一种延缓皮肤衰老的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及化妆品添加剂的技术领域，尤其涉及一种延缓皮肤衰老的组合物及其制备方法。

背景技术

随着年龄增长，皮肤衰老随之而来，这是一种正常的生理现象。皮肤衰老的表现主要包括皮肤松弛、产生皱纹等。

人体衰老时，皮肤血液循环开始变慢，皮下组织脂肪层也开始变得松弛而欠缺弹性，耳垂到下巴的面部线条可能会变得松弛，颧骨上的皮肤也不再饱满紧致。皮肤衰老还可出现皱纹的表现，如眼角长出细纹、鱼尾纹，面部的最高点逐渐往下移动，出现法令纹，抬头纹以及脖颈处的皱褶等。皮肤老化时，脸部和身体的皮肤也可能会出现干燥的表现，而且肤色也会变得蜡黄，失去光泽，有些人可能还会出现老年斑或者皮肤瘙痒等症状。除因年龄的增长自然衰老外，皮肤衰老还可能是受日光、机械作用、不良生活习惯、污染等原因影响，加速衰老。

正所谓“爱美之心，人皆有之”。千百年来，人们在如何延缓皮肤衰老的问题上，做着长久的努力和探索。

科学家们于2000年首次提出了“炎性衰老”（inflamm-aging）这个概念，指机体在衰老的过程中出现的慢性促炎性反应状态。并且科学家通过临床研究发现：炎性衰老是机体衰老进程速率和寿命的一个决定因素。炎性衰老是人体衰老的“必然”过程，是不可逆的；但是，炎性衰老却有着一个“共同”的症状表现，并且可以用具体的指标来衡量。因此，我们可以通过人工干预在一定程度上预防和延缓这种衰老的出现。

在我们的体内，有两种“因子”，一种叫促炎因子（或称炎症因子），一种叫抗炎因子。它们无时无刻不在我们的血液里“相互斗争”，而这个斗争的“结果”，不但决定着我们体内的炎症状况，还直接决定着人体的衰老速度。简单而言，“炎性衰老”，其实就是我们体内的抗炎因子“少于”促炎因子而导致的。主要促炎因子包括TNF-α（肿瘤坏死因子—α）、IL-1β（白介素—1β）和IL-6（白介素—6）。主要抗炎因子为IL-10，这是一种具有重要免疫调节功能的多效细胞因子。

现有的能够抑制促炎因子的药物，包括恩布雷尔、己酮可可碱、柳氮磺吡啶等非天然来源的抑制剂不适用于护肤品等领域。

如何从获得天然来源的延缓皮肤衰老产品，来对抗炎性衰老，是我公司研发团队一直以来探究的问题。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供一种延缓皮肤衰老的组合物及其制备方法，并实现以下发明目的：制备一种天然来源的延缓皮肤衰老的组合物，有效抑制细胞产生IL-1β、IL-6、TNF-α。

为实现以上发明目的，本发明所采用的技术方案为：

一种延缓皮肤衰老的组合物，包括以下组分：S-Rg2、S-Rh1、R-Rg2、R-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、S-Rg3、R-Rg3、Rk1、Rg5、S-Rh2、R-Rh2、Rk2、Rh3。

所述组合物中各组分配比: 所述组合物中各组分的含量配比为: S-Rg2：S-Rh1：R-Rg2：R-Rh1：Rd：Rg6：Rg4：Rk3：Rh4：S-Rg3：R-Rg3：Rk1：Rg5：S-Rh2：R-Rh2：Rk2：Rh3的质量比为5.1-6.1：4.8-5.8：2.8-4.2：3.0-3.8：1.0-1.5：7.0-8.5：12.5-15.5：6.4-7.2：13.5-15.0：6.1-7.5：3.4-3.8：7.0-8.2：10-12：1.7-2.2：1.0-1.2：2.7-3.2：3.4-3.8。

一种延缓皮肤衰老的组合物的制备方法包括以下步骤：

步骤1、选择菌种

选择的菌种为沙克乳杆菌。菌种来源于市售，为美国ATCC标准菌种，菌种保藏号：ATCC15521。

步骤2、接种

在室温条件下，将沙克乳杆菌接种到基础培养基上；基础培养基为：MRS培养基，pH值为4-6；接种量为1-1.5%。

步骤3、发酵

将接种后的基础培养基放置到培养箱中发酵培养，发酵温度为37-40℃。

步骤4、诱导

发酵培养48-72小时，然后，向基础培养基中加入诱导物和人参皂苷，诱导物的加入量为培养基总质量的0.1-10%，人参皂苷的量为培养基总质量的0.01-5%。加入后，将培养基摇匀，并继续发酵48-96小时。

所述诱导物的原料组分包括人参、西洋参、大豆和三七，质量比为4-5：3-4：7-9：2-2.5。

所述人参也可以是人参的组织、组织培养物或不定根；

所述西洋参也可以是西洋参的组织、组织培养物或不定根；

所述大豆也可以是大豆的组织、组织培养物或不定根；

所述三七也可以是三七的组织、组织培养物或不定根。

所述诱导物的制备方法：

1、原料准备按照原料配比准备好原料。

2、提取将人参、西洋参、大豆和三七粉碎后搅拌混合得到混合料。加入去离子水，去离子水的加入量为混合料质量的4倍。加入去离子水后，开启微波处理，然后，开启加热和搅拌，在70-80℃，200-300rpm条件下，处理8-10min。处理后过滤保留液相，得到提取液。重复3次。所述微波处理：微波功率为850-900w，微波处理时间为5min。

3、萃取将提取液用水饱和正丁醇萃取3次，水饱和正丁醇的用量为提取液质量的50-60%。萃取后，保留每次萃取的正丁醇层，合并到一起得到萃取相。

4、获得诱导物将萃取相减压挥发掉正丁醇，得到诱导物。

步骤5、发酵后处理

发酵结束后，先过滤除去菌体，再将培养液进行浓缩，浓缩至培养液体积的5-20%，得到浓缩液。

向浓缩液中加入乙醇，震荡2-3min，离心除去不溶物，浓缩蒸干，得到粗提物。所述乙醇的加入量为浓缩液体积的3-5倍，乙醇浓度为95-100%。

将粗提物与浓度95%的乙醇按照1:3的质量比混合，溶解后，加入8-10倍去离子水，混合后得到稀释液。

将稀释液上大孔吸附树脂进行纯化；皂苷被树脂吸附以后，水洗除去杂质；用浓度85%以上的酒精洗脱皂苷，洗脱液蒸干后得到粉末，即为抗皮肤衰老的组合物。

有益效果

（1）本发明抗皮肤衰老的组合物采用天然来源的原料制备而成，用于延缓皮肤衰的护肤品或者保健品，绿色健康；同时，可有效延缓和改善炎性衰老，适合大力推广。

（2）本发明抗皮肤衰老的组合物可有效抑制细胞产生促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6，显著降低IL-1β、TNF-α、IL-6的含量；效力与SU相当。

（3）本发明抗皮肤衰老的组合物可有效促进细胞产生IL-10，显著提高血清中IL-10的含量；效力比柳氮磺吡啶更优。

附图说明

附图1为实施例3中ELISA 检测各组IL-1β含量的检测结果；

附图2为实施例3中ELISA 检测各组TNF-α含量的检测结果；

附图3为实施例3中ELISA 检测各组IL-6含量的检测结果；

附图4为实施例3中ELISA 检测各组IL-10含量的检测结果；

附图5为本发明抗皮肤衰老的组合物检测的HPLC图谱。

实施方式

包括以下步骤：

1、原料准备

诱导物的原料组分包括人参、西洋参、大豆和三七，质量比为4.5：3：9：2.2。

按照原料配比准备好原料。

2、提取

将人参、西洋参、大豆和三七粉碎后搅拌混合得到混合料。加入去离子水，去离子水的加入量为混合料质量的4倍。加入去离子水后，开启微波处理，然后，开启加热和搅拌，在78℃，280rpm条件下，处理10min。处理后过滤保留液相，得到提取液。重复3次。

所述微波处理：微波功率为880w，微波处理时间为5min。

3、萃取

将提取液用水饱和正丁醇萃取3次，水饱和正丁醇的用量为提取液质量的55%。萃取后，保留每次萃取的正丁醇层，合并到一起得到萃取相。

4、获得诱导物

将萃取相减压挥发掉正丁醇，得到诱导物。

包括以下步骤：

步骤1、选择菌种

选择的菌种为沙克乳杆菌。菌种来源于市售，为美国ATCC标准菌种，菌种保藏号：ATCC15521。

步骤2、接种

在室温条件下，将沙克乳杆菌接种到基础培养基上；基础培养基为：MRS培养基，pH值为5；接种量为1%。

步骤3、发酵

将接种后的基础培养基放置到培养箱中发酵培养，发酵温度为38℃。

步骤4、诱导

发酵培养48小时，然后，向基础培养基中加入实施例1制备的诱导物和人参皂苷，诱导物的加入量为培养基总质量的0.5%,人参皂苷的量为培养基总质量的1%。加入诱导物后，将培养液摇匀，并继续发酵48小时。

所述诱导物的原料组分包括人参、西洋参、大豆和三七，质量比为4.5：3：9：2.2。

步骤5、发酵后处理

发酵结束后，先过滤除去菌体，再将培养液进行浓缩，浓缩至培养液体积的10%，得到浓缩液。

向浓缩液中加入乙醇，震荡3min，离心除去不溶物，浓缩蒸干，得到粗提物。所述乙醇的加入量为浓缩液体积的4倍，乙醇浓度为95%。

将粗提物与浓度95%的乙醇按照1:3的质量比混合，溶解后，加入8倍去离子水，混合后得到稀释液。

将稀释液上大孔吸附树脂进行纯化；皂苷被树脂吸附以后，水洗除去杂质；用浓度85%的酒精洗脱皂苷，洗脱液蒸干后得到粉末，即为抗皮肤衰老的组合物。

经HPLC检测，获得的抗衰老功能添加剂组分配比为：S-Rg2：S-Rh1：R-Rg2：R-Rh1：Rd：Rg6：Rg4：Rk3：Rh4：S-Rg3：R-Rg3：Rk1：Rg5：S-Rh2：R-Rh2：Rk2：Rh3的质量比为5.5：4.8：3.6：3.3：1.0：7.1：14.1：6.5：14.4：6.6：3.6：7.9：11.7：1.9：1.1：3.0：3.8。

抗皮肤衰老的组合物检测的HPLC图谱如附图5所示。

检测方法：

步骤1、取对数生长期的 RAW264.7 细胞，用营养液将细胞浓度调整到 1×10

步骤2、将标记好的孔板放置在37℃、5 % CO2的细胞培养箱中培养过夜，然后分别换1 mL新的营养液。

营养液为含体积分数为 10%胎牛血清的 RPMI1640。

步骤3、干预

分别向实验1组、实验2组、对照2组的板孔内加入药剂，并干预2h；具体为：

实验1组：向标记为实验1组的板孔内加入实施例2制备的本发明抗皮肤衰老的组合物（简称Rgs），每孔加入剂量为5mg/L。

实验2组：向标记为实验2组的板孔内加入Rgs，每孔加入剂量为10mg/L。

对照2组：向标记为对照2组的板孔内加入抗炎药柳氮磺吡啶（简称SU），每孔加入剂量为10mg/L。

步骤4、LPS诱导

干预后，向标记为实验1组、实验2组、对照1组、对照2组的板孔内分别加入LPS（内毒素即脂多糖）进行诱导，每孔加LPS100 ng/mL。

空白组加入相同量的 PBS 缓冲液。将孔板在原培养条件下继续培养 8 h，然后，分别收集上清，采用ELISA 检测试剂盒按照说明书分别检测上清中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 的含量。

各组上清中IL-1β含量的检测结果如附图1所示：

各组上清中TNF-α含量的检测结果如附图2所示：

各组上清中IL-6含量的检测结果如附图3所示：

各组上清中IL-10含量的检测结果如附图4所示：

分析附图1-3可知，对照1组的IL-1β、TNF-α、IL-6含量显然高于空白组，说明LPS诱导后血清中的IL-1β、TNF-α、IL-6含量明显增高。实验1组和实验2组的IL-1β、TNF-α、IL-6含量显然低于对照1组，说明经过本发明抗皮肤衰老的组合物的干预，有效降低了血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的含量，说明本发明抗皮肤衰老的组合物有效抑制了细胞产生IL-1β、TNF-α、IL-6。其中，实验2组的效果与对照2组基本持平，说明本发明抗皮肤衰老的组合物抑制细胞产生IL-1β、TNF-α、IL-6的效力与SU相当。

分析附图4可知，对比空白组、对照1组和实验1组、实验2组可知，经过本发明抗皮肤衰老的组合物的干预，有效提高了血清中IL-10的含量，说明本发明抗皮肤衰老的组合物有效促进了细胞产生IL-10。

对比实验1组、实验2组的IL-10含量均高于对照2组，其中实验2组的IL-10含量显著高出其他组；说明5mg/L剂量Rgs对促进细胞产生IL-10的效力优于10mg/L剂量SU的效力，10mg/L剂量Rgs对促进细胞产生IL-10的效力更佳。

本发明抗皮肤衰老的组合物各组分的结构式：

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除特殊说明的外，本发明所述的比例均为质量比，所述的百分数均为质量百分数。

显然的是，在本发明的构思下，可以变化的具体实施方法还有很多，在此，应该声明，在本发明的发明构思下所做出的任何改变都将落入本发明的保护范围内。