一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法
文献发布时间:2023-06-19 16:08:01
技术领域
本发明涉及药品检测领域,具体涉及一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法。
背景技术
法莫替丁注射液属于抑制胃酸分泌药,有效成分法莫替丁是组胺H2受体阻滞药,对胃酸有明显的抑制作用,可以抑制胃蛋白酶分泌,对实验性胃溃疡有保护作用,因此,对于胃酸所致的胃炎以及相关的溃疡都有治疗作用。
法莫替丁注射液中的主药法莫替丁属氧敏感物质,易被氧化,通过加入另一种易感物质维生素C,可与法莫替丁竞争氧气,从而起到保护药物活性成分法莫替丁的作用。但由于维生素C在法莫替丁注射液中不稳定,也难被有效分离,故对加入维生素C的法莫替丁注射液的质量不易控制。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法,它包括以下步骤:
a、对照品溶液的制备:取维生素C对照品,加溶剂溶解,即得;
b、供试品溶液的制备:取法莫替丁注射液,加溶剂稀释3~5倍,即得;
c、分别吸取对照品溶液和法莫替丁注射液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以磷酸二氢钾溶液为流动相A,以乙腈水溶液为流动相B;进样器温度:4℃;
梯度洗脱程序为:
d、按如下公式计算维生素C含量:
其中:A
所述溶剂为含乙二胺四乙酸二钠和磷酸二氢钾的水溶液;
进一步地,步骤a所述维生素C对照品与溶剂的质量体积比为5mg:20ml。
进一步地,步骤b所述法莫替丁注射液与溶剂的体积比为2.5ml:10ml。
进一步地,步骤c所述色谱条件中色谱柱为GL Inertsustain C18,250×4.6mm、5μm,波长200~250nm,柱温25~40℃,进样器温度4℃,进样量5~25μl。
更进一步地,所述柱温30℃,波长210nm,进样量5μl。
进一步地,所述溶剂为pH值2.0~4.0每1ml含0.3~0.67mg乙二胺四乙酸二钠和1.0~3.0mg磷酸二氢钾的水溶液。
更进一步地,所述溶剂为pH值3.0每1ml含0.56mg乙二胺四乙酸二钠和2.0mg磷酸二氢钾的水溶液。
进一步地,所述流动相A为1~5mg/mL磷酸二氢钾溶液;所述流动相B为70~80%,ml/ml乙腈水溶液。
更进一步地,所述流动相A为2.04mg/mL磷酸二氢钾溶液;所述流动相B为73%,ml/ml乙腈水溶液。
进一步地,步骤d所述
其中,A
更进一步地,所述法莫替丁注射液的成分包括法莫替丁、烟酰胺、维生素C、D-甘露醇、乳酸、氢氧化钠和注射用水。
经检测分析试验发现,组成成分中含维生素C的法莫替丁注射液,经高效液相色谱常温进样检测的准确性和精密度差,维生素C含量比实际添加量偏低2%~5%。本发明法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法,通过特定的样品溶剂和色谱条件,可以检测法莫替丁注射液中维生素C,结果准确,快速、灵敏度高,为含维生素C的法莫替丁注射液的质量控制提供了新方法,也为法莫替丁注射液的质量控制标准的提高提供了方法依据,同时为扩大法莫替丁注射液的临床应用提供了参考依据,具有良好的应用前景。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1溶剂空白色谱图
图2未降解空白辅料溶液色谱图
图3未降解供试品溶液色谱图
图4维生素对照品溶液色谱图
图5强氧化降解空白辅料溶液色谱图
图6强氧化降解供试品溶液色谱图
图7强酸降解空白辅料溶液色谱图
图8强酸降解供试品溶液色谱图
图9强碱降解空白辅料溶液色谱图
图10强碱降解供试品溶液色谱图
图11高温降解空白辅料溶液色谱图
图12高温降解供试品溶液色谱图
图13强光降解空白辅料溶液色谱图
图14强光降解供试品溶液色谱图
图15维生素C线性图
具体实施方式
实施例1法莫替丁注射液中维生素C含量测定
a、对照品溶液的制备:取维生素C对照品5mg,精密称定,置20ml量瓶中,用pH值3.0每1ml含0.56mg乙二胺四乙酸二钠和2.0mg磷酸二氢钾的水溶液溶解并稀释至刻度,即得,平行配制2份对照品溶液。
b、供试品溶液:精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用pH值3.0每1ml含0.56mg乙二胺四乙酸二钠和2.0mg磷酸二氢钾的水溶液稀释至刻度,摇匀。
c、分别吸取5μl对照品溶液和法莫替丁注射液注入液相色谱仪,记录色谱图,色谱条件如下:
色谱柱:GL Inertsustain C18,250×4.6mm、5μm;检测波长:210nm;柱温:30℃;流动相:以2.04mg/mL磷酸二氢钾溶液为流动相A,以73%乙腈水溶液为流动相B;进样器温度:4℃;梯度洗脱程序为:
d、按下式计算法莫替丁注射液的维生素C:
其中:A
V
以下通过试验例说明本发明的有益效果
试验例1方法学研究
1.用于验证的法莫替丁注射液
法莫替丁注射液的处方(标示装量1mL)
法莫替丁注射液溶配工序:
(1)主药及辅料溶解
于500L浓配罐中加入注射用水,开启氮气,充氮至配液罐顶空残氧量<2.0%,控制注射用水温度40~50℃,备用。
量取40~50℃充氮后注射用水置于稀配罐中,设置搅拌频率为30±2Hz并开启搅拌,开启氮气,充氮至配液罐顶空残氧量<2.0%。依次加入乳酸、烟酰胺、维生素C、甘露醇和法莫替丁(避光操作),再次充氮至配液罐顶空残氧量<2.0%,搅拌30min至溶液澄清,开启小循环5min。
(2)调节pH
称取充氮后注射用水置于不锈钢桶中,加入氢氧化钠,搅拌至完全溶解,再次充氮5min,即得0.2M氢氧化钠溶液。于配制罐加入氢氧化钠溶液约,调节溶液pH为5.8~6.2。
(3)定容
用35℃以下充氮后注射用水定容至,循环搅拌5min。过程中持续向罐内充氮,保证配液罐顶空残氧量<2.0%。
2.验证内容
维生素C分析方法的专属性、系统精密度、溶液稳定性、线性与范围、准确度、精密度(重复性与中间精密度)、耐用性。
3.验证可接受标准
表1.验证可接受标准
4.验证的实施步骤
4.1.仪器配置
表2.仪器配置
4.2.验证所使用的试剂与对照品
表3.试剂与对照品
4.3.待验证的分析方法
4.3.1.实验条件
检测波长:210nm;色谱柱:GL Inertsustain C18,250×4.6mm、5μm;柱温:30℃;进样盘温度:4℃;进样量:5μl;流速:0.6~1.5ml/min;流动相A:磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾2.04g,加水1000ml使溶解,用磷酸调节pH值至3.0);流动性B:73%乙腈;洗针溶液:0.2%磷酸;梯度洗脱:
4.3.2.溶液配制
溶剂:称取乙二胺四乙酸二钠0.56g与磷酸二氢钾2.0g,加入纯化水1000ml使溶解,用磷酸调节pH值至3.0。
对照品溶液:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度。平行配制2份。
供试品溶液:精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。平行配制2份。
4.3.3.系统适用性要求
供试品溶液色谱图中,维生素C峰与相邻峰分离度应大于1.5,维生素C峰拖尾因子应不大于1.5,理论塔板数按维生素C峰计算不得低于5000。
4.3.4.测定
取空白(溶剂)、对照品溶液及供试品溶液各5μl,注入色谱仪,记录色谱图。
表4.样品进样针数设置
4.3.5.计算公式
按下式计算供试品的维生素C:
其中:A
m
V
p:对照品的含量;
A
V
4.3.6.标准规定
含维生素C(C
5.方法验证
5.1.专属性试验
5.1.1.干扰性试验
①溶液的配制:
溶剂:称取乙二胺四乙酸二钠0.56g与磷酸二氢钾2.0g,加入纯化水1000ml使溶解,用磷酸调节pH值至3.0。
空白溶剂:溶剂
空白辅料溶液:精密量取空白辅料溶液(取烟酰胺约500mg、D-甘露醇约200mg、乳酸约35mg,用水10ml溶解)2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
维生素C定位溶液:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。
供试品溶液:精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
②测定法:
精密量取上述空白、空白辅料溶液、对照品溶液与供试品溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。
③测定结果:
色谱图结果见图1~4,具体色谱图分析结果见表5。
表5.干扰性试验测定结果
④结论:
空白溶剂、空白辅料不干扰维生素C测定;供试品溶液色谱图中,维生素C峰与相邻峰分离度为3.4大于1.5,拖尾因子为1.1小于1.5,理论塔板数按维生素C峰计算为15993大于5000。
5.1.2.强制降解试验
①溶液的配制:
空白:溶剂
空白辅料溶液:精密量取空白辅料溶液(取烟酰胺约500mg、D-甘露醇约200mg、乳酸约35mg,用水10ml溶解)2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
(1)强氧化降解
精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,加入0.03%双氧水0.5ml,混匀,放置10min,用溶剂稀释至刻度,摇匀,作为强氧化降解供试品溶液;精密量取空白辅料溶液2.5ml,置10ml量瓶中,同法操作,作为强氧化降解空白辅料溶液。
(2)强碱降解
精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,加入0.1mol/L氢氧化钠溶液0.3ml,40℃水浴加热10分钟后,再加入0.1mol/L的盐酸溶液0.3ml,用溶剂稀释至刻度,摇匀,作为强碱降解供试品溶液;精密量取空白辅料溶液2.5ml,置10ml量瓶中,同法操作,作为强碱降解空白辅料溶液。
(3)高温降解
取法莫替丁注射液适量,于60℃干燥箱中放置4小时,精密量取2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,作为高温降解供试品溶液;取空白辅料溶液,同法操作,作为高温降解空白辅料溶液。
(4)强酸降解
精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,加入1mol/L盐酸溶液0.5ml,40℃水浴加热10分钟后,再加入1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml,用溶剂稀释至刻度,摇匀,作为强酸降解供试品溶液;精密量取空白辅料溶液2.5ml,置10ml量瓶中,同法操作,作为强酸降解空白辅料溶液。
(5)强光照降解
取法莫替丁注射液适量,同时置紫外光灯(能量不低于200W·hr/m
(6)未降解试验
精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
②测定法:
精密量取上述溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。
表6.样品进样针数设置
③测定结果:
强降解色谱图结果见图5~14,具体色谱图分析结果见表7。
表7.专属性测定结果
④结论:
各降解条件下供试品溶液的主峰纯度角度均小于纯度阈值,主峰与相邻杂质的分离度都大于1.5,符合方案要求。
5.2.系统精密度试验
①溶液的配制:
空白:溶剂
对照品溶液:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。
②测定法:
取空白与对照品溶液各5μl,注入色谱仪,记录色谱图。
表8.样品进样针数设置
③测定结果:
表9.系统精密度试验结果
④结论:
系统精密度实验中,连续6针维生素C保留时间RSD为0.23%,小于1.0%,峰面积RSD为0.61%,小于2.0%,仪器精密度符合要求。
5.3.溶液稳定性
①溶液的配制:
对照品溶液:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀。
供试品溶液:精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
②测定法:
取对照品溶液5μl,于2℃~8℃条件下分别放置0h、2h、4h、8h、12h、24h注入液相色谱仪,记录色谱图;取供试品溶液5μl,于2℃~8℃条件下分别放置0h、2h、4h、8h注入液相色谱仪,记录色谱图;
③测定结果:
表10.溶液稳定性测定结果
④结论:
放置于2℃~8℃条件下,供试品溶液至少在8h内稳定,对照品溶液至少在24h内稳定。
5.4.线性
①溶液的配制:
对照品贮备溶液的配制:取维生素C对照品约50mg,精密称定,置20ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备溶液。
50%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液0.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
80%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液0.8ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
90%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液0.9ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
100%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液1.0ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
110%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液1.1ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
120%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液1.2ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
200%线性溶液:精密量取对照品贮备溶液2.0ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀。
②测定:
取上述线性溶液各5μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
表11.样品进样针数设置
③测定结果:
以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归处理,计算回归方程、相关系数、截距与相当于供试品浓度100%所对应的峰面积比值。
表12.维生素C测定线性测定结果
④结论:
维生素C浓度在124.85μg/ml~499.4μg/ml范围内时,线性方程为:y=4720.9x+14229,相关系数为0.9996,大于0.999,截距为1.21%,小于2.0%,故峰面积与浓度呈良好线性关系。
5.5.准确度
确定供试品50%浓度水平、100%浓度水平及120%浓度水平时维生素C测定的结果与真值的接近程度,是否满足方法准确度要求。
①溶液的配制:
空白辅料溶液:取烟酰胺约5000mg、D-甘露醇约2000mg、乳酸约350mg,精密称定,用水100ml溶解,摇匀,作为空白辅料溶液。
对照品溶液的配制:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。平行配制2份。
对照品贮备溶液的配制:取维生素C对照品约50mg,精密称定,置20ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备溶液。
供试品溶液的配制:精密量取法莫替丁注射液空白辅料2.5ml,平行9份,分别置10ml量瓶中,3份中加入对照品贮备溶液0.5ml,作为50%回收率供试品溶液,3份中加入对照品贮备溶液1.0ml,作为100%回收率供试品溶液,3份中加入对照品贮备溶液1.2ml,作为120%回收率供试品溶液,分别用溶剂稀释至刻度,摇匀。
②测定:
取上述溶液各5μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。
表13.样品进样针数设置
③测定结果:
按下面公式计算回收率:
m
式中:η:回收率,%;
m
m
f:校正因子;
V:供试品溶液稀释体积,ml;
A:供试品溶液主峰面积。
表14.准确度测定结果
④结论:
本法测定50%限度水平、100%限度水平和120%限度水平的回收率均在98%~102%之间,平均回收率为100.67%,RSD为0.76%,小于2.0%,结果符合规定。
5.6.精密度
5.6.1.重复性
①溶液的配制:
对照品溶液:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。
供试品溶液:精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,即得。平行配制6份。
②测定:
精密量取供试品溶液与对照溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法计算维生素C含量。
表15.样品进样针数设置
③测定结果:
表16.重复性测定结果(规格2ml:20mg)
5.6.2.中间精密度
由不同人员,不同时间,使用不同仪器,按“重复性”同法测定。
①溶液的配制:
按“重复性”同法操作。
②测定:
精密量取供试品溶液与对照溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法计算维生素C含量。
表17.样品进样针数设置
③测定结果:
表18.不同人员不同时间不同仪器维生素C含量测定结果(规格2ml:20mg)
表19.维生素C含量测定中间精密度试验结果(规格2ml:20mg)
④结论:
平行测定6份供试品溶液中维生素C平均含量为95.94%,RSD为0.83%,小于2.0%,重复性良好。12份供试品溶液中维生素C平均含量为94.81%,RSD为1.40%,小于2.0%,故中间精密度良好。
5.7耐用性
为了考察测试条件发生微小变动时,对测定结果的影响,考察了以下几个典型变动因素:流速、pH值、流动相比例、柱温、检测波长、色谱柱,考察情况如下:
表20.耐用性试验考察指标
①溶液的配制:
对照品溶液:取维生素C对照品约12.5mg,精密称定,置50ml量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。平行配制2份。
供试品溶液:精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,即得。平行配制2份。
②测定:
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,记录色谱。
表21.样品进样针数设置
③测定结果:
表22.耐用性测定结果
④结论:
当各色谱条件发生微小变动时,维生素C的含量均在80.0%-110.0%范围内,与正常条件的偏差小于2.0%,故本方法耐用性良好。
综上,本发明通过特定的样品溶剂和色谱条件,可以检测法莫替丁注射液中维生素C,结果准确,快速、灵敏度高,为含维生素C的法莫替丁注射液的质量控制提供了新方法,也为法莫替丁注射液的质量控制标准的提高提供了方法依据,同时为扩大法莫替丁注射液的临床应用提供了参考依据,具有良好的应用前景。
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