一种盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳及其制备方法

技术领域

本发明涉及兽用抗生素领域，尤其是涉及一种盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳及其制备方法。

背景技术

盐酸克林霉素又名氯洁霉素，属林可霉素类抗生素，是林可霉素的衍生物。盐酸克林霉素抗菌活性强，抗菌谱广，它对革兰氏阳性需氧菌、链球菌、葡萄球菌具有抗菌活性,对多种厌氧菌、衣原体、支原体和钩形虫也具有抗菌活性。

大观霉素是由链霉菌所产生的一种氨基糖苷类抗生素，用于革兰氏阴性菌及支原体感染。研究表明，大观霉素能有效治疗和预防由链球菌、丹毒丝状菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌及支原体引起的畜禽疾病，尤其对支原体和大肠杆菌混合感染效果显著。

林可霉素与大观霉素复方又称利高霉素，二者配伍有协同作用，有较广的抗菌谱，作用快速，毒性小，治疗量对鸡、猪无不良影响。对仔猪腹泻、猪的支原体性肺炎以及鸡毒支原体引起的鸡慢性呼吸道病有很好的疗效。

现有的林可霉素与大观霉素复方剂型有预混剂、片剂、混悬剂、可溶性粉以及水性注射液。林可霉素与大观霉素二者口服生物利用度低，而注射途径具有良好的吸收效果，生物利用度高，组织分布广泛，起效迅速，但是大观霉素在水溶液中稳定期短，据J.Szunyog等报道，大观霉素水溶液不稳定。在酸性环境下，大观霉素水解为actinamine，失去生物活性。在碱性条件下，actinamine与actinospectose结合部α-酮-半缩酮很容易断裂、重排，形成降解产物大观霉酸(actinospectinoic acid)，效价、pH值均快速下降。而盐酸林可霉素水溶液的稳定性略差，其结构中的硫苷键在酸性或金属作用下极易发生水解，从而影响药液的稳定性。所以，林可霉素与大观霉素复方注射液的稳定性是困扰许多生产厂家的一个难题。

CN101829082B公开了一种兽用盐酸大观霉素、盐酸林可霉素注射液的制备方法，该方法需要先将盐酸大观霉素进行包合后再制备成注射剂，但是在制备过程中需要先升温至50℃溶解环糊精再迅速降温至4℃，对设备的要求较高，而CN102048748B公开了一种林可霉素与大观霉素复方混悬注射液及其制备方法，但其使用有机溶剂制备注射液，且其为油混悬剂对动物的刺激性较大。

所以研制出一种稳定、刺激性小、包封率高且给药方便的盐酸林可霉素与盐酸大观霉素复方注射液，对于应用推广林可霉素与大观霉素复方具有重要的意义，尤其是将在仔猪腹泻、猪的支原体性肺炎的防治将会发挥更大的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳，以解决现有技术中存在的稳定差、刺激性大以及包封率低的技术问题。

本发明的另一目的在于提供一种上述微乳的制备方法；

本发明还有一个目的在于提供上述微乳在治疗仔猪腹泻、猪的支原体性肺炎等疾病方面的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

提供一种盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳，包括盐酸林可霉素、盐酸大观霉素、乳化剂、助乳化剂、抗氧剂、络合剂、等渗剂、注射用油和注射用水，其特征在于，各组分按重量比为：盐酸林可霉素0.5-7.5％,盐酸大观霉素1-15％，乳化剂1-3％，助乳化剂0.01-2％，络合剂0.01％-1％，抗氧剂0.01-2％，等渗剂2-5％，注射用油10-30％，其余为注射用水；

在一个方案中，所述盐酸林可霉素的用量优选为0.5wt％、1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％或7.5wt％,所述盐酸大观霉素的用量优选为1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％或15wt％；

在一个方案中，乳化剂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂或人工合成磷脂中的一种或一种以上的组合，所述乳化剂的用量优选为1wt％、1.5wt％、2wt％或3wt％；

在一个方案中，助乳化剂选自PEG400、PEG600、油酸、亚油酸、棕榈酸中的一种或一种以上的组合，所述助乳化剂的用量优选为0.01wt％、0.02wt％、0.03wt％、0.05wt％、0.5wt％、0.6wt％、1wt％、1.5wt％或2wt％；

在一个方案中，络合剂选自EDTA二钠，所述EDTA二钠的用量优选为0.01wt％、0.02wt％、0.03wt％、0.05wt％、0.5wt％或1wt％；

在一个方案中，抗氧化剂选自维生素E，没食子酸丙酯，叔丁基对羟基茴香醚，抗坏血酸，亚硫酸氢钠，焦亚硫酸钠中的一种或一种以上的组合物，所述抗氧化剂的用量优选为0.01wt％、0.02wt％、0.03wt％、0.05wt％、0.5wt％、1wt％、1.5wt％或2wt％；

在一个方案中，等渗剂选自甘油、木糖醇或葡萄糖中的一种或一种以上的组合，所述等渗剂的用量为2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％或5wt％；

在一个方案中，注射用油选自大豆油、花生油、茶油、麻油、中长链脂肪酸酯或橄榄油中的一种或一种以上的组合，所述注射用油的用量优选10wt％、15wt％、20wt％、25wt％或30wt％；

本发明还提供一种盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳的制备方法，包括以下步骤：

1)在50-60℃及氮气保护下，用注射用油将乳化剂完全溶解，再在氮气保护下加入抗氧化剂，搅拌使上述混合物完全溶解，得油相；

2)将盐酸林可霉素、盐酸大观霉素、等渗剂、络合剂和助乳化剂溶解于注射用水中，搅拌使其完全溶解，得水相；

3)将上述油相和水相混合，定容，再高速搅拌剪切为初乳液。

4)再将上述初乳液在高压下均质5-8次，得到均匀的乳状液，再将均质后的乳状液过微孔滤膜，充氮，灌封，115℃灭菌30min，制得终产品。

本发明中，由于抗氧化剂的水溶性不同，所以加入的方式也不同，油溶性抗氧化剂加入油相中，水溶性抗氧剂加入水相中；

具体地，所述盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳的制备方法，包括以下步骤：

1)在50-60℃及氮气保护下，用注射用油将乳化剂完全溶解，再在氮气保护下加入抗氧化剂(维生素E、叔丁基对羟基茴香醚或没食子酸丙酯)，搅拌使上述混合物完全溶解，得油相；

2)将盐酸林可霉素、盐酸大观霉素、等渗剂、络合剂和助乳化剂溶解于注射用水中，搅拌使其完全溶解，得水相；

3)将上述油相和水相混合，定容，再高速搅拌剪切为初乳液。

4)再将上述初乳液在高压下均质5-8次，得到均匀的乳状液，再将均质后的乳状液过微孔滤膜，充氮，灌封，115℃灭菌30min，制得终产品。

具体地，所述盐酸林可霉素与盐酸大观霉素微乳的制备方法，包括以下步骤：

1)在50-60℃及氮气保护下，用注射用油将乳化剂完全溶解，搅拌使上述混合物完全溶解，得油相；

2)将盐酸林可霉素、盐酸大观霉素、等渗剂、抗氧化剂(亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸)络合剂和助乳化剂溶解于注射用水中，搅拌使其完全溶解，得水相；

3)将上述油相和水相混合，定容，再高速搅拌剪切为初乳液。

4)再将上述初乳液在高压下均质5-8次，得到均匀的乳状液，再将均质后的乳状液过微孔滤膜，充氮，灌封，115℃灭菌30min，制得终产品。

本发明提高了注射剂的稳定性，提高了包封率，获得的微乳粒径小且均匀，延长了药品保质期，保证了药品安全，本发明的制备工艺简单，节约了时间和成本，适于工业化，此外，本发明制剂的配方组成和制备工艺进行了科学的筛选和论证；

采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：

1)本发明制备得到的微乳制剂稳定性高，而且可以获得很高的包封率(98.5％以上)；

2)本发明的微乳制剂通过引入络合剂和助乳化剂，制备得到的微乳制剂平均粒径小，分布均匀且稳定性高；

3)本发明的制备工艺简单，节约了时间和成本，适于工业化。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下面结合具体的实施方式对本发明做进一步的解释说明。

实施例1

处方：

盐酸大观霉素10g

盐酸林可霉素5g

大豆卵磷脂1.5g

注射用大豆油15g

PEG4000.6g

甘油2.5g

维生素E0.02g

EDTA二钠0.01g

注射用水加至100mL

制备工艺：

1)在50℃及氮气保护下，用15g注射用大豆油将1.5g大豆卵磷脂完全溶解，再在氮气保护下加入0.02g维生素E，搅拌使上述混合物完全溶解，得油相；

2)将10g盐酸大观霉素、5g盐酸林可霉素、2.5g甘油、0.01gEDTA二钠和0.6gPEG400溶解于70mL注射用水中，搅拌使其完全溶解，得水相；

3)将上述油相和水相混合，定容至100mL，再转移至高速剪切乳化机中，高速搅拌剪切(10000r,5min),得到初乳液。

4)再将上述制备好的初乳液在高压(800Bar)下均质6次，再将均质后的乳状液用微孔滤膜过滤，充氮，灌封，115℃灭菌30min，制得终产品。

实施例2-4

实施例2-4参照实施例1的方法制备，具体的组分和用量参照表1。

表1

其中，表1中的“-”表示未添加；

对比例1

处方：

盐酸大观霉素10g

盐酸林可霉素5g

大豆卵磷脂1.5g

注射用大豆油15g

甘油2.5g

PEG400 0.6g

维生素E 0.02g

注射用水加至100mL

制备工艺：

1)在50℃及氮气保护下，用15g注射用大豆油将1.5g大豆卵磷脂完全溶解，再在氮气保护下加入0.02g维生素E，搅拌使上述混合物完全溶解，得油相；

2)将10g盐酸大观霉素、5g盐酸林可霉素、2.5g甘油和0.6gPEG400溶解于70mL注射用水中，搅拌使其完全溶解，得水相；

3)将上述油相和水相混合，定容至100mL，再转移至高速剪切乳化机中，高速搅拌剪切(10000r,5min),得到初乳液。

4)再将上述制备好的初乳液在高压(800Bar)下均质6次，再将均质后得乳状液用微孔滤膜过滤，充氮，灌封，115℃灭菌30min，制得终产品。

对比例2-4

对比例2-4参照对比例1的方法制备，具体各的各组分及其用量参见表2。

表2

其中，表2中的“-”表示未添加；

粒径的测定：

分别取实施例1-4和对比例1-4的注射用微乳各200μL加入到10mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，轻轻摇匀，采用马尔文Nano-ZS90粒度仪测定粒径和多分散性系数(PDI)，结果见表3。

表3

根据表3可以看出，在未添加助乳化剂的情况下，制备得到的微乳粒径偏大且分布相对不均匀，而本申请实施例1-4加入助乳化剂后制备得到的微乳的平均粒径小且分布均匀；

包封率实验：

测定上述实施例1-4和对比例1-4制备的注射微乳中盐酸大观霉素和盐酸林可霉素的包封率。

将上述实施例1-4和对比例1-4制备的注射微乳制剂高速离心，5000r/min，离心30min，取清液1ml，用乙醇溶解，以高效液相色谱法测定盐酸大观霉素和盐酸林可霉素的含量，确定被包封的含量M1，注射微乳中盐酸大观霉素和盐酸林可霉素总量为M0，包封率N为：

N＝M1/M0×100％，结果见表4

表4

根据表4的结果可以看出，在未添加助乳化剂PEG400的情况下，制备得到的微乳的包封率明显降低，而本发明在添加助乳化剂后微乳的包封率明显提升，此外，当采用其他的乳化剂，如氢化大豆卵磷脂，其包封率有所降低，采用大豆卵磷脂作为乳化剂制备得到的注射微乳的包封率最好；

稳定性试验:

将以上实施例1-4和对比例1-4制备的微乳，1)在高温40±2℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，在第1，2，3，6个月分别取样一次，分别按照稳定性重点考察项目进行检查，结果见表5；2)在25±2℃、相对湿度60％±5％条件下12个月，进行长期稳定性试验考察，在第3，6，9，12个月分别取样一次，分别按照稳定性重点考察项目进行检查，结果见表6。

表5加速实验结果

表6长期稳定性实验结果

根据表5和表6的实验数据可以看出，对比例2中未添加助乳化剂PEG400，对比例3中未添加助乳化剂PEG400和络合剂EDTA二钠，二者微乳的pH值和药物含量随着放置时间的延长均明显下降，这表明助乳化剂和络合剂的加入对于微乳的稳定性影响较大，本发明的微乳中加入了助乳化剂和络合剂，其微乳的pH值和药物含量在加速实验和长期稳定性实验条件下均较稳定，这说明本发明的注射微乳长期储藏稳定性好。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。