作为RET激酶抑制剂的杂芳环化合物及其制备和应用

本发明涉及一系列杂芳环结构的衍生化合物，及其作为RET激酶抑制剂的应用。具体涉及式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐。

1985年，将人T细胞淋巴瘤的高分子量DNA转染NIH3T3细胞，发现RET是一种新的转化基因。该基因是通过DNA重排激活的，在DNA重排中，人类DNA的两个未连接的片段重新组合，产生一个新的转录单位。随后，研究将RET定位在染色体10q11.2上，在那里它编码一种受体酪氨酸激酶。RET是一种单程跨膜蛋白，具有典型的细胞内酪氨酸激酶结构域。虽然受体酪氨酸激酶(RTK)的“经典”激活是由于配体-受体的相互作用，但RET的激活需要其配体(胶质细胞源性神经营养因子家族配体，GFLS)和辅助受体(GFLS家族受体-α)之间的相互作用。GFL-GFRα复合物与Ret的胞外结构域结合，导致细胞内酪氨酸激酶结构域的磷酸化，从而激活几条通路，包括MAPK、PI3K、JAK-STAT、PKA及PKC。

RET在正常生理状态下与肾脏的发育和胃肠神经系统发育有关，但是，RET基因的突变导致不依赖配体的，组成型的RET激酶异常激活，将导致肿瘤发生。RET激酶的激活主要有两种机制：1.RET基因点突变；2.RET基因重排。RET的错义突变可能发生在胞外的Cys残基上，引起异常的激酶激活。突变也可能发生在胞内激酶活性域，这种突变将促进不依赖配体的RET激酶激活。甲状腺髓样癌(MTC)中RET的点突变非常常见，存在于大约50％的散发性MTC及几乎所有的家族性MTC中。RET基因通过本身断裂与其它基因融合的方式发生重组，成为一个新的融合基因，使得RET酪氨酸激酶的活化逃脱配体的调控，进一步自我磷酸化，从而增强信号转导功能，促使激酶活化，引发肿瘤生成。在约20％的甲状腺乳头状癌(PTC)中，1～2％的非小细胞肺癌(NSCLC)和其它癌症，如结肠癌和乳腺癌中都存在RET融合。以上结果表明RET信号通路的失调是很多肿瘤疾病的重要驱动原因。

目前就活性和耐受性而言，各种多激酶抑制剂对RET有活性但非特异性，患者长期暴露于RET TKI中，因为对VEGFR激酶的抑制作用，产生3～4级毒性发生率较高。所以，研发活性强、选择性高的RET特异性抑制剂，满足临床需求，有望成为治疗甲状腺癌和非小细胞等多种癌症的新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一类RET激酶抑制剂的杂芳环化合物。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，

其中，

A选自H、-CN、卤素、-C＝ONH

B选自被一个或多个相同或不同取代基取代或未取代的以下基团：C1-C6烷基、C1-C6烷胺基、C2-C6炔基、C2-C6烯基、HetAr

HetAr

HetCyc

C是具有独立地选自N、S或O的1～3个杂原子的5～6元杂芳环；其中所述杂芳环未被取代或者任选被一个或多个相同或不同取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、-CN、硝基、C1-C3烷基或卤代C1-C3烷基；

D是具有选自N或O的1～3个杂原子的C1-C6烷基、具有选自N和O的1～3杂原子的4～8元杂环、具有选自N和O的1～3杂原子的7～8元桥环、具有选自N和O的1～3杂原子的7～11元螺环、具有选自N和O的1～3杂原子的7～10元稠杂环、

L是

E是被一个或多个相同或不同取代基取代或未取代的HetAr

HetAr

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，A选自-CN、-C＝C-CN或-C≡CH；在一种具体的实施例中，A为-CN。

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，B选自被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的以下基团：

HetCyc

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，B选自被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的以下基团：R

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，B为被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，C是被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的以下基团：

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，D是

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构 体、溶剂化合物、氧化物或前药，L是

在一些实施例中，具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药，E是被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的

在一些实施例中，本发明还提供一种具有式(II)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，

其中，B选自被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的HetCyc

在一些实施例中，本发明还提供的具有式(II)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药，

其中，B选自取代或未取代的HetCyc

在一些实施例中，本发明还提供的具有式(II)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物、氧化物或前药，

其中，B选自被一个或两个相同或不同取代基取代或未取代的HetCyc

本发明所述的氧化物可以为易形成氧化的任意位置，在一些具体的实施例中，是在具有N杂原子的4～8元杂环或桥环的N原子处形成氧化物，例如在一些实例中，是在

本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中一些具体化合物选自：

本发明还提供一种通式(I)的化合物制备路线：

其中，A、B、C、D、L、E定义如前所述。

在一些实施例中，上述制备路线的具体步骤如下：

步骤1：以二氧六环为溶剂，化合物I通过和硼酸试剂C偶联得到II；

步骤2：中间体II与胺类化合物亲核取代得到III；

步骤3：以1,2-二氯乙烷为溶剂，中间体III和L-E通过还原胺化或酰化反应得到中间体IV；

步骤4：以二氧六环和N,N-二甲基甲酰胺作为溶剂，通过C-N偶联，获得终产物(I)。

本发明还提供具有式(II)结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药的制备方法：

其中，B的定义如前所述。

本发明所述的氧化物的制备可以在获得式(I)的化合物之前由化合物IV氧化获得，或者获得式(I)的化合物之后氧化获得。氧化方法可以采用本领域的常规方法，例如在一些具体的实施例中采用常用氧化剂如间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)进行氧化获得相应化合物的氧化物。

本发明中的化合物可能形成的盐也是属于本发明的范围。除非另有说明，本发明中的化合物被理解为包括其盐类。例如，式(I)化合物与一定量如等当量的酸或碱反应，在介质中盐析出来，或在水溶液中冷冻干燥得来。本发明中的化合物含有的碱性片段，包括但不限于胺或吡啶或咪唑环，可能会和有机或无机酸形成盐。式I化合物的药学上可接受的盐的非限制性实例包含单盐酸盐、二盐酸盐、三氟乙酸盐和二三氟乙酸盐。

本发明中的化合物，依次通过制备、分离纯化获得的该化合物其重量含量等于或大于90％，例如，等于或大于95％，等于或大于99％(“非常纯”的化合物)，在正文描述列出。 此处这种“非常纯”本发明的化合物也作为本发明的一部分。

本文还提供一种药物组合物，其包括式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药，以及药学上可接受的载体。

本文还提供一种活体外或活体内抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物接触。

本文还提供一种治疗需要这类治疗的患者的RET相关疾病或病症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

本文还提供本发明所述化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药作为RET激酶抑制剂的应用。

本文还提供本发明所述化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药在制备治疗RET相关疾病药物中的应用。

在本发明的一些实例中，RET相关疾病或病症为癌症。

本文还提供一种治疗需要这类治疗的患者的癌症和/或抑制与特定癌症相关联的癌转移的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I的化合物或或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

本文还提供一种如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物，其用于疗法中。

本文还提供一种如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物，其用于治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的癌转移中。

本文还提供一种式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其用于抑制RET激酶活性。

本文还提供一种如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物，其用于治疗RET相关疾病或病症。

本文还提供一种如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的用途，其用于制造用于治疗癌症和/或抑制与特定癌症相关的癌转移的药物中。

本文还提供一种如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的用途，其用于制造用于抑制RET激酶活性的药物。

本文还提供一种如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的用途，其用于制造用于治疗RET相关疾病或病症的药物。

本文还提供一种用于治疗有需要的患者的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定所述癌症是否与RET基因、RET激酶或其中的任一个的表达或活性或水平的调节异常相关联(例如，RET相关癌症)；和(b)如果确定所述癌症是与RET基因、RET激酶或其中的任一个的表达或活性或水平的调节异常相关联(例如，RET相关癌症)，那么向所述患者施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

本文还提供一种用于治疗有需要的患者的癌症(例如，RET相关癌症，如具有一个或多个RET抑制剂抗性的突变的RET相关癌症)的药物组合，其包括：(a)式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，(b)额外治疗剂，和(c)任选的至少一种药学上可接受的载体，其中所述式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物和所述额外治疗被配制成单独组合物或剂量，以同时、单独或依序用于治疗癌症，其中式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的量和额外治疗剂的量一起有效治疗癌症。本文还提供一种药物组合物，其包括这种组合。本文还提供一种这种组合的用途，其用于制备用于治疗癌症的药物。本文还提供一种商业包装或产品，其包括这种组合，呈用于同时、单独或依序使用的组合制剂；和一种治疗有需要的患者的癌症的方法。

本文还提供一种逆转或预防对抗癌药物的获得性抗性的方法，其包括向处于发展或具有对抗癌药物的获得性抗性风险下的患者，施用治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。在一些实施例中，向患者施用一定剂量的抗癌药物(例如，基本上在向所述患者施用一定剂量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物同时)。

本文还提供一种延迟和/或预防个体中发展对抗癌药物的癌症抗性的方法，其包括在施用有效量的抗癌药物之前、期间或之后，向所述个体施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

本文还提供一种治疗患有癌症、具有对抗癌药物发展抗性的增加可能性的个体的方法，其包括在施用(b)有效量的抗癌药物之前、期间或之后，向所述个体施用(a)有效量的式I化合物。

还提供治疗患有RET相关癌症的个体的方法，所述个体具有增加癌症对第一RET抑制剂的抗性的一个或多个RET抑制剂抗性突变(例如，在氨基酸位置804处的取代，例如V804M、V804L或V804E)，所述方法包括在施用另一抗癌药物(例如第二RET激酶抑制剂)之前、期间或之后，施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

还提供治疗患有RET相关癌症的个体的方法，其包含在施用另一种抗癌药物(例如，第一RET激酶抑制剂)之前、期间或之后，施用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂 合物。

在本文所描述的任一方法或用途的一些实施例中，癌症(例如，RET相关癌症)是血液癌。在本文所描述的任一方法或用途的一些实施例中，癌症(例如，RET相关癌症)是实体肿瘤。在本文所描述的任一方法或用途的一些实施例中，癌症(例如RET相关癌症)是肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、甲状腺癌(例如乳头状甲状腺癌、甲状腺髓样癌、分化型甲状腺癌、复发性甲状腺癌或难治性分化型甲状腺癌)、甲状腺腺瘤、内分泌腺肿瘤、肺腺癌、细支气管肺细胞癌、多发性内分泌瘤形成2A或2B型(分别地MEN2A或MEN2B)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺增生、乳癌(breast cancer)、乳腺癌(mammary cancer)、乳腺癌瘤(mammary carcinoma)、乳腺赘瘤、结肠直肠癌(例如转移性结肠直肠癌)、乳头状肾细胞癌、胃肠粘膜神经节细胞瘤、发炎性成肌纤维细胞瘤或宫颈癌。

在一些实施例中，患者是人类。

式I化合物和其药学上可接受的盐和溶剂合物也适用于治疗RET相关癌症。

本文还提供一种用于治疗诊断患有或鉴定为患有RET相关癌症(例如，本文公开的任一示范性RET相关癌症)的患者的方法，其包括向患者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

本文还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物或前药在制备FGFR家族激酶抑制剂药物中的应用；本发明所述的FGFR家族包括但不限于FGFR1、FGFR1 V561M、FGFR2、FGFR2 V564F、FGFR2 N549H、FGFR2 V564I、FGFR2 K641R、FGFR3、FGFR3 V555M、FGFR3 K650E、FGFR4；在一些更具体的实例中，所述的FGFR家族包括FGFR2 V564F、FGFR2 N549H、FGFR2 V564I以及FGFR3 V555M。

本发明术语若无特别说明定义如下：

术语“卤素”意指-F(在本文中有时被称作“氟”)、-Cl、-Br和-I。

术语“C1-C3烷基”、“C1-C6烷基”、“C2-C6烷基”和“C3-C6烷基”是指分别具有一个到三个、一个到六个、两个到六个或三个到六个碳原子的饱和的直链或分支链一价烃基。实例包含(但不限于)甲基、乙基、1-丙基、异丙基、1-丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、2-甲基-2-丙基、戊基、新戊基和己基。

术语“C1-C6烷氧基”是指具有一到六个碳原子的饱和直链或分支链一价烷氧基，其中键是在氧原子上。实例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基和叔丁氧基。

术语“(C1-C6烷氧基)C1-C6烷基-”和“(C1-C6烷氧基)C2-C6烷基-”是指分别具有一到六个碳原子或两个到六个碳原子的饱和直链或分支链一价基团，其中一个碳原子被如 本文所定义的(C1-C6烷氧基)基团取代。实例包含甲氧基甲基(CH

术语“羟基C1-C6烷基-”和“羟基C2-C6烷基-”分别是指具有一个到六个或两个到六个碳原子的饱和直链或分支链一价烷基，其中一个碳原子被羟基取代。

术语“氘代C1-C6烷基-”、“卤代C1-C6烷基”、“氰基C1-C6烷基”分别是指一个到六个碳原子的饱和直链或分支链一价烷基，其中一个碳原子被氘、卤素或氰基取代。

术语“C3-C6环烷基”是指环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

术语“烯基”指直链、支链或环状的，含有至少一个碳-碳双键的非芳香烃基。因此，“C2-C6烯基”指具有2～6个碳原子的烯基。例如包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和环己烯基等。

术语“炔基”指直链、支链或环状的，含有至少一个碳碳三键的非芳香烃基。因此，“C2-C6炔基”指具有2～6个碳原子的炔基。例如包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。

术语“杂环”是指除了含有碳原子以外还含有1-4个选自由氧原子、硫原子及氮原子组成的组中的杂原子的单环式或双环式的非芳香族杂环，作为具体例，可以举出：氮杂环丁烷、吡咯烷、吡唑烷(pyrazolidine)、哌啶、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、四氢噻吩、二氢咪唑、咪唑烷(imidazolidine)、四氢吡嗪、哌嗪、吗啉等除了含有碳原子以外还含有1个或2个选自由氧原子、硫原子及氮原子组成的组中的杂原子的4-7元单环式非芳香族杂环；氮杂双环[3.1.0]己烷等除了含有碳原子以外还含有1-4个选自由氧原子、硫原子及氮原子组成的组中的杂原子的6-8元双环式非芳香族杂环。

术语“杂芳环”代表环中多达3-10个原子的稳定的单环或每个环中多达3-10个原子双环碳环，其中至少一个环为芳香环且含有1-4个选自O、N和S的杂原子。本定义范围内的杂芳基包括但不限于吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹噁啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基。

术语“螺环”是指通过碳原子进行螺环连接而连接的两个环的基团，其中每个环具有4到6个环原子(其中一个环碳原子对于两个环是共同的)。

术语“杂螺环”是指含有一个或多个相同或不同的杂原子且通过碳原子进行螺环连接而连接的两个环的基团，其中每个环具有4到6个环原子(其中一个环碳原子对于两个环是共同的)，杂原子选自氮原子、氧原子。

术语“稠杂环”是指2-3个环共用两个相邻(邻位)原子的环烃；其中至少一个环为含有1到3个选自O、N和S的杂原子的芳香环，在一些实例中，为2个环共用两个相邻(邻位)原子的环烃；其中一个环为含有1到3个选自O、N和S的杂原子的芳香环，另一个环为饱和杂环。

术语“桥环”是指共用两个以上碳原子(桥头碳)的多环烃，根据组成环的数目分为二环烃、三环烃、四环烃等。

本文件通篇提及的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”的使用是常规的，例如为了抵抗、减轻、减少、缓解、改善诸如癌的疾病或病症的病况的目的来管理或护理个体。

术语“个体”或“患者”包括能够患细胞增殖性病症或者能够受益于给药本发明的化合物的有机体，例如人和非人的动物。优选的人包括患有或易于患有如本文所述的细胞增殖性病症或相关的状态的人患者。术语“非人的动物”包括脊椎动物，例如哺乳动物，如非人灵长类动物、绵羊、母牛、狗、猫和啮齿动物(例如小鼠)，以及非哺乳动物，例如鸡、两栖动物、爬行动物等。

术语“细胞增殖”包括涉及细胞的不期望的或不受控制的增殖。本发明的化合物可以用于防止、抑制、阻断、降低、减少、控制等细胞增殖和/或细胞分裂，和/或产生细胞凋亡。该方法包括向需要其的个体(包括哺乳动物，包括人)给药可有效治疗或预防所述病症的量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、多晶型物、代谢物、水合物或溶剂合物。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明的RET激酶抑制剂化合物，具有优于上市药物Selpercatinib(LOXO-292)的酶和细胞水平生物活性且具有更低的心脏毒性。本发明的化合物为新型抗肿瘤药物提供了更多的选择，具有良好的药物应用前景。

下面有代表性的例子旨在帮助阐述本发明，而不是有意也不应该被解释为限制本发明的范围。事实上，除了那些出现和描述于此的以外，本发明中文件的全部内容，包括依据此处引用的科技文献和专利的例子，以及由此产生的各种修饰和许多进一步变化对本专业内一般技术人员都是清晰明白的。还应当明白，这些参考文献的引用有助于陈述本文内容。下面的例子包含了重要的补充信息、范例和指导，可适应于本发明中各种变化及类似情况。

实施例1

合成路线如下：

化合物1

取2L三口烧瓶，低温温度计，氩气保护装置，三口瓶中分别加入2,4,6-三甲基苯磺酰氯(80g，367mmol)，N-羟基氨基甲酸叔丁酯(62.4g，468mmol)和THF(1.2L)，温度降至0℃,该温度下缓慢滴加TEA(64ml)，并在室温下继续搅拌1h，TLC监测无原料剩余，减压蒸馏除去溶剂，加入EA(1.2L)溶解，H

化合物2

取500ml三口烧瓶，低温温度计，氩气保护装置，三口瓶中加入TFA(150ml)，温 度降至0℃,该温度下分批加入1(110g，348.8mmol)，并在该温度下继续搅拌3h，TLC监测无原料剩余，将反应液缓慢倒入剧烈搅拌的冰水中，搅拌10mins有白色固体析出，过滤，滤饼用冰水洗涤，干燥得到60.1g白色固体即产物2，收率80％。

化合物3

取500ml三口烧瓶，低温温度计，氩气保护装置，三口瓶中分别加入2(60g，278.5mmol)，3-溴-5-甲氧基吡啶(52.37g，278.6mmol)和DCM(1L)，温度降至0℃，搅拌1h后补加3-溴-5-甲氧基吡啶(523mg，2.8mmol)0℃下继续搅拌2h，该温度下加入PE(1L)搅拌10mins有白色固体析出，过滤，滤液浓缩加入DCM(300ml)溶解降至0℃后加入PE(300ml)继续搅拌10mins析出白色固体，过滤，合并两次得到的固体，干燥得到87.6g白色固体即产物3，收率78％。

化合物4

取500ml单口烧瓶，分别加入3(87.6g，217.2mmol)，丙炔酸乙酯(42.6g，434.4mmol)和DMF(200ml)，室温下缓慢滴加TEA(60.4ml，434.4mmol)滴加完毕后，在室温下继续搅拌2ds，TLC监测无原料剩余，加入H

化合物5

取1L单口茄形瓶，加入40％HBr(400ml)，搅拌下分批加入4(48.7g，162.8mmol)，升温至100℃，继续搅拌1h，TLC监测无原料剩余，冷却至室温后，倒入碎冰中搅拌， 2M NaOH溶液调节pH﹥8，有固体析出，过滤干燥得到34.38g粉色固体即产物5，收率为93％。

化合物6

取500ml单口烧瓶，分别加入5(34.38g，151.4mmol)和DMF(200ml)，0℃下缓慢滴加POCl

化合物7

取500ml单口烧瓶，分别加入6(34.38g，151.4mmol)，盐酸羟胺(13.7g，196.82mmol)，EtOH(250ml)和H

化合物8

取500ml单口烧瓶，分别加入7(38g，140.8mmol)，Cu(OAc)

化合物9

取45ml封管，分别加入8(5g，19.8mmol)，1,2-二氯乙烷(100ml)，室温下分批加入AlCl

化合物10

取50ml单口烧瓶，分别加入化合物9(3g，12.6mmol)，N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(4.5g，12.6mmol)，DIEA(3.26g，25.2mmol)和DMA(20ml)，于室温下搅拌过夜。TLC监测反应完全。将反应液倒入搅拌的60ml H

化合物11

取12ml封管，分别加入10(4.4g，11.9mmol)，Pd(dppf)Cl

化合物12

取45ml封管，分别加入11(3g，9.46mmol)，6-(叔丁氧羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷(2.25g，11.3mmol)，K

化合物13

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入12(94.5mg，0.2mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌1h，浓缩除去溶剂，滴加NH

化合物14

取50ml单口烧瓶，分别加入13(68mg，0.18mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(30.2mg，0.22mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

化合物15

取25ml封管，分别加入14(500mg，0.97mmol)，Pd

1

化合物16

取25ml单口茄形瓶，加入盐酸乙酸乙酯溶液(10ml)，缓慢加入15(450mg，0.71mmol)，室温下搅拌3小时，TLC监测无原料剩余，浓缩，加入氨水调节pH＝9，DCM(3ml*3)萃取，合并有机相浓缩，柱层析纯化得到350mg黄色固体即为目标产物16，收率为92％。

1

实施例2

化合物17

取25ml单口茄形瓶，加入16(200mg，0.37mmol)，多聚甲醛(333mg，3.7mmol)和DCM(15ml)，室温下搅拌30分钟，加入醋酸硼氢化钠(392.2mg，1.85mmol)，室温下继续搅拌过夜，TLC监测无原料剩余，加入氨水调节pH＝9，DCM(3ml*3)萃取，合并有机相浓缩，柱层析纯化得到150mg黄色固体即为目标产物17，收率为74.2％。

1

实施例3

化合物18

取250ml三口烧瓶，氩气保护，低温温度计，加入100ml THF，甲基膦酞二氯(5g，37.6mmol)，降温至-78℃，30min内缓慢滴加乙烯基溴化镁(38ml，38mmol)，升温至0℃，搅拌1小时，滴加苄胺(4.8g，44.8mmol)的甲醇溶液，温度升至68℃，回流过夜，TLC监测无原料剩余，柱层析纯化得到目标产物3.1g，为白色固体18，收率36.9％。

化合物19

取100ml单口烧瓶，分别加入18(3g，13.4mmol)，钯碳(500mg)和甲醇(30ml)，H2下，室温搅拌过夜，TLC监测无原料剩余，过滤除去废钯碳，浓缩得到1.5g目标产物19，收率为83.85％。未纯化直接用于下一步。

化合物20

取25ml封管，分别加入14(300mg，0.58mmol)，Pd

1

实施例4

合成路线如下：

化合物8的合成同实施例1。

化合物9-a

取25ml封管，分别加入8(1g，3.97mmol)，Pd(PPh

化合物10-a

取45ml封管，分别加入9-a(850mg，3.36mmol)，1,2-二氯乙烷(15ml)，室温下分批加入AlCl

化合物11-a

取50ml单口烧瓶，分别加入化合物10-a(450mg，1.88mmol)，N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(806mg，2.26mmol)，DIEA(486mg，3.76mmol)和DMA(5ml)，于室温下搅拌过夜。TLC监测无原料10-a剩余。将反应液倒入搅拌的10ml H

化合物12-a

取12ml封管，分别加入11-a(628mg，1.69mmol)，Pd(PPh

化合物16-a

取12ml封管，分别加入12-a(70mg，0.22mmol)，N,N’-二甲基乙二胺(23.2mg，0.26mmol)，K

LC-MS[M+H]

化合物17-a

取50ml单口烧瓶，分别加入16-a(51mg，0.13mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(26.7mg，0.19mmol)和DCM(15ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1H NMR(400MHz,CDCl

实施例5

合成路线如下：

化合物18-a

取12ml封管，分别加入12-a(80mg，0.25mmol)，1-Boc-4-氨基哌啶(60.5mg，0.3mmol)，K

LC-MS[M+H]

化合物19-a

取50ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入18-a(70mg， 0.14mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌3h，浓缩除去溶剂，滴加NH

LC-MS[M+H]

化合物21

取50ml单口烧瓶，分别加入19-a(55mg，0.138mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(22.7mg，0.166mmol)和DCM(15ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1H NMR(400MHz,CDCl

实施例6

合成路线如下：

化合物30

取12ml封管，分别加入12-a(70mg，0.22mmol)，1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(52.1mg，0.26mmol)，K

LC-MS[M+H]

化合物31

取50ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(5ml)，搅拌下缓慢滴入30(55mg，0.11mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌3h，浓缩除去溶剂，滴加NH

LC-MS[M+H]

化合物32

取50ml单口烧瓶，分别加入31(44.6mg，0.11mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(18.1mg，0.13mmol)和DCM(5ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1H NMR(400MHz,CDCl

实施例7

合成路线如下：

化合物33

取12ml封管，分别加入12-a(70mg，0.22mmol)，(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(31.3mg，0.22mmol)，K

LC-MS[M+H]

化合物34

取50ml单口烧瓶，分别加入33(43.6mg，0.1mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(16.7mg，0.12mmol)和DCM(5ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1H NMR(400MHz,CDCl

实施例8

合成路线如下：

化合物35

取50ml单口烧瓶，分别加入化合物2,4-二溴噻唑(1.5g，6.17mmol)，1-N-BOC-哌嗪(1.7g，9.26mmol)，Cs

LC-MS[M+H]

化合物36

取45ml封管，分别加入35(1.2g，3.45mmol)，联硼酸频那醇酯(918.7mg，3.62mmol)，Pd(dppf)Cl

LC-MS[M+H]

取45ml封管，分别加入化合物36(1.25g，3.18mmol)，11-a(1.0g，2.69mmol)，Pd(PPh

LC-MS[M+H]

化合物38

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入37(1.2g，2.45mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌3h，浓缩除去溶剂，滴加NH

LC-MS[M+H]

化合物39

取50ml单口烧瓶，分别加入38(200mg，0.51mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(70.2mg，0.51mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1

实施例9

合成路线如下：

化合物40

取45ml封管，分别加入化合物11-a(200mg，0.54mmol)，4-吡唑硼酸频哪醇酯(104.5mg，0.54mmol)，Pd(PPh

LC-MS[M+H]

化合物41

取50ml单口烧瓶，分别加入化合物40(115.7mg，0.4mmol)，1-Boc-4-甲烷磺酰氧基哌啶(167.6mg，0.6mmol)，Cs

LC-MS[M+H]

化合物42

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入41(94.5mg， 0.2mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌3h，浓缩除去溶剂，滴加NH

化合物43

取50ml单口烧瓶，分别加入42(68mg，0.18mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(30.2mg，0.22mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1

实施例10

合成路线如下：

化合物44

取45ml封管，分别加入8(5g，19.8mmol)，1,2-二氯乙烷(100ml)，室温下分批加入AlCl

化合物45

取50ml单口烧瓶，分别加入化合物44(3g，12.6mmol)，N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺(4.5g，12.6mmol)，DIEA(3.26g，25.2mmol)和DMA(20ml)，于室温下搅拌过 夜。TLC监测无原料44剩余。将反应液倒入搅拌的60ml H

化合物46

取12ml封管，分别加入45(4.4g，11.9mmol)，Pd(dppf)Cl

化合物47

取45ml封管，分别加入46(3g，9.46mmol)，6-(叔丁氧羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷(2.25g，11.3mmol)，K

化合物48

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入47(94.5mg， 0.2mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌1h，浓缩除去溶剂，滴加NH

化合物49

取50ml单口烧瓶，分别加入48(68mg，0.18mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(30.2mg，0.22mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

化合物50

取25ml封管，分别加入3-溴-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-B]吡唑(1.45g，7.8mmol)，联硼酸片呐醇酯(2.1g，8.2mmol)，Pd(dppf)Cl

LC-MS[M+H]

化合物51

取25ml封管，分别加入49(55mg，0.11mmol)，Pd(PPh

1

实施例11

化合物52

取45ml封管，分别加入46(500mg，1.58mmol)，N-BOC-哌嗪(352.2mg，1.89mmol)，K

化合物53

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入52(611mg，1.26mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌1h，浓缩除去溶剂，滴加NH

化合物54

取50ml单口烧瓶，分别加入53(473.2mg，1.23mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(203.2mg，1.48mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

化合物55

取25ml封管，分别加入54(50mg，0.1mmol)，Pd(PPh

1

实施例12

化合物56-1

取100ml封管，分别加入6-氯-3-氧代己酸乙酯(10g，51.9mmol)，水合肼(33.3ml)，EtOH(20ml)于120℃下搅拌过夜。TLC监测无原料剩余，冷却至室温，浓缩，EA(20ml*3)萃取，合并有机相，浓缩，柱层析纯化得到3.4g黄色固体产物。收率为53％。

LC-MS[M+H]

化合物56-2

取100ml三颈瓶，分别加入56-1(3.4g，27.4mmol)，pyridine(55ml)，温度降到0℃，缓慢滴加三氟甲磺酸酐(8.1g，28.8mmol)，滴加完毕后升至室温，继续搅拌过夜。TLC监测无56-1剩余，将反应液倒入20ml 2MHCl中。EA(10ml*3)萃取，合并有机相，依次用饱和食盐水，饱和碳酸钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得到1.7g无色油状产物。收率为24％。

LC-MS[M+H]

化合物56

取25ml封管，分别加入56-2(2g，7.8mmol)，联硼酸片呐醇酯(2.1g，8.2mmol)，Pd(dppf)Cl

LC-MS[M+H]

化合物57

取25ml封管，分别加入49(50mg，0.1mmol)，Pd(PPh

1

实施例13

化合物58

取25ml封管，分别加入54(50mg，0.1mmol)，Pd(PPh

1

实施例14

化合物59

取25ml单口烧瓶，分别加入53(50mg，0.13mmol)，6-甲氧基烟酸(19.9mg，0.13mmol)，EDCI(37.38mg，0.2mmol)，HOBt(35.13mg，0.26mmol)，DIEA(50.4mg，0.39mmol)，DCM(8ml)，Ar保护，室温下搅拌过夜，TLC监测无原料53剩余，加入10ml水搅拌10min分液，浓缩有机相，柱层析纯化得到55.25mg即为产物59，收率为82％。

LC-MS[M+H]

化合物60

取25ml封管，分别加入59(55.2mg，0.1mmol)，Pd(PPh

1

实施例15

化合物61

取45ml封管，分别加入46(200mg，0.63mmol)，1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(151.57mg，0.76mmol)，K

LC-MS[M+H]

化合物62

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入61(250mg，0.5mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌1h，浓缩除去溶剂，滴加NH

LC-MS[M+H]

化合物63

取50ml单口烧瓶，分别加入62(188.7mg，0.47mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(78.2mg，0.57mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

LC-MS[M+H]

化合物64

取25ml封管，分别加入63(52mg，0.1mmol)，Pd(PPh

1

实施例16

化合物65

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例17

化合物66

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例18

化合物67

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例19

化合物68

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例20

化合物69

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例21

化合物70

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例22

化合物71

取12ml封管，分别加入45(500mg，1.35mmol)，Pd(dppf)Cl

LC-MS[M+H]

化合物72

取45ml封管，分别加入71(93.8mg，1.08mmol)，6-(叔丁氧羰基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷(257mg，1.3mmol)，K

LC-MS[M+H]

化合物73

取25ml单口烧瓶，加入3.5M HCl的EA溶液(10ml)，搅拌下缓慢滴入72(382.5mg，0.74mmol)的EA溶液，滴加完毕后室温下继续搅拌1h，浓缩除去溶剂，滴加NH

LC-MS[M+H]

化合物74

取50ml单口烧瓶，分别加入73(100mg，0.24mmol)，6-甲氧基-3-吡啶甲醛(39.8mg，0.29mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

LC-MS[M+H]

化合物75

取25ml封管，分别加入74(77mg，0.14mmol)，Pd

1

实施例23

取50ml单口烧瓶，分别加入48(60mg，0.15mmol)，6-氘代甲氧基-3-吡啶甲醛(25.5mg，0.18mmol)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

化合物77

取25ml封管，分别加入74(56mg，0.11mmol)，Pd

1

实施例24

化合物78

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例25

化合物79

取25ml单口烧瓶，分别加入78(50mg，0.09mmol)，多聚甲醛(50mg)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1

实施例26

化合物80

取25ml单口烧瓶，分别加入78(50mg，0.09mmol)，环丙甲醛(0.5ml)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1

实施例27

化合物81

取25ml单口烧瓶，分别加入78(50mg，0.09mmol)，环丙甲醛(0.5ml)和DCM(10ml)，搅拌10Mins后，室温下分批加入NaBH(OAc)

1

实施例28

化合物82

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例29

化合物83

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例30

化合物84

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例31

化合物85

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例32

化合物86

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例33

化合物87

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例34

化合物88

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例35

化合物89

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例36

化合物92

取25ml单口茄形瓶，分别加入D

LC-MS[M+H]

化合物93

取25ml单口茄形瓶，加入盐酸乙酸乙酯溶液(50ml)，缓慢滴入92(340mg，1.68mmol)，室温下搅拌3小时，TLC监测无原料剩余，有白色固体析出，过滤，烘干得到296mg白色固体为目标产物93，收率为100％。

化合物94

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

1

实施例37

化合物95

取25ml封管，分别加入49(52mg，0.1mmol)，Pd

LC-MS[M+H]

化合物96

取25ml单口茄形瓶，加入盐酸乙酸乙酯溶液(10ml)，缓慢加入95(53mg，0.09mmol)，室温下搅拌3小时，TLC监测无原料剩余，浓缩，加入氨水调节pH＝9，DCM(3ml*3)萃取，合并有机相浓缩，柱层析纯化得到36mg黄色固体即为目标产物96，收率为78％。

1

实施例38

化合物98

取25ml单口烧瓶，分别加入97(500mg，0.97mmol)，K

化合物99

取25ml封管，分别加入98(100mg，0.19mmol)，Pd

1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34–8.28(m,1H),8.17(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(d,J＝2.1Hz,1H),8.01(s,1H),7.72–7.63(m,2H),7.16(d,J＝1.5Hz,1H),6.76(dd,J＝8.5,3.2Hz,1H),6.56(dd,J＝41.0, 8.8Hz,1H),4.07–3.88(m,6H),3.84–3.57(m,5H),3.49(d,J＝4.3Hz,1H),3.23(t,4H),2.66(t,4H),2.49(d,J＝7.0Hz,1H).

实施例39

化合物101

取25ml单口烧瓶，分别加入94(100mg，0.18mmol)，K

1

活性实验1：制备的化合物对RET家族激酶活性的抑制

测试此类化合物对RET野生型(RET WT)，RET(V804M)，RET(M918T)点突变型CCDC6-RET融合突变以及KDR(VEGFR2)的激酶活性IC

采用均相时间分辨荧光(HTRF)的方法建立上述激酶的活性检测方法，测定化合物的抑制活性。配置8uL的反应液，包括1×enzymatic buffer(Cisbio,HTRF KinEASE

表1，体外酶学活性测试数据(IC

N.D.-未测试

活性实验2：制备的化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性研究报告

通过液质联用(LC-MS/MS)方法考察化合物在NADPH还原辅酶的作用下在肝微粒体中代谢的速度和程度。分别取445μL 0.562mg/mL人肝微粒体工作溶液于对应的96孔板中，于37℃水浴中预孵育10.0min。然后加入5.00μL 100μM化合物和50.0μL 10.0mM NADPH启动反应。于0、2、5、10、20、30、60min后，取出50.0μL反应液加入到400μL含50.0ng/mL内标(甲苯磺丁脲)的冰乙腈中终止反应。对于不添加辅助因子的样品(NCF)，取445μL各个物种的微粒体工作溶液，50.0μL 10mM MgCl

表2，化合物在人肝微粒体中的半衰期及内在清除率

表3，化合物在人肝微粒体中的半衰期及内在清除率

活性实验3：制备的化合物对Ba/F3KIF5B-RET细胞生长的抑制作用

收获处于对数生长期的Ba/F3 KIF5B-RET、Ba/F3KIF5B-RET-V804M、Ba/F3 RET-M918T、Ba/F3 KIF5B-RET-G810R细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整细胞浓度，分别添加90μL细胞悬液至96孔板中。将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO

表4，体外细胞水平活性测试数据(IC

BLU-667的结构式如下：

Selpercatinib(Loxo-292)的结构式如下：

活性实验4：制备的化合物对hERG钾离子通道的抑制作用

测试化合物的最终浓度均在当天配制，再溶于细胞外液。细胞外液(mM)为:NaCl,137；KCl,4；CaCl

将细胞钳制在–80mV，然后用持续4秒方波去极化到40mV，再用持续2秒方波超极化到-40mV，以得到hERG尾电流。这一程序每20秒重复一次。hERG尾电流是纯hERG电流。检测第二个方波引发的最大电流，待其稳定后，灌流测试化合物，当反应稳定后，计算阻断的强度。根据阻断强度计算化合物对hERG通道抑制的IC

表5，化合物在细胞水平对hERG钾离子通道抑制的IC

活性实验5：大鼠药代动力学测试

SD雄性大鼠(体重220±20g)，按1.0mg/kg剂量尾静脉注射以及5.0mg/kg剂量口服给予化合物94、Loxo-292，每组3只动物。给药溶剂为5％DMSO+5％聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)的生理盐水溶液。给药前禁食约12小时，给药后4h自由进食；不禁 水。于给药前及给药后5、15、30min，1、2、4、6、8、10、24h，由眼眶采血约0.2mL，置于EDTA-K

表6.药代动力学参数

由表6中数据可见，口服给药后，与Loxo-292相比，化合物94在大鼠体内消除时间更长，生物利用度更高。

活性实验6：小鼠体内组织分布试验

雄性NVSG小鼠(体重20-25g)，以30mg/kg剂量分别口服给予化合物94、Loxo-292。于给药后4h采集动物的血浆及肝、脑、肺等组织样本。血浆的采集：用含有EDTA的EP管收集全血80-100μL左右，4000g离心5分钟后，收集上层血浆于-80℃保存。组织的采集：于动物安乐死后取组织并于液氮速冻后，按每1g组织加入5mL匀浆液(50％乙腈)比例，于组织匀浆机中将组织处理为匀浆液，并转移至-80℃保存。使用液相色谱-串联质谱联用方法(LC-MS/MS)对血浆及组织样本中化合物浓度进行定量分析。

表7.化合物在小鼠血浆及器官组织中的分布浓度

由表7中数据可见，口服给药后，化合物94在小鼠靶器官组织中具有更高的分布浓度，更有利于在靶器官药效的发挥。

活性实验7：小鼠皮下BA/F3 KIF5B-RET移植瘤模型测试

BA/F3 KIF5B-RET细胞，以RPMI-1640培养基添加10％FBS培养于含5％CO

表8，化合物对BA/F3 KIF5B-RET小鼠移植瘤模型的抑制作用

*第15天溶剂对照组动物全部死亡，无测量数据

由表8中数据可见，给药15天后，化合物94各剂量组小鼠移植瘤体积均小于Loxo-292组，体现更优的肿瘤抑制活性；并且化合物94每日给药一次仍具有优良的肿瘤抑制活性。

活性实验8：制备的化合物对FGFR家族激酶活性的抑制

测试化合物对FGFR家族激酶活性IC

采用均相时间分辨荧光(HTRF)的方法建立相关激酶的活性检测方法，测定化合物的抑制活性。配置5μL的反应液，包括1×enzymatic buffer(Cisbio,HTRF KinEASE

表9激酶浓度及相应ATP浓度

激酶和化合物预孵育10分钟，然后加入ATP和底物开始反应。所有酶催化反应都在25℃下进行40分钟。酶催化反应结束后，反应液中加入5μL TK antibody-cryptate和streptavidin-XL665(streptavidin-XL665反应浓度为62.5nM)，继续在25℃孵育60分钟。孵育结束后在用Biotek读615nm(Cryptate)和665nm(XL665)的荧光信号，并使用GraphPad Prism5.0软件计算IC

表10，化合物对FGFR家族激酶活性的测试(IC

以上表10数据显示，化合物94对FGFR家族激酶的活性具有抑制作用，其中化合物94对FGFR2 V564F、FGFR2 N549H、FGFR2 V564I以及FGFR3 V555M激酶抑制活性优于LOXO-292(IC