氨基嘧啶基衍生物

技术领域

本发明提供药学上活性的氨基嘧啶基配体(ligand)及类似物。此类化合物有用于抑制Janus激酶(JAK)。此发明亦针对包含所述化合物的组合物、制备所述化合物的方法，以及用于治疗和预防由JAK、且特别是由TYK2/JAK1介导之病症(condition)的方法。

背景技术

蛋白质激酶是催化蛋白质中之特定残基的磷酸化的酶的家族，大致分类为酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶。因突变、过度表达、或不适当调节、不良调节或去调节，以及生长因子或细胞因子的过度或不足产生所引起的不适当的激酶活性已牵涉许多疾病，包括但不限于癌症、心血管疾病、过敏、哮喘及其他呼吸疾病、自体免疫性疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢紊乱、以及神经和神经退化紊乱，如阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)。不适当的激酶活性引发各种与前述及相关疾病牵涉的细胞生长、细胞分化、细胞功能、存活、细胞凋亡和细胞运动性相关的生物细胞反应(biological cellular response)。

因此，蛋白质激酶已成为一类作为标靶用于治疗性干预(therapeuticintervention)的重要酶。特别是，细胞蛋白质酪氨酸激酶之JAK家族(JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)在细胞因子信号传导(signaling)中扮演中心角色(Kisseleva et al.,Gene,2002,285,1；Yamaoka et al.Genome Biology 2004,5,253)。在结合到他们的受体后，细胞因子活化JAK，然后JAK磷酸化细胞因子受体，从而创造信号分子(特别是最终导致基因表达的信号转导因子和转录活化蛋白(STAT)家族的成员)的停泊位点。已知许多细胞因子会活化JAK家族。这些细胞因子包括干扰素(IFN)家族(IFN-α、IFN-β、IFN-ω、限制素(Limitin)、IFN-γ、IL-10、IL-19、IL-20、IL-22)、gp130家族(IL-6、IL-11、OSM、LIF、CNTF、NNT-1/BSF-3、G-CSF、CT-1、瘦素、IL-12、IL-23)、伽马C家族(IL-2、IL-7、TSLP、IL-9、IL-15、IL-21、IL-4、IL-13)、IL-3家族(IL-3、IL-5、GM-CSF)、单链家族(EPO、GH、PRL、TPO)、受体酪氨酸激酶(EGF、PDGF、CSF-1、HGF)、及G-蛋白偶合受体(AT1)。

仍然需要有效且选择性地抑制特定JAK酶的新化合物。已显示JAK酶在炎性疾病和自体免疫性疾病中重要的多种细胞类型的分化和功能中是重要的，包括自然杀伤细胞、B细胞和辅助性T细胞(T helper cell)类型。异常JAK表达与多种自体免疫性或炎性病症相关联。通过抑制JAK1激酶活性调节免疫活性可以在各种免疫紊乱的治疗中证明是有用的(O’Shea JJ,Plenge R,Immunity,36,542-50(2012)；Murray,P.J.,J.Immunol.,178,2623-2629(2007)；Kisseleva,T.,et al.,Gene,285,1-24(2002))。

本技术领域已知的JAK抑制剂常常具有使得他们通常更适合口服给药而较不适合局部给药的性质。据此，本发明提供新JAK抑制剂，他们既是有效的JAK抑制剂，特别是TYK2/JAK1抑制剂，而且在人类肝细胞中也展现高清除率，因此提供显著改善的全身清除率，从而降低局部给药时的不良副作用的风险，并同时在皮肤中保有效力(efficacy)。

发明内容

本发明提供一种具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐，

其中R

在其他面上，本发明亦提供：包含药学上可接受的载剂及式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

在其他面上，本发明亦提供治疗包括下列病症或紊乱的方法，

关节炎，包括类风湿关节炎、幼年型关节炎、及银屑病关节炎；

自体免疫性或炎性疾病或紊乱，包括桥本(Hashimoto’s)甲状腺炎、自体免疫性溶血性贫血、恶性贫血的自体免疫性萎缩性胃炎、自体免疫性脑脊髓炎、自体免疫性睪丸炎、Goodpasture病、自体免疫性血小板减少症、交感性眼炎、重症肌无力、毒性弥漫性甲状腺肿(Graves’disease)、原发性胆汁性肝硬化、自体免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、慢性侵袭性肝炎、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、溃疡性结肠炎和膜性肾小球肾病、全身性红斑狼疮、类风湿关节炎、银屑病关节炎、Sjogren综合征、Reiter综合征、多肌炎、皮肌炎、I型干扰素病，包括Aicardi-Goutières综合征和其他过度表达I型干扰素的孟德尔疾病(mendelian diseases)、全身性硬化、结节性多动脉炎、多发性硬化、复发性缓解型多发性硬化、原发性进行性多发性硬化、次发性进行性多发性硬化、及大疱性类天疱疮、以及额外的自体免疫性疾病，其可以是基于O形细胞(体液性)或基于T细胞者，包括Cogan综合征、强直性脊柱炎、Wegener肉芽肿病、自体免疫性脱发、I型或青少年发病型糖尿病、或甲状腺炎；

癌症或肿瘤，包括消化道/胃肠道癌、结肠癌、肝癌、皮肤癌(包括肥大细胞肿瘤和鳞状细胞癌)、乳癌和乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病(包括急性骨髓性白血病和慢性骨髓性白血病)、肾癌、肺癌、肌肉癌、骨癌、膀胱癌、脑癌、黑色素瘤(包括口及转移性黑色素瘤)、卡波西肉瘤、骨髓瘤(包括多发性骨髓瘤)、骨髓增生性紊乱、增生性糖尿病视网膜病变、或血管生成相关紊乱，包括实体肿瘤；

糖尿病，包括I型糖尿病或来自糖尿病的并发症；

眼疾病、紊乱或病症，包括眼的自体免疫性疾病、角膜结膜炎、春季结膜炎、葡萄膜炎(包括与Behcet病相关的葡萄膜炎和镜片引起的葡萄膜炎)、角膜炎、疱疹性角膜炎、圆锥形角膜炎、角膜上皮营养不良、角膜白斑、眼天疱疮、蚕蚀性角膜溃疡(Mooren's ulcer)、巩膜炎、格雷夫眼病、伏格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)、干燥性角结膜炎(干眼)、小水疱(phlyctenule)、虹膜睫状体炎、结节病、内分泌性眼病、交感性眼炎、过敏性结膜炎、或眼部新生血管；

肠炎症，包括克罗恩病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎、炎性肠病、腹腔疾病、直肠炎、嗜酸性胃肠炎、或肥大细胞增多症；

神经退化疾病，包括运动神经元病、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿病、脑缺血、或由跌打损伤、敲击(strike)、谷氨酸神经毒性或缺氧导致的神经退化疾病；中风、心肌缺血、肾缺血、心脏发作、心脏肥大、动脉粥样硬化及动脉硬化中的缺血/再灌注损伤、器官缺氧、或血小板聚集；

皮肤疾病、病症或紊乱、包括特应性皮炎、手部皮炎、接触性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎、神经性皮炎、口周皮炎、郁血性皮炎、多汗性湿疹、干燥性皮炎、钱币状皮炎(nummular dermatitis)、脂溢性皮炎、眼睑皮炎、尿布皮炎、皮肌炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、斑秃、白癜风、酒渣鼻、大疱性表皮松解症、毛角化病、白色糠疹、天疱疮、外阴阴道炎、痤疮、慢性自发性荨麻疹、慢性特发性荨麻疹、慢性身体性荨麻疹、伏格特-小柳-原田病、萨顿痣/母斑、发炎后色素过少症、老年性白斑病、化学/药物引起的白斑病、皮肤红斑狼疮、盘状狼疮、瘑疮、类天疱疮、Sweet综合征、化脓性汗腺炎、银屑病、斑块状银屑病、脓疱性银屑病、指甲银屑病、屈侧型银屑病、滴状银屑病、银屑病关节炎、红皮病性银屑病或反转型银屑病；

过敏反应，包括哺乳动物的过敏性皮炎(包括马过敏性疾病，如叮咬超敏反应)、夏季湿疹、马的甜痒病、肺气肿、炎性气道疾病、复发性气道阻塞、气道高反应性、或慢性阻塞性肺病；

哮喘及其他气道阻塞性疾病，包括慢性或顽固性哮喘、晚期哮喘、支气管炎、支气管哮喘、过敏性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、或粉尘哮喘；以及

移植排斥，包括胰岛移植排斥、骨髓移植排斥、移植物抗宿主病、器官及细胞移植排斥，例如骨髓、软骨、角膜、心脏、椎间盘、胰岛、肾、肢、肝、肺、肌、成肌细胞、神经、胰腺、皮肤、小肠、或气管、或异种移植。

本发明将自仅通过举例方式给出的下文描述得以进一步理解。本发明是针对一类氨基嘧啶基衍生物。特别是，本发明是针对有用于作为JAK之抑制剂的氨基嘧啶基化合物。虽然本发明并不如此受到限制，但本发明的各种面向的理解将通过以下讨论和实例来获得。

术语“经分离”和“呈经分离形式”意指化合物或其盐，对于化合物而言，该术语是指从合成程序例如从反应混合物中分离后的化合物物理状态。因此，对于化合物而言，术语“经分离”和“呈经分离形式”是指从本文所述的或本领域技术人员熟知的一或多种纯化程序(例如，色谱法、再结晶等)获得后的化合物物理状态，有足够的纯度而可通过本文所述或本领域技术人员熟知的标准分析技术示性。例如，本文揭示的纯化技术(例如，LC-MS和LC-MS/MS技术)得到经分离形式的对象化合物。预期此等分离和纯化技术将得到含有以重量计至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的化合物或其盐的产品纯度。

术语“对象”是指哺乳动物，例如人类、家畜或伴侣动物。可互换使用的“患者”、“个体”或“对象”是哺乳动物，更优选是人类。

术语“伴侣动物(companion animal或companion animals)”是指作为宠物或家庭动物饲养的动物。伴侣动物的实例包括狗、猫及啮齿动物(包括仓鼠、豚鼠、沙鼠等)、兔、雪貂和鸟类。

术语“家畜(livestock)”指在农业环境中养殖或饲养以制作产品，诸如食品或纤维，或获得其劳力的动物。在一些实施方案中，家畜适合于由哺乳动物，例如人类消费。家畜动物的实例包括牛、山羊、马、猪、绵羊(包括羊羔)、和兔、以及鸟类，如鸡、鸭及火鸡。

除非本文另有定义，否则与本发明有关的科学和技术术语具有本领域技术人员通常理解的含义。

如果取代基被描述为“独立地选自”一组时，各取代基彼此独立地选择。因此各取代基可与其他一或多个取代基相同或不同。

除非另有指明，否则如本文所用的术语“治疗(treating)”意指逆转(reversing)、减轻(alleviating)、抑制其进展、推迟(delaying)对其应用该术语的紊乱或病症，或一或多种此类紊乱或病症的症状(symptom)的进展、推迟其发作、或预防之。除非另有指明，否则如本文所用的术语“治疗(treatment)”是指治疗的行为，如上文所定义的“治疗(treating)”。

术语“选择性(selective)”，当在本文中用于描述功能上定义(functionally-defined)的受体配体或酶抑制剂时意指与同一家族中的其他受体或酶亚型相比，对该定义的受体或酶亚型具有选择性。例如，选择性TYK2/JAK1抑制剂是比任何其他JAK酶亚型更有效地抑制TYK2/JAK1酶亚型的化合物。在一个实施方案中，此选择性为至少2倍(如使用传统结合测定法(assay)测量)，或在另一个实施方案中，为至少10倍，或在另一个实施方案中，为至少100倍。

术语“治疗有效”是指药剂预防紊乱、或减少紊乱的严重程度的能力。短语“治疗有效”应理解为等同于短语“有效治疗、预防或改善(amelioration)”，并且二者都意图定量药剂的量，其将在各药剂以其本身治疗期间实现缓解(mitigating)癌症、心血管疾病、或疼痛及炎症的严重程度及发生频率的目标。

“药学上可接受的”意指适合用于对象。

附图说明

图1提供了针对结晶((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮获得的粉末X射线衍射图，而下表1列出了以2-theta值表示的衍射峰。

图2提供了在根据下文阐述的公开内容中以Th2刺激的离体人类皮肤测定法中局部给药实施例1的1％调配物和化合物2后CXCL10生物标志物的百分比变化。

具体实施方式

本发明关于新化合物，他们是有用于治疗与JAK(特别是TYK2/JAK1)的不良调节相关的疾病和病症的JAK调节剂(modulator)。本发明进一步提供包含此类JAK酶调节剂的药物组合物以及治疗和/或预防此类疾病和病症的方法。

根据本发明的第一方面，提供式I化合物或其药学上可接受的盐，

其中R

E1.如上所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐。

E2.如E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

E3.如E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

E4.式IA之如E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，

E5.式IB之如E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，

E6.式IC之如E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，

E7.式ID之如E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，

E8.如E1所述的化合物，其选自以下组中：

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((S)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；及，

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮，或，其药学上可接受的盐。

E9.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。

E10.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。

E11.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。

E12.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((S)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。

E13.如E1至E12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其呈经分离形式。

E14.如E1至E13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其呈结晶形式。

E15.一种药物组合物，其包含如E1至E13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载剂。

E16.一种于有治疗需要的对象中治疗或预防对其指示用药TYK2/JAK1抑制剂的疾病和病症的方法，其包括向所述对象给药治疗有效量之如E1至E14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

E17.一种治疗或预防炎性或免疫性病症的方法，其包括向有此需要的对象给药治疗有效量的如E1至E14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

E18.一种治疗或预防疾病或病症的方法，所述疾病或病症选自下列：炎症、自体免疫性疾病、神经炎症、关节炎、类风湿关节炎、脊椎关节病、全身性红斑狼疮、狼疮性肾炎、骨关节炎、痛风性关节炎、疼痛、发热、肺结节病(pulmonary sarcoidosis)、硅肺病、心血管疾病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、血栓形成、充血性心脏衰竭及心脏再灌注损伤、心肌病、中风、局部缺血、再灌注损伤、脑水肿、脑外伤、神经退化、肝病、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肾炎、视网膜炎、视网膜病、黄斑变性、青光眼、糖尿病(1型及2型)、糖尿病性神经病、病毒及细菌感染、肌痛、内毒素休克、中毒性休克综合征、骨质疏松症、多发性硬化、子宫内膜异位、痛经、阴道炎、念珠菌病、癌症、纤维化、肥胖症、肌营养不良症、多肌炎、皮肌炎、自体免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、白癜风、阿尔茨海默病、皮肤潮红、湿疹、银屑病、特应性皮炎、晒伤、蟹足肿(keloid)、肥厚性瘢痕、风湿性疾病、荨麻疹、盘状狼疮、皮肤狼疮、中枢神经系统狼疮、银屑病关节炎、哮喘、过敏性哮喘、I型干扰素病(包括Aicardi-Goutières综合征和其他过度表达I型干扰素的孟德尔疾病)、原发性进行性多发性硬化、复发性缓解型多发性硬化、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、硬皮病、斑秃、疤痕性脱发、痒疹、结节性痒疹、CPUO、苔藓疾病、扁平苔藓、史蒂文斯-约翰逊综合征(Steven’s Johnson’s syndrome)、脊椎病、肌炎、血管炎、天疱疮、狼疮、重性抑郁症、过敏、干眼综合征、移植排斥、癌症、感染性休克、心肺功能障碍、急性呼吸疾病、强直性脊柱炎、恶病质、慢性移植物抗宿主病、急性移植物抗宿主病、乳糜泻(Celiac Sprue)、特发性血小板减少性血栓性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、重症肌无力、Sjogren综合征、上皮增生、软骨炎症、骨退化(bone degradation)、幼年型关节炎、幼年型类风湿性关节炎、少关节型幼年型类风湿性关节炎、多关节型幼年型类风湿性关节炎、全身性发病幼年型类风湿性关节炎、幼年型强直性脊柱炎、幼年型肠病性关节炎、幼年型Reter综合征(juvenile Reter’sSyndrome)、SEA综合征、幼年型皮肌炎(juvenile dermatomyositis)、幼年型银屑病关节炎、幼年型硬皮病、幼年型全身性红斑狼疮、幼年型脉管炎、少关节型类风湿性关节炎、多关节型类风湿性关节炎、全身性发病类风湿性关节炎、肠病性关节炎、反应性关节炎、Reter综合征(Reter’s Syndrome)、肌炎、多发性肌炎、皮肌炎、结节性多动脉炎、Wegener肉芽肿病、动脉炎、风湿性多肌痛、结节病、硬化、原发性胆汁性硬化、硬化性胆管炎、皮炎、Still病、慢性阻塞性肺病、Guillain-Barre病、毒性弥漫性甲状腺肿(Graves’disease)、艾迪生病、雷诺现象(Raynaud’s phenomenon)、银屑病上皮增生、斑块型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、脓疱型银屑病、红皮症银屑病、与致病性淋巴细胞的活动相关或由其引起的免疫紊乱、非传染性葡萄膜炎、Behcet病和伏格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Haradasyndrome)，该方法包括向有此需要的对象给药治疗有效量之如E1至E14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

E19.如E16至E18中任一项所述的方法，其中所述化合物选自以下组：

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((S)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；及，

((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮，或其药学上可接受的盐。

E20.如E16至E18中任一项所述的方法，其中所述化合物为((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；或其药学上可接受的盐，其呈经分离形式。

E21.如E16至E18中任一项所述的方法，其中所述化合物为((S)-2,2-二氟环丙基))((1R,5S)-3-(2-((1-(3-羟基丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮；或其药学上可接受的盐，其呈经分离形式。

E22.如E16至E19中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症为银屑病。

E23.如E16至E19中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症为特应性皮炎。

E24.如E16至E19中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症为手部湿疹。

E25.如E16至E19中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症为瘙痒症(pruritis)。

E26.如E16至E19中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症为皮肤狼疮。

E27.如E16至E19中任一项所述的方法，其中所述化合物是局部给药。

E28.如E1至E14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗对其指示用药TYK2/JAK1抑制剂之紊乱的药物中的用途。

E29.如E1至E14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其是用于治疗对其指示用药TYK2/JAK1抑制剂的紊乱。

E30.一种药物组合，其包含如E1至E14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其呈经分离形式，或其药学上可接受的盐；以及一或多种额外的药理活性化合物。

E40.如E4所述的化合物，其呈结晶形式，该结晶形式具有包含在4.6、9.2、18.5、和19.6±0.2°2θ处的衍射峰的粉末X射线衍射图。

在某些实施方案中，根据所述方法使用的治疗有效量为0.01mg/kg体重/天至100mg/kg体重/天。在某些其他实施方案中，根据所述方法使用的治疗有效量为其中该治疗有效量为0.1mg/kg体重/天至10mg/kg体重/天。

在某些实施方案中，本发明提供一种局部药物调配物，其包含以约0.0001％至约10.0％(w/w)浓度存在的活性剂。在另一实施方案中，活性剂以约0.001％至约3.0％(w/w)的浓度存在。在另一实施方案中，活性剂以约0.01％至约3.0％(w/w)的浓度存在。

具有相同分子式但在性质或他们的原子的键合顺序、或他们的原子的空间排列上不同的本发明化合物被称为“异构体”。彼等原子之空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。取决于手性碳原子周围取代基的构型(configuration)，这些立体异构体为“R”或“S”。本文所用术语“R”和“S”是如同IUPAC 1974Recommendations for Section E,Fundamental Stereochemistry,Pure Appl.Chem.,1976,45:13-30中定义的构型。由(R)、(S)或*指示的本发明对映异构体(enantiomer)实质上不含其它对映异构体。术语“实质上不含”意指对映体过量(enantiomeric excess)大于约90％，优选大于约95％，且更优选大于约99％。在对映体过量的上下文中，术语“约”意指±1.0％。符号*将手性碳原子指定为(R)或(S)立体化学(取决于手性碳原子周围取代基的构型)。本发明涉及具体包括在本发明范围内的各种立体异构体及其混合物。立体异构体包括对映异构体和对映异构体的混合物。本发明化合物的个别立体异构体可从含有不对称或手性中心的市售起始材料合成制备，或者通过制备外消旋混合物接着通过本领域技术人员熟知的拆分(resolution)来制备。这些拆分方法包括但不限于(1)将手性助剂附接到对映异构体的混合物上，通过再结晶或色谱法分离所得的非对映异构体混合物，并从助剂中释放出光学上纯的产物；或(2)在手性色谱柱上直接分离光学对映异构体混合物。未指定(R)、(S)或*的本发明化合物可呈外消旋物存在(亦即，50％(R)和50％(S))、或呈二种对映异构体的混合物存在，其中一种对映异构体过量。例如，对映异构混合物可包括51％的(R)对映异构体和49％的(S)对映异构体，反之亦然，或者除了50％(R)和50％的(S)的外消旋混合物之外的任何(R)和(S)的组合。

所述化合物的范围内包括本文单独描述的化合物的所有异构体(例如，顺式-、反式-、或非对映异构体)以及任何混合物。所有这些形式，包括对映异构体、非对映异构体、顺式、反式、同式、逆式、溶剂化物(包括水合物)、互变异构体以及其混合物均包括在所述化合物中。立体异构混合物，例如非对映异构体的混合物，可以通过适合的分离方法以已知方式分离成他们的相应异构体。非对映异构体混合物例如可通过分级结晶(fractionatedcrystallization)、色谱法、溶剂分配、及类似的程序分离成他们的个别非对映异构体。此分离可在起始化合物中之一者的层级上或在式I、IA、IB、IC或ID化合物本身发生。对映异构体可通过形成非对映异构体盐，例如通过与对映异构体纯的手性酸形成盐，或通过色谱法装置，例如通过HPLC，使用层析底物与手性配体来分离。本发明包括所有药学上可接受的同位素标记式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐，其中一个或多个原子被具有相同原子数但原子质量或质量数不同于自然中占优势的原子质量或质量数的原子代替。

适合含括在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，例如

某些同位素标记的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐，例如并入放射性同位素的那些，有用于药物和/或底物组织分布研究中。放射性同位素氚(亦即，

用较重的同位素诸如氘(亦即，

在用于治疗哺乳动物紊乱的治疗用途中，本发明化合物或其药物组合物可以口服、非消化道、局部、直肠、透黏膜、或肠内给药。非消化道给药包括间接注射以产生全身效果或直接注射到生病区域。局部给药包括治疗易通过局部施用触及的皮肤或器官，例如眼睛或耳朵。其亦包括经皮递送以产生全身效果。直肠给药包括栓剂的形式。优选的给药途径是口服和非消化道。

式I、IA、IB、IC或ID化合物之药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己氨基磺酸盐(cyclamate)、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和羟萘甲酸盐(xinofoate)。

合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星盐(benzathine)、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐。

亦可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐及半钙盐。对于合适的盐的综述，参见Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use by Stahl andWermuth(Wiley-VCH,2002)。

式I、IA、IB、IC或ID化合物之药学上可接受的盐可分别通过三种方法中之一者或多者来制备：(i)使式I、IA、IB、IC或ID化合物与所欲的酸反应；(ii)从式I、IA、IB、IC或ID化合物的合适的前体中移除酸不稳定保护基团或碱不稳定保护基团，或使合适的环状前体(例如内酯或内酰胺)开环；或(iii)与适当的酸或碱反应或通过合适的离子交换柱装置将式I、IA、IB、IC或ID化合物的一种盐转化为另一种。所有三种反应典型地在溶液中进行。所得盐可沉淀出来，然后通过过滤收集或可通过蒸发溶剂来回收。所得盐中电离的程度可能会从完全电离到几乎不电离变化。

本发明亦包括下列实施方案：

如本文所述实施方案中之任一者所定义的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药物；

如本文所述实施方案中之任一者所定义的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防选自下列者：炎症、自体免疫性疾病、神经炎症、关节炎、类风湿关节炎、脊椎关节病、全身性红斑狼疮、狼疮性肾炎、骨关节炎、痛风性关节炎、疼痛、发热、肺结节病、硅肺病、心血管疾病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、血栓形成、充血性心脏衰竭及心脏再灌注损伤、心肌病、中风、局部缺血、再灌注损伤、脑水肿、脑外伤、神经退化、肝病、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肾炎、视网膜炎、视网膜病、黄斑变性、青光眼、糖尿病(1型及2型)、糖尿病性神经病、病毒及细菌感染、肌痛、内毒素休克、中毒性休克综合征、骨质疏松症、多发性硬化、子宫内膜异位、痛经、阴道炎、念珠菌病、癌症、纤维化、肥胖症、肌营养不良症、多肌炎、皮肌炎、自体免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、白癜风、阿尔茨海默病、皮肤潮红、湿疹、银屑病、特应性皮炎、晒伤、蟹足肿、肥厚性瘢痕、风湿性疾病、荨麻疹、盘状狼疮、皮肤狼疮、中枢神经系统狼疮、银屑病关节炎、哮喘、过敏性哮喘、I型干扰素病(包括Aicardi-Goutières综合征和其他过度表达I型干扰素的孟德尔疾病)、原发性进行性多发性硬化、复发性缓解型多发性硬化、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、硬皮病、斑秃、疤痕性脱发、痒疹、结节性痒疹、CPUO、苔藓疾病、扁平苔藓、史蒂文斯-约翰逊综合征、脊椎病、肌炎、血管炎、天疱疮、狼疮、重性抑郁症、过敏、干眼综合征、移植排斥、癌症、感染性休克、心肺功能障碍、急性呼吸疾病、强直性脊柱炎、恶病质、慢性移植物抗宿主病、急性移植物抗宿主病、乳糜泻、特发性血小板减少性血栓性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、重症肌无力、Sjogren综合征、上皮增生、软骨炎症、骨退化、幼年型关节炎、幼年型类风湿性关节炎、少关节型幼年型类风湿性关节炎、多关节型幼年型类风湿性关节炎、全身性发病幼年型类风湿性关节炎、幼年型强直性脊柱炎、幼年型肠病性关节炎、幼年型Reter综合征、SEA综合征、幼年型皮肌炎、幼年型银屑病关节炎、幼年型硬皮病、幼年型全身性红斑狼疮、幼年型脉管炎、少关节型类风湿性关节炎、多关节型类风湿性关节炎、全身性发病类风湿性关节炎、肠病性关节炎、反应性关节炎、Reter综合征、肌炎、多发性肌炎、皮肌炎、结节性多动脉炎、Wegener肉芽肿病、动脉炎、风湿性多肌痛、结节病、硬化、原发性胆汁性硬化、硬化性胆管炎、皮炎、Still病、慢性阻塞性肺病、Guillain-Barre病、毒性弥漫性甲状腺肿、艾迪生病、雷诺现象、银屑病上皮增生、斑块型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、脓疱型银屑病、红皮症银屑病、与致病性淋巴细胞的活动相关或由其引起的免疫紊乱、非传染性葡萄膜炎、Behcet病和伏格特-小柳-原田综合征；

于有治疗需要的对象中治疗对其指示用药JAK抑制剂的疾病的方法，其包括向所述对象给药治疗有效量的如本文所述实施方案中之任一者所定义的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐；

如本文所述实施方案中之任一者所定义的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗对其指示用药JAK抑制剂的疾病或病症的药物中的用途；

如本文所述实施方案中之任一者所定义的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗对其指示用药JAK抑制剂的疾病或病症；

用于治疗对其指示用药JAK抑制剂的疾病或病症的药物组合物，其包含如本文所述实施方案中之任一者所定义的式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐。

本发明亦提供如上所定义之用途、方法或组合物中之任一者，其中式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐是与另一种药理活性化合物，特别是与下面列出的功能上定义的类或具体化合物中之一者组合使用。这些药剂可以根据本领域技术人员已知的标准制药实务，作为相同或分开剂型的一部分，经由相同或不同的给药途径，并以相同或不同的给药时间表给药。

适合用于与式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐之组合疗法中药剂：柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、美沙拉嗪(mesalazine)、泼尼松(prednisone)、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、贝利木单抗(belimumab)、塞妥珠单抗(becertolizumab)、那他珠单抗(natalizumab)、维多珠单抗(vedolizumab)、氢化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、环孢菌素(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus)、非索非那定(fexofenadine)、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤(methotrexate)、熊脱氧胆酸(ursodeoxycholic acid)、奥贝胆酸(obeticholic acid)、抗组织胺、利福平(rifampin)、泼尼松(prednisone)、甲氨蝶呤(methotrexate)、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、羟氯喹(hydroxychloroquine)、吗替(mofetil)、霉酚酸钠(sodium mycophenolate)、他克莫司(tacrolimus)、来氟米特(leflunomide)、氯奎(chloroquine)和奎纳克林(quinacrine)、沙利度胺(thalidomide)、利妥昔单抗(rituxan)、非甾体抗炎药(NSAID)、甲强龙(solumedrol)、甲基泼尼松龙(depomedrol)和地塞米松(dexamethasone)。

其他适合用于与式I、IA、IB、IC或ID化合物或其药学上可接受的盐之组合疗法中的药剂包括：5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)拮抗剂；白三烯拮抗剂(LTRA)，如LTB

据此，本发明提供于对象(诸如人类或非人类哺乳动物)中治疗或预防与JAK相关联的疾病、病症或紊乱的方法，其包括向有此需要的对象给药有效量的一或多种本文所述的化合物。其中选择性靶向JAK途径或调节JAK激酶被认为是治疗上有用的病症尤其包括关节炎、哮喘、自体免疫性疾病、癌症或肿瘤、糖尿病、某些眼疾病、紊乱或病症、炎症、肠炎症、过敏或病症、神经退化疾病、银屑病、和移植排斥。

实施本发明的一种方式是以前药的形式给药式I、IA、IB、IC或ID化合物。因此，本身可能具有很少或没有药理活性的式I、IA、IB、IC或ID化合物的某些衍生物在给药到身体内或身体上时可以转化为具有所希望之活性的式I、IA、IB、IC或ID化合物，例如通过水解断裂(hydrolytic cleavage)，特别是通过酯酶或肽酶之酶促进的水解断裂。此等衍生物被称为“前药”。对于前药使用的进一步信息可在‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems’,Vol.14,ACS Symposium Series(T.Higuchi and W.Stella)和‘Bioreversible Carriersin Drug Design’,Pergamon Press,1987(Ed.E.B.Roche,American PharmaceuticalAssociation)中找到。也可以参考Nature Reviews/Drug Discovery,2008,7,355，以及Current Opinion in Drug Discovery and Development,2007,10,550。

根据本发明的前药可以例如通过利用本领域技术人员已知的作为“前部分(pro-moieties)”的某些部分，如描述在例如H.Bundgaard的‘Design of Prodrugs’(Elsevier,1985)中者，来替代式I、IA、IB、IC或ID化合物中存在的适当官能性而制备。

因此，根据本发明的前药是：(a)式I、IA、IB、IC或ID化合物中羟基的酯或酰胺衍生物；(b)式I、IA、IB、IC或ID化合物中羟基的酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、磷酸酯或醚衍生物；(c)式I、IA、IB、IC或ID化合物形式中氨基的酰胺、亚胺、氨基甲酸酯或胺衍生物；(d)式I、IA、IB、IC或ID化合物中羰基的肟或亚胺衍生物。

一些根据本发明的前药的具体实例包括：

(i)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有羟基官能性

(ii)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有醇官能性(-OH)、其酯，诸如其中式I、IA、IB、IC或ID化合物的醇官能性的氢被-CO(C

(iii)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有醇官能性(-OH)、其酯，诸如其中式I、IA、IB、IC或ID化合物的醇官能性的氢被(C

(iv)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有醇官能性(-OH)、其磷酸酯，诸如其中式I、IA、IB、IC或ID化合物的醇官能性的氢被-P(＝O)(OH)

(v)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有二级氨基官能性(-NHR，其中R≠H)、其酰胺，例如其中式I、IA、IB、IC或ID化合物的氨基官能性的一个氢原子被或二个氢原子都被(视情况而定)(C

(vi)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有二级氨基官能性(-NH

对式I、IA、IB、IC或ID化合物的提及被认为包括化合物本身及其前药。本发明包括此等式I、IA、IB、IC或ID化合物以及此等化合物的药学上可接受的盐。

也包括在本发明范围内的是式I、IA、IB、IC或ID化合物的活性代谢物，亦即给药药物后在体内通常通过氧化或脱烷基化作用形成的化合物。一些根据本发明的代谢物的实例包括：

(i)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有亚甲基、其羟基亚甲基衍生物(-CH

(ii)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有三级氨基、其二级氨基衍生物(-NRR’->-NHR或-NHR’)；和

(iii)其中式I、IA、IB、IC或ID化合物含有二级氨基、其伯氨基衍生物(-NHR->-NH

药物组合物或调配物

在另一实施方案中，本发明提供药物组合物或调配物，其包含治疗有效量的本发明化合物和药学上可接受的稀释剂或载剂。本发明的药物组合物或调配物可向人类和其他哺乳动物局部、口服、非消化道、脑池内、阴道内、腹膜内、口腔内、作为口喷雾剂、作为鼻喷雾剂、作为栓或以脂质体的形式给药。

典型的药物组合物或调配物是通过将本发明的化合物与载剂或稀释剂混合来制备的。合适的载剂和稀释剂包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可溶胀聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等的材料。所使用的具体载剂或稀释剂将取决于本发明化合物所应用的装置和目的。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400、PEG300)等及其混合物。调配物也可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂和其他已知的添加剂以提供药物(亦即，本发明的化合物或其药物组合物)的精美呈现或有助于药学上产品的制造(亦即，用于制备药物)。

可以使用传统溶解和混合程序来制备调配物。例如，将原料药(bulk drugsubstance)(亦即，本发明化合物或化合物的经稳定形式(例如与环糊精衍生物或其他已知复合剂的复合物))在一种或多种上面描述的载剂的存在下溶解在合适溶剂中。水溶性差的化合物的溶解率可通过使用喷雾干燥的分散体来提高，例如Takeuchi,H.等人在“Enhancement of the dissolution rate of a poorly water-soluble drug(tolbutamide)by a spray-drying solvent deposition method and disintegrants,”J.Pharm.Pharmacol.,39,769-773(1987)；和EP0901786B1(US2002/009494)中所述的那些，这些文献通过引用并入本文。本发明的化合物典型地调配成药物剂型以提供易于控制的药物剂量并为患者提供优雅且易于操作的产品。

用于施用的药物组合物或调配物可用各种方式包装，这取决于用于给药药物的方法。通常，用于分配的物品包括容器，容器中存放有适当形式的药物调配物。合适的容器包括诸如瓶子(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等材料。容器也可以包括防破坏总成，以防止不小心触及包装的内容物。另外，容器上还贴有描述容器内容物的标签。标签也可包括适当的警告。

术语“药学上可接受的载剂”是指提供有效量如本文定义的活性剂的适当递送、不干扰活性剂的生物活性有效性的载剂介质，以及对宿主或患者足够无毒的载剂介质。代表性载剂包括水、油、植物油和矿物油、乳膏基质、洗剂基质(lotion base)、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增稠剂、渗透增强剂等。有关载剂的额外信息可以在以下文献中找到：Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，其通过引用并入本文。可用作药学上可接受的载剂的材料的进一步实例是糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末化黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；载剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝等；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格液(Ringer's solution)；乙醇和磷酸盐缓冲溶液，以及其他无毒兼容的润滑剂，诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以根据调配师的判断存在于组合物中。

术语“药学上可接受的局部载剂”是指适合于局部应用的如上文所述药学上可接受的载剂。能够悬浮或溶解活性剂并且当应用于皮肤、指甲、毛发、爪或蹄时具有无毒和非炎性性质的不活性液体或乳膏载剂是药学上可接受的局部载剂的实例。此术语特别意图涵盖也批准用于局部化妆品的载剂材料。

术语“局部给药”是指将药剂应用于皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的外表面，而使得药剂穿过皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的外表面并且进入下方组织。局部给药包括将组合物应用于完整无伤的皮肤、指甲、毛发、爪或蹄，或应用于皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的破损、露出或开放的伤口。药剂的局部给药可得到药剂向皮肤和周围组织的有限分布，或者当药剂通过血流从治疗区域移除时，可得到药剂的全身分布。

本发明化合物的局部或经皮给药的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性成分是在无菌条件下与药学上可接受的载剂和任何所需防腐剂或缓冲剂(当可能需要时)混合。挥发性化合物可能需要与特殊调配用剂或与特殊包装材料混合以确保正确的剂量递送。另外，人类皮肤渗透性差的本发明化合物可能需要一或多种渗透性增强剂，而通过皮肤快速吸收的化合物可能需要具有吸收延迟剂或屏障剂的调配物。

除了含有本发明的活性化合物外，用于局部给药的软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、粉末和溶液还可含有药学上可接受的载剂，例如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、聚硅氧、膨润土、硅酸、滑石、氧化锌、防腐剂、抗氧化剂、香料、乳化剂、染料、惰性填料、抗刺激剂、增黏剂、香料、不透明剂、抗氧化剂、胶凝剂、稳定剂、表面活性剂、润肤剂、着色剂、防腐剂、缓冲剂、渗透增强剂或其混合物。局部载剂不应干扰活性剂的生物活性有效性，并且不应对上皮细胞或它们的功能有害。

术语“渗透性增强剂”或“渗透增强剂”是关于增加皮肤、指甲、毛发、爪或蹄对药物的渗透性，以兹增加药物渗透通过皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的速率。例如，可以通过使用扩散单元设备测量药物扩散通过动物或人类的皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的速率来观察通过使用此类增强剂致效的增强渗透。扩散单元系由Merritt et al.Diffusion Apparatus forSkin Penetration,J of Controlled Release,1(1984)pp.161-162描述。术语“渗透性增强剂”或“渗透增强剂”意图使药剂或药剂的混合物，单独或组合地作用来增加皮肤、指甲、毛发、爪或蹄对药物的渗透性。

术语“经皮递送”是指因组合物的局部给药或其他应用所致药剂扩散跨越皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的屏障。角质层充当屏障，且很少有药剂够渗透完整无伤的皮肤。相反地，表皮和真皮对许多溶质是可渗透的，因此药物的吸收更容易通过磨损或以其他方式剥离角质层而暴露表皮的皮肤、指甲、毛发、爪或蹄发生。经皮递送包括注射或其他递送通过皮肤、指甲、毛发、爪或蹄或黏膜的任何部分的以及通过剩余部分的吸收或渗透。通过完整无伤的皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的吸收可以通过在应用于皮肤、指甲、毛发、爪或蹄之前将活性剂放在合适的药学上可接受的媒剂中来增强。被动局部给药可由将活性剂与润肤剂或渗透增强剂组合直接应用于治疗部位所组成。如本文所用，经皮递送意图包括通过渗透或穿过体被，亦即皮肤、指甲、毛发、爪或蹄的递送。

除了含有本发明的化合物之外，粉末和喷雾剂还可以含有乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可以额外含有常用的推进剂，例如氯氟烃。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒。在此等固体剂型中，活性化合物与至少一种诸如柠檬酸钠或磷酸钙的惰性药学上可接受的载剂和/或a)填料或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和水杨酸；b)黏合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶解阻滞剂，如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)湿润剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，如高岭土和膨润土；i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠、及其混合物混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。

类似类型的固体组合物也可用作使用乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充明胶胶囊中的填料。

片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可以制备有包衣和外壳，例如肠溶包衣和药学制剂领域熟知的其他包衣。他们可视需要地含有不透明剂并且也可以是仅释放或优选在肠道的某部分以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的例子包括聚合物质和蜡。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除含有活性化合物外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯、及其混合物。

除了惰性稀释剂外，口服组合物也可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化和悬浮剂、甜味、调味、和芳香剂。

如本文所用的术语“非消化道”是指给药模式，其包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下、关节内注射和输注。用于非消化道注射的本发明药物组合物包含药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液以及用于重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载剂、稀释剂、溶剂或媒剂的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其合适混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射有机酯，诸如油酸乙酯。例如，可通过使用诸如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过保持所需的粒度、以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。

通过在生物可降解的聚合物(诸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成药物的微胶囊化基质来制作可注射的贮库形式。取决于药物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)，贮库可注射调配物也可通过将药物裹在与身体组织兼容的脂质体或微乳液中来制备。

可注射调配物可被灭菌，例如，通过过滤通过细菌截留过滤器或在无菌固体组合物形式中通过并入灭菌剂，该无菌固体组合物可以在刚要使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。

可使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可为在无毒、非消化道可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，诸如在1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受媒剂和溶剂中尤其是水、林格氏液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油传统上用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，诸如油酸的脂肪酸是用于注射剂的制备。

用于直肠或阴道给药的药物组合物、或调配物优选为栓剂，其可以通过将本发明的化合物与合适的无刺激性载剂诸如可可脂、聚乙二醇或在环境温度下为固体但在体温下为液体的栓剂蜡混合来制备，并因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。

本发明的化合物也可呈脂质体的形式给药。脂质体通常衍生自磷脂或其他脂质物质并通过分散在水性介质中的单层或多层水合液晶形成。可使用能够形成脂质体的任何无毒、生理上可接受且可代谢的脂质。除了含有本发明的化合物之外，呈脂质体形式的本发明组合物还可含有稳定剂、防腐剂等。优选的脂质是单独或一起使用的天然和合成磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)。形成脂质体的方法是本技术领域已知的。例如参见：Prescott,Ed.,Methods in Cell Biology,Volume XIV,Academic Press,New York,N.Y.(1976),p 33etseq。

本发明的药物组合物、或调配物也可含有佐剂，诸如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等来确保预防微生物的作用。包括诸如糖、氯化钠等的等渗剂也可能是希望的。延长可注射药物形式的吸收可通过使用诸如单硬脂酸铝和明胶的延迟吸收剂来实现。

本发明的药物组合物或调配物可为悬浮液。除了含有活性化合物外，悬浮液还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂基醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄蓍胶、及其混合物。

药物组合物也包括本发明化合物的溶剂化物和水合物。术语“溶剂化物”是指由式I、IA、IB、IC或ID表示的化合物，包括其药学上可接受的盐，与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此等溶剂分子是医药领域常用的那些，并且已知对接受者无害，例如水、乙醇、乙二醇、(S)-丙二醇、(R)-丙二醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子为水的复合物。溶剂化物和/或水合物优选呈结晶形式存在。其他溶剂可用作制备更合乎所希望的溶剂化物的中间溶剂化物。中间溶剂包括但不限于甲醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、1,4-丁炔二醇等。

本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可有变化，以获得对特定患者、组合物、和给药模式有效达成所欲治疗反应的活性化合物的量。所选剂量水平将取决于特定化合物的活性、给药途径、所治疗病症的严重程度、以及所治疗患者的病症和既往病史。然而，以低于达成所希望的治疗效果所需的水平开始化合物的剂量并逐渐增加剂量直至达成所希望的效果是在本技术领域的通常知识范围内。

向人类或较低等动物给药本发明化合物的总每日剂量可在范围约0.000001至约10mg/kg/天。为了口服给药，更优选的剂量可以在约0.001至约1mg/kg/天的范围内。对于局部给药，更优选的剂量可以在0.00001mg/kg/天至约5mg/kg/天的范围内。如果希望，为了给药，有效每日剂量可以分成多个剂量，例如每天二到四个单独的剂量。

合成方法

以下反应路线及书面的描述提供关于制备本发明化合物的一般细节。本发明的化合物可通过本技术领域中已知的用于制备类似结构化合物的任何方法来制备。具体而言，本发明化合物可以通过参考以下反应路线中描述的方法，或通过实施例中描述的具体方法，或通过上述任一者的类似方法来制备。

本领域技术人员将理解，阐述在以下反应路线中的实验条件是说明用于实现所示转变之合适的条件，并且可能有必要或所希望的是改变用于制备式I、IA、IB、IC或ID化合物的精确条件。

另外，本领域技术人员将理解，可能有必要或所希望的是在本发明化合物的合成中的任何阶段保护一个或多个敏感基团，以便预防非所希望的副反应。具体而言，可能有必要或所希望的是保护氨基或羧酸基团。在制备本发明化合物中使用的保护基团是可以常规方式使用。参见，例如，在Theodora W.Greene及Peter G.M.Wuts之‘Greene’s ProtectiveGroups in Organic Synthesis’的3版(John Wiley and Sons,1999)，特别是第7章(“Protection for the Amino Group”)及第5章(“Protection for the CarboxylGroup”)中所述的那些，通过引用并入本文中，其亦描述脱除这些基团的方法。

所有式I的衍生物可以通过在下面给出的一般方法中描述的方法或通过其常规变型来制备。本发明也涵盖用于制备式I、IA、IB、IC或ID衍生物的这些方法中之任何一者或多者，除了涵盖其中使用的任何新颖中间体之外。本领域技术人员将理解，下列反应可在用热或在微波照射下加热。应当进一步理解，可能有必要或所希望的是以反应路线中所描述的不同顺序进行变换，或者修改所述变换中之一者或多者，以提供所希望的本发明化合物。

本领域技术人员亦认知到本发明的一些化合物是手性的，并因此可制备呈对映异构体的外消旋或内消旋混合物。有几种方法可得并且是本领域技术人员熟知的用于分离对映异构体的方法。优选分离对映异构体的常规方法是使用手性固定相的超临界流体色谱法。

如反应路线A所示，式I、IA、IB、IC或ID化合物可从化合物A-1、A-2和C-3(A＝正丙基、1-羟基丙基或2-羟基丙基、或其受保护形式)制备。式A-1、A-2和C-3化合物是市售或可由本领域技术人员根据文献或本文所描述的制法合成。为此，PG是保护基且典型地是叔丁氧基羰基。式A-3化合物可根据程序步骤(i)，而从式A-1和A-2化合物之在有机碱的存在下的芳族取代反应制备。优选的条件包括：三乙胺，在甲醇中，在0℃至室温下。式A-5化合物可根据工艺步骤(ii)和(iii)，而从式A-3化合物与式C-3化合物在Buchwald-Hartwig交叉偶合条件或由酸及升高温度所介导下的亲核取代反应，接着由无机或有机酸所介导的去保护反应制备。典型的Buchwald-Hartwig条件包括：合适的钯催化剂与合适的螯合膦配体与无机碱，在合适的有机溶剂中，在用热或在微波照射下之升高温度下。优选的条件包括：a)醋酸钯(II)及2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯或Xantphos

反应路线A

替代地，如反应路线B所示，式I、IA、IB、IC或ID化合物可从化合物A-3和C-3制备。如反应路线A所示制备了式A-3化合物。式C-3化合物是市售或可由本领域技术人员根据文献或本文所描述的制法合成。式B-1化合物可根据工艺步骤(i)，而从式A-3化合物之由无机或有机酸(在合适的有机溶剂中)所介导的去保护反应制备。优选的条件包括：盐酸或TFA，在二噁烷或DCM中。式B-2化合物可根据工艺步骤(ii)，而从式B-1和BC(O)X的化合物的酰胺键形成反应(如反应路线A所示)制备。式A-6化合物可根据工艺步骤(iii)，而从式B-2化合物与式C-3化合物在Buchwald-Hartwig交叉偶合条件或由酸及高温所介导下的亲核取代反应(如反应路线A所示)制备。

反应路线B

如反应路线C所示，反应路线A和反应路线B所用式C-3化合物可从式C-1化合物制备。式C-1化合物是市售或可由本领域技术人员根据文献或本文所描述的制法合成。式C-2化合物可根据工艺步骤(i)，而从式C-1化合物与式AX(其中X为Cl、Br或I)之适当经取代的卤烷在无机或有机碱和诸如DMF的溶剂存在下的烷基化反应，或式C-1化合物向环氧化物在无机或有机碱的存在下的加成反应制备。式C-3化合物可根据步骤(ii)，而从式C-2化合物之典型在诸如钯或镍的金属催化剂、在1-50大气压的压力下的氢气、和诸如甲醇的质子溶剂存在下进行的还原制备。

反应路线C

制备和实施例

以下非限制性制备和实施例说明了本发明化合物和盐的制备。在下面清楚列出的实施例和制备中，以及在上述反应路线中，可能将提及以下缩写、定义和分析方法。也可以使用本技术领域常见的其他缩写。本发明的化合物使用Chemdraw Professional

1

质谱是使用电子碰撞电离(EI)、电喷雾电离(ESI)或大气压化学电离(APCI)记录。观察到的离子是以MS m/z报告，并且可能是化合物的正离子[M]

其中TLC、色谱法或HPLC已用于纯化化合物者，本领域技术人员可选择任何适当的溶剂或溶剂组合来纯化所希望的化合物。除非另有说明，否则色谱分离(排除HPLC)均使用硅胶吸附剂进行。

除非另有说明，否则所有反应均在氮气或氩气气氛下使用连续搅拌进行。在一些情况下，在反应起始之前用氮气或氩气吹扫反应。在这些情况下，氮气或氩气鼓泡通过混合物的液相大约指定的时间。使用的溶剂是商业无水等级。所有起始材料均为市售产品。在某些情况下，起始材料是根据报导的文献方法制备的。对于本领域技术人员将清楚明了的是，本文所用的“浓缩”一词通常是指在减压下蒸发溶剂的实践，其典型是通过使用旋转蒸发器来完成。

本文中使用以下缩写：

ACN：乙腈；

ATM：大气压

BrettPhos

c：浓度

CDI：1,1’-羰基二咪唑；

Cs

DCM：二氯甲烷

DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；

DMA：N,N-二甲基乙酰胺；

DMF：N,N-二甲基甲酰胺；

ESI：电喷雾电离；

EtOAc：乙酸乙酯；

HATU：N-[(二甲基氨基)-1H-1,2,3-三唑并-[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸N-氧化物；

HCl：盐酸；

HPLC：高压液相色谱法；

HRMS：高分辨率质谱；

H

kg：千克或公斤

KOH：氢氧化钾；

MeOH：甲醇；

MIBK：甲基异丁基酮；

mg：毫克；

mL：毫升；

mmol：毫摩尔；

Mpa：兆帕；

MTBE：甲基叔丁基醚；

NMT：不超过；

Pd/C：钯碳；

TBAB：溴化四丁基铵；

TFA：三氟乙酸；

THF：四氢呋喃；

TLC：薄层色谱法；

T3P：2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物；

Xantphos：4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃。

制备1：(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸2,2’,2”-氮基三(乙-1-醇)盐。

向100mL反应器中添加ACN(50.0mL)和三乙醇胺(12.2g，1.0当量)。将溶液加热至45℃，并以100分钟逐滴添加如US专利9,663,526的制备68所述般制备的(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(10.1g，1.0当量)在MTBE(50.0mL，～20％w/w)中的预混合溶液。添加后，将反应在45℃下保持30分钟，然后以0.25℃/min的速率冷却至20℃。将混合物造粒30分钟，然后过滤并用MTBE(40.0mL)清洗，并在50℃真空下干燥。

制备2：2,2-二氟环丙烷-1-(S)-甲酸(R)-N-苄基-1-苯基乙烷-1-铵盐

向250mL容器中添加MTBE(134mL)、(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸2,2’,2”-氮基三(乙-1-醇)盐(20.0g，1.0当量)、和硫酸(4.3mL，1.1当量)在水(86.0mL)中的预混溶液。搅拌混合物直至所有固体溶解，然后允许各层沉降。层分离，且用MTBE(58mL)反萃取底层(水性)。合并的有机层经由共沸蒸馏干燥，以达到在MTBE中～15％(w/w)的(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸的最终浓度。以～1小时向该溶液中逐滴添加手性胺(R)-(+)-N-苄基-α-甲基苄基胺(13.0g，0.85当量)。添加～25％的该胺后，反应用先前纯化的(R)-N-苄基-1-苯基乙烷-1-胺(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(50mg，0.002当量)种晶。添加该胺后，允许浆液造粒，然后过滤，并用已预冷至10℃的MTBE(12.0mL)清洗，且固体在50℃真空下干燥。使粗制固体(10.57g)回到同一容器中并添加ACN(35.0mL)。将浆液加热至80℃以完全溶解固体。以0.2℃/min的速率将溶液冷却至22℃并允许其造粒。通过过滤收集产物并用ACN(13.0mL)清洗，然后在50℃真空下干燥。

实施例1：((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(IA)

步骤1A.4-硝基-1-丙基-1H-吡唑。此步骤以二个平行批次进行。将碳酸钾(1.38g，9.99mmol)一次性添加到4-硝基-1H-吡唑(360g，3.18mol)在ACN(3L)中的25℃搅拌混合物中，并将混合物加热至约50-60℃。以约20min的时间期将1-碘丙烷(595.3g，3.5mol)添加到混合物中。将所得反应混合物在50-60℃下搅拌约2小时。将反应混合物冷却至约25℃。合并这二批次的反应混合物，用水(3L)稀释并在减压下浓缩以移除大部分ACN。所得水性层用EtOAc(4L，3x2L)萃取。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液而得到980.0g(99％)油状的标题化合物。

步骤1B.1-丙基-1H-吡唑-4-胺盐酸盐。向4-硝基-1-丙基-1H-吡唑(1.04kg，9.93mol)在MeOH(5L)中的混合物添加Pd/C(10％Pd，71.06g，66.77mmol)。将混合物脱气并用氩气(3x)重新填充。将混合物回温至35℃并在氢气气氛下在2Mpa左右搅拌约48小时。必要时重新填充氢气以将压力保持在2Mpa左右。过滤反应混合物。将滤液浓缩成溶液(2.5kg)。向在5-10℃左右之HCl的MeOH(5.99mol，2.35L)溶液分次添加该溶液并搅拌约1小时。在减压下浓缩混合物而得到浆液(～1L)。添加EtOAc(500mL)，并将混合物搅拌约5min。过滤混合物，且用EtOAc(4x500mL)清洗滤饼。在减压下干燥滤饼而得到550g呈固体的标题化合物。MS m/z 126.1[M+H]

步骤1C.(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁基酯。标题化合物购自STA Pharmaceutical Hong Kong Limited。

步骤1D.4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺。向进料有50mL异丙醇和375mL水的1L OptiMax

步骤1E.(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸。在2.0L OptiMax

步骤1F.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。向进料有THF(595mL)的1.0LOptiMax反应容器中添加(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(43.7g，1.25当量，331mmol)。将溶液冷却至0℃，之后以小量分次添加呈固体的CDI(59.7g，1.35当量，357mmol)。在0℃下搅拌约90分钟后，以5分钟经由加料漏斗添加水(17.0g，17.0mL，944mmol)。混合物在0℃下搅拌约20分钟。向反应混合物中添加呈固体的2-羟基吡啶N-氧化物(1.47g，0.05当量，13.2mmol)和4-((1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-N-(1-丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(85.0g，264mmol)。反应混合物在0℃下搅拌约12小时。反应混合物用600mL的MIBK稀释并过滤通过Celite

粉末X射线衍射分析

使用配备有铜辐射源的Bruker AXS D8 Endeavor衍射仪进行粉末X射线衍射分析。发散狭缝设在15mm连续照明。经衍射辐射由PSD-Lynx Eye检测器检测，利用检测器PSD开口设在4.129度。X射线管电压和安培数分别设成40kV和40mA。使用0.00997度的步进大小和1.0秒的步进时间，在3.0至40.0度2-Theta的Cu波长下在Theta-Theta测角仪中收集数据。防散射屏设成1.5mm的固定距离。样品在收集期间以15次/min的速度旋转。通过将他们放在硅低背景样品架中并在收集期间旋转来准备样品。使用Bruker DIFFRAC

表1：化合物1A的PXRD峰列表

/>

图1是结晶((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-丙基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮的粉末X射线衍射分析。基于表1，结晶化合物IA的特征在于具有在4.6、9.2、18.5、和19.6±0.2度2θ的特征衍射峰的粉末X射线衍射图。

实施例2：((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(IB)

步骤2A.(R)-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇。向进料有(R)-(+)-环氧丙烷(12mL)的烧瓶中添加4-硝基-1H-吡唑(4.0g，40mmol)，随后添加Cs

步骤2B.(R)-1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇。向(R)-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(5.3g，31.0mmol)的MeOH(60mL)溶液中添加Pd/C(10％Pd，659mg，0.02当量)。所得悬浮液在1atm的氢气压力和室温下搅拌约16小时。过滤反应混合物，且在减压下浓缩滤液而得到4.3g(98％)深色油状的标题化合物。MS m/z 142.1[M+H]

步骤2C.(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。向(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(6.0g，28.3mmol)在MeOH(121mL)中的冰溶液添加三乙胺(7.9ml，56.5mmol)。约10分钟后，向混合物中以约二均等份添加2,4-二氯嘧啶(4.6g，31.1mmol)。所得混合物在15℃左右搅拌约5小时。在减压下浓缩混合物而得到浆液。将浆液溶解在二氯甲烷(150mL)中，用水(2x50mL)清洗，用硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法纯化，用0-50％在石油醚中的EtOAc洗提，而得到8.3g(90％)呈白色固体的标题化合物。MS m/z 325.1[M+H]

步骤2D.(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷。向(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(10.3g，31.7mmol)的MeOH(160mL)溶液添加HCl的MeOH(60mL，4.0M)溶液。添加后，混合物在15℃左右搅拌约3小时。在减压下浓缩反应。向所得固体中添加水(40mL)并在冰浴中冷却。向搅拌的反应混合物中缓慢添加氢氧化钠水溶液，直至达到10左右的pH。所得浆液用二氯甲烷(2x100mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液而得到6.6g(87％)呈白色固体的标题化合物。MS m/z 225.0[M+H]

步骤2E.(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮。向T3P(8.86g，13.9mmol,50％的EtOAc溶液)中缓慢添加(1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(1.56g，6.96mmol)、如制备1中所述般制备的(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸2,2’,2”-氮基三(乙-1-醇)盐(1.9g，6.96mmol)和三乙胺(4.9mL，34.8mmol)在ACN(4mL)中的冰浴冷却溶液。所得反应混合物在冰浴中搅拌约2小时。向冰浴冷却混合物中添加NaHCO

步骤2F.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((R)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。向((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮(500mg，1.52mmol)的异丙醇(19.6ml)溶液中添加(R)-1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(258mg，1.83mmol，1.2当量)，随后添加浓盐酸(0.05mL)。所得溶液在76℃下搅拌约16小时。在减压下浓缩反应混合物。将残余物溶于水(20mL)中，在冰水浴中冷却，并通过添加氢氧化铵中和至pH>7。溶液用二氯甲烷(2x30mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液。所得粗制产物通过制备型HPLC(Welch Xtimate

实施例3：((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((S)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(IC)

步骤3A.(S)-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇。向进料有(S)-(-)-环氧丙烷(6mL)的烧瓶中添加4-硝基-1H-吡唑(2.0g，20mmol)，随后添加Cs

步骤3B.(S)-1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇。向(S)-1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(2.0g，11.7mmol)的MeOH(60mL)溶液中添加Pd/C(10％Pd,249mg，0.2当量)。所得悬浮液在1atm的氢气和室温下搅拌约16小时。过滤反应混合物，且在减压下浓缩滤液而给出1.5g(91％)深色油状的标题化合物。MS m/z 142.1[M+H]

步骤3C.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-((S)-2-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。向如步骤2E中所述般制备的((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮(500mg，1.52mmol)的异丙醇(21.7mL)溶液中添加(S)-1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇(258mg，1.83mmol，1.2当量)，随后添加浓盐酸(1mL)。所得溶液在76℃下搅拌约16小时。然后在减压下浓缩反应混合物。将残余物溶于水(20mL)中，用冰水浴冷却，并通过添加氢氧化铵中和并调整至pH>7。溶液混合物用二氯甲烷(2x30ml)萃取。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液。所得残余物通过制备型HPLC(WelchXtimate

实施例4：((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(ID)

步骤4A.3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇。向4-硝基-1H-吡唑(1.13g，9.9mmol)在二甲基甲酰胺(20mL)中混合物添加3-溴丙醇(1.67g，12mmol)和碳酸钾(1.38g，9.99mmol)。混合物加热至60℃约16h。在减压下浓缩混合物。向残余物中添加水(100mL)，且混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液而得到1.7g(99％)的标题化合物。MS m/z 171.9[M+H]

步骤4B.3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇。向3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇(1.70g，9.93mmol)在MeOH(19.0mL)中的混合物添加Pd/C(10％Pd,0.60g，0.06mmol)。混合物在1atm的氢气和室温下搅拌16h。过滤混合物，且浓缩滤液而得到1.4g(100％)的标题化合物。

步骤4C.((S)-2,2-二氟环丙基)((1R,5S)-3-(2-((1-(3-羟基丙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮。向如步骤2E中所述般制备的((1R,5S)-3-(2-氯嘧啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)((S)-2,2-二氟环丙基)甲酮(600mg，1.8mmol)在异丙醇(24mL)中混合物添加3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)丙烷-1-醇(515mg，3.6mmol)和浓盐酸(1mL)。混合物加热至70℃约16小时。在减压下浓缩混合物。将残余物溶解在水(20mL)中，并在冰水浴中冷却的同时用氢氧化铵将pH值调整至>7。混合物用二氯甲烷(2x30mL)萃取。有机萃取物用硫酸钠干燥并过滤。浓缩滤液。残余物通过制备型HPLC(Welch Xtimate

测定流程

JAK家族Caliper酶测定法

通过活体外方法评价本发明化合物以测定其各自抑制JAK激酶(TYK2、JAK1、JAK2、JAK3)的能力。抑制活性是如下测定的：使用微流体测定法(LabChip 3000

将化合物的DMSO溶液添加到384孔板中。反应混合物含有10mM HEPES，pH7.4、10mMMgCl

数据分析

使用来自Caliper Life Sciences的HTS孔分析软件收集数据。数据分析的数据输出为基于峰高计算的转化产物百分比(等式1)。

等式1：％转化产物＝100*((产物)/(产物+底物))

基于各测定法板内含有的阳性及阴性对照孔，计算在各化合物浓度下的效果百分比(等式2)。阳性对照孔含有会产生与背景相当(亦即，完全抑制的JAK1、JAK2、JAK3或TYK2)的磷酸化水平之饱和浓度的对照化合物。阴性对照孔仅含有DMSO(浓度与化合物孔相同)，其用于设定在测定法中的基线活性(即，未受抑制的JAK1、JAK2、JAK3或TYK2)。

等式2：％效果＝100*((样品孔-阴性对照)/(阳性对照-阴性对照))

效果百分比是相对于化合物浓度化合物作图。使用4参数逻辑模型拟合非约束S形曲线并测定50％抑制所需的化合物浓度(IC50)(等式3)。

等式3：y＝((max-min)/(1+((x/IC50)^s)))+min

其中max是最大渐近线(完全抑制)，min是最小渐近线(无抑制)，以及s是斜率因子。各化合物的IC

表1

HWB INFα诱导的STAT3磷酸化测定法

在人类全血流式细胞计量术测定法中评估本发明化合物抑制干扰素α信号传导的能力。干扰素α经由TYK2及JAK1发信号。测试品是制备成在100％DMSO中的30mM的原液，然后稀释成10mM。在DMSO中创建11点3稀释系列，其中最高浓度为5mM。通过添加4μL上述测试品溶液到96μL的PBS中作出进一步稀释，其中最高浓度为400μM。人类全血(HWB)是经由静脉穿刺流到含有肝素钠的Vacutainer

流式细胞计量术

将样品转移至96孔U底板(Falcon#353077)，并在配备HTS板装载器(BDBiosciences)的LSRFortessa上进行流式细胞计量术分析。为了pSTAT3的直方图分析对淋巴细胞群体进行门控。使用未受刺激的细胞定义背景荧光并将门控放在峰的脚，以包括～0.5％的经门控群体。使用FACSDiva的8.0版(BD Biosciences)软件进行直方图统计分析。测量磷酸STAT水平的相对荧光单位(RFU)是通过将阳性群体百分比乘上其平均荧光计算的。来自11个化合物浓度(各浓度单个)的数据是基于下式标准化成对照的百分比：

对照的％＝100x(A-B)/(C-B)

其中A是来自含有化合物和细胞因子的孔的RFU，B是来自没有细胞因子和化合物的孔的RFU(最小荧光)，以及C是来自仅含有细胞因子的孔的RFU(最大荧光)。使用Prism的7版软件(GraphPad,La Jolla,CA)测定抑制曲线和IC50值。

表2

以Th2刺激的离体人类皮肤测定法中的生物标志物调节

评估本发明化合物在局部应用后调节以Th2刺激的离体人类皮肤中的CXCL10生物标志物的能力。

将化合物溶解在由以下所构成的调配物中：

10％w/w白凡士林，

5％w/w矿物油，

10％w/w乳化蜡，

2％w/w油醇，

46％w/w水，

15％w/w二乙二醇单乙醚，

10％w/w聚乙二醇(PEG)400，和

1％w/w 2-聚氧乙醇(pehoxyethanol)。

从手术试样中新鲜切出的人类皮肤用皮刀切割成750μm厚，并安装在7mm静态Franz槽中以进行组织培养，而使得皮肤的上表面暴露于在Franz槽供体室中的空气，而底部(真皮)则暴露于角化培养基。总共使用了二个皮肤供体(每个供体每个治疗n＝6)。培养是在标准组织培养箱中进行。将化合物以1％w/w的浓度溶解在所指调配物中，并向皮肤以每个样品10μL(每cm

表3

体外人类肝细胞清除率测定法

高通量人类肝细胞底物耗尽测定法是在如先前所述般配制的384孔中进行[Di etal.,Eur.J.Med.Chem.,2012,57,441]。简言之，将冷冻保存的人类肝细胞解冻并重新悬浮在补充有HEPES和Na

表4

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