一种微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法和应用

技术领域

本发明属于化学测试技术领域，具体涉及一种微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法和应用。

背景技术

随着合成化学的发展，具有不同性能的表面活性剂被陆续开发，并广泛应用于制药行业。表面活性剂由亲水和亲油2种性质不同基团组成，常作为乳化剂、增溶剂、润湿剂、助溶剂和渗透剂等应用于制剂成型。表面活性剂的种类繁多，其中非离子表面活性剂由于稳定性高、相容性好、低毒等优良特性而在口服药用制剂、注射剂和外用制剂领域广泛应用，制药行业常用的非离子表面活性剂包括烷基聚氧乙烯醚类、失水山梨醇脂肪酸酯类和烷基葡萄糖苷类。

聚氧乙烯(35)蓖麻油(polyoxyethylene 35castor oil，以下简称为CrEL)是一种较为常用的烷基聚氧乙烯醚类非离子表面活性剂，是由环氧乙烷和甘油蓖麻油摩尔比35:1生成的复杂混合物，其主要化学成分组成为聚氧乙烯甘油三蓖麻酸酯(结构式见图1a)和聚乙二醇蓖麻油酸酯(结构式见图1b)。CrEL通常被认为是相对无毒的，但已有研究表明CrEL是抗肿瘤药物紫杉醇制剂存在严重超敏反应的根本原因，另外，此类表面活性剂在人体内分解代谢时可促进人体释放组胺，引发神经毒性、心脏毒性和中毒性肾损伤等不良反应。目前对CrEL的研究多是集中在组成成分分析和应用，缺乏合适的定量分析方法对其进行质量控制，已有文献报道的柱前衍生法和液相色谱/串联质谱法虽然灵敏度较高，但仅分别能对CrEL中存在的蓖麻油酸类和聚乙二醇类化合物进行定量，不能实现CrEL混合物整体定量，而比色法和滴定法虽能对混合物整体大致定量，但整体实验的灵敏度和可行性却较低。

因此，亟需建立了一种灵敏度高并能实现对CrEL定量检测的新方法，以期为微乳提取液中表面活性剂的去除提供稳定可行的检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中的上述问题，本发明提出了一种微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法和应用。

第一方面，本发明提出了一种微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法，通过研究得到CrEL与蓖麻油酸甲酯之间的比例关系，然后测定待测微乳提取液中蓖麻油酸甲酯的含量，再根据两者的比例关系计算出待测微乳提取液中CrEL的含量，实现微乳提取液中CrEL的定量。

根据本发明，CrEL的化合物的化学结构中存在蓖麻油酸酯类似结构，而蓖麻油酸酯可以在碱的催化下与甲醇发生醇解反应生成蓖麻油酸甲酯(结构式见图1c)。蓖麻油酸甲酯是2020年版《中国药典》蓖麻油的含量测定指标。首先以CrEL为研究对象，获得CrEL与蓖麻油酸甲酯之间的比例关系，并以相同制样方法处理含有CrEL的药物制剂，测定其蓖麻油酸甲酯的含量，根据两者的比例关系，计算出样品中CrEL的含量，以此实现对CrEL的定量。

根据本发明，微乳提取液是以油酸乙酯、CrEL、50％乙醇为原料，制备了稳定的O/W型微乳，并作为提取溶剂，用于泽泻汤的提取，得到微乳提取液。以微乳作为提取溶剂可在一定程度上提高泽泻汤中有效成分的提取效率，尤其是脂溶性最强的泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B，分别提高了6.4倍和5.5倍，但微乳提取的泽泻汤药液中存在一定量CrEL，故本发明建立CrEL的定量检测方法，可以对微乳提取液中CrEL的去除提供方法，并为其他含有CrEL的药物制剂的质量控制提供参考。

作为本发明的具体实施方式，包括以下步骤：

S1：将定量CrEL与氢氧化钾-甲醇溶液混合加热回流，再加入三氟化硼乙醚-甲醇溶液加热回流，萃取，得到研究样品溶液；

S2：将研究样品溶液脱水、过滤进行测试蓖麻油酸甲酯的峰面积；

S3：重复步骤S1和S2，得出CrEL中的蓖麻油酸甲酯得到含量比例均值；

S4：将待测微乳提取液与氢氧化钾-甲醇溶液混合加热回流，再加入三氟化硼乙醚-甲醇溶液加热回流，萃取，得到待测样品溶液；

S5：将待测样品溶液脱水、过滤进行测试蓖麻油酸甲酯的峰面积，得到蓖麻油酸甲酯的含量；

S6：采用步骤S3得到的CrEL中的蓖麻油酸甲酯得到含量比例均值计算得到待测微乳提取液中CrEL的含量。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S1和步骤S4中，各自独立地，所述氢氧化钾-甲醇溶液中氢氧化钾在甲醇溶液中的浓度为0.25-1.5mol/L，优选为1mol/L；所述甲醇溶液为纯甲醇；

所述CrEL与氢氧化钾-甲醇溶液的质量体积比为1g:(50-150)ml，优选为1g:100ml。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S1和步骤S4中，各自独立地，所述三氟化硼乙醚-甲醇溶液中三氟化硼乙醚与甲醇的质量比为1:(2-4)，优选为1:3；

所述CrEL与三氟化硼乙醚-甲醇溶液的质量体积比为1g:(50-250)ml，优选为1g:100ml。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S1和步骤S4中，各自独立地，所述加热温度为50-70℃，优选为60℃，加热方式优选为水浴加热；

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S1和步骤S4中，各自独立地，所述回流时间为15-60min，优选为15min。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S1和步骤S4中，各自独立地，所述萃取包括采用正己烷萃取1-4次，优选为2次；

所述CrEL与正己烷的质量体积比为1g:(50-150)ml，优选为1g:100ml；

优选地，第一次萃取时加入饱和氯化钠，加入量为正己烷的2-5倍，优选为3.5倍。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S2和步骤S5中，各自独立地，所述脱水包括采用无水硫酸钠进行脱水；所述过滤包括采用滤膜过滤，优选地滤膜孔径为0.22μm。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S3中，所述得出CrEL中的蓖麻油酸甲酯得到含量比例均值为0.2084。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S4中，实际实施中，将待测微乳提取液挥发干燥后，残渣与氢氧化钾-甲醇溶液混合加热回流。

作为本发明的具体实施方式，所述步骤S6中，所述CrEL含量＝步骤S5得到的蓖麻油酸甲酯含量/0.2084。

作为本发明的具体实施方式，所述测试蓖麻油酸甲酯优选为采用气相色谱仪测试，测试条件包括：采用

本发明中的上述原料均可自制，也可商购获得，本发明对此不作特别限定。

第二方面，本发明提供了第一方面所述检测方法在CrEL去除领域中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明的微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法，通过研究得到CrEL与蓖麻油酸甲酯之间的比例关系，然后测定待测微乳提取液中蓖麻油酸甲酯的含量，再根据两者的比例关系计算出待测微乳提取液中CrEL的含量，实现微乳提取液中CrEL的定量，该方法稳定可行。

本发明的微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法，重复性好、准确度较高，能对泽泻汤微乳提取液中的CrEL进行定量，对后期分离纯化泽泻汤有效成分中CrEL残留量的测定具有重要意义。CrEL常作为难溶性药物的增溶剂和乳化剂，用量较大，是制剂产生不良反应的重要原因，本研究建立的CrEL的检测方法可以对制剂中CrEL进行定量，从产品的质量控制角度出发提高其临床应用的安全性，并可为微乳作为提取溶剂的可行性分析提供检测方法。

附图说明

图1a为聚氧乙烯甘油三蓖麻酸酯结构式；

图1b为聚乙二醇蓖麻油酸酯结构式；

图1c为蓖麻油酸甲酯结构式；

图2为本发明实施例1中CrEL生成蓖麻油酸甲酯的实验流程图；

图3A为本发明实施例1中对照品的气相色谱图；

图3B为本发明实施例1中CrEL的气相色谱图；

图3C为本发明实施例1中待测泽泻汤微乳提取液样品的气相色谱图。

其中，1-蓖麻油酸甲酯。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但并不构成对本发明的任何限制。

本发明各实施例中所用的实验设备具体信息如下：

7890A型气相色谱仪，美国Agilent公司；

BD125型十万分之一电子分析天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；

1011015型恒温水浴锅，巩义市予华仪器有限责任有限公司；

JY2002型电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；

98-1-B型电子调温电热套，天津市泰斯特仪器有限公司；

WB2000-D型搅拌器，德国WIGGENS公司。

本发明各实施例中所用的试剂具体信息如下：

蓖麻油酸甲酯，纯度≥99％，批号H2112152，购自Aladdin阿拉丁试剂有限公司；

正己烷，分析纯，北京迈瑞达科技有限公司；

三氟化硼乙醚，分析纯，北京迈瑞达科技有限公司；

氢氧化钾，分析纯，天津市大茂试剂厂；

氯化钠，分析纯，北京迈瑞达科技有限公司；

甲醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

油酸乙酯，北京凤礼精求商贸有限责任公司，批号为0000881168；

聚氧乙烯(35)蓖麻油CrEL，北京凤礼精求商贸有限责任公司，批号为14026224UO；

泽泻和白术药材均购于四川新荷花中药饮片股份有限公司，经中国中医科学院中药研究所何希荣鉴定为泽泻科植物泽泻Alisma plantago-aquatica Linn.的干燥块茎，菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎。

空白微乳的制备

精密称量油酸乙酯5.17g，CrEL 29.06g，50％乙醇10.76g置烧杯内，搅拌，加入去离子水稀释至200mL，使用搅拌器以600r·min

供试品：泽泻汤微乳提取液的制备

称量泽泻69g、白术27.6g置2000mL圆底烧瓶内，加入空白微乳溶液，分别加热回流提取1、0.5、0.5h，合并提取液，放凉即为泽泻汤微乳提取液。

本发明的微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法包括以下步骤：

S1：将定量CrEL与氢氧化钾-甲醇溶液混合加热回流，再加入三氟化硼乙醚-甲醇溶液加热回流，萃取，得到研究样品溶液；

S2：将研究样品溶液脱水、过滤进行测试蓖麻油酸甲酯的峰面积；

S3：重复步骤S1和S2，得出CrEL中的蓖麻油酸甲酯得到含量比例均值；

S4：将待测微乳提取液挥发干燥后，残渣与氢氧化钾-甲醇溶液混合加热回流，再加入三氟化硼乙醚-甲醇溶液加热回流，萃取，得到待测样品溶液；

S5：将待测样品溶液脱水、过滤进行测试蓖麻油酸甲酯的峰面积，得到蓖麻油酸甲酯的含量；

S6：采用步骤S3得到的CrEL中的蓖麻油酸甲酯得到含量比例均值计算得到待测微乳提取液中CrEL的含量。

其中，采用气相色谱仪测试，测试条件包括：采用

实施例1

本实施例提供了一种微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法，其中，以CrEL为研究对象，获得CrEL与蓖麻油酸甲酯之间的比例关系，具体细节如下：

精密称定CrEL约0.1g于锥形瓶内，分别考察氢氧化钾-甲醇溶液浓度、用量和60℃水浴加热回流时间，三氟化硼乙醚-甲醇(1:3)溶液的用量、60℃水浴加热回流时间和正己烷的萃取次数对生成蓖麻油酸甲酯的影响如表1所示，实验流程图见图2。萃取所得样品合并至50ml量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀，2g无水硫酸钠脱水，摇匀，过0.22μm滤膜即得。

精密注入气相色谱仪1μl，记录蓖麻油酸甲酯的峰面积。

表1CrEL生成蓖麻油酸甲酯制备方法单因素考察结果

实施例1最终确定的最佳制备方法为1mol/l的氢氧化钾-甲醇溶液10mL并60℃水浴加热回流时间15min、三氟化硼乙醚-甲醇(1:3)溶液10mL并60℃水浴加热回流时间15min、正己烷萃取2次。

实施例1得出CrEL生成蓖麻油酸甲酯的百分含量均值为20.84％、RSD值为2.55％，表明最佳制备方法重现性良好，稳定可行。

实施例2

本实施例提供了一种微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法，具体细节如下：

S1：精密吸取供试品泽泻汤微乳提取液10ml于蒸发皿中，蒸至全干，使用1mol/l的氢氧化钾-甲醇溶液10ml溶解并全部转移至锥形瓶内，在60℃水浴加热回流15min，沿冷凝管壁精密加入三氟化硼乙醚-甲醇(1:3)10ml，60℃水浴加热回流15min；精密加入10ml正己烷于锥形瓶内，震摇，冷却至室温，加入10ml饱和氯化钠溶液于锥形瓶内，震摇，并转移至分液漏斗内，依次加入10、10、5ml的饱和氯化钠溶液洗涤锥形瓶，全部转移至分液漏斗内，震摇，静置15min；上清液全部转移至50ml容量瓶内，下层加入10ml正己烷进行第2次萃取，上清全部转移至50ml容量瓶内；用正己烷定容50ml容量瓶至刻度，摇匀，加入2g的无水硫酸钠脱水，震摇，过0.22μm滤膜即得待测样品。

S2：采用

S3：根据实施例1得到的CrEL中蓖麻油酸甲酯的百分含量均值为20.84％计算得到供试品泽泻汤微乳提取液的CrEL含量为29.054g。

实施例3-4

根据实施例2的步骤，再将供试品进行测试，实施例3测得供试品泽泻汤微乳提取液的CrEL含量为30.495g，实施例4测得供试品泽泻汤微乳提取液的CrEL含量为29.764g。

实施例2-4得到的测试结果误差RSD值为2.42％，说明验证合格，表明本发明的检测方法稳定可行。

综上，本发明的微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量检测方法，通过研究得到CrEL与蓖麻油酸甲酯之间的比例关系，然后测定待测微乳提取液中蓖麻油酸甲酯的含量，再根据两者的比例关系计算出待测微乳提取液中CrEL的含量，实现微乳提取液中CrEL的定量，该方法稳定可行、重复性好、准确度较高。

在本发明中的提到的任何数值，如果在任何最低值和任何最高值之间只是有两个单位的间隔，则包括从最低值到最高值的每次增加一个单位的所有值。例如，如果声明一种组分的量，或诸如温度、压力、时间等工艺变量的值为50-90，在本说明书中它的意思是具体列举了51-89、52-88……以及69-71以及70-71等数值。对于非整数的值，可以适当考虑以0.1、0.01、0.001或0.0001为一单位。这仅是一些特殊指明的例子。在本申请中，以相似方式，所列举的最低值和最高值之间的数值的所有可能组合都被认为已经公开。

应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。