一种获得铁皮石斛苗的方法

技术领域

本发明涉及人工种植铁皮石斛技术领域，特别是涉及一种获得铁皮石斛苗的方法。

背景技术

石斛是兰科石斛属植物的干茎制成的传统名贵中药材，始载于《神农本草经》，而铁皮石斛则是石斛品种中最珍贵，也是最昂贵的一种，享有“救命仙草”的美誉。在唐代《道藏》一书开列的“中华九大仙草”中，铁皮石斛被列于首位。铁皮石斛被奉为“药中之上品”，具有滋阴生津、健脾开胃、护肝利胆、缓解疲劳、润养肌肤、抗氧化、抗肿瘤、降低血糖、增强免疫力等诸多功效，药用价值与经济价值极高。

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生草本，喜在半阴半阳的环境中生长，主要分布在中国的南部和西南部，生长在海拔较高的山谷或森林岩石或树木上，对环境要求严苛，且种子细小无胚乳，在自然环境下极难萌发，加之野生铁皮石斛繁殖能力低和人工乱采滥挖，造成野生石斛濒临灭绝。早在20世纪80年代，野生铁皮石斛就已被国家列为重点保护的珍稀濒危植物，禁止采挖和销售。因此，人工种植铁皮石斛成为满足市场需求的惟一途径，而人工种植最大的成本是种苗成本，因此降低种苗培育成本是发展铁皮石斛产业的关键。

近年来，由于铁皮石斛组织培养技术及集约化人工栽培技术的产生，使得铁皮石斛种苗的获得取得很大进展。目前，铁皮石斛组织培养技术的研究主要有：无菌播种、原球茎诱导、增殖及分化、壮苗生根，外植体诱导器官和原球茎发生、细胞培养、离体开花、人工种子与种质资源保存、四倍体诱导等。

国内学者对铁皮石斛的外植体选择开展了较多研究，多以铁皮石斛的种子、茎段、根尖、不定芽、幼叶、无菌苗茎段等外植体获得原球茎，通过增殖、分化、生根培养方式获得再生苗或完整植株。但是，以铁皮石斛种子为材料的组培方式中，因其种子资源短缺，造成铁皮石斛幼苗工厂化生产较难。以原球茎为外植体增殖率比较低，用于规模化生产成本比较高。以茎尖为外植体，大多数是依附于带芽茎段，单独以茎尖为外植体的成活率低。以叶片为外植体，叶片分化程度比较高，培养成完整植株的能力比较低，也不适合工厂化生产。

综上，现有获得铁皮石斛苗的方法至少存在成本高、用时长、以及操作繁琐的问题，不适合工厂化生产。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种获得铁皮石斛苗的方法，主要目的在于提供一种成本低、用时短、操作简便的获得铁皮石斛苗的方法，以适合工厂化生产。

为达到上述目的，本发明主要提供如下技术方案：

一方面，本发明的实施例提供一种获得铁皮石斛苗的方法，其中，所述获得铁皮石斛苗的方法包括如下步骤：

制备扦插条步骤：以铁皮石斛废茬为原料；将所述铁皮石斛废茬制成扦插条；

光照培养步骤：将所述扦插条扦插在培养基质中，放入光照培养箱中进行光照培养处理，获得铁皮石斛苗。

优选的，在所述光照培养步骤中：所述光照培养处理，包括：先在第一设定条件下培养15-40天、再在第二设定条件下培养25-35天；其中，

所述第一设定条件包括：光照强度为20000-40000LX，优选为30000LX；温度为20-35℃，优选为28℃；湿度为50-80％，优选为60-75％；

所述第二设定条件包括：交替进行光照处理10-14h和黑暗处理10-14h；其中，在所述光照处理中：湿度为50-80％，优选为60-75％；光照强度为3000-10000LX，优选为5000LX；温度为20-35℃，优选为30℃；其中，所述黑暗处理的温度为20-35℃，优选为25℃。

优选的，在第一设定条件下培养25-35天，优选29-31天；优选的，在第二设定条件下培养29-31天。

优选的，所述制备扦插条步骤，包括：将所述铁皮石斛废茬上的须根去掉，留下茎部及与茎基部相连的根，得到扦插条；对所述扦插条进行消毒处理。

优选的，所述扦插条的长度为3-5cm。

优选的，对所述扦插条进行消毒处理的步骤包括：将所述扦插条浸泡在石灰水中进行消毒处理。

优选的，所述扦插条在石灰水中浸泡的时间为8-15h；和/或所述石灰水是将由熟石灰和水配制成的质量浓度为1-5％，优选为2％的溶液。

优选的，在所述光照培养步骤中：所述培养基质包括松树皮、蛭石中的一种或两种。

优选的，所述培养基质的厚度为1.5-2cm。

优选的，在所述光照培养步骤中：将所述扦插条的根端插入培养基质中；优选的，所述扦插条插入所述培养基质中的长度为0.8-1.2cm。

优选的，所述扦插条在所述培养基质上的扦插密度为4500-5200株每平方米。

与现有技术相比，本发明的一种获得铁皮石斛苗的方法至少具有下列有益效果：

本发明实施例提出一种获得铁皮石斛苗的方法，是以石斛鲜条收割后的废弃组织(即，铁皮石斛废茬)为原料，并采用设定的光照培养条件，成功获得了铁皮石斛苗。在此，(1)本发明实施例所采用的原料通常被种植基地直接丢弃，因此，本发明实施例的方法不仅实现了农业残渣回收充分利用，而且成本低。(2)本发明实施例的方法仅需用熟石灰对铁皮石斛废茬进行消毒，扦插到常见的培养基质上，进行光照培养处理即可。而现有技术常规组培苗需要在无菌环境下进行增殖分化、壮苗生根等，相比之下，本发明实施例的方法仅需在常规环境中，且普通人员均可操作完成。因此，本发明实施例的方法具有操作简便的优点。(3)本发明实施例的方法历时60天(60天左右)，即可得到平均株高7cm、平均总根长10cm、根分生数为4.26的健壮幼苗。而获得同样大小的铁皮石斛幼苗，通过无激素组培方法需要历时180天、激素组培方法需要用时75天；现有技术的方法均远远高于本发明实施例方法所用时间。如，利用种子进行组织培养的方法中，从种子萌发到可以移栽成苗大多要经历1-2年的时间。(4)本发明实施例的方法仅用到铁皮石斛废茬，加上常见的熟石灰、松树皮等材料，经过光照处理即可。而现有技术中铁皮石斛的常规组织培养方法，通常需要原球茎诱导、增殖分化、壮苗生根等流程，需要专业人员利用专业的设备与试剂在专门的组织培养环境下完成，需要耗费大量的人力和物力。综上，本发明实施例提出的获得铁皮石斛苗的方法是一种成本低、用时短、操作简便的方法，其适合工厂化生产。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1是铁皮石斛废茬的实物图；

图2是扦插条的实物图；

图3是实施例1中，将扦插条扦插在培养基质(蛭石)后，光照培养20天后的幼苗萌发实物图；

图4是实施例1中，将扦插条扦插在培养基质(松树皮)后，光照培养20天后的幼苗萌发实物图；

图5是图4的局部放大实物图；

图6是实施例1中，扦插条扦插在培养基质(松树皮和蛭石)后，光照培养40天后的幼苗萌发的幼苗萌发实物图；

图7是图6的局部放大实物图；

图8是实施例1中，扦插条扦插在培养基质(蛭石)后，光照培养60天后的幼苗萌发的实物图；

图9是图8的局部放大实物图；

图10是实施例1中，扦插条扦插在培养基质(松树皮)后，光照培养60天后的幼苗萌发的实物图；

图11是图10的局部放大实物图；

图12是强光照处理下扦插条生长相关激素含量变化；

图13是强光照处理下扦插条衰老相关激素含量变化。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合附图及较佳实施例，对依据本发明申请的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。

本发明实施例提供一种获得铁皮石斛苗的方法，主要是首次提出以铁皮石斛废茬为原料，选用设定的培养基质和相应的光照培养条件，培养出铁皮石斛苗。

其中，关于本发明实施例中的“铁皮石斛废茬”说明如下：铁皮石斛是春天开始发芽，5-10月为生长期，10月后茎条进入成熟期，新茎增粗但叶片不再增加，11月左右叶片自然脱落，进入低温休眠期。叶脱落后，叶鞘紧包茎，呈白色状，药农称之为白条。人工栽培铁皮石斛的采收时间以11月至翌年3月为宜。在采收白条时，不能从基部割下，要至少保留两节较粗壮的茎节为来年新芽萌发时提供充足的养分、水分。铁皮石斛虽为多年生植物，但通常在采收2-3次后，即种植4年左右时，老茎的发芽率严重降低，甚至基本不发新芽，这时候种植户便会将铁皮石斛连根拔掉。这种被拔掉的铁皮石斛便是本实验所用的材料，定义为铁皮石斛废茬(这部分材料通常被种植基地直接丢弃)。在此需要说明的是：现有技术采用的外植体除种子外，均为健康植株组织；而本发明实施例所用材料为农业废弃品。

本发明实施例所选用的培养基质主要是：松树皮、蛭石中的一种或两种。

本发明实施例所选用的光照培养条件指的是：先在第一设定条件下培养15-40天(优选15-35天，进一步优选29-31天)、再在第二设定条件下培养25-35天(优选29-31天)；其中，所述第一设定条件包括：光照强度为20000-40000LX，优选为30000LX；温度为20-35℃，优选为28℃；湿度为50-80％，优选为60-75％；所述第二设定条件包括：交替进行光照处理10-14h和黑暗处理10-14h；其中，在所述光照处理中：湿度为50-80％，优选为60-75％；光照强度为3000-10000LX，优选为5000LX；温度为20-35℃，优选为30℃；其中，所述黑暗处理的温度为20-35℃，优选为25℃。本研究与现有技术不同，是利用极端光照处理，具体利用铁皮石斛对胁迫的极端反应而得到幼苗的一种方式。

下面通过实施例、对比例对本发明进一步说明如下：

实施例1

实施例1提供一种获得铁皮石斛苗的方法，具体如下：

1.选用的原料(植物材料)

铁皮石斛废茬。其中，铁皮石斛废茬的实物图如图1所示。

2.主要设备与试剂

光照培养箱(GXZ–310D，宁波东南仪器有限公司)，专业根系分析系统(WinRHIZOTM，2013e，加拿大Regent Instruments公司)，超高效液相色谱-质谱联用仪(SHIMADZU，日本)，色谱纯甲醇、色谱纯乙腈、色谱纯植物激素标准品，熟石灰等。

3.实验方法

1)植物材料的处理

取铁皮石斛废茬，去除须根系(一般情况下，铁皮石斛废茬的须根都已腐烂，烂根不具备生物学功能，还可能造成污染)，如图2所示。取熟石灰，加清水配制成质量分数为2％的石灰水，浸泡8-15小时，放入托盘晾干，作为扦插条备用。

2)扦插方法及培养条件

取松树皮与蛭石若干，加清水浸透后，分别平铺到塑料托盘(长宽高48×33.5×3cm)中作为培养基质，厚度为1.5-2cm。

取扦插条，将底端(根端)约0.8-1.2cm插入培养基质中，扦插密度为4500-5200株每平方米。

将托盘随机摆放在光照培养箱内，先将培养箱参数设置为如下：光照强度为30000LX，温度为28℃，湿度为60-75％，24h全天强光照处理30天。再将培养箱参数调整如下：交替光照处理为12h和黑暗处理为12h直至光照培养30天。其中，光照处理条件：湿度为60-75％、光照强度为5000LX、温度为30℃。黑暗处理的温度为25℃。

上述整个光照培养过程持续60天。

分别于培养的第20天、第45天统计幼苗的萌发率；并于培养的0h、24h、11天、21天测定扦插条的内源激素含量；于培养后的第60天测量新萌发小苗的株高、根长。

其中，幼苗萌发率(Germination percentage,GP)

以幼芽长度≥2mm作为幼苗萌发的标准。幼苗萌发率的计算公式如下：

上式中，SNG为已萌发植株数量，SN0为单个托盘扦插条数量。

4.幼苗激素的提取与测定

(1)激素提取步骤

a.取鲜样，加入液氮，利用研磨仪研磨(50Hz，1分钟)至粉末状。

b.称量100mg(±1mg)鲜样粉末，加入1mL的提取液(其中，提取液包括甲醇、水、甲酸；其中，甲醇、水、甲酸的体积比为75：23：2)，室温下振荡15min。

c.离心(离心参数设置如下12000rpm，4℃，10分钟)后，取上清于新离心管中。

d.向残渣中加入0.5mL的提取液，重复振荡和离心，合并上清。

e.在4℃下，浓缩仪中浓缩干，加入200μL的复溶液(复溶液包括甲醇和水；其中，甲醇和水的体积比为4：1)复溶。

f.离心(转速12000rpm，10分钟)后，吸取上清，用微孔滤膜(0.22μm pore size)过滤样品，并保存于进样瓶中，用于LC-MS/MS分析。

(2)色谱质谱采集条件

数据采集仪器系统主要包括：

超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)(Shim-pack UFLC SHIMADZU CBM30A)；

串联质谱(Tan-dem mass spectrometry，MS/MS)(AppliedBiosystems4500QTRAP)。

液相条件主要包括：

1)色谱柱：Waters ACQUITY

2)流动相：A相为超纯水(含0.04％乙酸)，B相为乙睛(含0.04％乙酸)；

3)洗脱梯度：0min A/B 95:5(V/V)、10.0min为A/B 5:95、11.0min为A/B 5:95、11.1min为A/B 95:5、14min为A/B 95:5。

4)流速：0.40mL/min，柱温为40℃，进样量5μm。

其中，质谱条件如表1所示：

表1(质谱检测参数)

5.幼苗根、茎测量

采用WinRHIZOTM根系分析系统测量幼苗根、茎长度。其中，WinRHIZOTM具体系统参数设置如下：

模式：专业模式；

文稿类型：胶片(带胶片区域导轨)；

胶片类型：正片；

图像类型：8位灰度；

分辨率：600dpi；

文稿大小：203×254mm；

目标尺寸：原稿；

调节器：USM锐化。

6.实验结果

1)实施例1中，将扦插条扦插在培养基质(蛭石、松树皮)后，光照培养20天、40天、60天后的幼苗萌发实物图，参见图3-图11所示。

从图3-图11可以看出，本发明实施例成功地获得了铁皮石斛苗。

2)光照培养20天、45天后的幼苗萌发率。

表2为两种培养基质下，扦插后20天、45天的幼苗萌发率。

表2

注：表2中数据为平均值±标准误差，不同字母标记表示差异显著(p<0.05)。

在此，本实施例的扦插条在24h强光照(30000LX)处理15-18天后，可明显观察到幼苗芽点。分别于扦插后第20天、40天统计两种培养基质下幼苗的萌发率，结果如表2所示。相同培养条件下，松树皮基质组的幼苗萌发率显著高于蛭石基质组。在扦插后的第20天与40天，松树皮组比蛭石组的萌发率分别高出14.82％和9.55％。

3)培养40天、60天根茎指标

表3为两种培养基质下，扦插后40天的幼苗生长指标

表3

注：表3中数据为平均值±标准误差，不同字母标记表示差异显著(p<0.05)。

表4.两种培养基质下扦插后60天的幼苗生长指标

表4

注：表4中数据为平均值±标准误差，不同字母标记表示差异显著(p<0.05)。

由表3、表4可知，扦插后40天、60天，两种培养基质对幼苗茎高的影响不大；但在松树皮基质组，根的生长量显著高于蛭石基质组。在扦插后第40天、60天，松树皮基质组的根长比蛭石基质组分别高出了58.2％和63.89％。

从幼苗萌发率和根茎生长指标来看，扦插第45天，松树皮基质组的幼苗萌发率可达89.59％；第60天，松树皮基质组的幼苗高度(茎长)平均可达7.47cm。

4)强光照处理下扦插条内源激素的变化

目前，关于光照处理对铁皮石斛的研究主要集中在两个方面，一是利用二代转录组测序技术研究光照处理下铁皮石斛基因调控的变化；二是关于铁皮石斛苗期(尤其是试管苗)最适光照条件的研究。在此，摘取现有技术如下：

王雪妮等在“光处理对铁皮石斛繁殖生长的影响”研究中发现，以铁皮石斛原球茎为供试材料，通过诱导原球茎增殖、分化得到培养苗，在光照时间为10h/d、光照强度2500Lx、红蓝光光质比为1∶1时铁皮石斛培养苗生长最好。(王雪妮,林蔚,王晶晶,李菁,范正阳,叶晓洁,何碧珠.光处理对铁皮石斛繁殖生长的影响[J].安徽农业科学,2020,48(17):49-52+76.)

陈志等通过“不同色温LED白光对铁皮石斛组培苗生长的影响”研究，认为色温3000KLED白光完全可替代荧光灯应用于铁皮石斛组培苗培养，光照时间以12h为宜。(陈志,汪一婷,吕永平,牟豪杰.不同色温LED白光对铁皮石斛组培苗生长的影响[J].浙江农业科学,2018,59(11):2013-2016.DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.20181119.)

林小苹的研究结果表明，保持CO

皇甫森森在“LED光照对铁皮石斛生长特性的研究”中发现，成年期铁皮石斛在(红光:蓝光＝24:96μmol·m

麦小燕等对“不同培养基和光照强度对春石斛试管苗的影响”的研究发现，春石斛试管苗在5000Lx强光照下的生根率高于500Lx弱光照。作者认为春石斛试管苗只有在适当的培养基和一定的强光条件下，才能培养成为根系发达、茎叶粗壮的健壮苗，从而提高移栽成活率。而培养春石斛试管苗的适宜光照强度范围则有待进一步研究(麦小燕,郑平,刘荣维,王韬,周荣.不同培养基和光照强度对春石斛试管苗的影响[J].广东农业科学,1997(03):26-27.DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.1997.03.011.)。

丑敏霞等通过“光照强度对石斛生长与代谢的影响”研究，认为石斛分蘖期的培养条件以光照时间12h/d，相对湿度80％，光照强度以320μmol·m

郜李彬等在“铁皮石斛组培苗生根技术研究”发现，生根培养基配方对铁皮石斛组培苗出根率的影响最大，其次为光照强度，但光照时间对出根率的影响不显著。铁皮石斛组培苗生根的最佳实验室环境条件为光照强度为2000Lx，培养室温度调控在(20±2)℃，最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L+香蕉汁100mg/L(郜李彬,曹征宇,顾韵莉,周亚辉.铁皮石斛组培苗生根技术研究[J].上海农业科技，2017(04):32+46.)。

龙祥友等在对“铁皮石斛试管苗生长的适宜光照时间”的研究发现，铁皮石斛试管苗增殖阶段适宜光照时间为10h/d，生根阶段的适宜光照时间为12h/d。(龙祥友,朱虹,孙长生,刘雪兰,李利霞.铁皮石斛试管苗生长的适宜光照时间[J].贵州农业科学,2015,43(04):173-175.)

与上述研究不同，本发明是利用极端光照处理，利用铁皮石斛对胁迫的极端反应而得到幼苗的一种方式。通过测定极端光照处理条件下，铁皮石斛内源激素含量的变化，可初步探知本发明得以实现的内在机理。

如图12和图13所示，在全天候不间断强光照处理下，扦插条的内源激素随着处理时间的延长而发生显著变化。24h处理下，生长相关激素小幅度下降，成熟衰老相关激素，尤其是乙烯急剧上升，表明扦插条在强光照胁迫下处于应激反应状态。而持续强光照处理下，处理后11天，生长相关激素上升，成熟衰老相关激素下降，表明铁皮石斛扦插条在长期的强光照胁迫下并没有死亡，而是产生了抗性，调动内源激素对抗胁迫。21天强光照处理下，所测量4种内源激素水平与对照组趋于一致，反应出扦插条已适应强光照胁迫，所观察到的结果就是扦插条上萌出新芽。这也充分说明了，民间关于铁皮石斛又叫“打不死”的说法，铁皮石斛具有适应极端条件的能力，这也为本发明的成功提供了可能。

对比例1

对比例1是现有技术的一种方法，参见：蔡宣梅.福建铁皮石斛的组培快繁体系的研究[J].福建热作科技,2020,45(04):1-4.。主要步骤如下：

1材料和方法

1.1材料

供试材料取自福建连城野生铁皮石斛的成熟蒴果。

1.2培养条件

培养条件为23±2℃，光照1500Lx，时间为12h·d

1.3方法

1.3.1原球茎的获得

选择健康的、无病害、无虫害的蒴果，用流水冲洗干净，用洗衣粉浸泡5min，用刷子轻刷，然后用自来水冲洗干净。在超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％的升汞消毒10min，无菌水冲洗3-4次，在无菌条件下，用解剖刀将消毒后的蒴果切开一端，轻轻抖动蒴果，使种子接种在诱导培养基上。

1.3.2种子萌发培养

MS培养基，蔗糖为3％，琼脂为0.65％，pH值为5.8-6.0。培养100天。

1.3.3原球茎增殖培养

对培养100天的原球茎进行切割转接到有机添加物培养基中(6-BA2.2+NAA0.2+2,4-D0.1+香蕉提取物50+马铃薯提取物50)，培养120天。

1.3.4壮苗与生根培养

切取分化后高2-3cm、有4-5张叶片的苗，接入壮苗与生根培养基中(6-BA0.5+NAA0.5+IBA0.1+香蕉提取物100)，培养(文献中未写培养多长时间)，获得平均根数4.63，株高4.14cm的幼苗。

对比例2

对比例2是现有技术的一种方法，参见：夏九成，郑毅，代钦川.铁皮石斛的组培技术研究[J].黑龙江农业科学,2022(02):69-74.。

1材料与方法

1.1材料

以霍山铁皮石斛带节的茎段作为外植体,试验材料为安徽省霍山县的带土植株。

1.2方法

光照培养条件为培养温度(25±1)℃、光照强度为1600Lx、光照时长为12h·d

1.2.1外植体灭菌

选取霍山铁皮石斛健壮植株，用无菌剪刀剪下带节茎段作为外植体在自来水下流水冲洗30-40min，风干，使鲜条内的水分脱去35-45％。接种前,在超净工作台内用酒精棉擦拭双手，接着用75％的酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。用灭菌后的手术刀将外植体,修剪成0.5-0.8cm带节茎段，除去叶片，然后进行外植体消毒。先用75％的酒精浸泡30s，然后将外植体等分为3组，用0.1％HgCl

1.2.2外植体培养

培养基为1/2MS培养基，培养35d继代1次，共培养75d，继代两次。

1.2.3腋芽的诱导

铁皮石斛带节茎段诱导腋芽的培养基是1/2MS+10g·L

1.2.4丛芽的增殖

培养基为1/2MS+0.6mg·L

1.2.5组培苗的生根培养

铁皮石斛的带节茎段诱导生根培养基配方为1/2MS+0.9mg·L

在此，与对比例1、对比例2相比，本发明实施例提出的获得铁皮石斛苗的方法，至少具有如下优点：

1、植物残渣再利用；本发明实施例的方法所用扦插条为石斛鲜条收割后的废弃组织，在实际规模化生产中，这部分材料通常被种植基地直接丢弃。

而对比例1的原料是野生铁皮石斛的成熟蒴果，对比例2的原料是霍山铁皮石斛带节的茎段。很明显，对比例1、对比例2的原料较为贵重，成本高。

2、操作简便；本发明实施例的方法仅需用熟石灰对石斛残渣进行消毒，扦插到常见的培养基质上，按本发明实施例的方法进行一段时间的24h全光照处理即可。常规组培苗需要在无菌环境下进行增殖分化、壮苗生根等，相比之下，本发明实施例的方法仅需在常规环境中普通人员均可操作完成。

对比例1、对比例2均是在无菌条件下操作，需要完成培养基配制、灭菌、接种、初代培养、继代培养、生根培养、试管苗移栽驯化等操作，太繁琐。

3、用时短；本发明实施例的方法历时60天，即可得到平均株高7cm，平均总根长10cm，根分生数为4.26的健壮幼苗。同样大小的铁皮石斛幼苗，通过无激素组培方法需要历时180天，激素组培方法需要用时75天；对比例的方法均远远高于本发明方法所用时间。如，利用种子进行组织培养的方法中，从种子萌发到可以移栽成苗大多要经历1-2年的时间。

4、成本低；本方法仅用到铁皮石斛废茬，加上常见的熟石灰、松树皮等材料，经过光照处理即可。而铁皮石斛的常规组织培养方法，通常需要原球茎诱导、增殖分化、壮苗生根等流程，需要专业人员利用专业的设备与试剂在专门的组织培养环境下完成，需要耗费大量的人力和物力。

综上，本发明实施例提出的获得铁皮石斛苗的方法是一种成本低、用时短、操作简便的方法，其适合工厂化生产。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。