含硫并环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种含硫并环类衍生物抑制剂及其制备方法和应用。

背景技术

RAS是一种由189个氨基酸(分子量21kDa)的单体球状蛋白，并结合GDP或GTPoRAS作为分子开关。RAS中影响其与GAP相互作用或将GTP转换回GDP的能力的任何突变都将导致蛋白质的活化时间延长，从而导致细胞信号延长，使其继续生长和分裂。因为这些信号导致细胞生长和分裂，所以过度活跃的RAS信号可能最终导致癌症。RAS亚家族最著名的成员是HRAS，KRAS和NRAS，主要是因为它们与多种类型的癌症有关。RAS的三个主要同工型(HRAS，NRAS或KRAS)基因中的任何一种突变都是人类肿瘤发生中最常见。发现人类肿瘤中约有30％携带RAS基因突变。其中，KRAS突变在25-30％的肿瘤中检测到。

SOS1（Son of Sevenless 1）是一类重要的鸟苷酸交换蛋白，与RAS家族蛋白有两个结合位点，一个是催化位点，与GDP结合状态的RAS家族蛋白结合来促进鸟苷酸的交换使其变成GTP结合状态的RAS蛋白，另一个是变构位点，与GTP结合状态的RAS家族蛋白结合促进SOS1催化功能进一步增加。抑制SOS1可阻断SOS1与KRAS的结合，从而将KRAS蛋白阻断在非活化状态。

目前关于KRAS突变的肿瘤的研究越来越多，例如，安进公司的AMG510、Mirati公司及勃林格殷格翰公司的MRTX-849均已进入临床研究。并且专利CN114539245A及CN114456165A中公开了一系列的抑制SOS的并环化合物。例如，在专利CN114456165A中公开了噻吩并嘧啶的系列化合物。但是，活性更好和安全性高的SOS1抑制剂仍然具有较大的治疗潜力，临床应用前景广阔。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通式( I )所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其中通式( I )所示的化合物结构如下：

其中，

M选自NH、O或S；

M

环A存在或不存在，当环A存在时，选自C

L选自键、-(CH

R

R

R

R

R

R

或者，R

z为0~5的整数；

n1和n2独立地为0~5的整数；

m1为0~2的整数；

条件是，当环A不存在时，L不为键，并且R

在本发明优选的实施方案中，所述通式（I）化合物进一步如式（II）所示：

其中：

M选自NH、O或S；

L选自键、-(CH

R

R

R

R

R

z为0~3的整数；

n1为0~3的整数。

在本发明优选的实施方案中，所述通式（I）化合物进一步如式（III-1）或（III-2）所示：

其中：

M选自NH、O或S；

M

R

R

R

R

R

z为0~3的整数；

n2为0~3的整数。

在本发明进一步优选的实施方案中，所述R

R

在本发明进一步优选的实施方案中，所述R

优选地，R

在本发明进一步优选的实施方案中，所述R

R

优选地，R

本发明还提供了一种药用组合物，其包括有效剂量的所示的各通式化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明还提供了一种优选方案，涉及所述的各通式化合物、及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药物组合物在制备SOS1抑制剂与RAS家族蛋白和/或RACl抑制剂药物中的应用。

本发明还提供了一种优选方案，涉及所述的各通式化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药物组合物在制备预防或/和治疗膜腺癌、肺癌、结直肠癌、胆管癌、多发性骨髓瘤、黑素瘤、子宫癌、子宫内膜癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、膀肮癌、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、头颈部鳞状细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、食道癌、慢性淋巴细胞白血病、肝细胞癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤、肾癌和肉瘤等疾病或病症药物中的应用。

本发明的化合物和组合物可用于治疗在制备治疗膜腺癌、肺癌、结直肠癌、胆管癌、多发性骨髓瘤、黑素瘤、子宫癌、子宫内膜癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、膀肮癌、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、头颈部鳞状细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、食道癌、慢性淋巴细胞白血病、肝细胞癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤、肾癌和肉瘤等疾病或病症中的方法。

在一些实施例中，本发明提供一种治疗癌症病症的方法，其包含将本发明的化合物或组合物给予患有癌症病症的患者。

在一些实施例中，由本发明的化合物或组合物治疗I型神经纤维瘤病（NFl）、努南综合症（NS）、伴有多斑的努南综合症（NSML)、毛细血管畸形动静脉畸形综合症（CMAVM）、科斯特洛综合症(CS）、心面皮肤综合症（CFC）、莱格斯综合症和遗传性牙根纤维瘤病。

发明的详细说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羟基取代的烷基。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，单环烷基选自包含3至12个碳原子，优选包含3至8个碳原子，进一步优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。

术语“桥环烷基”指 5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为5至14元，更优选为6至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

/>

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)

单环杂环基的非限制性实例包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吖庚基、1,4-二氮杂环庚基、吡喃基、四氢吡喃基等，优选氮杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吗啉基、哌啶基、吖庚基和哌嗪基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或者两个以上的原子与其他环烷基、杂环基、芳基和杂芳基进一步并环连接。术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)

。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。

“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。

“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。

“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷硫基，其中烷硫基如上所定义。

“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。

“烯基”指链烯基，又称烯烃基，其中所述的烯基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。

“羟基”指-OH。

“卤素”指氟、氯、溴或碘。

“氨基”指-NH

“氰基”指-CN。

“硝基”指-NO

“羰基”指-C(O)-。

“羧基”指-C(O)OH。

“THF”指四氢呋喃。

“EtOAc”指乙酸乙酯。

“MeOH”指甲醇。

“DMF”指N,N-二甲基甲酰胺。

“DIPEA”指二异丙基乙胺。

“TFA”指三氟乙酸。

“MeCN”指乙晴。

“DMA”指N,N-二甲基乙酰胺。

“Et

“DCE”指1,2二氯乙烷。

“DIPEA”指N,N-二异丙基乙胺。

“NBS”指N-溴代琥珀酰亚胺。

“NIS”指N-碘代丁二酰亚胺。

“Cbz-Cl”指氯甲酸苄酯。

“Pd

“Dppf”指1,1’-双二苯基膦二茂铁。

“HATU”指2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。

“KHMDS”指六甲基二硅基胺基钾。

“LiHMDS”指双三甲基硅基胺基锂。

“MeLi”指甲基锂。

“n-BuLi”指正丁基锂。

“NaBH(OAc)

“X选自A、B、或C”、“X选自A、B和C”、“X为A、B或C”、“X为A、B和C”等不同用语均表达了相同的意义，即表示X可以是A、B、C中的任意一种或几种。

本发明所述的氢原子均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢原子也均可被氘原子取代。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

具体实施方式

以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。

实施例

本发明的化合物结构是通过核磁共振 (NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜 (DMSO-

液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200 Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150× 4.6 mm色谱柱)和Waters2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15 mm～0.20 mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4 mm～0.5 mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。

在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度（℃）。

中间体1

（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）硼酸

第一步：（6-氨基-3-氧异吲哚-4-基）硼酸

5-氨基-7-氟异吲哚-1-酮（166mg，1mmol）和4,4,4'，4'，5,5,5'，5'-八甲基-2,2'-铋（1,3,2-二氧杂硼烷）（354mg，1.4mmol）溶于1,4-1,4-二恶烷中（10mL），加入醋酸钾（49mg，0.5mmol）和1,1′-二（二苯基膦）二茂铁]二氯钯（73mg,0.1mmol），在90℃下搅拌4小时。用乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离得到（6-氨基-3-氧异吲哚-4-基）硼酸（134mg，产率：69%）。

MS m/z (ESI): 193.0 [M+H]

第二步：（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）硼酸

（6-氨基-3-氧异吲哚-4-基）硼酸(192mg，1mmol)，四氢呋喃（20mL），氢氟酸（2mL），在硝基硫酸（5mL）存在条件下，-5℃搅拌反应40小时，加水淬灭反应，四氯化碳（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离（得到（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）硼酸（155mg，产率：79%）。

MS m/z (ESI): 196.0 [M+H]

1

中间体2

（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸（150mg，1 mmol）和无水硫酸镁(1.5 mg），在无水甲醇（5 mL）中。在氮气气氛下将反应混合物冷却至0°C。向该混合物中逐滴添加二甲胺（90mg，2mmol）。在0°C下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌3小时。再次将反应罐冷却至0°C，并每隔10分钟分三份添加NaBH

MS m/z (ESI): 181.2[M+H]

1

中间体3

（3-（甲氧基甲基）吡啶-2-基）硼酸

反应在氩气保护下进行。二乙基乙醚（100 mL）放入CO2/丙酮中，在磁力搅拌器中冷却至-70 ℃。正丁基锂（3.2g，50 mmol）缓慢添加到搅拌溶剂中。2-溴-3-（甲氧基甲基）吡啶（10 g，50 mmol）缓慢加入到上述反应液中，搅拌1小时后，将硼酸三乙酯（8.76mg，60mmol）加入上述溶液，并继续搅拌反应1小时。移除CO

MS m/z (ESI): 168.0[M+H]

1

中间体4

（3-（吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和吡咯为原料参照中间体2的制备方法得到中间体4（3-（吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 207.1[M+H]

中间体5

（3-（哌啶-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和哌啶为原料参照中间体2的制备方法得到中间体5（3-（哌啶-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 221.1[M+H]

中间体6

（3-（（3-氟氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和3-氟氮杂环丁烷为原料参照中间体2的制备方法得到中间体6（3-（哌啶-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 211.1[M+H]

中间体7

（3-（（甲胺基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和甲胺为原料参照中间体2的制备方法得到中间体7（3-（（甲胺基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 167.0[M+H]

中间体8

（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以2-溴-3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶为原料参照中间体3的制备方法得到中间体8（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 206.1[M+H]

中间体9

（3-（（3-甲基氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和3-甲基氮杂环丁烷为原料参照中间体2的制备方法得到中间体9（3-（（3-甲基氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 207.1[M+H]

中间体10

（3-（（2-氟氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和2-氟氮杂环丁烷为原料参照中间体2的制备方法得到中间体10（3-（（2-氟氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 211.1[M+H]

中间体11

（3-（（4-（三氟甲基）哌啶-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和4-（三氟甲基）哌啶为原料参照中间体2的制备方法得到中间体11（3-（（4-（三氟甲基）哌啶-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 289.1[M+H]

中间体12

（3-（（3-甲基吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和3-甲基吡咯烷为原料参照中间体2的制备方法得到中间体12（3-（（3-甲基吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 221.1[M+H]

中间体13

（3-（（3-甲氧基吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和3-甲氧基吡咯烷为原料参照中间体2的制备方法得到中间体13（3-（（3-甲氧基吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 237.1[M+H]

中间体14

（3-（（3-氟吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸

以（3-甲酰基吡啶-2-基）硼酸和3-氟吡咯烷为原料参照中间体2的制备方法得到中间体14（3-（（3-氟吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸。

MS m/z (ESI): 225.1[M+H]

中间体15

（5-甲基-2-（（甲胺基）甲基）苯基）硼酸

以（2-甲酰基-5-甲基苯基）硼酸和甲胺为原料参照中间体2的制备方法得到中间体15（5-甲基-2-（（甲胺基）甲基）苯基）硼酸。

MS m/z (ESI): 180.1[M+H]

中间体16

（5-甲基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸

以（2-甲酰基-5-甲基苯基）硼酸和吡咯为原料参照中间体2的制备方法得到中间体16（5-甲基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸。

MS m/z (ESI): 220.1[M+H]

中间体17

（5-甲氧基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸

以（2-甲酰-5-甲氧基苯基）硼酸和吡咯为原料参照中间体2的制备方法得到中间体17（5-甲氧基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸。

MS m/z (ESI): 236.1[M+H]

1

实施例1

7-（5-（1-（（6-（3-异丙基吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮

第一步：乙基4-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯

将乙基4-氯-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯（6.5 g，25.32 mmol），1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-胺（6.33 g，30.88 mmol），N,N-二异丙基乙胺（6.6 g，51.48 mmol）和二甲基亚砜(80mL)的混合物在100℃搅拌6小时，反应体系冷却至室温，加水淬灭反应，乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离得到乙基4-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯（6.1 g，产率：56%）。

MS m/z (ESI): 426.0[M+H]

第二步：乙基 2-甲基-4-（（1-（5-（3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯

乙基 4-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲 酸酯（6.0 g，14.1 mmol）溶于二氧六环（100 mL），加入（3-氧异吲哚-4-基）硼酸（3.5 g，19.8mmol）和饱和碳酸钾水溶液（35 mL）。Pd(dppf)Cl

MS m/z (ESI): 479.1[M+H]

第三步：2-甲基-4-（（1-（5-（3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸

乙基 2-甲基-4-（（1-（5-（3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸酯（478 mg，1.0 mmol）溶于DMSO（5 mL）和MeCN（2 mL），加入5N NaOH（0.3mL）。该反应在室温搅拌过夜。得到2-甲基-4-（（1-（5-（3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸直接用于下一步反应。

第四步：7-（5-（1-（（6-（3-异丙基吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮

2-甲基-4-（（1-（5-（3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸（451 mg，1 mmol）溶于DMF（6 mL），加入3-甲基四氢呋喃-3-胺（158mg，1.4mmol），HATU（380 mg，1 mmol）和DIEA（400 mg，3 mmol）。该反应在室温搅拌过夜。水加入反应液，再加入乙酸乙酯萃取。有机相干燥后浓缩。粗产品通过柱层析纯化，得到7-（5-（1-（（6-（3-异丙基吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮453mg。

MS m/z (ESI): 546.2[M+H]

1

实施例2

7-（5-（1-（（2-乙基-6-（3-异丙基吡咯烷-1-羰基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮

以4-氯-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯为原料参照实施例1的制备方法得到化合物7-（5-（1-（（2-乙基-6-（3-异丙基吡咯烷-1-羰基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮。

MS m/z (ESI): 560.2[M+H]

1

实施例3

7-（5-（1-（（6-（3-（1-甲氧乙基）吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮

以3-（1-甲氧乙基）吡咯烷为原料参照实施例1的制备方法得到化合物7-（5-（1-（（6-（3-（1-甲氧乙基）吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮。

MS m/z (ESI): 562.2[M+H]

实施例4

5-氟-7-（5-（1-（（6-（3-（1-甲氧乙基）吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮

以5-氟异吲哚-1-酮为原料参照实施例3的制备方法得到化合物5-氟-7-（5-（1-（（6-（3-（1-甲氧乙基）吡咯烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）异吲哚-1-酮。

MS m/z (ESI): 580.1[M+H]

实施例5

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N，N，2-三甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以二甲胺为原料，参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N，N，2-三甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 496.1[M+H]

1

实施例6

N-环丙基-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N，2-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以N-甲基环丙胺为原料参照实施例4的制备方法得到得到化合物N-环丙基-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N，2-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 522.1[M+H]

实施例7

N-（2-氟-2-苯基环丙基）-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以2-氟-2-苯基环丙烷-1-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物N-（2-氟-2-苯基环丙基）-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 602.1 [M+H]

实施例8

4-（（1-（5-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（噁烷-3-基）噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以奥西坦-3-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（噁烷-3-基）噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 524.1 [M+H]

实施例9

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（四氢呋喃-3-基）硫醚[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以四氢呋喃-3-胺为原料参照实施例1的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（四氢呋喃-3-基）硫醚[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 538.1 [M+H]

1

实施例10

N-（环戊基-1,3-二烯-1-基）-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以环戊基-1,3-二烯-1-胺为原料参照实施例1的制备方法得到化合物N-（环戊基-1,3-二烯-1-基）-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 532.1 [M+H]

实施例11

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（呋喃-2-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以呋喃-2-胺为原料参照实施例1的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（呋喃-2-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 534.1 [M+H]

实施例12

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（吡啶-2-基]噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以吡啶-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（吡啶-2-基]噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 545.1 [M+H]

实施例13

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（5-甲基吡啶-2-基]噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以5-甲基吡啶-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（5-甲基吡啶-2-基]噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 559.1 [M+H]

实施例14

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（5-甲氧基吡啶-2-基”-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以5-甲氧基吡啶-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（5-甲氧基吡啶-2-基”-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 575.1 [M+H]

实施例15

N-（5-氰基吡啶-2-基）-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基基）乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以6-氨基烟腈为原料参照实施例4的制备方法得到化合物N-（5-氰基吡啶-2-基）-4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基基）乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 570.1 [M+H]

实施例16

7-（5-（1-（（6-（氮杂环丁烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）-5-氟异吲哚-1-酮

以氮杂环丁烷为原料，参照实施例4的制备方法得到化合物7-（5-（1-（（6-（氮杂环丁烷-1-羰基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基）乙基）噻吩-2-基）-5-氟异吲哚-1-酮。

MS m/z (ESI): 508.1[M+H]

实施例17

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（1H-吡咯-2-基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以1H-吡咯-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（1H-吡咯-2-基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 533.1 [M+H]

实施例18

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（呋喃-2-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以呋喃-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（呋喃-2-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 534.1 [M+H]+.

实施例19

4-（（1-（5-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（4-甲基呋喃-2-基）硫醚[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以4-甲基呋喃-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-2-甲基-N-（4-甲基呋喃-2-基）硫醚[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 548.1 [M+H]+.

实施例20

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（4-甲氧基呋喃-2-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以4-甲氧基呋喃-2-胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（4-甲氧基呋喃-2-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 564.1 [M+H]

实施例21

4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（甲氧甲基）-N，2-二甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以1-甲氧基-N-甲基甲酰胺为原料参照实施例4的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（6-氟-3-氧异吲哚-4-基）噻吩-2-基）乙基）氨基）-N-（甲氧甲基）-N，2-二甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 526.1[M+H]

实施例22

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（二甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

第一步：乙基4-((1-(5-溴呋喃-2-基)乙基)氨基)-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯

以乙基4-氯-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯和1-（5-溴呋喃-2-基）乙烷-1-胺为原料参考实施例1第1步得产品乙基4-((1-(5-溴呋喃-2-基)乙基)氨基)-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸酯。

MS m/z (ESI): 410.0[M+H]

第二步：乙基 4-（（1-（5-（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基]乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

以（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参考实施例1第2步得产品4-（（1-（5-（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基]乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯。

MS m/z (ESI): 466.1[M+H]

第三步：4-（（1-（5-（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸

参考实施例1第3步得产品4-（（1-（5-（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸。

MS m/z (ESI): 438.1[M+H]

第四步：（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（二甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸（438 mg，1 mmol）溶于DMF（10 mL），加入（E）-丁-2-烯-1-胺（120 mg，1.2mmol），HATU（380 mg，1 mmol）和DIEA（252 mg，3.5 mmol）。该反应在室温搅拌过夜。水加入反应液，再加入乙酸乙酯萃取。有机相干燥后浓缩。粗产品通过柱层析纯化，得到（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（二甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺370 mg。

MS m/z (ESI): 491.2[M+H]

1

实施例23

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-甲氧甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（甲氧基甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-甲氧甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 478.1[M+H]

1

实施例24

（E）-4-（（1-（5-（3-（叠氮-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-N-（丁-2-烯-1-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（叠氮-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-4-（（1-（5-（3-（叠氮-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-N-（丁-2-烯-1-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 489.2[M+H]

实施例25

（E）-4-（（1-（5-（3-（氮丁-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-N-（丁-2-烯-1-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（氮丁-1-基甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-4-（（1-（5-（3-（氮丁-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-N-（丁-2-烯-1-基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺.

MS m/z (ESI): 503.2[M+H]

实施例26

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（3-氟氮杂环丁烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（3-氟氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（3-氟氮杂环丁烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺.

MS m/z (ESI): 521.2[M+H]

实施例27

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-（（甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（甲胺基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-（（甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺.

MS m/z (ESI): 477.2[M+H]

实施例28

（E） -N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺.

MS m/z (ESI): 516.2[M+H]

实施例29

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-氯-4-（（1-（5-（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以2,4-二氯噻吩[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯为原料参照实施例28制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-氯-4-（（1-（5-（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 536.1[M+H]

实施例30

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-氯-4-（（1-（5-（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以4-氯-2-氟噻吩[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯为原料参照实施例23制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-氯-4-（（1-（5-（3-（（1,2-二甲基环丙基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 498.1 [M+H]

实施例31

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲氧基-4-（（1-（5-（3-甲氧甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以4-氯-2-甲氧基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯为原料参照实施例23的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲氧基-4-（（1-（5-（3-甲氧甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 494.1[M+H]

实施例32

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（二甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲氧基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以4-氯-2-甲氧基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（（二甲胺基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-乙基）氨基）-2-甲氧基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 507.2[M+H]

实施例33

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-甲基氮杂环丁烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（3-甲基氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-甲基氮杂环丁烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 517.2 [M+H]+.

实施例34

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（2-氟氮杂环丁烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（2-氟氮杂环丁烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）甲二醇为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（2-氟氮杂环丁烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 521.2[M+H]

实施例35

（E）-N-（丁-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-（3-（三氟甲基）吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（3-（三氟甲基）吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-（3-（三氟甲基）吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 585.2[M+H]

实施例36

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-甲基吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（3-甲基吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-2-甲基-4-（（1-（5-（3-甲基吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 531.2[M+H]

实施例37

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（3-甲氧基吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基]乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（3-甲氧基吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（3-甲氧基吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基]乙基）氨基）-2-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 547.2[M+H]

实施例38

（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（3-氟吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

/>

以（3-（（3-氟吡咯烷-1-基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例22的制备方法得到化合物（E）-N-（丁基-2-烯-1-基）-4-（（1-（5-（3-（3-氟吡咯烷-1-基甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基乙基）氨基）-2-甲基噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 535.2[M+H]

实施例39

4-（（1-（5-（2-（氮丁-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以4-氯-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯、（2-（氮丁-1-基甲基）苯基）硼酸和丙-2-炔-1-胺为原料参照实施例25的制备方法得到化合物（4-（（1-（5-（2-（氮丁-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 540.1[M+H]

实施例40

4-（（1-（5-（2-（（3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基，-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（（3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基）甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（2-（（3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基，-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 570.1[M+H]

实施例41

4-（（1-（5-（2-（（二甲氨基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（（二甲氨基）甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（2-（（二甲氨基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 528.2[M+H]

实施例42

4-（（1-（5-（2-（（（2-甲氧乙基）（甲基）氨基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（（2-甲氧乙基）（甲基）氨基）甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（2-（（（2-甲氧乙基）（甲基）氨基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 572.2[M+H]

实施例43

4-（（1-（5-（2-（甲氧甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（甲氧基甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（2-（甲氧甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 515.2[M+H]

实施例44

N-（丙-2-炔-1-基）-4-（（1-（5-（2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物N-（丙-2-炔-1-基）-4-（（1-（5-（2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 554.1[M+H]

实施例45

4-（（1-（5-（2-（（3-甲基吡咯烷-1-基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（（3-甲基吡咯烷-1-基）甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（2-（（3-甲基吡咯烷-1-基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 568.1[M+H]

实施例46

4-（（1-（5-（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基]乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（3-（（二甲氨基）甲基）吡啶-2-基）呋喃-2-基]乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 529.2[M+H]

实施例47

4-（（1-（5-（4-（（二甲氨基）甲基）吡啶-3-基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（（4-（（二甲氨基）甲基）吡啶-3-基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（4-（（二甲氨基）甲基）吡啶-3-基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 529.2[M+H]

实施例48

4-（（1-（5-（2-（（二甲氨基）甲基）-5-甲基苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（（二甲氨基）甲基）-5-甲基苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（2-（（二甲氨基）甲基）-5-甲基苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 542.2[M+H]

1

实施例49

4-（（1-（5-（5-甲基-2-（（甲胺基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（5-甲基-2-（（甲胺基）甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-甲基-2-（（甲胺基）甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 528.2[M+H]

实施例50

4-（（1-（5-（5-甲氧基-2-（甲氧甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（5-甲氧基-2-（甲氧甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-甲氧基-2-（甲氧甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 545.2[M+H]

1

实施例51

4-（（1-（5-（5-氟-2-（甲氧基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（5-氟-2-（甲氧甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-氟-2-（甲氧基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 533.2[M+H]

实施例52

N-（丙-2-炔-1-基）-4-（（1-（5-（2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物N-（丙-2-炔-1-基）-4-（（1-（5-（2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 554.2[M+H]

实施例53

4-（（1-（5-（5-甲基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

/>

以（5-甲基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-甲基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 568.2[M+H]

实施例54

4-（（1-（5-（5-甲氧基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺

以（5-甲氧基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）硼酸为原料参照实施例39的制备方法得到化合物4-（（1-（5-（5-甲氧基-2-（吡咯烷-1-基甲基）苯基）呋喃-2-基）乙基）氨基）-N-（丙-2-炔-1-基）-2-（三氟甲基）噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。

MS m/z (ESI): 584.2[M+H]

1

实施例55

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基-6-(3-甲基四氢呋喃-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

第一步：4,6-二氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶

/>

将4,6-二氯-2-甲基嘧啶-5-甲醛（10.0 g，52.36 mmol），乙二醇（3.2 g，78.53mmol），对甲苯磺酸（894 mg，5.2 mmol）和甲苯（150mL）的混合溶液回流24小时，反应体系冷却至室温，加水淬灭反应，乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=15/1）得到4,6-二氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶（11.0g，产率：89%）。

MS m/z (ESI): 235.0[M+H]

1

第二步：二甲基 2-(6-氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)丙二酸酯

将4,6-二氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶（11.0 g，46.81mmol），丙二酸二乙酯（6.2 g，46.81 mmol），碳酸铯（30.4 g，9.62 mmol）和二甲基亚砜(150 mL)的混合物在100℃搅拌16小时，反应体系冷却至室温，加水淬灭反应，乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=2/1）得到2-(6-氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)丙二酸二甲酯（12.0g，产率：78%）。

1

第三步：甲基 2-(6-氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯

将2-(6-氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)丙二酸二甲酯（12.0 g，36.36 mmol），氯化锂（6.1 g，145.4 mmol）和二甲基亚砜(120 mL)的混合物在100℃搅拌24小时，反应体系冷却至室温，加水淬灭反应，乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=2/1）得到2-(6-氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸甲酯（7.0 g，产率：71%）。

MS m/z (ESI): 273.0 [M+H]

第四步：甲基 (R)-2-(6-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯

将2-(6-氯-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸甲酯（7.0 g，25.74mmol），1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-胺（6.33 g，30.88 mmol），N,N-二异丙基乙胺（6.6 g，51.48 mmol）和二甲基亚砜(80 mL)的混合物在100℃搅拌6小时，反应体系冷却至室温，加水淬灭反应，乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=1/1）得到甲基(R)-2-(6-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯（6.0 g，产率：53%）。

MS m/z (ESI): 442.0 [M+H]

第五步：甲基 (R)-2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯

甲基 (R)-2-(6-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯（5.0 g，11.3 mmol）溶于二氧六环（80 mL），加入(2-((二甲氨基)甲基)苯基)硼酸（2.6 g，14.7 mmol）和饱和碳酸钾水溶液（20 mL）。Pd(dppf)Cl

MS m/z (ESI): 497.2 [M+H]

第六步：(R)-2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸

甲基 (R)-2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯（500 mg，1.0 mmol）溶于DMSO（5 mL）和MeCN（2 mL），加入5N NaOH（0.3 mL）。该反应在室温搅拌过夜。得到(R)-2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸直接用于下一步反应。

MS m/z (ESI): 483.2 [M+H]

第七步：2-(6-(((R)-1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-N-(3-甲基四氢呋喃-3-基)乙酰胺

(R)-2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸（482 mg，1 mmol）溶于DMF（5 mL），加入3-甲基四氢呋喃-3-胺（120 mg，1.2 mmol），HATU（380 mg，1 mmol）和DIEA（400 mg，3 mmol）。该反应在室温搅拌过夜。水加入反应液，再加入乙酸乙酯萃取。有机相干燥后浓缩。粗产品通过柱层析纯化，得到2-(6-(((R)-1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-N-(3-甲基四氢呋喃-3-基)乙酰胺直接用于下一步反应。

MS m/z (ESI): 566.2 [M+H]

第八步：4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基-6-(3-甲基四氢呋喃-3-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-N-(3-甲基四氢呋喃-3-基)乙酰胺（200 mg，0.35 mmol）溶于异丙醇（5 mL），加入5N HCl（1 mL）。该反应在密封条件下50℃搅拌2小时。NaHCO

MS m/z (ESI): 504.2 [M+H]

1

实施例56

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-6-(1-(氟甲基)环丙基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

/>

以2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成1-(氟甲基)环丙烷-1-胺参考实施例55第七步至第八步得产品4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-6-(1-(氟甲基)环丙基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 492.2[M+H]

1

实施例57

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基-6-(1-甲基环丙基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成1-甲基环丙烷-1-胺参考实施例55第七步至第八步得产品4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基-6-(1-甲基环丙基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 474.2[M+H]

1

实施例58

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成四氢-2H-吡喃-4-胺参考实施例55第七步至第八步得产品4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 504.2[M+H]

1

实施例59

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-6-(3-氟环丁基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

以2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成3-氟环丁烷-1-胺参考实施例55第七步至第八步得产品4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-6-(3-氟环丁基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 492.2[M+H]

1

实施例60

4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-6-(3-甲氧基环丁基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

/>

以2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成3-甲氧基环丁烷-1-胺参考实施例55第七步至第八步得产品4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-6-(3-甲氧基环丁基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 504.2[M+H]

1

实施例61

6-环丙基-4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

以2-(6-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成环丙基胺参考实施例55第七步至第八步得产品6-环丙基-4-((1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)-2-甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 460.2[M+H]

1H NMR (400 MHz, Methanol-

实施例62

6-(3-氟环丁基)-2-甲基-4-((1-(5-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

第一步：甲基 (R)-2-(5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基-6-((1-(5-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)嘧啶-4-基)乙酸酯

以甲基 (R)-2-(6-((1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基)-5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基嘧啶-4-基)乙酸酯原料并将(2-((二甲氨基)甲基)苯基)硼酸换成(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)硼酸参考实施例55第五步得产品甲基 (R)-2-(5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基-6-((1-(5-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)嘧啶-4-基)乙酸酯。

MS m/z (ESI): 523.2[M+H]+.

第二步：6-(3-氟环丁基)-2-甲基-4-((1-(5-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮

以甲基 (R)-2-(5-(1,3-二噁戊环-2-基)-2-甲基-6-((1-(5-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)嘧啶-4-基)乙酸酯为原料并将3-甲基四氢呋喃-3-胺换成3-氟环丁烷-1-胺参考实施例55第六步至第八步得产品6-(3-氟环丁基)-2-甲基-4-((1-(5-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)氨基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7(6H)-酮。

MS m/z (ESI): 518.2[M+H]

1

生物学测试评价

以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。

测试例1、本发明化合物对SOS1活化KRAS G12C功能的抑制活性测定

1.1实验目的：

测量本发明化合物对SOS1活化KRAS G12C-GDP为KRAS G12C-GTP功能的抑制作用

1.2实验仪器和试剂：

1.2.1仪器：

酶标仪（BioTek Synergy H1）；

移液器（Eppendorf&Rainin）；

离心机（Eppendorf）。

1.2.2试剂：

KRAS Protein, Human, Recombinant (12 Cys, His Tag)蛋白购自北京义翘神州科技股份有限公司，货号为12259-H07E2；

SOS1蛋白购自Cytoskeleton，货号为CS-GE02；

GDP购自Sigma，货号为G7127-25MG；

EDA-GTP-Dy647P1购自Jena Bioscience，货号为NU-820-647P1；

MAb Anti-6HIS Eu cryptate Gold购自Cisbio，货号为61HI2KLA；

HEPES购自Life Technologies，货号为15630-080；

氯化钠购自国药集团化学试剂有限公司，货号为10019318；

氯化镁购自Sigma公司，货号为M1028-100ML；

BSA购自Sigma公司，货号为B2064-100G；

NP40购自Abcam公司，货号为ab142227；

DTT购自Sigma公司，货号为43816-50ML；

384孔板购自Greiner公司，货号为784075。

1.2.3 受试化合物：

本发明实施例化合物，自制。

1.3实验方法：

SOS1可将KRAS蛋白从非活化的GDP结合状态转变成活化的GTP结合状态。本实验采用TR-FRET的方法，在384孔板中进行，实验体系中使用的缓冲液为10 mM HEPES，150 mMNaCl，5 mM MgCl

1.4实验数据处理方法：

计算665 nm/620 nm的荧光比值，将浓度和荧光比值使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC

1.5 实验结果：

表1. 化合物对SOS1活化KRAS G12C-GDP为KRAS G12C-GTP功能的抑制

1.6 实验结论：

以上数据显示，本发明实施例化合物在SOS1活性抑制试验中显示出良好的抑制活性。

测试例2、本发明化合物对肿瘤细胞增殖体外抑制作用的测定

2.1 实验目的：

测量本发明化合物对肿瘤细胞体外增殖活性的抑制作用。

2.2 实验仪器和试剂：

2.2.1 仪器：

酶标仪（BioTek Synergy H1）；

移液器（Eppendorf&Rainin）。

2.2.2 试剂：

Mia PaCa-2购自ATCC；

CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay 购自Promega公司，货号为G9683；

球体微孔板购自Sigma公司，货号为CLS4520；

DMEM培养基购自Gibco公司，货号为11995065；

FBS购自Gibco公司，货号为10091148；

胰酶购自Gibco公司，货号为25200056；

PBS购自Gibco公司，货号为10010023。

2.2.3 受试化合物：

本发明实施例化合物，自制。

2.3 实验方法：

本实验采用3D-CTG的方法检测化合物对肿瘤细胞体外增殖活性的抑制作用。

培养Mia PaCa-2细胞（KRAS G12C突变）至合适的融合度时，用PBS清洗一次，加入胰酶消化后使用完全培养基重悬（含10%FBS的RPMI1640培养基或DMEM培养基），1000rpm离心5分钟后收集细胞，使用完全培养基将细胞调整为合适的细胞浓度，将细胞悬液铺于96孔球体微孔板，每孔180 μL，放入37℃，5%CO

2.4 实验数据处理方法：

使用发光信号值计算抑制率，将浓度以及抑制率使用Graphpad Prism软件进行非线性回归曲线拟合，得到IC

2.5 实验结果：

2.5 实验结论：

以上数据显示，本发明实施例化合物在肿瘤细胞增殖活性的抑制试验中显示出良好的生物活性。

3、Balb/C小鼠药代动力学测定

1. 研究目的：

以Balb/C小鼠为受试动物，研究实施例化合物在5 mg/kg剂量下口服给药在小鼠体内血浆的药代动力学行为。

2. 试验方案

2.1 试验药品：

本发明实施例化合物，自制。

2.2 试验动物：

Balb/C Mouse（每组3只），雄性，上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(SCXK（沪）2013-0006 N0.311620400001794)。

2.3 样品配制：

0.5% CMC-Na (1%Tween 80)

2.4 给药

Balb/C小鼠，雄性；禁食一夜后分别p.o.，剂量为5 mg/kg，给药体积10 mL/kg。

2.5 样品采集：

小鼠给药前和给药后，在0、0.5、1、2、4、6、8和24小时，采用眼眶采血0.1 mL，置于EDTA-K

2.6 样品处理：

1)血浆样品40 µL加入160 µL乙腈沉淀，混合后3500 × g离心5~20分钟。

2)取处理后上清溶液100 µL进行LC/MS/MS分析待测化合物的浓度。

2.7 液相分析

液相条件：Shimadzu LC-20AD 泵；

质谱条件：AB Sciex API 4000质谱仪；

色谱柱：phenomenex Gemiu 5 um C18 50 × 4.6 mm；

移动相：A液为0.1%甲酸水溶液，B液为乙腈；

流速：0.8 mL/min；

洗脱时间：0-4.0分钟，洗脱液如下：

3. 试验结果与分析

药代动力学主要参数用WinNonlin 6.1计算得到，小鼠药代实验结果见下表3：

4. 实验结论：

以上数据显示，本发明实施例化合物在小鼠体内显示出良好的药代动力学参数。

4、本发明在人非小细胞肺癌细胞NCI-H2110的皮下异种移植肿瘤模型的药效实验

1. 实验目的：

以NOD SCID小鼠为受试动物，采用人非小细胞肺癌细胞NCI-H2110异种移植瘤模型进行体内药效实验，评价受试化合物抗肿瘤作用。

2. 实验仪器和试剂：

2.1 仪器：

CO

高速冷冻离心机（5424R，Eppendorf）；

自动细胞计数仪（Countess Ⅱ，Invitrogen）；

生物安全柜（1300IIA2，上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；

电子天平（BSA2202s-CW，赛多利斯）；

游标卡尺（0-150mm/0.01mm，日本三丰）。

2.2 试剂：

RPMI1640（22400-089，Gibco）；

胎牛血清（FBS）（10099-141C，Gibco）；

清链霉素双抗（PS）（15140-122，Gibco）；

磷酸盐缓冲液（PBS）（10010-023，Gibco）。

3. 实验动物：

NOD SCID小鼠，雌性，6-8周龄，体重18-22 g，由江苏集萃药康生物科技股份有限公司提供。

4. 受试化合物：

本发明实施例化合物，自制。

5. 实验操作：

5.1 细胞培养：

从细胞库中取出NCI-H2110细胞，复苏后加入RPMI1640培养基中（RPMI1640+10%FBS+1% P/S）置于CO

5.2 肿瘤接种：

细胞NCI-H2110在对数生长期的时候长满收集，保证活力在90%以上。将含有约6 x10

5.3实验分组和给药：

1. 分组当天为第0天（D0）。BID 给药间隔6-8 h。第一次给药于D0天下午，最后一次给药于D10-14天。

2. 给药容积：根据小鼠体重10 μL/g。

动物饲养：动物到达后在实验环境饲养7天后开始实验。动物在SPF级动物房以IVC（独立送风系统）笼具饲养（每笼5只）。

动物分组：给药前称重动物，测量瘤体积。根据瘤体积和体重随机分组。

观察：每天监测动物的健康状况及死亡情况，例行检查包括观察药物对动物日常行为表现的影响如行为活动，摄食摄水量，体重变化（每周测量两次体重或每隔一天测量），外观体征或其它不正常情况。基于各组动物数量记录组内动物死亡数和副作用。

实验指标：每周两次游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V = a×b

5.4 数据分析：

T检验用于两组间比较。三组或多组间比较用one-way ANOVA。如果F值有显著性差异，应在ANOVA分析之后再进行多重比较。用GraphPad Prism 进行所有数据分析。

6. 实验结果：

7. 实验结论：

以上数据显示，本发明实施例化合物在人非小细胞肺癌细胞NCI-H2110的皮下异种移植肿瘤模型的药效实验中显示出良好的效果。