取代的吡唑基化合物及其使用方法

技术领域

本文提供了可用于抑制乳糖酶脱氢酶(LDH)活性以及用于治疗、预防和改善高草酸尿症的一种或多种症状的化合物、组合物和方法，所述一种或多种症状包括原发性高草酸尿症以及肾和尿道中的结石形成。

背景技术

高草酸尿症的特征在于个体体内草酸盐浓度增加，通常表现为尿草酸盐排泄增加。草酸是二羧酸，其可与阳离子诸如钙形成络合物以产生高度不溶的草酸钙晶体。草酸钙晶体的沉积可影响肾功能，导致整个尿路(尿石症)、肾脏(肾结石)中形成结石，并导致肾脏的钙水平逐渐增加(肾钙沉着症)(美国罕见疾病组织-PH疾病数据库)。总体影响是肾损害、肾结石、尿路感染、慢性肾病以及在一些情况下的终末期肾病(ESRD)。此外，高草酸尿症与肾小球功能降低相结合可导致全身性草酸过多症，由此草酸盐沉积发生在全身，包括骨骼、视网膜、中枢神经组织和脉管系统内层(Bhasin,World J.Nephrol.2015,42(2),235-244)。

基于临床病因，高草酸尿症细分为原发性和继发性高草酸尿症。原发性高草酸尿症(PH)是由于酶活性缺陷引起的代谢遗传错误并进一步分为三种亚型(Harambat,Int.J.Nephrol.2011:864580)。I型原发性高草酸尿症(PH1)是一种由肝脏特异性过氧化物酶体酶丙氨酸-乙醛酸氨基转移酶(AGT，基因名称为AGXT)缺乏引起的常染色体隐性疾病。这是PH1最严重的形式，并且占诊断的PH病例的大约80％。PH1通常在儿童期或青春期出现，并且该病症的特征在于复发性肾结石。在大约20-50％的PH1患者中观察到肾衰竭。AGT酶负责将乙醛酸解毒为甘氨酸，并与乳酸脱氢酶(LDH)介导的乙醛酸向草酸的转化竞争。因此，AGT功能的丧失导致草酸的产生增加。PH1在欧洲的估计患病率为每百万人中1-3例，在欧洲、美国和日本的登记处占小儿终末期肾病(ESRD)的～1％(Harambat 2011)。在PH1中已经鉴定出超过150个AGXT突变，并且这种遗传多样性可解释PH1患者的异质性临床表现和疾病严重程度。因此，在确定PH1诊断时经常出现延迟，并且发病率可能未得到充分反映(vander Hoeven,Nephrol.Dial.Transplant 2012,27(10),3855-3862)。通过证实AGXT基因中的突变或肝脏活检样本中AGT活性降低来诊断PH1(Williams,Hum.Mutat.2009,30,910-917)。

II型原发性高草酸尿症(PH2)是由乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶(GRHPR)基因缺陷引起的。编码这种酶的基因负责将乙醛酸转化为甘氨酸，并且突变通常导致GRHPR功能的丧失。通常认为PH2的临床病程比PH1轻，ESRD的风险低，尽管肾结石和频发肾结石在这些患者中是常见的(Dhondup,Am.J.Transplant.2018,18,253-257)。这些患者可能出现慢性以及终末期肾功能不全(Kemper,Eur.J.Pediatr.1997,156(7),509-512)。

III型原发性高草酸尿症(PH3)由编码肝特异性线粒体酶4-羟基-2-酮戊二酸醛缩酶的HOGA1基因的突变引起(Belostotsky,Am.J.Hum.Genet.2010,87(3),392-399)。该酶在草酸产生中的确切作用尚未完全理解，但目前的假设是，HOGA1的底物4-羟基-2-酮戊二酸(HOG)能够抑制GRHPR(Reidel,Biochim.Biophys.Acta.2012,1822(10),1544-1552)。虽然PH3患者中的ESRD病例明显少于PH1患者的病例，但该患病人群中的肾结石发病率仍然较高，并且患者和住院负担很重。例如，大约50-65％的患有PH3的个体在五岁之前出现结石(Monico,Clin.J.Am.Soc.Nephrol.2011,6,2289-2295)，虽然一些个体在青春期及其成年期经历较少的肾结石事件，但并非所有个体都是如此。还注意到，PH3载体频率是1:185，类似于PH1的载体频率。遗传患病率为1:136,000，使得PH3比最初基于临床诊断所认为的更常见(Hopp,J.Am.Soc.Nephrol.2015,26,2559-2570)。

PH患者的尿草酸盐浓度增加与疾病严重程度增加和进展为终末期肾病相关(Zhao,CJASN,2016,11(1),119-126)。临床上，低于<0.45mmol/天的尿草酸盐浓度被认为在正常范围内。尿草酸盐浓度>2.4mmol/天的患者发生ESRD的风险显著更高(风险比＝3.4)。在诊断和随访时尿草酸盐排泄较高与PH患者肾脏结果较差相关。平均而言，PH1患者具有较高的尿草酸盐浓度(297名患者的平均值为2.0mmol/天)，并且毫不奇怪地，在30年的随访后，肾存活率仅为27％，相比之下，PH2和PH3个体的尿草酸盐浓度为92％和95％，其中尿草酸盐浓度较低，但仍远高于正常范围。另外，升高的24小时尿草酸盐排泄也与CKD 2至4期个体中慢性肾病(CKD)进展和ESRD的较高风险相关(Waikar,JAMA Internal Medicine,2019)。这些发现证实了尿草酸盐排泄作为肾存活率的预测因子的关键重要性以及降低尿草酸盐浓度的潜在治疗价值。

继发性高草酸尿症是用于并非由遗传因素引起的所有其他高草酸尿症的通用术语。在肠源性高草酸尿症中，认为驱动因素增强了饮食的草酸盐或草酸盐前体诸如乙醇酸的吸收。这些患者通常患有导致草酸吸收不良的慢性潜在胃肠道病症，诸如减肥手术并发症、短肠综合征或克罗恩病(Crohn's disease)。在炎性肠病、回肠切除和现代减肥手术患者中，肠源性高草酸尿症的发生率为5-24％，因此代表了显著的尚未满足的医疗需求(Esker,Am.J.Nephrol.2016,44,85-91)。糖尿病和肥胖症都独立地与尿草酸盐排泄增加以及肾结石风险增加相关，但尚不清楚这些个体中的高草酸尿症是否由饮食吸收增加或草酸的内源性合成引起(参见Efe,Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.2019)。所有其他非肠道性质的继发性高草酸尿症均定义为特发性的，这意味着导致高草酸尿症的病因尚未确定。

目前还没有批准的对高草酸尿症患者普遍有效的疗法。在临床证据表明草酸盐排泄增加后不久，通常建议患者增加液体摄入(建议>2L/m

双重肝肾移植是完全逆转PH1患者高草酸尿症的唯一有效手段。肝肾移植的时机通常由慢性肾病的阶段和患者ESRD的时间决定(Cochat,Nephrol.Dial.Transplant.2012,27,1729-1736)。肝肾移植应在严重的全身性草酸过多症发生之前预先计划好。常规透析对于清除高草酸尿症患者的血浆草酸盐浓度无效，但通常用于等待移植的5期CKD患者。在这些患者中，建议进行高效透析，这可适度减缓疾病进展，但不能预防ESRD(Ellis,Nephrol.Dial.Transplant.2001,16,348-354)。

努力减少草酸的内源性合成对治疗高草酸尿症应该是有效的。乳酸脱氢酶A(LDHA)催化乙醛酸氧化成草酸，并且是草酸合成中的最后步骤(Lluis,Biochim etBiophys Acta.1977,333-342)。因此，抑制LDHA将减少乙醛酸向草酸的氧化转化，并且代表用于治疗高草酸尿疾病的有前景的方法。事实上，siRNA治疗后LDHA表达的敲低已经显示出减少了啮齿动物PH1模型中的尿草酸盐(Lai,Mol Ther.2018,26(8):1983-1995)以及奈多西兰(Nedosiran)的早期临床研究(PHYOX:A Safety and Tolerability Study of DCR-PHXC in Primary Hyperoxaluria Types 1 and 2,OHF 2019)。

预期肝靶向的LDH抑制是良好耐受的。据报道，在LDHA中具有功能丧失突变的人患有运动诱发的横纹肌溶解(Miyajima,Muscle&Nerve.1995,18:874-878)，然而，针对LDHA的肝靶向的siRNA在小鼠中不引起劳力性肌病(Lai,Mol Ther.2018,26(8):1983-1995)，并且在临床试验中奈多西兰的治疗具有良好耐受性(PHYOX:A Safety and TolerabilityStudy of DCR-PHXC in Primary Hyperoxaluria Types 1 and 2,OHF 2019)。此外，具有LDHB功能丧失突变的人不具有任何报道的表型(Tanis,Am.J.Hum.Genet.1977,29:419-430)。

文献中已经描述了几种LDH抑制剂作为溶瘤剂(Granchi,J.Med.Chem.2011,54,1599-1612；Ward,J.Med.Chem.2012,55,3285-3306；Kohlmann,J.Med.Chem.2013,56,1023-1040；Fauber,Bioorg.Med.Chem.Lett.2013,20,5533–5539；Purkey,ACSMed.Chem.Lett.2016,7,896-901；Rai,J.Med.Chem.2017,60,9184-9204)。这些抑制剂中的大多数具有适度的LDH抑制、差的细胞渗透性和差的药代动力学性质，使得它们作为疗法的应用具有挑战性。此外，用于治疗高草酸尿症的有效药剂的具体要求与肿瘤学所需的那些明显不同。大多数肿瘤药剂具有全身组织分布特征，确保化合物可抑制全身的癌细胞。此外，对于肿瘤学适应症，化合物需要表现出高度的细胞毒性。相比之下，对于高草酸尿症，人们希望有一个肝靶向组织分布特征，肝细胞活性提高，细胞毒性很小或没有。

仍然需要能够抑制LDH蛋白的新型肝靶向的小分子治疗剂用于治疗疾病诸如原发性高草酸尿症和继发性高草酸尿症，其中降低草酸合成的量将是有益的。

发明内容

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物。在某些实施方案中，化合物是乳酸脱氢酶(LDH)酶的抑制剂。在某些实施方案中，作为LDH抑制剂的化合物将提供与降低草酸盐水平，包括降低草酸的内源性产生相关的治疗益处。

在某些实施方案中，本文提供了具有式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

Y是O或S；

X

X

R

R

R

R

R

条件是(i)当R

还提供了配制用于通过适当的途径和手段施用的药物组合物，其含有治疗有效浓度的一种或多种本文所提供的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，并且任选地包含至少一种药物载体。在某些实施方案中，药物组合物递送有效降低有需要的受试者的草酸盐水平的量。在某些实施方案中，药物组合物递送有效减少有需要的受试者的肾结石形成的量。

在另一方面，本文提供了治疗与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症的方法，其包括向患有此类疾病或病症的受试者施用治疗有效量的一种或多种本文所公开的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或本文所公开的药物组合物。在某些实施方案中，疾病或病症是高草酸尿症、慢性肾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)或肾结石疾病。在又某些实施方案中，疾病或病症是原发性高草酸尿症、特发性高草酸尿症或特发性草酸肾结石疾病。在又某些实施方案中，疾病或病症与AGXT、GRHPR或HOGA1突变或其突变的组合相关。

本文还提供了使用一种或多种本文所提供的化合物或组合物与用于治疗本文所述的疾病和病症的其他药剂组合的联合疗法。

参考以下具体实施方式和附图，本文所述的主题的这些和其他方面将变得显而易见。

附图说明

图1描绘了在以5mg/kg QD PO施用本文所公开的式(I)化合物5天之后，原发性高草酸尿症1(PH1)的AGXT敲低小鼠模型中尿草酸盐水平的降低百分比。

图2描绘了本文所公开的式(I)化合物的XlogP分布。

具体实施方式

A.定义

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。除非另有说明，否则本文引用的所有专利、申请、公开的申请和其他出版物均全文以引用方式并入。在本文的术语具有多个定义的情况下，除非另有说明，否则以本节中的那些定义为准。术语“受试者”是指动物，其包括哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、牛、绵羊、猪、兔、山羊、马、猴、狗、猫，和人，包括新生儿、婴儿、少年、青少年、成人或老年患者。

如本文所用且除非另有说明，术语“卤基”、“卤素”或“卤化物”是指氟、氯、溴或碘的任何基团。

如本文所用且除非另有说明，术语“烷基”是指可以是直链或支链的饱和烃链基团，其含有指定数目的碳原子或另外具有一至十、一至八、一至六或一至四个碳原子，并且其通过单键附接到分子的其余部分。在某些实施方案中，烃链任选地被氘化。例如，C

如本文所用且除非另有说明，术语“环烷基”是指具有指定数目的环碳原子或另外具有三至十个碳原子并且完全饱和或部分不饱和的单环、双环、三环或其他多环烃基。多环环烷基可以是稠合的、桥连的或螺环系统。环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基，和部分不饱和烃环，诸如环丁烯、环戊烯和环己烯。在一些实施方案中，环烷基是单环C

如本文所用且除非另有说明，术语“卤代烷基”是指其中至少一个氢原子被卤素替代的烷基。在一些实施方案中，多于一个氢原子(例如，2、3、4、5或6个)被卤素替代。在这些实施方案中，氢原子可各自被相同的卤素(例如，氟)替代，或者氢原子可被不同卤素(例如，氟和氯)的组合替代。“卤代烷基”还包括其中所有氢被卤素替代的烷基部分(本文中有时称为全卤代烷基，例如全氟烷基，诸如三氟甲基)。

如本文所用且除非另有说明，术语“烷氧基”是指式-O-(烷基)的基团。烷氧基可以是例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基或己氧基。术语C

如本文所用且除非另有说明，术语“芳基”意指每个环中至多6个成员的任何稳定的单环或双环碳环基团，其中至少一个环是芳族的。芳基的实例包括苯基、萘基、四氢萘基、茚满基或联苯基。

如本文所用且除非另有说明，术语“环烷基烷基”是指被环烷基取代的烷基，如那些术语“烷基”和“环烷基”中的每一者在本文中所定义。术语C

如本文所用且除非另有说明，术语“杂芳基”表示稳定的芳族5元、6元或7元单环环系统或稳定的9元或10元稠合双环环系统，其由碳原子和一至四个或一至三个选自由N、O和S组成的组的杂原子组成，其中氮和硫杂原子可任选地被氧化，并且氮杂原子可任选地被季铵化。在“杂芳基”是双环基团的情况下，第二环不需要包含杂原子并且可与苯环稠合。因此，双环“杂芳基”包括例如由碳原子和一至四个或一至三个如上定义的杂原子组成的与苯环稠合的稳定的5元或6元单环芳族环，或第二单环“杂芳基”，或如上定义的“杂环基”、“环烷基”或“环烯基”。杂芳基的实例包括但不限于苯并咪唑、苯并吡唑、苯并异噻唑、苯并异噁唑、苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻吩、苯并三唑、苯并噁唑、呋喃、呋咱、咪唑、吲唑、吲哚、吲嗪、异喹啉、异噻唑、异噁唑、萘啶、噁二唑、噁唑、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三嗪、三唑、苯并咪唑、苯并噻二唑、异吲哚、吡咯并吡啶、咪唑并吡啶(诸如咪唑并[1,2-a]吡啶)、吡唑并吡啶、吡咯并嘧啶及其N-氧化物。

如本文所用且除非另有说明，术语“水合物”是指本文所提供的化合物或其盐，其进一步包括通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的水。

如本文所用且除非另有说明，术语“体内”是指在活生物体或活系统中发生的过程或事件。

如本文所用且除非另有说明，术语“草酸钙结石”是指包含作为肾、膀胱或尿道中的结石或斑块存在的草酸钙盐的结晶物质。

术语“高草酸尿症”是指特征在于尿或血浆中升高的草酸盐水平或存在肾结石的病状。在某些实施方案中，高草酸尿症的特征在于尿草酸盐排泄率大于约0.5mmol/1.73m

“原发性高草酸尿症”是指特征在于草酸盐的过度产生和/或调节体内草酸盐水平的一种或多种酶的产生或功能缺陷的病状。在某些实施方案中，原发性高草酸尿症与丙氨酸:乙醛酸氨基转移酶(AGT)的表达缺陷或编码AGT的基因AGXT的突变相关，并且可分类为1型原发性高草酸尿症或PH1。在某些实施方案中，原发性高草酸尿症与乙醛酸还原酶(GR)的表达缺陷或编码GR的基因(GRPHR)的突变相关，并且其可分类为2型原发性高草酸尿症或PH2。在其他实施方案中，原发性高草酸尿症与4-羟基-2-酮戊二酸醛缩酶(HOGA)的表达缺陷或编码HOGA的基因(HOGA1)的突变相关，并且其可分类为3型原发性高草酸尿症或PH3。

“继发性高草酸尿症”是指特征在于尿或血浆中升高的草酸盐水平或存在肾结石的病状。继发性高草酸尿症包括例如由饮食的草酸的摄入和肠吸收增加、草酸盐前体的过度摄入和肠微生物区系的改变引起的肠源性高草酸尿症。继发性高草酸尿症还包括病因不明的特发性高草酸尿症。

如本文所用且除非另有说明，术语“溶剂合物”是指一种或多种溶剂分子与本文所提供的化合物缔合形成的溶剂合物。术语“溶剂合物”包括水合物(例如，一水合物、脱水物、三水合物等)。

术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”通常指将一种或多种药物物质，尤其是至少一种式(I)化合物施用于患有疾病、病症或病状，或患有疾病或病症的症状或病状，或患有疾病或病症的倾向的患者，其目的是治愈(cure)、治愈(heal)、缓解、改变、减轻、改善、减缓疾病、病症或病状或其一种或多种症状的进展、延迟其发作、降低其风险、改善或影响疾病、病症或病状或其一种或多种症状，或对疾病、病症或病状或其复发的易感性。

术语“治疗有效量”或“有效量”是足以实现有益的或期望的临床结果的量。有效量可以一次或多次施用进行施用。有效量通常足以减轻、改善、稳定、逆转、减缓或延迟疾病状态的进展或治疗疾病、病症或病状。

在本文的描述中，如果化学名称和化学结构之间存在任何差异，则以化学结构为准。

B.化合物

在某些实施方案中，本文提供了具有式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

Y是O或S；

X

X

R

R

R

R

R

条件是该化合物不选自：

/>

在某些实施方案中，本文提供了具有式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

Y是O或S；

X

X

R

R

R

R

R

条件是(i)当R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中选择取代基R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

Y是O或S；

X

X

R

R

R

R

R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了具有式(Ia)的式(I)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

在某些实施方案中，本文提供了具有式(Ia)的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

Y是O或S；

X

X

R

R

R

在某些实施方案中，本文提供了式(Ia)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中选择取代基R

在某些实施方案中，本文提供了具有式(Ia)的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了具有式(Ib)的式(I)或(Ia)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

在某些实施方案中，本文提供了式(Ib)化合物，其中R

在又某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)或(Ib)的化合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了具有式具有式(Ic)的式(I)、(Ia)或(Ib)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

在某些实施方案中，本文提供了式(Ic)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(II)化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：

X

X

R

R

R

在某些实施方案中，本文提供了式(II)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了具有式(IIa)的式(II)化合物

或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

在某些实施方案中，本文提供了式(II)或(IIa)的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在某些实施方案中，本文提供了式(II)或(IIa)的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R

在又某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)的化合物，其中Y是S，并且其他变量如本文别处针对本文别处的式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)所述。

在又某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物，其中R

在又某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物，其中R

在又某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物，其中X

在某些实施方案中，本文提供了式(I)化合物，其中该化合物选自：

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-4-(4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(2-环丙基乙基)-3-(4-氟苯基)-4-(4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噁唑-4-甲酸；

2-(4-(3-氯-4-氨磺酰基苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(3-(3-氰基苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(3,4-二氟苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(3-(二氟甲氧基)-4-氟苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(3,5-二氟苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(3-(4-氯苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(3-(3-氯苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-苯基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(4-(二氟甲基)苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(3-(4-氰基-3-甲氧基苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3-氟-5-甲氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-3-(3,5-二氯苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-

1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3,5-二氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸；和

2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸，

或其药学上可接受的盐或溶剂合物。

在某些实施方案中，本文提供了本文所公开的化合物的同位素富集的类似物，例如氘代类似物，以改善化合物的药代动力学(PK)、药效学(PD)和毒性特征。

在某些实施方案中，本文提供了药物组合物，其包含式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，和药学上可接受的载体。

本文考虑了上文针对各种变量所述的基团的任何组合。在整个说明书中，本领域技术人员选择其基团和取代基以提供稳定的部分和化合物。

本公开的化合物包括化合物本身，以及它们的盐、溶剂合物和盐的溶剂合物(如果适用的话)。用于本公开的目的的盐优选地是根据本公开的化合物的药学上可接受的盐。还包括本身不适于药物用途但可用于例如分离或纯化根据本公开的化合物的盐。例如，盐可在阴离子与本文所述的化合物上的带正电的取代基(例如，氨基)之间形成。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根和乙酸根。同样，盐也可在阳离子与本文所述的化合物上的带负电的取代基(例如，羧酸根)之间形成。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵阳离子诸如四甲基铵离子。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指酸或碱加成盐，包括但不限于由具有酸性部分的式(I)化合物与药学上可接受的阳离子例如钠、钾、镁、钙、铝、锂和铵形成的碱加成盐。

合适的盐的列表可在Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页；S.M.Berge等人,“PharmaceuticalSalts”,J.Pharm.Sci.1977,66,1-19；和“Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use.A Handbook”；Wermuth,C.G.和Stahl,P.H.(编)Verlag Helvetica ChimicaActa,Zurich,2002[ISBN 3-906390-26-8]中找到；其中的每一者全文以引用方式并入本文中。

在本公开的上下文中，溶剂合物指定为根据本公开的化合物的那些形式，其通过与溶剂分子的化学计量配位而形成固态或液态的络合物。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位。溶剂合物的形成在“Solvents and Solvent Effects in OrganicChemistry”；Reichardt,C.和Welton T.；John Wiley&Sons,2011[ISBN：978-3-527-32473-6]中更详细地描述，其内容全文以引用方式并入本文中。

在一些实施方案中，式(I)化合物以药学上可接受的盐形式存在。在一些实施方案中，式(I)化合物以游离酸形式存在。在一些实施方案中，式(I)化合物以游离酸形式存在。在一些实施方案中，式(I)化合物以溶剂合物的形式存在。在一些实施方案中，溶剂合物是水合物。在一些实施方案中，式(I)化合物以药学上可接受的盐形式的溶剂合物存在。

本公开还涵盖根据本公开的化合物的所有合适的同位素变体，无论是否是放射性的。根据本公开的化合物的同位素变体应理解为意指其中根据本公开的化合物内的至少一个原子已被具有相同原子序数但具有与自然界中通常或主要存在的原子质量不同的原子质量的另一个原子交换的化合物。可掺入到根据本公开的化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、氟、氯、溴和碘的那些，诸如

在某些实施方案中，本文所提供的化合物具有促进肝脏靶向的组织分布特征，并且使其在肝脏中的暴露最大化，同时使在其他组织(例如，血浆、肌肉、脾脏、睾丸)中的暴露最小化的物理化学性质。在某些实施方案中，本文所提供的化合物在啮齿动物中表现出肝脏靶向的组织分布特征，这通过在肝脏中比在其他组织(例如，血浆、肌肉)中更大的药物暴露来证明，例如在PO给药后4h或PO给药后24h。在某些实施方案中，本文所提供的化合物具有促进肝脏中表达的OATP受体亚家族的摄取的物理化学性质。OATP亚家族成员OATP1B1、OATP1B3和OATP2B1是主要在人肝细胞上表达的转运蛋白，在人肝细胞中它们介导底物从血液到肝脏的摄取。因此，与全身和外周组织相比，OATP底物预期在肝脏中具有更高的暴露。在某些实施方案中，本文所提供的化合物是OATP的底物。在某些实施方案中，本文所提供的化合物是OATP1B1、OATP1B3、OATP2B1或其组合的底物。在又某些实施方案中，本文所提供的化合物具有使化合物被动扩散到缺乏膜转运蛋白的脱靶组织中最小化的物理化学性质，从而促进肝脏选择性。在某些实施方案中，本文所提供的化合物的辛醇-水分配系数(XlogP)落在使其被动扩散潜力最小化、促进肝脏靶向和减少暴露于肝脏外组织的范围内。在某些实施方案中，本文所提供的化合物具有约4至约6.5的计算的辛醇-水分配系数(XlogP)。在某些实施方案中，本文所提供的化合物具有约4至约6的XlogP。在又某些实施方案中，本文所提供的化合物具有约4至约5.5的XlogP。在又某些实施方案中，本文所提供的化合物具有约4至约5的XlogP。在又某些实施方案中，本文所提供的化合物具有约4.5至约5的XlogP。

C.制剂

如本文所用，术语“药物组合物”旨在涵盖包含活性成分和构成载体的惰性成分的产品，以及由任何两种或更多种成分的组合、络合或聚集，或由一种或多种成分的解离，或由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用直接或间接得到的任何产品。因此，本公开的药物组合物涵盖通过将本公开的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其盐的溶剂合物和药学上可接受的载体混合来制备的任何组合物。

术语“药学上可接受的载体”是指可与本公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、溶剂合物的盐或前药一起施用于患者的载体或佐剂，并且当以足以递送治疗量的化合物的剂量施用时，其不破坏其药理活性并且是无毒的。

所施用的量取决于化合物制剂、施用途径等。并且通常凭经验确定，并且将必然取决于靶标、宿主和施用途径等而发生变化。通常，根据具体应用，单位剂量制剂中活性化合物的量可从约1毫克(mg)至约100mg或从约1mg至约1000mg变化或调整。为了方便起见，可将总日剂量分开并在一天中分批施用。

用于口服施用的本发明药物组合物的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)湿润剂诸如甘油，d)崩解剂诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂诸如石蜡，f)吸收促进剂诸如季铵化合物，g)润湿剂例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂诸如高岭土和膨润土，和i)润滑剂诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物混合。在胶囊剂、片剂以及丸剂的情况下，剂型还可包括缓冲剂。

类似类型的固体药物组合物也可用作使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊剂中的填充剂。

片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的本发明药物组合物的固体剂型可用包衣和外壳诸如肠溶包衣和其他药物包衣来制备。它们可任选地含有乳浊剂，并且还可以是仅在或优选在肠道的某一部分任选地以延迟方式释放活性成分的制剂。可使用的包埋药物组合物的实例包括聚合物质和蜡。

活性化合物也可呈微囊形式，适当时，连同一种或多种以上提及的赋形剂一起。

用于口服施用的本发明药物组合物的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂(例如水或其他溶剂)、增溶剂和乳化剂(诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺)、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。

除了活性化合物之外，本发明化合物的混悬剂还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。

本公开的用于注射的药物组合物包含药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、混悬剂或乳剂以及用于在临用前重构为无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射的有机酯诸如油酸乙酯。适当流动性可例如通过使用包覆材料(如卵磷脂(lecithin))、在分散液的情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂加以维持。

除了惰性稀释剂之外，这些药物组合物还可含有佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。可通过加入各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等来确保防止微生物的作用。还可能希望包括等渗剂，诸如糖、氯化钠等。可注射药物形式的延长吸收可通过加入延迟吸收的药剂诸如单硬脂酸铝和明胶来实现。可将化合物掺入缓释或靶向递送系统诸如聚合物基质、脂质体和微球中。此类制剂可提供更有效的化合物分布。

作为可注射制剂的药物组合物可例如通过经细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体药物组合物形式的灭菌剂来灭菌，该无菌固体药物组合物可在使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。

用于局部施用本公开的化合物或药物组合物的剂型包括散剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

本文所述的化合物和组合物可例如以范围为每4至120小时约0.01毫克/千克(mg/kg)至约1000mg/kg(例如，约0.01至约100mg/kg，约0.1至约100mg/kg)的剂量或根据特定药物、剂型和/或施用途径的要求口服、肠胃外(例如，皮下、皮内、静脉内或肌内)、局部、直肠、经鼻舌下或口腔施用。其他施用途径包括肠内、动脉内、腹膜内和鞘内施用。动物和人的剂量的相互关系(基于每平方米体表的毫克数)由Freireich等人，CancerChemother.Rep.50,219-244(1966)描述。体表面积可根据患者的身高和体重来近似确定。参见，例如，Scientific Tables,Geigy Pharmaceuticals,Ardsley,N.Y.,537(1970)。在某些实施方案中，组合物通过口服施用或注射来施用。本文的方法考虑了施用有效量的化合物或化合物组合物以实现期望的或所述的效果。通常，本公开的药物组合物将每天施用约1次至约6次，或另选地作为连续输注施用。此类施用可用作慢性或急性治疗。

可能需要比上述剂量更低或更高的剂量。用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合、疾病、病状或症状的严重程度和病程、患者对疾病的倾向以及治疗医师的判断。

剂型包括约0.001mg至约2,000mg(包括约0.001mg至约1,000mg、约0.001mg至约500mg、约0.01mg至约250mg)的如本文别处所定义的式(I)化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)。剂型还可包括药学上可接受的载体和/或另外的治疗剂。

合适的剂量水平可通过任何合适的方法来确定。优选地，对于局部施用，活性物质以每天1至4次的频率施用，或者如果使用药物递送系统，则频率更低。然而，本公开的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平和施用时间过程可以变化，以获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望的治疗反应而对患者没有不可耐受的毒性的活性成分的量。在某些情况下，剂量可偏离所述量，特别是随着患者的年龄、性别、体重、饮食和一般健康状况、施用途径、对活性成分的个体反应、制剂的性质和施用发生的时间或间隔而变化。因此，在一些情况下，以小于上述最小量进行管理是令人满意的，而在其他情况下，可超过所述上限。在施用较大量的情况下，可建议将这些分成在一天内分布的多个单独剂量。

D.化合物活性的评估

标准生理学、药理学和生物化学程序可用于测试化合物以鉴别具有作为LDH抑制剂的生物活性的那些化合物。

生物化学测定包括重组人LDH酶测定，其中将纯化的重组人乳酸脱氢酶A(LDHA)与测试化合物、底物丙酮酸和辅酶NADH+一起孵育，并且通过丙酮酸转化为乳酸时NAD的形成来测量其酶活性。

LDH抑制剂也可在由原代小鼠肝细胞组成的离体测定中评估。分离后，将存活的野生型鼠肝细胞与测试化合物在丙酮酸的存在下孵育。然后通过测量细胞将丙酮酸转化为乳酸来评估化合物调节LDH酶活性的效力。

基因工程化的丙氨酸-乙醛酸氨基转移酶缺陷型小鼠，诸如基因敲除AGT

E.使用方法

LDH抑制剂可证明对于由草酸增加引起的疾病或其中草酸减少可能是有益的疾病是有效的。一个实例是原发性高草酸尿症，这是由草酸盐的过度产生，例如，由于其前体乙醛酸盐的过度产生或积累引起的疾病。因此，本文提供了治疗或预防与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症的方法。与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症包括高草酸尿症、慢性肾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)或肾结石疾病。在某些实施方案中，高草酸尿症与各种消化或肠道疾病相关，诸如克罗恩病、先天性巨结肠症(Hirschspring's disease)、囊性纤维化和慢性胆道或胰腺病变。在某些实施方案中，高草酸尿症与减肥手术和回肠切除相关。在某些实施方案中，慢性肾病与糖尿病、高血压、急性肾损伤的既往发作、心血管疾病或血脂异常相关。在某些实施方案中，肾结石疾病是特发性肾结石疾病，或与甲状旁腺功能亢进或其他钙代谢障碍相关的肾结石疾病。在某些实施方案中，升高的草酸盐水平与糖尿病、肥胖症或代谢综合征(MS)相关。本文所提供的化合物和组合物可用于治疗或预防高草酸尿症，包括原发性高草酸尿症和亚型PH1、PH2和PH3，以及继发性高草酸尿症，包括肠源性高草酸尿症和特发性高草酸尿症。本文所提供的化合物和组合物可用于治疗例如在肾、尿道或膀胱中的草酸钙结石形成，治疗在肾外的其他组织和器官中的草酸钙沉积(全身性草酸过多症)，或者预防或延迟肾损伤或慢性肾病(CKD)或终末期肾病(ESRD)的发作。

在某些实施方案中，升高的草酸盐水平意指尿草酸盐排泄率大于约0.5mmol/1.73m

治疗原发性高草酸尿症的方法可包括选择具有PH1、PH2或PH3潜在的基因突变的患者的步骤，例如，在施用本文所提供的任何化合物或组合物之前，使用诊断测试来检测AGXT、GRHPR、HOGA1基因中突变的存在，或检测AGXT、GRHPR、HOGA1基因的表达水平或活性。在施用本文所提供的化合物或组合物之前，还可通过肾结石活组织检查、测量尿中草酸盐、钙、柠檬酸盐、钠、镁、尿酸盐、尿pH和尿量的水平或任何此类测量的组合来诊断高草酸尿症患者。

可在患者中通过例如在数天、数周、数月或数年的过程中血浆或尿草酸盐的减少来测量药剂的功效。血浆和尿草酸盐可以几种方式在患者中测量，包括生物介质(尿或血浆)中草酸盐的浓度或毫克数、草酸盐的摩尔数或草酸盐的浓度。此外，可将草酸盐归一化为其他蛋白质(诸如肌酸酐)，或在24h内进行评估，和/或基于年龄、体重或体表面积进行归一化。

在某些实施方案中，本文提供了治疗与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症的方法，其包括向患有此类疾病或病症的受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。在某些实施方案中，升高的草酸盐水平是升高的尿草酸盐水平。在某些实施方案中，升高的草酸盐水平是升高的血浆草酸盐水平。在某些实施方案中，疾病或病症是高草酸尿症、慢性肾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)或肾结石疾病。在某些实施方案中，与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症是高草酸尿症。在某些实施方案中，高草酸尿症是原发性高草酸尿症或继发性高草酸尿症。在某些实施方案中，与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症是原发性高草酸尿症、特发性高草酸尿症或特发性草酸肾结石疾病。在又某些实施方案中，原发性高草酸尿症是1型原发性高草酸尿症(PH-1)、2型原发性高草酸尿症(PH-2)或3型原发性高草酸尿症(PH-3)。在又某些实施方案中，与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症与AGXT、GRHPR或HOGA1突变或其突变的组合相关。

在某些实施方案中，本文提供了治疗高草酸尿症的方法，其包括向患有此类疾病或病症的受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。在某些实施方案中，本文提供了治疗高草酸尿症、慢性肾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)或肾结石疾病的方法，其包括向患有此类疾病或病症的受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

在某些实施方案中，本文提供了治疗1型原发性高草酸尿症(PH-1)、2型原发性高草酸尿症(PH-2)或3型原发性高草酸尿症(PH-3)的方法，其包括向患有此类疾病或病症的受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。在某些实施方案中，本文提供了治疗与AGXT、GRHPR或HOGA1突变或其突变的组合相关的疾病或病症的方法，其包括向患有此类疾病或病症的受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

在某些实施方案中，本文提供了降低有需要的受试者的草酸盐水平的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。在某些实施方案中，本文提供了治疗有需要的受试者的肾结石形成的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物。

在某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物，其用于治疗与升高的草酸盐水平相关的疾病或病症。

在某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物，其用于治疗高草酸尿症。在某些实施方案中，本文提供了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物，其用于治疗高草酸尿症、慢性肾病(CKD)、终末期肾病(ESRD)或肾结石疾病。

在某些实施方案中，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物可用于多种联合疗法以治疗上述病状、疾病和病症。因此，本文还考虑了式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(II)或(IIa)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或其药物组合物与另外的药剂组合用于治疗本文所述的病状、疾病和病症的用途。可用于与本文所提供的化合物或组合物共同施用的另外的药剂包括例如降低乙醛酸盐或草酸盐水平的另外的药剂，诸如靶向GO表达的RNAi治疗剂(例如，卢马西兰(lumasiran)(ALN-GO1)，靶向GO的Alnylam's GalNAc-siRNA缀合物)、靶向LDHA的RNAi治疗剂(例如，奈多西兰，靶向LDHA的Dicerna's GalNAc-siRNA缀合物)、草酸合成途径中的其他抑制剂(例如，司替戊醇(stiripentol)，弱LDH抑制剂)，或能够减少外源性草酸的药剂，诸如草酸脱羧酶(例如，瑞洛沙酶(reloxaliase)，以前为ALLN-177)或草酸降解细菌，产甲酸草酸杆菌(oxalobacter formigenes)(例如

在某些实施方案中，本文提供了治疗本文所述的疾病或病症的方法，其还包括向有需要的受试者施用治疗有效量的第二治疗剂。在某些实施方案中，第二治疗剂是乙醛酸盐或草酸盐降低治疗剂。在某些实施方案中，乙醛酸盐或草酸盐降低治疗剂是RNAi治疗剂。在又某些实施方案中，乙醛酸盐或草酸盐降低治疗剂是卢马西兰、奈多西兰、瑞洛沙酶、司替戊醇、产甲酸草酸杆菌或维生素B6。

F.化合物的制备

用于合成的起始材料根据已知的文献程序合成或从商业来源获得，诸如但不限于Sigma-Aldrich、Fluka、Acros Organics、Alfa Aesar、VWR Scientific等。核磁共振(NMR)分析使用具有适当氘代溶剂的Bruker Acuity 300MHz或400MHz分光计进行。NMR化学位移(δ)以百万分率(ppm)为单位表示。LCMS分析使用具有QDA MS检测器的Waters AcquityUPLC，使用Waters C18 BEH 1.7μm，2.1×50mm柱，在3.5分钟内用95:5至0:100H

虽然本文已经示出和描述了本公开的优选实施方案，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，此类实施方案仅作为实例提供。在不脱离本公开的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。可在实践本公开中采用本文所述的本公开的实施方案的各种替代方案。以下权利要求书旨在限定本公开的范围，并且由此覆盖这些权利要求书及其等同物范围内的方法和结构。

本文使用Journal of Organic Chemistry's Author's Guideline中定义的标准缩写和首字母缩写，网址为

表1：缩写

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一般合成方案

在一些实施方案中，本文所述的化合物可如以下一般合成方案中概述的那样制备。

方法A：S

使吡唑中间体A-1与卤代或甲基磺酰基-杂芳基甲酸酯A-2经由S

方法B：溴吡唑的硼基化和铃木偶联

溴吡唑中间体B-1可在Pd催化剂和作为频哪醇硼酸酯来源的B

方法C：吡唑三氟甲磺酸酯的铃木偶联

使三氟甲磺酰基吡唑中间体C-1与各种芳基硼酸或硼酸酯(C-2)经由Pd催化的偶联反应来反应，直接获得2-芳基吡唑。该步骤之后进行酯水解，得到相应的甲酸目标物C-3。

G.实施例

中间体的制备

中间体A：2-(3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

步骤1：2-肼基噻唑-4-甲酸乙酯氢溴酸盐的制备

在23℃下，向N-(硫代氨基甲酰氨基)乙酰胺(1.0当量)在EtOH(0.3M)的搅拌溶液中添加3-溴-2-氧代丙酸乙酯(1.0当量)。将混合物在该温度下搅拌30分钟，然后加热回流2h。将所得混合物在真空下浓缩。通过用MeOH/Et

步骤2：1-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-2-环丙基乙-1-酮的制备

在23℃下，向苯并三唑(4.0当量)在CH

步骤3：1-(3-溴-4-氟苯基)-4-环丙基丁烷-1,3-二酮的制备

在23℃下，向1-(1,2,3-苯并三唑-1-基)-2-环丙基乙酮(1.0当量)在CH

步骤4：4-(2-(3-溴-4-氟苯甲酰基)-4-环丙基-3-氧代丁基)-2-氟苯磺酰胺的制备

将1-(3-溴-4-氟苯基)-4-环丙基丁烷-1,3-二酮(1.0当量)、4-(溴甲基)-2-氟苯磺酰胺(1.1当量)、Cs

步骤5：2-(3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

在23℃下，向4-[2-(3-溴-4-氟苯甲酰基)-4-环丙基-3-氧代丁基]-2-氟苯磺酰胺(1.0当量)在EtOH(0.2M)的搅拌溶液中添加吡咯烷(0.3当量)和对甲苯磺酸(0.5当量)。将所得混合物在该温度下搅拌30分钟。向该混合物中添加2-肼基-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯二氢溴化物(1.2当量)。将反应在氮气下在80℃下搅拌2h。反应完成后，将混合物在真空下浓缩。将残余物通过C18反相柱色谱法，用95:5至15:85H

中间体B：2-(3-(3-溴苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

以与上述中间体A相同的方式制备中间体B，以3-溴代苯乙酮作为起始材料开始。

中间体C：4-(溴甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

步骤1：4-(溴甲基)-2-氟苯磺酰氯的制备

向2-氟-4-甲基-苯磺酰氯(1.0当量)在MeCN(0.4M)的脱气溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(1.1当量)、2,2'-偶氮双(2-甲基丙腈)(0.1当量)，并且将混合物在油浴中加热至80℃持续8小时。将该混合物在减压下浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法，用0至10％EtOAc的己烷溶液作为梯度洗脱来纯化。将选择的级分通过TLC(EtOAc:己烷1:9，UV)监测。将来自以7％ EtOAc的己烷溶液为中心洗脱的主峰的所需级分合并并浓缩，得到呈白色结晶固体状的标题化合物(53％产率)。

步骤2：4-(溴甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向在氮气下并在干冰/丙酮浴中冷却的4-(溴甲基-2-氟苯磺酰氯(1.0当量)在CH

中间体D：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

步骤1：2-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-4-环丙基-3-氧代丁酸乙酯的制备

向4-环丙基-3-氧代丁酸乙酯(1.2当量)、4-(溴甲基)-2-氟-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]苯磺酰胺(中间体C，1.0当量)和溴化锂(0.4当量)在THF(0.2M)的悬浮液中添加N,N-二异丙基乙胺(2.0当量)。将混合物在回流下搅拌6小时。将该混合物冷却至23℃,并在饱和NH

步骤2：4-((5-(环丙基甲基)-3-羟基-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向2-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-4-环丙基-3-氧代丁酸乙酯(1.0当量)在乙醇(0.22M)的溶液中添加水合肼(2.0当量)。将混合物加热至70℃持续2.5小时。将该溶液冷却至23℃，得到白色固体。将该固体过滤，用己烷(0.2体积)洗涤并在真空下干燥18小时，得到呈白色固体状的标题化合物(86％产率)。

步骤3：4-((1-乙酰基-5-(环丙基甲基)-3-羟基-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向4-((5-(环丙基甲基)-3-羟基-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(1.0当量)在吡啶(0.23M)的溶液中添加乙酸酐(0.98当量)，并且将混合物加热至90℃持续48小时。将该混合物在减压下浓缩。将所得油状物在饱和NH

步骤4：4-((1-乙酰基-5-(环丙基甲基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

将4-((1-乙酰基-5-(环丙基甲基)-3-羟基-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(1.0当量)在DMF(0.15M)的溶液在冰浴中冷却。添加固体碳酸铯(2.0当量)，随后添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(1.5当量)。将该混合物在冰浴中搅拌30分钟，然后在23℃下搅拌1小时。将所得混合物用碎冰(0.5体积)淬灭，用饱和NH

步骤5：4-((5-(环丙基甲基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

经由加料漏斗向4-((1-乙酰基-5-(环丙基甲基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(1.0当量)在THF/MeOH(1:1v/v)(0.27M)的溶液中逐滴添加1M氢氧化锂水溶液(1.25当量)。将混合物在23℃下搅拌30分钟。将混合物在冰浴中冷却并且经由加料漏斗逐滴添加1M HCl水溶液(1.1当量)。将该混合物用饱和NH

步骤6：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向在氮气下并在冰浴中冷却的4-((5-(环丙基甲基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(1.0当量)在DMF(0.18M)的溶液中分批添加叔戊醇钠(1.2当量)。将混合物在该温度下搅拌5分钟。此后，添加2-氟噻唑-4-甲酸乙酯(1.1当量)。将所得混合物在冰浴中搅拌15分钟，然后在23℃下搅拌20分钟。LCMS分析表明剩余起始材料。将反应混合物在冰浴中再次冷却。添加叔戊醇钠(0.15当量)，并且将混合物在冰浴中搅拌15分钟，然后在搅拌下在23℃下温热20分钟。将该混合物在乙醚(2×2体积)和水(1体积)之间分配，随后在饱和NH

步骤7：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-羟基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

在23℃下，向2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)在CH

步骤8：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-羟基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)在CH

中间体E：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-羟基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

步骤1：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒并在氮气下的圆底烧瓶中添加2-(3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(中间体A，1.0当量)、4-甲氧基苄基氯(2.5当量)和DMF(0.16M)。将混合物在冰浴中冷却，并且将氢化钠(60％分散体在矿物油中，2.5当量)分批添加到冷却的混合物中。将反应混合物冷搅拌10分钟，然后在23℃下搅拌2小时。将该混合物在EtOAc(2×5体积)和水(4体积)之间分配，并且将合并的有机层在真空下浓缩。将粗油状物直接加载到硅胶预柱上，并通过硅胶柱进行柱色谱法，用0-100％EtOAc的己烷溶液梯度洗脱来纯化。将来自以60％ EtOAc的己烷溶液洗脱的主峰的级分在真空下浓缩，得到呈油状物的标题化合物(76％产率)。

步骤2：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-1H-吡唑-1-基)噻唑--4-甲酸乙酯(1.0当量)、双(频哪醇)二硼(2.0当量)、Pd(dppf)Cl

步骤3：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-羟基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)在甲醇(0.07M)和DMF(0.07M)的悬浮液中添加脲-过氧化氢加合物(2.0当量)。将混合物在23℃下搅拌21小时。将该混合物在真空下浓缩以除去MeOH。将该溶液在饱和NH

中间体F：4-环丙基-1-(4-氟苯基)丁烷-1,3-二酮的制备

步骤1：1-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-2-环丙基乙-1-酮的制备

向配备有磁力搅拌棒并在N

步骤2：4-环丙基-1-(4-氟苯基)丁烷-1,3-二酮的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加1-(苯并三唑-1-基)-2-环丙基-乙酮(1.2当量)、4'-氟苯乙酮(1.0当量)和CH

中间体G：4-((5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟苯磺酰胺的制备

步骤1：4-(4-环丙基-2-(4-氟苯甲酰基)-3-氧代丁基)-2-氟苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加4-环丙基-1-(4-氟苯基)丁烷-1,3-二酮(中间体F，1.0当量)和DMSO(0.4M)。将溶液用碳酸铯(1.5当量)和碘化钾(1.0当量)处理。将所得悬浮液在23℃下搅拌30分钟。此后，添加4-(溴甲基)-2-氟苯磺酰胺(1.1当量)。将混合物在23℃下搅拌2h，并且在通过LCMS完成反应后，将反应混合物用EtOAc处理，随后添加1MHCl水溶液，直到水层pH为～2。将混合物搅拌10分钟并分配到分液漏斗中。将有机层移除，经MgSO

步骤2：4-((5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)甲基)-2-氟苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加4-[4-环丙基-2-(4-氟苯甲酰基)-3-氧代丁基]-2-氟苯磺酰胺(1.0当量)和EtOH(0.3M)。将液体一水肼合(6.0当量)添加到烧瓶中，并且将溶液在油浴中加热至70℃持续2h。LC-MS分析表明起始材料的消耗和产物的形成。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得黄色油状物加载到硅胶预柱中并干燥。将混合物通过硅胶柱色谱法，在25min内用80:20至0:100己烷:EtOAc作为梯度洗脱来纯化。将含有所需产物的级分(75％至100％ EtOAc)浓缩并在真空下干燥，得到呈白色固体状的标题产物(76％产率)。

中间体H：2-(甲基磺酰基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

步骤1：2-(甲基硫烷基)-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-氯-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、DMF(0.9M)、K

步骤2：2-(甲基磺酰基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-(甲基硫烷基)-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)和CH

实施例的制备

实施例1：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡

步骤1：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒并在N

步骤2：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-[5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基-苯基)甲基]吡唑-1-基]噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)和THF/MeOH(1:1v/v，0.2M)。将混合物在23℃下搅拌，直到大部分固体溶解。添加1.0M LiOH水溶液(2.5当量)。将反应在23℃下搅拌2h，并且将混合物通过逐滴添加浓甲酸淬灭。通过反相柱色谱法，使用C18柱，用90:10至0:100H

实施例2：2-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄

步骤1：2-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向2-[5-(环丙基甲基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基-苯基)甲基]-3-(三氟甲基磺酰氧基)吡唑-1-基]噻唑-4-甲酸乙酯(中间体D，1.0当量)、tBuXPhos-Pd-G3(0.1当量)和(3-氰基-4-氟苯基)硼酸(2.0当量)在1,4-二噁烷(0.11M)的混合物中添加水(0.001M)和磷酸钾(3.0当量)。将该混合物在N

步骤2：2-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向圆底烧瓶中添加2-(3-(3-氰基-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、THF(0.06M)、MeOH(0.06M)和1MLiOH水溶液(1.0当量)。将反应在23℃下搅拌2小时，此时LCMS显示完全转化为产物。通过反相柱色谱法，使用C18柱，用90:10至0:100H

实施例3：2-(4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)

步骤1：4-溴-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑的制备

向圆底烧瓶中添加3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑(1.0当量)和MeCN(0.3M)。将混合物在冰浴中冷却至0℃，并且添加N-溴琥珀酰亚胺(1.5当量)。将反应在23℃下搅拌18h过夜。LCMS分析表明所有起始材料已经转化为溴化产物。将反应混合物在EtOAc(2体积)和饱和NaHCO

步骤2：2-(4-溴-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向圆底烧瓶中添加4-溴-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑(1.0当量)、2-溴噻唑-4-甲酸乙酯(1.5当量)、碳酸钾(3.0当量)和DMF(0.3M)。将混合物在100℃下搅拌18h过夜。LCMS分析表明反应完成。将混合物过滤以移除大部分碳酸钾固体。将滤液直接加载在硅胶预柱上并干燥。将混合物通过硅胶柱色谱法，在20min内用80:20至0:100己烷:EtOAc作为梯度洗脱来纯化。将含有所需产物的级分浓缩并在真空下干燥，得到呈黄色固体状的标题产物(43％产率)。

步骤3：2-(4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的反应瓶中添加B

步骤4：2-(4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-(4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)和THF/MeOH(1:1v/v，0.3M)。将混合物在23℃下搅拌10分钟，直到大部分固体溶解。添加1M LiOH水溶液(3.0当量)，得到澄清溶液。将反应在23℃下搅拌1h。此时的LC-MS分析显示起始材料完全转化。将反应混合物用1M HCl水溶液酸化至pH～2。通过反相制备型HPLC柱(C18，5μm柱)，在25分钟内用90:10至0:100水:MeCN+0.1％甲酸作为梯度洗脱来纯化，收集所有峰。将含有所需产物的级分浓缩并冻干过夜，得到呈白色粉末状的标题产物(83％产率)。LC-MS(ESI)m/z 491(M+H)

实施例4：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡

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步骤1：1-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)丙-1-酮的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加苯并三唑(1.0当量)、三乙胺(2当量)和CH

步骤2：1-(3-溴-4-氟苯基)戊烷-1,3-二酮的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加1-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)丙-1-酮(1.5当量)、1-(3-溴-4-氟苯基)乙-1-酮(1.0当量)和CH

步骤3：4-(2-(3-溴-4-氟苯甲酰基)-3-氧代戊基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加1-(3-溴-4-氟苯基)戊烷-1,3-二酮(5.0当量)和DMSO(0.14M)。将溶液用碳酸铯(1.2当量)处理，并且将所得悬浮液在23℃下搅拌30分钟。此时，添加4-(溴甲基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(以与中间体C相同的方式制备，1.0当量)。将混合物在23℃下搅拌3h，并且反应完成后，将混合物用EtOAc(5体积)处理，随后添加1M HCl水溶液(5体积)，确保水层为酸性(pH～2)。将混合物搅拌10分钟并分配到分液漏斗中。将有机层移除，经MgSO

步骤4：4-((3-(3-溴-4-氟苯基)-5-乙基-1H-吡唑-4-基)甲基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加4-(2-(3-溴-4-氟苯甲酰基)-3-氧代戊基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(1.0当量)和EtOH(0.3M)。将浓一水合肼(6.0当量)添加到烧瓶中，并且将溶液在油浴中加热至70℃持续2h。LC-MS分析表明起始材料的消耗和产物的形成。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将所得黄色油状物加载到硅胶预柱中并干燥。将混合物通过硅胶柱色谱法，在25min内用80:20至0:100己烷:EtOAc作为梯度洗脱来纯化。将在75％至100％ EtOAc的己烷溶液之间洗脱的含有所需产物的级分浓缩并在真空下干燥，得到呈白色固体状的标题产物(76％产率)。

步骤5：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)苄基)-3-(3-溴-4-氟苯基)-5-乙基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加4-((3-(3-溴-4-氟苯基)-5-乙基-1H-吡唑-4-基)甲基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺(1.0当量)和DMF(0.07M)。添加氢化钠(60％分散体在矿物油中，1.5当量)，并且搅拌10分钟后，将反应混合物在冰浴中冷却至0℃。添加2-氟噻唑-4-甲酸乙酯(1.2当量)，并且将反应混合物在23℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(4体积)稀释，并用EtOAc(5体积)萃取。将有机层在减压下浓缩，并且将所得黄色油状物加载到预柱中并干燥。将混合物通过硅胶柱色谱法，在25min内用80:20至0:100己烷:EtOAc作为梯度洗脱来纯化。将从75％至100％ EtOAc的己烷溶液中洗脱的含有所需产物的级分浓缩并在真空下干燥，得到呈白色固体状的标题产物(62％产率)。

步骤6：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)苄基)-5-乙基-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)苄基)-3-(3-溴-4-氟苯基)-5-乙基-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、MeOH(0.02M)和CH

步骤7：2-(5-乙基-3-(4-氟苯基)-4-(4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向圆底烧瓶中添加2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)苄基)-5-乙基-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)和TFA(100当量)。将反应在23℃下搅拌1小时，然后在减压下浓缩。向所得固体粗品中添加1M LiOH水溶液(10当量)、MeOH(0.04M)和THF(0.04M)。将所得混合物在50℃下加热3小时。通过反相柱色谱法，使用C18柱，用90:10至0:100H

以与实施例4类似的方式，通过在第一步中用相应的烷基甲酸代替丙酸来制备以下化合物。

实施例7：2-(5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基

步骤1：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-羟基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(中间体E，1.0当量)、三苯基膦(2.3当量)、异丙醇(3.0当量)和CH

步骤2：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)在THF/MeOH(1:1v/v，0.02M)的溶液中添加1M LiOH水溶液(8.0当量)，并且将混合物加热至40℃保持16小时。将该混合物在真空下浓缩以移除MeOH和THF。然后将残余物用甲酸(8.0当量)酸化。将该混合物在CH

步骤3：2-(5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3-氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟-3-异丙氧基苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸(1.0当量)在CH

实施例8：2-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-

步骤1：2-[3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基苯基)甲基]吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-[3-(3-溴-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基苯基)甲基]吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(中间体A，1.0当量)、DMF(0.25M)、FeCl

步骤2：2-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-[3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(环丙基甲基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基苯基)甲基]吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、MeOH(0.1M)和H

实施例9：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡

步骤1：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噁唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒并在N

步骤2：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1-吡唑-1-基)噁唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌棒并在N

实施例10：2-(4-(3-氯-4-氨磺酰基苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡

/>

步骤1：2-氯-4-(4-环丙基-2-(4-氟苯甲酰基)-3-氧代丁基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中放入4-环丙基-1-(4-氟苯基)丁烷-1,3-二酮(中间体F，1.0当量)、4-(溴甲基)-2-氯-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]苯磺酰胺(以与中间体C相同的方式制备，0.5当量)、K

步骤2：2-氯-4-[[3-(环丙基甲基)-5-(4-氟苯基)-2H-吡唑-4-基]甲基]-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中放入2-氯-4-[4-环丙基-2-(4-氟苯甲酰基)-3-氧代丁基]-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]苯磺酰胺(1.0当量)、一水合肼(8.0当量)和EtOH(0.11M)。将所得溶液在油浴中加热至70℃持续1h。LC-MS分析表明起始材料的消耗和产物的形成。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物上样到硅胶柱上，并用乙酸乙酯/石油醚(2:3)洗脱。将含有产物的级分合并，浓缩并在真空下干燥，得到呈黄色固体状的标题化合物(50％产率)。

步骤3：2-[4-[(4-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨磺酰基]-3-氯苯基)甲基]-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-氯-4-[[3-(环丙基甲基)-5-(4-氟苯基)-2H-吡唑-4-基]甲基]-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]苯磺酰胺(1.0当量)、2-甲磺酰基-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(中间体H，5.0当量)、DMSO(0.03M)和K

步骤4：2-(4-(3-氯-4-氨磺酰基苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌器的圆底烧瓶中添加2-[4-[(4-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨磺酰基]-3-氯苯基)甲基]-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、TFA(0.12M)和三乙基硅烷(0.03M)。将所得混合物在23℃下搅拌4h。监测反应的起始材料消耗，并且当完成时，在减压下浓缩。将粗残余物上样到硅胶柱上，并且将柱用石油醚/乙酸乙酯(2:1)洗脱。将含有产物的级分合并，浓缩并在真空下干燥，得到呈白色固体状的标题化合物(84％产率)。

步骤5：2-[4-[(3-氯-4-氨磺酰基苯基)甲基]-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌器的圆底烧瓶中添加2-(4-(3-氯-4-氨磺酰基苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、MeOH(0.02M)、H

实施例11：2-(3-(3-氰基苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-

/>

步骤1：2-(3-(3-氰基苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向反应瓶中添加2-(3-(3-溴苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(中间体B，1.0当量)、氰化锌(2.0当量)、Pd(PPh

步骤2：2-(3-(3-氰基苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中添加2-(3-(3-氰基苯基)-5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、THF/MeOH(1:1v/v，0.2M)和1M LiOH水溶液(3当量)。将混合物在23℃下搅拌2小时，此后LCMS表明水解完成。将反应用甲酸淬灭至pH～2。将混合物浓缩并通过C18柱反相制备型HPLC，在25分钟内用90:10至0:100水:MeCN+0.1％甲酸作为梯度洗脱来纯化，收集所有峰。将含有所需产物的级分浓缩并冻干过夜，得到呈白色粉末状的标题产物(89％产率)。LC-MS(ESI)m/z 538(M+H)

实施例12：2-(5-(环丙基甲基)-3-(3,4-二氟苯基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-

向2-[5-(环丙基甲基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基-苯基)甲基]-3-(三氟甲基磺酰氧基)吡唑-1-基]噻唑-4-甲酸乙酯(中间体D)(1.0当量)、tBuXPhos-Pd-G3(0.1当量)和3,4-二氟苯基硼酸(2.0当量)在1,4-二噁烷(0.05M)的混合物中添加无水磷酸钾(3.0当量)。将该混合物用氮气脱气10分钟，然后加热至90℃持续2小时。向该混合物中添加饱和NH

如实施例12中那样，通过用必需的硼酸或硼酸酯代替3,4-二氟苯基硼酸来制备以下实施例。此外，tBuXPhos-Pd-G3可用包括XPhos-Pd-G3和Pd(dppf)Cl

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实施例27：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3,5-二氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-

步骤1：4-(溴甲基)-2,6-二氟苯磺酰氯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中放入2,6-二氟-4-甲基苯磺酰氯(1.0当量)、NBS(1.1当量)、AIBN(0.1当量)和MeCN(0.2M)。将所得悬浮液在-10℃下搅拌4h。LCMS分析表明起始材料的转化，并且将所得混合物在减压下浓缩。将粗产物通过C18柱制备型HPLC，用90:10至50:50水:MeCN洗脱来纯化。将含有产物的级分合并，浓缩并在真空下干燥，得到呈棕黄色油状物的所需化合物(55％产率)。

步骤2：4-(溴甲基)-2,6-二氟-N,N-双(4-甲氧基苄基)苯磺酰胺的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中放入双[(4-甲氧基苯基)甲基]胺(1.0当量)、4-(溴甲基)-2,6-二氟苯磺酰氯(0.6当量)、Na

步骤3：2-(4-(4-(N,N-双(4-甲氧基苄基)氨磺酰基)-3,5-二氟苄基)-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒，用氮气惰性气氛吹扫并维持的圆底烧瓶中添加4-(溴甲基)-2,6-二氟-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]苯磺酰胺(1.0当量)、2-[5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(以与用于合成实施例3的硼基化步骤3中所述相同的方式制备，1.0当量)、Pd(dppf)Cl

步骤4：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3,5-二氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中放入2-[4-[(4-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨磺酰基]-3,5-二氟苯基)甲基]-5-(环丙基甲基)-3-(4-氟苯基)吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、TFA(0.01M)和三乙基硅烷(0.05M)。将所得混合物加热至40℃持续2h。监测反应的起始材料消耗，并且当完成时，将冷却的反应混合物用水(2体积)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×2体积)萃取。将有机层合并，并在减压下浓缩。粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤。

步骤5：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3,5-二氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-1-基)噻唑-4-甲酸的制备

向配备有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中放入2-[5-(环丙基甲基)-4-[(3,5-二氟-4-氨磺酰基苯基)甲基]-3-(4-氟苯基)吡唑-1-基]-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.0当量)、固体LiOH(8.0当量)、MeOH(0.04M)和H

实施例28：2-(5-(环丙基甲基)-4-(3-氟-4-氨磺酰基苄基)-3-(3,4,5-三氟苯

向2-[5-(环丙基甲基)-4-[(3-氟-4-氨磺酰基-苯基)甲基]-3-(三氟甲基磺酰氧基)吡唑-1-基]噻唑-4-甲酸乙酯(中间体D，1.0当量)、tBuXPhos-Pd-G3(0.1当量)和3,4,5-三氟苯基硼酸(2.0当量)在1,4-二噁烷(0.06M)的混合物中添加无水磷酸钾(3.0当量)。将该混合物用氮气脱气10分钟，然后加热至90℃持续2小时。向该混合物中添加饱和NH4Cl水溶液(1体积)和水(2.5体积)，并用EtOAc(2×5体积)萃取。将合并的萃取物用水(1.5体积)洗涤并在真空下浓缩。将该残余物溶解在THF/MeOH(1:1v/v)(1体积)中。添加1M LiOH水溶液(6.0当量)，并且将混合物在23℃下搅拌16小时。LCMS分析表明水解完成时，将该混合物用甲酸(15当量)酸化。将反应混合物直接加载到C18预柱并干燥。将该物质通过反相柱色谱法，使用C18柱，用含有0.1％HCO2H的10-100％ CH3CN/水梯度洗脱来纯化。将来自以83％CH3CN洗脱的主峰的纯级分合并并冻干，得到呈白色固体状的标题产物(55％产率)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δH 13.22(br s,1H),8.29(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(br s,2H),7.46(dd,J＝6.5,8.5Hz,2H),7.12(d,J＝11.5Hz,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H),4.18(s,2H),3.16(d,J＝7.0Hz,2H),1.15-1.07(m,1H),0.36-0.28(m,2H),0.23-0.17(m,2H)。LC-MS(ESI)m/z 567(M+H)+。MW：566.07

实施例29：人LDHA酶测定

将化合物溶解在DMSO中，并与人重组C-末端His-标记的LDHA(0.070μg/mL)在室温下在由50mM Tris，pH 7.5和100mM NaCl组成的测定缓冲液中在黑壁、透明底部、非结合96孔板中预孵育10min。将在测定缓冲液中含有100μM丙酮酸和100μM NADH的等体积底物溶液添加到各孔中(最终浓度0.035μg/mL酶，50μM丙酮酸，50μM NADH和1％ DMSO)。对于人血清白蛋白(HSA)位移测定，在底物添加(最终浓度10％ HSA)之前，将化合物与酶在含有20％HSA的测定缓冲液中预孵育。在酶标仪(Molecular Devices)上以动力学模式在340nm下监测反应15min。通过绘制吸光度对时间的曲线来确定反应速率。

表2显示了根据效力分类的下述化合物的LDHA酶抑制：IC

表2.

实施例30：原代小鼠肝细胞测定

在由新鲜原代小鼠肝细胞组成的离体测定中评估化合物。使用两步胶原酶灌注技术从野生型小鼠(来自Charles River Labs的C57BL/6NCrl)中分离肝细胞，该技术涉及用Hanks平衡盐溶液和胶原酶对麻醉的小鼠进行连续灌注。分离后，将存活的野生型肝细胞(0.1M细胞/孔)与测试化合物在丙酮酸的存在下孵育，并且通过使用液相色谱与质谱联用测量由细胞产生的乳酸来评估化合物效力。在XDB-C18 4.6×50mm柱(Agilent，目录号927975-902)上以1mL/min的流速实现色谱分离。流动相A由0.1％甲酸的水溶液组成并且流动相B由乙腈组成。从5％ B开始启动梯度程序，保持1分钟，然后在1分钟内从5％ B升至95％ B。在95％ B下保持1分钟后，程序变回5％B。在下一次进样前，将柱用5％B平衡1.5分钟。质谱仪以具有电喷雾电离的负模式操作。使用以下跃迁及其碰撞能量(CE)：对于乳酸，89→43(CE：-16V)，以及对于

表3显示了下述化合物在原代小鼠肝细胞测定中对乳酸产生的抑制。IC

表3.

*以0.4M细胞/孔的肝细胞浓度运行

实施例31：PH1 AGXT敲低小鼠模型

为了评定LDH抑制剂的体内功效，开发了AGXT基因的肝脏敲低小鼠模型。通过向c57bl/6雄性小鼠(8-12周龄，Charles River Labs)全身施用0.4mg/kg siRNA来产生该模型。AGXT siRNA包封在脂质纳米颗粒(XL-10(KL-52)LNP，如WO2016/205410中所述)中，并且其序列为：5'-AcAAcuGGAGGGAcAucGudTsdT-3'(修饰的有义链序列，N：RNA残基；dN：DNA残基；n：2'-O-甲基残基；s：硫代磷酸酯残基)和5'-ACGAUGUCCCUCcAGUUGUdTsdT-3'(修饰的反义链序列，参见上文关于残基修饰的注释)。在第0天和第7天静脉内施用AGXT siRNA，以在整个实验研究中维持>90％的肝脏AGXT表达敲低。AGXT-KD模型在施用后7天内表现出与AGXT基因剔除小鼠类似程度的尿草酸盐排泄的强烈升高(Salido,Proc Natl Acad Sci,2006,103(48),18249–18254)。在开始用LDH抑制剂治疗之前，评定尿中的草酸和肌酸酐水平，并且将动物分配到治疗组。

本文所公开的某些选择的化合物在连续5天内以5mg/kg QD(PO)经口施用，从最初AGXT-siRNA施用后8天开始。一旦口服治疗完成，将小鼠置于代谢笼中，并且在24小时内收集尿液。尿液收集完成后进行处死，并且收集血浆/所选器官并分析药物浓度。

根据制造商的方案，使用市售试剂盒对尿草酸盐和肌酸酐进行定量(TrinityBiotech USA Inc.，目录号591；R&D Systems,Inc.，目录号KGE005)。将草酸盐结果标准化为肌酸酐以解释尿稀释度。如表4和图1所示，发现测试的式(I)化合物在第5天使尿草酸盐(针对肌酸酐标准化)减少，减少范围为17％至55％。

表4.

实施例32：肝靶向组织分布特征研究

在大鼠中，在单次经口(PO)施用测试化合物后测定测试化合物的血浆和肝脏(靶器官)浓度。将雄性Sprague Dawley大鼠(6-8周龄，Charles River Labs)禁食过夜，并且通过PO管饲法施用单剂量的测试化合物(10mg/kg；作为在0.5％甲基纤维素中的悬浮液)。然后在施用测试化合物后4和24h时处死大鼠，并且收集血浆和肝脏组织样品。使用珠磨匀浆机将肝脏组织样品在5体积的水:乙腈(50/50；v/v)混合物中匀浆。使用乙腈通过蛋白质沉淀处理血浆和肝脏匀浆样品，并且通过液相色谱-串联质谱法(SciEx triple quad 5500+和Exion UPLC)测定测试化合物的浓度。

下表5中描述了各种化合物在4h和24h时间点的肝脏和血浆暴露。测量的化合物浓度如下：++++>10μM；10μM≥+++>5μM；5μM≥++>1μM；1μM≥+>0.25μM；和

0.25μM≥-。

表5.

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*在20mg/kg PO剂量后在c57/bl6小鼠中获得的数据

还使用Dotmatics Ltd.的Vortex v2018.09.76561.64-s计算表4中的化合物的XlogP值。表5中的化合物的XlogP分布如图2所示。

实施例32：大鼠耐受性评定

为了评定本文所提供的化合物的潜在耐受性概况，在大鼠中进行内部7天剂量限制毒性(DLT)研究。评定的主要变量是体重变化、CBC参数(包括红细胞、血红蛋白、血细胞比容、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白和网织红细胞)和血清生物化学(丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素和肌酸激酶)。

每天称重8周龄的雄性Sprague Dawley大鼠(Charles River Laboratories)，并且在连续7天内经口QD给予测试化合物。第7次给药后24h处死动物。

研究结束时，记录脾脏重量，并且收集部分肝脏、肌肉、睾丸、脾脏和肾脏以评估这些器官中的药物水平。收集血液并如下进行划分：1)用于生物化学的血清样品，2)CBC+手动网织红细胞计数(K

以75、125和300mg/kg PO QD的剂量测试式(I)化合物，并与以65和100mg/kg POQD给药的WO2016/109559中作为化合物ID 408公开的参考LDH抑制剂进行比较。如表6中所示，与参考LDH抑制剂相比，发现七天后的体重、脾脏重量、CBC参数和血清生物化学的测量值在所有三种剂量下都在正常范围内，表明300mg/kg的该式(I)化合物的七天QD剂量在大鼠中良好耐受并且相对于LDH参考抑制剂提供更宽的治疗窗(>40x)。

表6.

在研究结束时(最后一次PO剂量后24h)收集的肝脏、肌肉、睾丸、脾脏、肾脏和血浆中的式(I)化合物的药物浓度的分析显示比参考LDH抑制剂所发现的更高的肝脏与非肝脏组织比率，这表明与参考化合物相比，该化合物大大改善了肝脏暴露。参考LHD抑制剂表现出约2:1的肝脏与肌肉比率，并且在某些实施方案中，式(I)化合物表现出大于约20:1、大于约25:1、大于约50:1、大于约80:1或大于约100:1的肝脏与肌肉比率。参考LDH抑制剂表现出6:1的肝脏与睾丸比率，而在某些实施方案中，式(I)化合物表现出大于约20:1、大于约25:1、大于约50:1、大于约80:1或大于约100:1的肝脏与睾丸比率。

上述实施方案旨在仅仅是示例性的，并且本领域技术人员仅使用常规实验将识别或将能够确定具体化合物、材料和程序的许多等同物。所有这些等同物都被认为在所要求保护的主题的范围内，并且被所附权利要求所涵盖。由于修改对于本领域技术人员来说是显而易见的，因此所要求保护的主题仅受所附权利要求的范围限制。