，酶提纯难度大等缺点；

2、本发明采用乙酰丙酮显色法测定植物叶提取液中外加甲醛，有效解决了技术的操作复杂，所需仪器昂贵等缺点；

3、本发明采用电位滴定法，通过测定外加甲醛前后植物叶新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，进而定量评估植物叶中甲酸脱氢酶的活性大小；

4、本发明方法与传统测定酶的方法相比较具有简易、快速且高效的优点。

实施例1 基于对牡丹吊兰叶中甲醛脱氢酶活性大小的评价

(1)准备移取新鲜或失活牡丹吊兰叶提取液20.00 mL于4个100 mL离心管中、再分别加入8.00 mL水和甲醛溶液浓度(350 mg·L

(2)移取新鲜或失活牡丹吊兰叶提取液0.50 mL于12个具塞比色管中，分别加入0 mg·L

(3)按上述方法，通过测定外加甲醛后牡丹吊兰叶新鲜提取液和失活提取液中甲醛含量的减少值，及外加甲醛前后牡丹吊兰叶新鲜提取液和失活提取液中酸度变化的差异，定量评估牡丹吊兰叶中甲酸脱氢酶的活性大小。结果表明当牡丹吊兰叶质量和提取液比例为1:4时，外加甲醛浓度为350~750 mg.L

实施例 2 基于对绿萝叶中甲醛脱氢酶活性大小的评价

与实施例1类似，其区别在于步骤(1)和(2)中植物换成大小相同，长势相同的绿萝，分别测定绿萝叶新鲜提取液和失活提取液对外加甲醛净化量与酸度变化值。结果表明当绿萝叶质量和提取液比例为1:4时，外加甲醛浓度为350~750 mg.L

与实施例1类似，其区别在于步骤(1)和(2)植物换成大小相同，长势相同的芦荟，分别测定芦荟叶新鲜提取液和失活提取液对外加甲醛净化量与酸度变化值。结果表明当芦荟叶质量和提取液比例为1:4时，外加甲醛浓度为350~750 mg.L