一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，涉及一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法。

背景技术

抑郁症发病原因较多，目前尚没有较为统一的结论。对抑郁症的发病机制阐述主要有单胺递质假说、受体假说、轴假说及神经可塑性假说等观点。嗅球与上述几种假说均具有密切联系，嗅球能通过影响神经可塑性、生物节律性、内分泌以及单胺类递质与其受体表达等过程而参与抑郁症的病理调控。嗅球在生命功能中占有重要地位，其信号调节作用参与神经可塑性与嗅觉功能的管理。

临床资料表明，抑郁症患者嗅觉的敏感性降低，嗅球体积减少，且嗅球的体积与患者抑郁程度呈现负相关性。由于嗅球体积和嗅觉功能密切相关，嗅球体积减少可能也是抑郁症患者嗅觉障碍的潜在原因，但嗅球体积减少是抑郁症的病因还是病理结果，目前尚没有定论。嗅球在信息处理中扮演重要的角色，神经细胞之间需要通过突触传递形成神经网络才可以执行脑的高级功能，如情绪和学习记忆。突触传递表现出高度的可塑性，神经可塑性是神经细胞处理信息的关键，神经可塑性与神经发生关系密切。神经形成(神经的分化、生长)在哺乳动物脑内主要分布在两个区，一个是可以产生新的颗粒细胞的海马结构的齿状回，抑郁患者的海马齿状回新生神经细胞受到抑制；另外一个则是可以产生新的嗅球中间神经细胞的脑室管膜下区。

嗅球与脑内很多区域存在神经纤维联系，损伤或者摘除嗅球将会导致一系列神经传入障碍，不仅会使嗅觉相关区域受到影响，而且与嗅球密切联系的海马、下丘脑和网状结构等部位也会受到影响。而上述结构功能的低下则会导致抑郁症产生。

嗅球能够独立于视交叉上核表达节律调控基因，如促进基因的高水平表达，因此嗅球在生物节律性的调节中发挥重要作用。抑郁障碍患者常常伴有一定程度的生物节律异常变化，如睡眠障碍、体温变化、神经内分泌的改变等。嗅球功能的缺失则会影响生物节律性，从而诱导抑郁症的产生。嗅球中具有的神经纤维与轴的功能密切相关，嗅球的神经纤维被破坏，使神经系统受损，神经元活性减低，则会刺激分泌，再作用于垂体，促进的分泌导致外周皮质醇分泌增加，使轴过度活化；进而使交感神经兴奋，进一步刺激分泌，促进分泌并作用于肾上腺皮质，使其分泌大量的糖皮质激素，而轴功能的持续亢进将严重影响身心健康，导致机体出现抑郁症状。

因此，轴在抑郁症发病机制中具有重要作用。同时，嗅球损毁作为一种应激刺激，为适应应激的需要，机体轴也会活化，皮质醇升高从而降低垂体前受体的数量和敏感性，降低皮质醇对应激的负反馈也会促进抑郁症的发生。研究表明，嗅球毁损后，大鼠下丘脑中和垂体中的分泌均明显增加，血中皮质醇含量显著升高，这一表现与临床抑郁症患者的内分泌变化特点较为一致。

发明内容

本发明的目的是提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，以能够周期短、费用低、操作简便、重现性好、抑郁效果显著的建立抑郁大鼠动物模型，避免传统的嗅球摘除手术建模过程造成的动物死亡率高、愈后差、效果参差不齐等问题。

为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，所述的方法是通过辐射嗅球致麻醉后的大鼠嗅球损伤，从而建立所述的抑郁大鼠动物模型。

在一种优选的实施方案中，本发明提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，其中所述的辐射为电子射线单次照射大鼠嗅球。

在一种更加优选的实施方案中，本发明提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，其中所述的辐射的能级范围为5～7Mev。

在一种更加优选的实施方案中，本发明提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，其中所述的辐射的剂量率为2～4Gy/min，时间为8～12min，总剂量为24～36Gy。

在一种更加优选的实施方案中，本发明提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，其中所述的电子射线由电子加速器产生。

在一种更加优选的实施方案中，本发明提供一种辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，其中所述的电子加速器为Elekta Synergy直线加速器。

本发明的有益效果在于，利用本发明的辐射致抑郁大鼠动物模型的建立方法，能够周期短、费用低、操作简便、重现性好、抑郁效果显著的建立抑郁大鼠动物模型，避免传统的嗅球摘除手术建模过程造成的动物死亡率高、愈后差、效果参差不齐等问题。

本发明建立的动物模型可以用于抗抑郁食品药品的评价研究。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作出进一步的说明。

实施例1：辐射致抑郁大鼠动物模型的建立

(1)仪器与设备

大鼠脑立体定位仪(stoelting 51621)，直线加速器Elekta Synergy(英国ElektaLimited公司)。

(2)动物与分组

24只健康雄性SPF级SD大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(生产许可证号：SCXK(京)2016-0006)，体重180-200g。依据动物体重，随机分为对照组和模型组，每组12只。大鼠分笼饲养，每笼5只，自由饮食、饮水，饲料为北京科澳协力饲料有限公司生产的SPF大、小鼠维持饲料，饲料生产许可证：京饲证(2018)06073，饲养室温度控制在20-25℃，湿度控制在40-70％。大鼠饲养笼具、饮水瓶定期消毒，使用垫料均经高压灭菌。分组后用苦味酸对大鼠进行通号标记。动物适应性饲养1周后开展试验。

(3)建立方法

试验前对动物禁食不禁水12小时，所有动物采用腹腔注射戊巴比妥钠(50mg/kg，2.5％，0.2ml/100g体重)麻醉，待动物麻醉后，将模型组动物固定于大鼠脑立体定位仪，标注大鼠嗅球位置，然后将大鼠置于直线加速器下。将直线加速器的照射光圈范围锁小至标注的大鼠嗅球位置，将加速器相关参数调整至能级6Mev，剂量率3Gy/min，照射时间10min，单次照射，总剂量为30Gy；对照组大鼠只进行麻醉处理。

建模期后每日对动物进行一般状态观察，包括大鼠精神状态、行为活动、照射野的皮肤毛发、口鼻分泌物、大便等情况。建模后每周对动物称重2次(每两周第3、7、10、14天)，每周进行旷场试验1次(第7、14天)，每周进行糖水偏爱试验1次(第7、14天)。

实施例2：实施例1建立大鼠动物模型的检测

(1)动物体重变化

大鼠嗅球辐射损伤后，易怒、活动量增加，表1结果表明第7、10、14天模型组大鼠体重较对照组降低(P<0.05)，表明嗅球损伤对动物体重增长有一定影响。

表1 SD大鼠嗅球辐射建模后体重变化

注：与对照组比较*P<0.05。

(2)旷场试验

自制旷场试验箱，为1×1×0.7m

旷场实验：将大鼠放在自制敞箱中心位置，适应2min后，记录大鼠后4min内水平运动爬行跨越的格子数，以大鼠两只后腿进入另一格记为行走一格；以及大鼠在旷场箱内的理毛次数。于第7、14天进行旷场试验。

表2的实验结果表明，第7、14天模型组大鼠的理毛时间与对照组相比显著降低(P<0.01)，模型组大鼠的穿格数与对照组相比显著升高(P<0.05)。

表2 SD大鼠嗅球辐射损伤模型旷场试验结果

(3)糖水偏爱试验

糖水偏爱试验：大鼠单只放置于鼠盒内，每个鼠盒上放两个已称重的水瓶(分别为1％(m/m)的糖水和纯净水)，大鼠禁食禁水24h后进行测定，以大鼠6h内糖水偏好百分比[(糖水消耗量/总液体消耗量)×100％]作为评价指标。于建模后第7、14天进行糖水偏爱测试，表3的实验结果表明，第7、14天模型组大鼠的糖水偏爱率与对照组相比显著降低(P<0.05)。

表3 SD大鼠嗅球辐射损伤模型糖水偏爱试验结果

上述结果表明，大鼠嗅球损伤，出现易怒、活动量增加、理毛时间减少、穿格次数增加、糖水偏爱率降低等症状，上述症状与文献报道的大鼠嗅球摘除后的症状一致，表明通过大鼠嗅球辐射损伤可以代替大鼠嗅球摘除导致的抑郁模型，该模型周期短、费用低、重现性好、操作简便，避免了传统的嗅球摘除建模过程中的动物死亡率高、愈后差、效果参差不齐等弊端。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其同等技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。上述实施例或实施方式只是对本发明的举例说明，本发明也可以以其它的特定方式或其它的特定形式实施，而不偏离本发明的要旨或本质特征。因此，描述的实施方式从任何方面来看均应视为说明性而非限定性的。本发明的范围应由附加的权利要求说明，任何与权利要求的意图和范围等效的变化也应包含在本发明的范围内。