糜蛋白酶在制备用于超声引导下包裹性胸/腹水置管引流堵塞的制剂中的应用

技术领域

本发明涉及医疗医药技术领域，尤其涉及一种糜蛋白酶在制备用于超声引导下包裹性胸/腹水置管引流堵塞的制剂中的应用。

背景技术

正常人胸/腹膜腔内有5-15ml液体，主要由壁胸/腹膜以0.1ml/kg/h的速率分泌。胸/腹腔积液是胸/腹膜腔非正常的液体聚积物，临床上十分常见，是胸/腹膜疾病最常见的表现。导致胸/腹腔积液的病因众多，如：结核、恶性肿瘤、外伤、心功能不全、肺炎、脓胸、肝功能不全、胰腺炎、低蛋白血症等。目前常用超声引导下胸/腹水置管引流的方法来治疗胸/腹水过多的情况，形象描述就是将一根引流管在超声声像实时引导下植入患者胸/腹腔内有水的部位，将水吸出以减轻患者症状。

由于导致胸/腹水的病因不同，胸/腹水中可能含有大量白细胞、蛋白质、纤维蛋白原、凝血因子等，容易形成局限性、内含多个纤维分隔的包裹性积液。由于分隔之间的积液互不相通，往往造成引流管只能引流一小部分液体，不能有效改善症状。此外，这些富含蛋白的物质进入引流管，可于管腔中形成血栓或血凝块，直接影响引流状态，甚至堵塞引流管。

针对上述的引流管堵塞的问题，目前一般通过挤压体外引流管，使用生理盐水冲管、甚至更换引流管等方法疏通。上述方法虽然能在一定程度上改善引流效果，但是前述的挤压、冲管的方法的持久疏通效果往往并不理想，容易再次发生堵塞现象，而更换引流管又存在二次穿刺风险、成本/效益比低。

因此，为临床寻找一种既安全、又便捷的持久疏通引流的方法尤为重要。

发明内容

本发明的目的就在于提供一种糜蛋白酶在制备用于超声引导下包裹性胸/腹水置管引流堵塞的制剂中的应用，以解决上述问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的：糜蛋白酶在制备用于超声引导下包裹性胸/腹水置管引流堵塞的制剂中的应用。

作为优选的技术方案：所述制剂为糜蛋白酶注射液。

作为优选的技术方案：所述制剂在超声影像实时引导下注入胸/腹水中。

本领域技术人员知晓的：蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶的总称，常见包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶等。由于粘稠胸/腹水中往往含有较多蛋白成分，因此本申请的发明人试想：能否通过使用酶类的化学作用，降解蛋白，从而达到胸/腹腔置管后通畅引流的目的。然而，截止目前，尚未见有将酶类药物应用于降解粘稠胸/腹水，疏通引流管引流的报道。

尽管胃蛋白酶是生物体消化胃内容物最常见的一种酶类，但其活性主要适用于酸性环境，在胸/腹水(弱碱性环境)中发挥蛋白降解作用受到了限制。

糜蛋白酶为胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能促进血凝块、脓性分泌物和坏死组织等的消化清除，用于眼科手术以松弛韧带，减轻创伤性虹膜睫状体炎；也可用于创口或局部炎症，以减少局部分泌和水肿。即目前已知糜蛋白酶可用于创伤或手术后伤口愈合、抗炎、防止局部水肿、积血、扭伤血肿等，因此多被外科医生熟知其用途，然而外科医生不常规使用超声设备，也不进行超声引导下的介入操作，因此不会想到使用糜蛋白酶处理胸/腹水引流管堵塞的问题；

另一方面，虽然超声医生超声影像对多种疾病的检查，对从事超声介入工作的医生而言，也熟悉超声引导下胸腹水置管引流，但超声医生一般情况不具有处方权，一般情况也不常规使用药物，因此不会想到糜蛋白酶在胸腹水引流管堵塞疏通中的作用，因此不会想到使用糜蛋白酶处理胸/腹水引流管堵塞。

本申请的发明人通过大量实验发现：相较于胰蛋白酶，糜蛋白酶能更快速的将胸/腹水中的血凝块、脓性分泌物和坏死组织等液化清除。此外，糜蛋白酶还能使纤维蛋白酶原变成纤维蛋白溶解酶，去除大部分纤维性渗出物的阻塞，使血液和体液通畅。同时研究表明，对于结核性胸膜炎患者，给予胸腔内注射一定量的糜蛋白酶后，可有效溶解已形成的胸膜粘连，促进胸膜炎症消退。

如前所述的，目前的思路是在引流管已被堵塞后才进行疏通处理，而本申请提供了一种在已知引流管可能堵塞时可提前进行干预的方法。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本申请创造性使用适量的糜蛋白酶，在超声影像实时引导下注入胸/腹水中，克服了无法降解胸腹水中蛋白含量的障碍，并能对引流管可能堵塞时提前进行干预，能更快速的将胸/腹水中的血凝块、脓性分泌物和坏死组织等液化清除。此外，糜蛋白酶还能使纤维蛋白酶原变成纤维蛋白溶解酶，去除大部分纤维性渗出物的阻塞，使血液和体液通畅；对于胸水患者，处理后通畅引流平均时间为19天，对于腹水患者，处理后通畅引流平均时间为17天，是一种安全、便捷且持久疏通的方法。

附图说明

图1为糜蛋白酶与胸/腹水孵育0，4，8，12，24，48h的肉眼观察结果；

图2为不同时间点(0,4,8,12,48h)的蛋白光谱分析；

图3为280nm处总蛋白吸收峰在不同时间点的分析比较结果，

图4为415nm处血红蛋白吸收峰在不同时间点分析比较结果，

图5为不同质量的糜蛋白酶与胸/腹水共孵育24h的肉眼观察结果；

图6为各组样本稀释后的蛋白光谱分析结果；

图7为280nm处总蛋白吸收峰在各组间的分析比较结果，

图8为415nm处血红蛋白吸收峰在各组间的分析比较结果，

图9为不同处理后，A组和B组胸水患者通畅引流时间分析结果，

图10为根据胸水量的亚组分析结果；

图11为不同处理后，A组和B组腹水患者通畅引流时间分析结果，

图12为根据腹水量的亚组分析结果。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明作进一步说明。

下面分别通过体外试验和体内试验进行效果验证。

实施例1

糜蛋白酶促进粘稠胸/腹水降解体外实验

1.主要试剂和设备

临床上发生引流管堵塞的粘稠胸/腹水若干，糜蛋白酶注射液(4000单位，华润双鹤)，恒温摇床(TYC-20A，上海笃特)，紫外分光光度计(UV5100，上海元析)。

2.实验方法

2.1取粘稠胸/腹水20mL，分成实验组和对照组，每组10mL。实验组中加入0.5mL糜蛋白酶(400单位)，对照组加入等量生理盐水。充分混匀后，置于37℃恒温摇床孵育，分别于4h,8h,12h,24h,48h各取20μL进行观察，使用紫外分光光度计测定各组不同时间点的蛋白含量。每组重复三次。

2.2取粘稠胸/腹水10mL，分成5个实验组，每组2mL；每组分别加入1,2,3,4,5mg糜蛋白酶，充分混匀后，置于37℃恒温摇床孵育24h后进行观察。之后，对各组分别取40μL加入2mL PBS液中，使用紫外分光光度计测定各组样本的蛋白含量。每组重复三次。

3.实验结果

3.1如图1所示，随孵育时间的延长，样本颜色逐渐由红色变为褐色。使用紫外分光光度计分析后发现，样本中总蛋白的特征吸收峰(280nm)、血红蛋白特征吸收峰(415nm)，均随着时间的延长而逐渐降低(图2)，表明样本中的蛋白含量逐渐减少。进一步对各时间点的蛋白吸收峰值分析比较发现(图3，图4)，与糜蛋白酶孵育12h后，样本中的总蛋白、血红蛋白含量均显著降低(P＜0.05)，在12,24,48h三个不同时间点比较，差异不具有统计学意义(P＞0.05)。

3.2如图5所示，随糜蛋白酶浓度增加，样本颜色由红色逐渐变为褐色。使用紫外分光光度计分析后发现，样本中总蛋白的特征吸收峰(280nm)、血红蛋白特征吸收峰(415nm)，均随着糜蛋白酶含量的增加而逐渐降低(图6)，表明样本中的蛋白含量逐渐减少。进一步对蛋白吸收峰值分析比较发现(图7，图8)，样本中的总蛋白、血红蛋白含量均显著降低，总蛋白含量在3，4，5mg三组间无统计学差异(P＞0.05)，在其余各组之间，总蛋白、血红蛋白含量均有显著差异(P＜0.05)。

实施例2:

糜蛋白酶促进粘稠胸/腹水降解体内实验

1.患者资料

共计纳入粘稠胸/腹水患者30例，其中，男性19例，女性11例，所述30例均为伴胸/腹腔积液的肿瘤患者，所有患者均已置胸/腹腔积液引流管并发生堵管现象致引流不畅，所有患者均签署知情同意书。上述患者随机分成A、B共2组，其中A组胸水8例、腹水7例；B组胸水9例、腹水6例。两组基本资料如表1所示，比较差异无统计学意义(表1，P＞0.05)。

表1.两组患者基本资料比较

2.实验方法

上述患者随机分成2组：A组使用10mL生理盐水冲管，对冲管后依旧引流不通者，予以拔管后再次行超声引导下置管引流。B组使用10mL生理盐水冲管，对冲管再通者予以管内注射糜蛋白酶1支(4000单位，华润双鹤)；对冲管后依旧引流不通者，予拔管后再次超声引导下置管并经引流管注射糜蛋白酶1支(4000单位)。B组注射药物后，夹闭引流管24h，之后按常规方法通畅引流。两组分别记录操作后通畅引流持续时间，并分析比较。

3.实验结果

胸水患者中，经A组处理后通畅引流平均持续时间为6.0天，经B组处理后通畅引流平均时间为19.1天，两组比较差异具有统计学意义(图9，P＜0.05)，取得了预料不到的技术效果。根据胸水量进行亚组分析发现，两组在少量胸水、中-大量胸水之间均具有显著的统计学差异(图10，P＜0.05)，图10中：(1)两组间少量胸水患者经不同处理后，通畅引流持续时间分析比较，

腹水患者中，经A组处理后通畅引流平均持续时间为8.6天，经B组处理后通畅引流平均时间为17.2天，两组比较差异具有统计学意义(图11，P＜0.05)，取得了预料不到的技术效果。根据腹水量进行亚组分析发现，两组在少量腹水、中-大量腹水之间均具有显著的统计学差异(图12，P＜0.05)，图12中：(1)两组间少量腹水患者经不同处理后，通畅引流持续时间分析比较，

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。