一种牡蛎负氢片及其制备方法

技术领域

本发明涉及负氢材料领域，具体涉及一种牡蛎负氢片及其制备方法。

背景技术

负氢离子"H

负氢离子具有四大特点：(1)负氢离子是自然界中最轻的物质，却是抗氧化能力最强的一种；还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH(即还原型辅酶Ⅰ)中的H即为负氢离子，被氧化后形成氧化型辅酶Ⅰ(NAD)并释放出负离子；因此，NADH是负氢离子的载体。(2)负氢离子是参与能量ATP合成和转化的重要因子，正常情况下，葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分少，而代谢产生的NADH经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。(3)负氢离子参与酶对核酸的修饰以及生物大分子之间的相互作用。负氢离子由于分子相对较小，作为中间的一个重要物质进入细胞快，还原性增强，因此负氢离子不仅可以改善细胞的代谢和循环，而且还有利于组织和器官的修复。(4)负氢离子体积微小，氢原子直径仅为0.064nm，质量极轻可迅速进入细胞，它能轻松进入任何组织，如肝、心、肺、肾、脑、皮肤和肌肉等，充当抗氧化和能量载体的角色，在体内形成一个特殊的生物环境。

尽管负氢离子具有良好的生物化学效应，但负氢离子在自然界中不能单独存在，难于制备和保存。

2013年，本发明人发明了一种担载负氢离子的粉体及其制备方法，申请并授权发明专利，专利号为ZL201310755613.1，授权公布号：CN103710028B，授权公告日为2014.12.24；该发明通过将脱除有机物的贝壳粉碎进行高温焙烧，使得得到的粉体具有纳微结构，然后将等离子状态下得到的负氢离子体固定在纳微结构的粉末中。这种粉末一旦与水就会释放出负氢离子，负氢离子改变水的特性，使普通的水具备负电位、弱碱性等特征。该发明提供的担载负氢离子的粉体在水中释放出的负氢离子浓度高达252ppb。但是该发明提供的担载负氢离子的粉体尚未开发出更多的功能。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种牡蛎负氢片及其制备方法，其制备的牡蛎负氢片具有对化学性肝损伤有辅助保护作用、增强免疫力的保健功能。

所采用的技术方案为：

一种牡蛎负氢片，其是由如下重量份的原料制备而成的：

进一步地，其是由如下重量份的原料制备而成的：

进一步地，所述牡蛎肉提取物是通过如下方法制备得到的：取新鲜牡蛎肉，研磨成浆，之后将牡蛎肉浆放入纯水中煎煮2-3次，每次煮制1-2h,合并煎液，减压浓缩冻干得牡蛎肉提取物。

进一步地，所述葛根提取物是通过如下方法制备得到的：将葛根粉碎，加入浓度为60％的乙醇溶液在常温下提取3次，每次料液重量比1:4-6，每次1-2小时，浸提液浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，后用30％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥而成。

进一步地，所述负氢牡蛎钙粉是通过如下方法制备得到的:将粒径200-300目的牡蛎壳粉末在温度为700℃、氮气保护条件下处理；将处理后的牡蛎壳粉末在温度为1000℃、氢气和氮气的混合气体保护条件下处理，得到负氢牡蛎钙粉。

本发明的一种牡蛎负氢片的制备方法，包括如下步骤：

将牡蛎肉提取物、葛根提取物、负氢牡蛎钙粉、淀粉混合均匀后，制粒，然后加入硬脂酸镁，压片即得。

在上述技术方案中，

负氢离子被吸纳到牡蛎钙粉中的微孔中，最终生成在常温下稳定的负氢离子载体，即负氢牡蛎钙粉。而它在体内低氧分压环境中，一旦遇水就会缓慢释放氢气，起到主要的对化学性肝损伤有辅助保护作用、增强免疫力的保健作用。

葛根提取物的标志性成分为葛根素，该葛根素的含量不低于20.0％。葛根素是属于从葛根内提取出来的中成药物，它的主要成为是黄酮类化合物，在很大程度上可以给身体增强免疫力、强化肝细胞免疫功能，增强心肌收缩。配合负氢牡蛎钙粉一起对化学性肝损伤有辅助保护作用、增强免疫力的保健作用。

牡蛎肉提取物具有增强免疫力的作用。牡蛎肉提取物富含蛋白质、肝糖元、维生素与矿物质、含有十八种以上的氨基酸，在这些氨基酸中富含可以合成抗酸化物质的谷胱甘肽的氨基酸(谷氨基酸)，可以在人体内合成谷胱甘肽，除去体内的活性酸素，提高免疫力，进一步提高对化学性肝损伤有辅助保护作用、增强免疫力的保健作用。

硬脂酸镁在体内能起到润滑的作用，能够提高肠胃的消化能力。

综上，本发明的有益效果在于：

本发明的牡蛎负氢片经动物实验评价，具有对化学性肝损伤有辅助保护作用、增强免疫力的保健功能。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

实施例1

本实施例的一种牡蛎负氢片，其是由如下重量份的原料制备而成的：

其中，牡蛎肉提取物是通过如下方法制备得到的：取新鲜牡蛎肉，研磨成浆，之后将牡蛎肉浆放入纯水中煎煮2-3次，每次煮制1-2h,合并煎液，减压浓缩冻干得牡蛎肉提取物。

葛根提取物是通过如下方法制备得到的：将葛根粉碎，加入浓度为60％的乙醇溶液在常温下提取3次，每次料液重量比1:4-6，每次1-2小时，浸提液浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，后用30％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥而成。

负氢牡蛎钙粉是通过如下方法制备得到的:将粒径200-300目的牡蛎壳粉末在温度为700℃、氮气保护条件下处理；将处理后的牡蛎壳粉末在温度为1000℃、氢气和氮气的混合气体保护条件下处理，得到负氢牡蛎钙粉。

该牡蛎负氢片的制备方法，包括如下步骤：

将牡蛎肉提取物、葛根提取物、负氢牡蛎钙粉、淀粉混合均匀后，制粒，然后加入硬脂酸镁，压片即得。

实施例2

参照实施例1，与实施例1不同的是，本实施例的一种牡蛎负氢片，其是由如下重量份的原料制备而成的：

实施例3

参照实施例1，与实施例1不同的是，本实施例的一种牡蛎负氢片，其是由如下重量份的原料制备而成的：

试验

将实施例2的牡蛎负氢片用于动物试验。

1材料与方法

1.1实验动物：由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供的SPF级昆明种雄性小鼠55只，动物质量合格证号：110324210100890883，体重12-14g，生产许可证号：SCXK(京)2019-0010。

1.2试验分组及剂量设计：选取适应6天体重在18-22g的雄性小鼠50只随机分为三个剂量组、一个空白对照组和一个模型对照组，共五组，每组10只。

1.3剂量设计：设1.5g/kg.BW、1.0g/kg.BW、0.5g/kg.BW三个剂量组。另设空白对照组和模型对照组。用无水乙醇(分析纯)造成肝损伤模型，乙醇浓度为50％(以纯水稀释)，灌胃量12mL/kg.BW。

1.4样品配制：分别称取样品1.5g、1.0g、0.5g，依次加纯水至20mL，溶解混匀，分别配成浓度为7.5％、5.0％、2.5％的溶液，备用。

1.5试验方法：采用酒精性肝损伤模型法，三个剂量组给予不同剂量的样品，空白对照组和模型对照组给予同体积纯水，按20mL/kg.BW每天经口灌胃一次，每周称两次体重，按体重调整受试样品剂量。连续给予受试样品30天，结束时将模型对照组和三个剂量组，次经口灌胃给予50％乙醇溶液，灌胃量12mL/kg.BW，空白对照组给予同体积的纯水，禁食16h后颈椎脱白处死动物，取肝左叶作组织病理学检查，剩余肝脏用0.9％氯化钠注射液冲洗、拭干后准确称取组织重量，剪碎置于匀浆器中，按重量g：体积mL＝1:9的比例，加入0.9％氯化钠注射液，在冰水浴条件下以20000r/min机械匀浆10S，间歇30S，反复3次制备成10％的肝匀浆，另取10％的肝匀浆制备份5％的肝匀浆，均以3000r/min离心10min，取上清液进行各项指标(还原型GSH、TG、MDA)的检测，其中MDA、还原型GSH的检测方法及计算方法均参照南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书，TG采用BS-330E全自动生化分析仪检测。

2结果检测

2.1评价方法

镜检，从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积。

2.2评分标准

分别记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，累计所观察视野的病变总分。

2.3结果判定：满足任一条件，可判定受试样品具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用。

2.3.1肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性。

2.3.2肝脏MDA、还原型GSH和TG三项指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。

2.4试验数据统计：用SPSS26软件对各试验原始数据进行方差齐性检验，满足“方差齐”，要求的数据资料用单因素方差分析方法和多个试验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理：对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足“正态分布和方差齐”要求后，再进行统计处理，如果仍不满足条件，采用非参数检验。

3.试验结果

3.1牡蛎负氢片对小鼠体重的影响

由表1可见，各剂量组及模型对照组小鼠体重、体重增重与空白对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表1牡蛎负氢片对小鼠体重的影响(X+SD)

3.2牡蛎负氢片对小鼠肝匀浆中MDA，还原型GSH和TG的影响

由表2可见，按12mL/kg.BW的剂量给予小鼠50％乙醇后，模型对照组MDA值升高、还原型GSH值降低、TG值升高，与空白对照组比较，差异均有显著性(P<0.01)，说明本次实验造模成功。各剂量组与模型对照组比较，各剂量组MDA值降低，但差异无显著性(P>0.05)：各剂量组还原型GSH值升高，差异均有显著性(P<0.01)：各剂量组TG值均降低，差异均有显著性(P<0.01)。可以判定GSH和TG两项指标结果为阳性。

表2牡蛎负氢片对小鼠MDA、还原型GSH和TG的影响(X+SD)

注：各剂量组与模型对照组比较，**表示P<0.01：模型对照组与空白对照组比较，##表示P<0.01。

3.3牡蛎负氢片对小鼠肝脏组织病理组织学的影响

由表3可见，模型对照组与空白对照组比较，肝脏脂肪细胞变性评分在统计学上有显著性差异(P<0.01)，说明小鼠酒精性肝损伤模型造模成功。与模型对照组比较，各剂量组肝细胞脂肪变性程度均减轻，其中高、中剂量组与模型对照组差异有显著性(P<0.05)，病理组织学指标可判断为阳性。

表3牡蛎负氢片对小鼠肝脏组织病理组织学的影响(X+SD)

注：各剂量组与模型对照组比较，*表示P<0.05；模型对照组与空白对照组比较，#表示P<0.01。

4结论

以50％无水乙醇造成SPF级昆明种雄性小鼠化学性肝损伤模型。按送检单位提供的人体推荐摄入量(3.0g/60kg.BW即0.05g/kg.BW)的30、20、10倍(即1.5g/kg.BW、1.0g/kg.BW、0.5g/kg.BW)作为该样品高、中、低三个剂量组，同时设空白对照组和模型对照组，小鼠连续经口灌胃30天，进行各项指标测定。

如下：

4.1各剂量组及模型对照组小鼠体重增重与空白对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

4.2模型对照组与空白对照组比较各项指标差异均有显著性，表明酒精性肝损伤模型建立成功，在此基础上各剂量组与模型对照组比较：各剂量组肝匀浆MDA值降低，但差异无显著性(P>0.05)；各剂量组肝匀浆还原型GSH值升高，差异有显著性(P<0.01)；各剂量组肝匀浆中TG值降低，差异均有显著性(P<0.01)。判定GSH和TG两项指标结果为阳性。

4.3肝脏病理组织学结果显示：各剂量组肝细胞脂肪变性程度均减轻，其中高、中剂量组与模型对照组比较，差异有显著性(P<0.05)。

结论：该样品肝匀浆中GSH和TG两项指标及病理组织学检查结果均为阳性，依据《允许保健食品声称的保健功能目录非营养素补充剂(2020年版)(征求意见稿)》中“对化学性肝损伤有辅助保护功能检验方法”可以判定：

牡蛎负氢片具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。