用于治疗流感的中药组合物及其方法、组合物颗粒和应用

技术领域

本申请涉及中药技术领域，尤其涉及一种用于治疗流感的中药组合物及其方法、组合物颗粒和应用。

背景技术

流行性感冒，简称流感，是流感病毒引起的一种急性呼吸道疾病，属于丙类传染病。流感在中国以冬春季多见，临床表现以高热、乏力、头痛、咳嗽、全身肌肉酸痛等全身中毒症状为主，而呼吸道症状较轻。流感病毒容易发生变异，传染性强，人群普遍易感，发病率高，历史上在全世界引起多次暴发性流行，是全球关注的重要公共卫生问题。流感传播迅速，每年可引起季节性流行，在学校、托幼机构和养老院等人群聚集的场所可发生暴发疫情。流感在全球成年人中的患病率为5％-10％，儿童患病率高达20-30％，其中发展中国家5岁以下儿童流感的住院率是发达国家的3倍。所有5岁以下的儿童都被认为是重症流感的高危人群，但2岁以下儿童的风险最高，6个月以下的婴儿住院率和死亡率最高。

流感的症状很多，例如发烧、咳嗽、疼痛及一些炎症等，现有的治疗流感的药物大多功能比较单一，例如有的退烧效果好，有的止咳效果好，有的抗炎效果好，有的镇痛效果好，但是很少有功能比较复合的药物。因此，患病者可能需要服用多种药物才可以同时缓解流感的各种症状，或者患病者可能无法在各种功能较为单一的药物中选择合适的药物，最终导致治疗效果较差，患病者服药体验也很差。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于提出一种用于治疗流感的中药组合物及其方法、组合物颗粒和应用。

基于上述目的，本申请提供了第一方面提供了一种用于治疗流感的中药组合物，所述中药组合物包括如下组分：金银花、连翘、荆芥、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄。

本申请第二方面提供了一种用于治疗流感的中药组合物的提取方法，包括：

在连翘、荆芥中加入水进行蒸馏，收集蒸馏液、蒸馏后的药渣和蒸馏后的水溶液；

将金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣合并，加水煎煮，得到煎煮液；

混合所述蒸馏液、蒸馏后的水溶液和煎煮液，得到中药组合物的提取液。

本申请第三方面提供了一种用于治疗流感的中药组合物颗粒的制备方法，包括：

在连翘、荆芥中加入水进行蒸馏，收集蒸馏液、蒸馏后的药渣和蒸馏后的水溶液，分离所述蒸馏液，得到挥发油；

将金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣合并，加水煎煮，得到煎煮液；

混合所述煎煮液和蒸馏后的水溶液，浓缩，得到第一浓缩液，在所述第一浓缩液中加入乙醇，搅拌、冷藏静置、过滤，滤液回收乙醇后浓缩，得到第二浓缩液；

将环糊精加水搅拌制成混悬液，滴加用乙醇溶解的所述挥发油，研磨、得到挥发油混悬液，抽滤，将滤饼干燥，粉碎，得到粗包合物，将所述粗包合物清洗至无挥发油味，干燥，得到挥发油-环糊精包合物；

将所述挥发油-环糊精包合物、矫味剂和糊精加入所述第二浓缩液中，进行制粒，得到中药组合物颗粒。

本申请第四方面提供了一种根据上述第三方面任一项所述的制备方法制备得到的中药组合物颗粒。

本申请第五方面提供了一种第一方面的中药组合物、第二方面的提取方法得到的提取液、第三方面的制备方法得到的中药组合物的颗粒或第四方面的中药组合物颗粒在制备治疗或改善流行性感冒的药物中的应用。

从上面所述可以看出，本申请提供的用于治疗流感的中药组合物及其方法、组合物颗粒和应用，用于治疗流感的中药组合物对酵母及内毒素发热模型有明显解热作用，对化学致炎剂(醋酸、角叉菜胶、二甲苯)引起的急性炎症有明显的抑制作用，还能显著减少扭体次数，延长小鼠痛阈，具有明显镇痛作用，并对小鼠有明显的止咳祛痰作用，即本申请所述的中药组合物可同时起到解热、消炎、止咳和镇痛等作用，可同时缓解流感的各种症状，对流行性感冒具有良好的治疗效果。

附图说明

为了更清楚地说明本申请或相关技术中的技术方案，下面将对实施例或相关技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本申请实施例的制备方法的流程示意图；

图2为本申请实施例的临界相对湿度测定结果图。

具体实施方式

为使本公开的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本公开进一步详细说明。

需要说明的是，除非另外定义，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

本申请第一方面提供了一种用于治疗流感的中药组合物，所述中药组合物包括如下组分：金银花、连翘、荆芥、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄。

具体地，金银花具有抗病原微生物、抗炎、解热、保肝、抗生育、止血、免疫调节、降血脂、中枢兴奋等作用，连翘的药理活性主要表现为抗氧化、抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤以及解热镇痛等作用。方中用金银花、连翘疏散风热、清热解毒，为君药。

荆芥辛而微温，助君药开皮毛而逐表邪。

廖大青叶、绵马贯众性寒味苦，均能清气分之实热，又能解血分之热毒，气血两清，配合君药，表里同治，且廖大青叶还有解毒利咽之功。

牛蒡子辛散苦泄，寒能清热，既能疏散风热，又善宣肺祛痰，清利咽喉，射干苦寒泄降，主入肺经，有清热泻火、利咽消肿之功，且能降气消痰以止咳平喘，两药合用，止咳利咽；以上五药荆芥、廖大青叶、绵马贯众、牛蒡子、射干共为臣药。

玄参苦咸寒入血分而清热凉血、泻火解毒而利咽消肿，又甘寒质润而能清热生津、滋阴润燥，以防热甚津伤；大黄苦寒清热泻火，且泻下通便，使热毒随大便而出；二者共为佐药。

综上，用于治疗流感的中药组合物针对外感风瘟发病急、传变快、易入里蕴而成毒的特点，采用气血两清，表里同治之治则，并在采用疏散、清透、凉血、滋阴、泄降并举之治法，多途径解除热毒，且肺卫同治，以止咳利咽，全方配伍严谨，组方精当。

本申请所涉及的中药组合物是在数千年中医实践理论指导下创制而成的，本领域技术人员公知，由于中药组方的复杂性，中药科学组方是一个创新性的过程，组方过程要兼顾中药组分间的协同增效才能获得有效的组方，即使两个相似度非常高的组方也可能因为其中一味中药的不同而改变整个方子的药性。本申请选用特定的九种天然植物中药组分进行组合，相互协同配合，治疗过敏性紫癜的效果良好。

在一些实施例中，所述中药组合物包括如下以重量份计的组分：金银花9.5～10.5份、连翘7～8.5份、荆芥4～6份、蓼大青叶7～8.5份、绵马贯众4.5～5.5份、炒牛蒡子4～6份、射干4～6份、玄参4～6份、大黄2～3份。当各组分的重量比在这个范围内时，所述中药组合物对流行性感冒的治疗效果较好。

进一步地，所述中药组合物包括如下以重量份计的组分：金银花10份、连翘7.5份、荆芥5份、蓼大青叶7.5份、绵马贯众5份、炒牛蒡子5份、射干5份、玄参5份、大黄2.5份。当各组分的重量比在这个范围内时，所述中药组合物对流行性感冒的治疗效果较佳。

示例性地，所述金银花可以为9.5份、10份、10.5份等，所述连翘可以为7份、7.5份、8.5份等，所述荆芥可以为4份、5份、6份等，所述蓼大青叶可以为7份、7.5份、8.5份等，所述绵马贯众可以为4.5份、5份、5.5份等，所述炒牛蒡子可以为4份、5份、6份等，所述射干可以为4份、5份、6份等，所述玄参可以为4份、5份、6份等，所述大黄2份、2.5份、3份等。

在一些实施例中，所述中药组合物的剂型包括水煎剂、溶液剂、颗粒剂、混悬剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、灌肠剂、气雾剂、贴剂或滴剂中的任意一种。

本申请第二方面提供了一种用于治疗流感的中药组合物的提取方法，包括：

步骤1、在连翘、荆芥中加入水进行蒸馏，收集蒸馏液、蒸馏后的药渣和蒸馏后的水溶液；

步骤2、将金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣合并，加水煎煮，得到煎煮液；

步骤3、混合所述蒸馏液、蒸馏后的水溶液和煎煮液，得到中药组合物的提取液。

本申请采用先水蒸气蒸馏后水提的方法对各组分的有效成分进行提取，预试验结果表明，采用先水蒸气蒸馏后水提的方法可以显著提高连翘、荆芥中各有效成分的提取率，同时其他组分的提取率也较高。

本申请中，采用先水蒸气蒸馏后水提的提取工艺可以更好的匹配中药组合物的复杂成分，同时兼顾传统中药的水煎煮方法，将水溶性成分全部保留，使得本申请的提取工艺可以确保各个组分的各有效成分均可被高效的提取，提升最终得到的中药组合物的治疗效果，整个提取工艺既具备现代科学性，又具备中药提取的传统和继承。

参见背景技术部分所述，流感在全球成年人中的患病率为5％-10％，儿童患病率高达20-30％，其中发展中国家5岁以下儿童流感的住院率是发达国家的3倍。所有5岁以下的儿童都被认为是重症流感的高危人群，但2岁以下儿童的风险最高，6个月以下的婴儿住院率和死亡率最高。因此，本申请的中药组合物很大可能会作为小儿用药。为便于儿童服用并且尽可能地降低药物中的杂质，提高药物中生药的含量，本申请根据临床上用药特点和处方中药味的有效成分及作用机理的特点，结合预实验结果，提供了中药组合物颗粒的制备方法，专门用于制备颗粒剂的中药组合物。选择颗粒剂，既能够保持中医药的传统用药特色，又能最大限度地提取和保留处方中药物的有效成分，发挥有效成分的综合治疗作用，确保临床疗效，而且颗粒剂还具有性质稳定、质量可控、便于工业化生产和携带服用方便的优点。

具体地，参加图1，本申请第三方面提供了一种用于治疗流感的中药组合物颗粒的制备方法，包括：

步骤S1、在连翘、荆芥中加入水进行蒸馏，收集蒸馏液、蒸馏后的药渣和蒸馏后的水溶液，分离所述蒸馏液，得到挥发油；

步骤S2、将金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣合并，加水煎煮，得到煎煮液；

步骤S3、混合所述煎煮液和蒸馏后的水溶液，浓缩，得到第一浓缩液，在所述第一浓缩液中加入乙醇，搅拌、冷藏静置、过滤，滤液回收乙醇后浓缩，得到第二浓缩液；

步骤S4、将环糊精加水搅拌制成混悬液，滴加用乙醇溶解的所述挥发油，研磨、得到挥发油混悬液，抽滤，将滤饼干燥，粉碎，得到粗包合物，将所述粗包合物清洗至无挥发油味，干燥，得到挥发油-环糊精包合物；

步骤S5、将所述挥发油-环糊精包合物、矫味剂和糊精加入所述第二浓缩液中，进行制粒，得到中药组合物颗粒。

具体地，步骤S1中，将没有浸泡过的连翘、荆芥中加入水进行蒸馏，可以将连翘、荆芥中的易挥发成分提取出来，提高这类易挥发成分的提取率。

其中，蒸馏时间为6～7h，加入水的量为所述连翘和荆芥总重量的8～10倍，可以提高易挥发成分的提取率。进一步地，所述蒸馏时间为6h，加入水的量为所述连翘和荆芥总重量的8倍，在确保高提取率的前提下，可以节约实验时间及成本。

步骤S2中，将金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣合并，加水煎煮三次，合并三次的煎煮液体，得到所述煎煮液，其中，每次煎煮加水量为所述金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣的总重量的9～10倍，每次煎煮时间为1～1.5h。

具体地，用水煎煮三次，并且每次煎煮加水量为所述金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣的总重量的9～10倍，每次煎煮时间为1～1.5h时，各个组分的有效成分提取率均较高。

优选地，每次煎煮加水量为所述金银花、蓼大青叶、绵马贯众、炒牛蒡子、射干、玄参、大黄和所述蒸馏后的药渣的总重量的10倍，每次煎煮时间为1h时，此时既可以保证各个有效成分提取率高，同时还可节约实验时间和实验成本。

步骤S3中，在水煎煮工艺中，由于水煎煮引入的杂质可能较多，出膏率比较高，影响最后样品制作，根据药物所含成分情况，对所述第一浓缩液进行醇沉精制。对于醇沉精制的工艺参数，发明人进行了一系列的试验研究，最终结果表明，所述第一浓缩液的相对密度为1.00～1.05(60℃)，在所述第一浓缩液中加入乙醇至所述第一浓缩液中醇含量为50％，可以提高第一浓缩液的纯度，提升第一浓缩液中有效成分的含量。

继续所述第二浓缩液的相对密度为1.3-1.4(60℃)，有利于后续制粒工艺的进行。

步骤S4中，由于蒸馏得到的挥发油性质不稳定，易挥发、氧化，使药效减少或消失，因此为了保证成品质量和疗效，本申请采用胶体磨β-环糊精包合法，使液态的挥发油以固态形式入药，防止挥发油损失，增加其稳定性，从而保证成品药效，延长药品保质期。

具体地，所述挥发油与所述环糊精的重量比为1：7～9，所述水与环糊精的重量比为7.5～8.5：1，所述研磨时间为25～30min，通过控制挥发油与所述环糊精的重量比、所述水与环糊精的重量比及研磨时间(即包合时间)，可以提升挥发油的包合率。

进一步地，所述挥发油与所述环糊精的重量比为1：8，所述水与环糊精的重量比为8：1，所述研磨时间为30min，将各参数控制在这个范围，得到的包合物中挥发油包合率较高。

示例性地，所述挥发油与所述环糊精的重量比为1：7、1：8、1：9等，所述水与环糊精的重量比为7：1、8：1、9：1等，所述研磨时间为25min、30min、35min等。

步骤S5中，所述制粒为采用一步制粒机(例如流化床)进行一步制粒。本实施例中，采用重庆精工制药机械有限责任公司制造的型号DPL-Ⅱ的一步制粒机进行制粒，制粒时，试验发现，将当第二浓缩液的相对密度为1.3-1.4(60℃)，风频小于35HZ，温度>65℃时，出现塌床现象，因此最终通过试验确定的制粒步骤的工艺参数是风频45HZ，进风温度55℃-65℃，物料温度40℃-50℃，供液转速为8-10r/min，该工艺条件下可以得到流动性良好的颗粒。

所述矫味剂为阿斯巴甜，所述矫味剂占所述挥发油-环糊精包合物和糊精重量的0.5％，加入所述矫味剂后，可以改善药物原本的微苦味道，使得制备得到的重要组合物颗粒微甜，口感良好。

本申请第四方面提供了一种根据上述第三方面任一项所述的制备方法制备得到的中药组合物颗粒。

本申请第五方面提供了一种第一方面的中药组合物、第二方面的提取方法得到的提取液、第三方面的制备方法得到的中药组合物的颗粒或第四方面的中药组合物颗粒在制备治疗或改善流行性感冒的药物中的应用。

以下结合具体实施例，对本公开进一步详细说明。

实施例1荆芥、连翘挥发油提取工艺研究试验

1.挥发油提取前浸泡与否考察

采用水蒸气蒸馏法进行荆芥、连翘的挥发油提取，首先以挥发油得率为指标，对提取前浸泡与否进行了考察。分别称取连翘150g、荆芥100g，加入8倍水，分别浸泡0、2小时，提取挥发油8h，考察挥发油得率，结果见表1。

表1浸泡与否及连翘、荆芥挥发油得率

结论：由实验结果得知，采用未浸泡和浸泡2h所得到的挥发油体积差别不大，所以最终工艺为在水蒸气蒸馏法进行荆芥、连翘的挥发油提取前不对药材进行浸泡。

2.挥发油提取用溶剂倍量考察

称取连翘150g、荆芥100g，共3份，分别加入6、8、10倍水，不浸泡，提取挥发油10h，记录8h的收油量，结果见表2。

表2不同时间的收油量(ml)

结论：通过以上单因素考察，加8、10倍量水时，达到最大收油量，因此，从经济角度考虑，最终工艺为选择提取用水倍量为8倍量。

3.挥发油提取时间考察

称取连翘150g、荆芥100g，共3份，加入8倍水，不浸泡，提取挥发油，记录不同时间的收油量及累计挥发油得率，结果见表3。

表3不同时间的收油量(ml)及累计挥发油得率(％)

实施例2挥发油包合工艺研究试验

1.溶剂倍量单因素考察

本试验采用胶体磨法包合挥发油，在预实验中发现当溶剂倍量较少时，不能形成一个碾磨循环，导致碾磨不充分，包合率不高，因此首先对溶剂倍量进行了单因素考察，结果见下表4。

表4溶剂倍量单因素考察

结果表明，当采用7倍溶剂进行碾磨时，刚刚能够保证一直保持碾磨循环，因此在包合工艺考察时，溶剂倍量最少选择为7倍量。

2.挥发油包合工艺正交试验设计

按照L9(34)正交试验，根据预实验和文献报道，结合实际生产的需要，对挥发油/β-环糊精比例、溶剂倍量、碾磨时间进行考察，因素水平表见表5。

表5挥发油胶体磨包合工艺因素水平表

按照正交试验设计，将β-CD(即β环糊精)加入适量纯化水中，搅拌均匀制成β-CD混悬溶液，置胶体磨中，形成研磨循环，缓慢滴加用乙醇稀释的挥发油提取物(乙醇与挥发油体积比为1：1)，研磨规定的时间，抽滤，干燥，粉碎，包合物粉末再依次用水、无水乙醇洗至无挥发油味，40度干燥，即得白色疏松状包合物粉末。

将β-环糊精包合物置500ml圆底烧瓶内，加10倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油至体积不增加，读取挥发油体积，并计算挥发油包合率，以挥发油包合率为考察指标，优选挥发油最佳包合工艺。其中，挥发油包合率＝包合物中挥发油的体积/挥发油加入体积×100％。

3.正交实验结果及方差分析

正交实验结果见表6及表7，采用SPSS17.0软件进行分析。

表6正交挥发油包合含量测定结果

表7方差分析表

由上表可知，方差分析结果显示，A、C有显著性差异，B无显著性差异，最佳工艺是A2B2C3，即八倍量水，挥发油：β-环糊精＝1:8，包合30min。

实施例3水煎煮工艺研究工艺优选

1.仪器与药品试剂

绿原酸标准品(编号SD200101)、连翘苷标准品(批号STA-20710005)购于北京赤焰测析科技发展有限公司。

2.水提取正交实验设计

根据方中各药中有效成分理化性质及实际生产需要，参考原工艺，连翘、荆芥经提取挥发油后，其残渣和水提液与其余几味药合并采用水提法。

以绿原酸、连翘苷的提取量为考察指标，对影响该工艺的主要因素加水量、煎煮时间和煎煮次数进行了考察。采用4因素3水平正交试验法来设计提取工艺。因素水平表见表8。

表8水提工艺因素水平表

2.1绿原酸、连翘苷含量测定方法

(1)绿原酸、连翘苷含量测定方法

绿原酸含量的测定方法采用2020版《中国药典》一部金银花药材项下的测定方法进行测定。连翘苷含量的测定方法采用乙腈：水＝23:77，流速为1.2ml/min进行测定。

(2)正交试验结果及方差分析

以方中君药金银花中绿原酸、连翘中连翘苷含量为指标，采用正交试验优选提取工艺参数。分别称取金银花20g、连翘15g、荆芥10g、蓼大青叶15g、绵马贯众10g、炒牛蒡子10g、射干10g、玄参10g、大黄5g，按上述实验设计进行试验，结果见表9、表10。

表9正交试验及结果

表10绿原酸复方提取正交试验方差分析

表11连翘苷复方提取正交试验方差分析

结果：实验结果表明，对绿原酸结果直观分析优选最佳提取条件为：A2B3C3。方差分析：第一个因素(提取时间)影响不大，无显著性差异。

对连翘苷结果直观分析优选最佳提取条件为：A2B3C1，方差分析：第一、三个因素(提取时间、溶剂倍量)影响不大，无显著性差异。

(3)小结

上述实验中，对绿原酸含量、连翘苷含量进行综合评分，以综合评分对实验结果及工艺进行优选。由金银花和连翘两味君药比例重，综合评分＝100×(4/7×X/977.99+3/7×Y/34.83)，X为金银花的含量，Y为连翘苷的含量。

表12(综合分析法)金银花的药材提取工艺正交试验及结果

结果：实验结果表明，对正交结果综合分析优选最佳提取条件为：A2B3C3。方差分析结果表明，第一个因素(提取时间)影响不大，无显著性差异。考虑到环境和成本因素，故选择A1B3C3，即，每次1h，提取3次，10倍量的水。

(4)验证试验

根据试验结果对最佳工艺条件：10倍量水，提取3次，每次1h。分别称取金银花20g、连翘15g、荆芥10g、蓼大青叶15g、绵马贯众10g、炒牛蒡子10g、射干10g、玄参10g、大黄5g进行三批验证实验。结果如表14、表15.

表14验证试验结果

表15验证试验结果

结果：该工艺稳定可行。

结论：以含绿原酸、连翘苷含量为指标，通过正交试验的考察，得出最佳水提工艺为10倍量水，提取3次，每次1h。

实施例4醇沉工艺技术条件的优选

本试验采用醇沉工艺对第一浓缩液进行纯化工艺研究。醇沉工艺主要受到提取液(即所述煎煮液和蒸馏后的水溶液的混合液)的相对密度和醇浓度的影响，故把两者作为考察因素分别进行单因素考察。

1.提取液相对密度的考察

分别按处方比例称取药材3份，依次按照上述挥发油提取工艺和水提工艺进行提取，然后混合所述煎煮液和蒸馏后的水溶液，分别浓缩至相对密度1.00～1.05、1.05～1.10、

1.10～1.15(60℃)，每份分别加乙醇至含醇量达60％，放置12小时，抽滤，测定其绿原酸、连翘苷转移率，作为考察指标，见表16。

表16醇沉相对密度考察及结果

由结果得知，相对密度1.00-1.05(60℃)时，绿原酸、连翘苷转移率的综合得分最高，因此，最终将提取液浓缩至相对密度1.00～1.05(60℃)，得到第一浓缩液。

2.醇沉浓度的考察

分别按处方比例称取药材3份，依次按照步骤S1和S2进行提取，然后在步骤S3中，混合所述煎煮液和蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度1.00～1.05，每份分别加乙醇至含醇量达50％、60％和70％，放置12小时，抽滤，其绿原酸、连翘苷转移率，作为考察指标，见表17。

表17醇沉浓度考察及结果

由结果得知，醇浓度50％时，绿原酸、连翘苷转移率综合得分最高，因此，在所述第一浓缩液中加入乙醇至所述第一浓缩液中醇含量为50％。

3.验证试验

根据试验结果得到的最佳工艺条件为：第一浓缩液相对密度1.00～1.05(60℃)，含醇量50％。

分别称取金银花20g、连翘15g、荆芥10g、蓼大青叶15g、绵马贯众10g、炒牛蒡子10g、射干10g、玄参10g、大黄5g三份，分别依次按照步骤S1和S2进行提取，然后在步骤S3中，混合所述煎煮液和蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度1.00～1.05，加乙醇至含醇量达50％，放置12小时，抽滤，测定其绿原酸、连翘苷转移率，结果如表18、表19。

表18绿原酸验证结果

表19连翘苷验证结果

结果表明，采用该工艺，绿原酸及连翘苷的转移率均较高，说明经过醇沉工艺后，第一浓缩液的杂质较少，有效成分含量较高。

实施例5颗粒剂成型工艺优选

为使患者服用方便，选择采用颗粒剂为成品剂型，并进行颗粒的制备，以便保证处方中药物混合的均匀性、流动性及服用剂量。

1.流化床制粒工艺参数.

一步制粒机型号DPL-Ⅱ，重庆精工制药机械有限责任公司制造。将药液浓缩至密度为

1.3-1.4(60℃)，加糊精828g。风频小于35H

2.颗粒流动性考察

一般认为，休止角小于40度时，其流动性较好；大于40度时，流动性不好，粉末有松散感。采用固定漏斗法测定样品的休止角，结果见表20、表21。

表20颗粒休止角测定表

表21粉末休止角测定表

结果表明，颗粒休止角均值为21.10度,粉末休止角均值为36.22度。

结论：颗粒流动性良好。

3.临界相对湿度的测定

分别取浸膏粉和颗粒，按文献方法进行测定。以相对湿度为横坐标，浸膏粉和颗粒的增重百分数为纵坐标，绘制吸湿曲线，结果见图2。

图2表明，粉末的临界相对湿度约为67％，颗粒的临界相对湿度约为80％，制粒后药物的吸湿性有所改善。

结论：在进行粉碎、混合、制粒时，应将相对湿度控制在67％以下为宜。

4.矫味剂的选择

颗粒制成后，味微苦，考虑到本中药组合物颗粒可能作为儿科用药，为增加儿童用药的依从性，考虑加入矫味剂对颗粒口味进行矫正。对食品、药品标准中常用甜味剂进行筛选，选定并考察了甜菊糖苷、阿斯巴甜不同浓度对颗粒剂的矫味作用，见表22。

表22颗粒加入矫味剂后口感

结果表明，加入0.5％甜菊糖苷后，仍有苦味。加入0.5％阿斯巴甜后，药物有甜味，且适中。而加入1％阿斯巴甜，药味太甜。在达到同样矫味效果的前提下，尽可能减小矫味剂用量，故选择0.5％阿斯巴甜作为矫味剂。

实施例6用于治疗流感的中药组合物颗粒的药效学试验

为了验证本申请所述的用于治疗流感的中药组合物的药效学，本申请根据国家《中药新药临床前评价技术指南》要求进行了用于治疗流感的中药组合物颗粒的抗解热、抗炎、镇痛、止咳方面的药效学实验研究。在各部分试验中，选取现有的在该方面治疗效果显著的药物作为阳性药，来进行对比试验，各阳性药物的给药剂量依据其说明书的用量给药。

一、解热实验：对酵母致幼年大鼠发热的退热作用

1.1受试药物：

药物名称：本申请制备的用于治疗流感的中药组合物颗粒，处方：所述中药组合物包括如下以重量份计的组分：金银花10份、连翘7.5份、荆芥5份、蓼大青叶7.5份、绵马贯众5份、炒牛蒡子5份、射干5份、玄参5份、大黄2.5份；

提取率：每克中药组合物颗粒清膏含生药1.71g。

批号：20201203。

生产单位：首都儿科研究所附属儿童医院制剂室。

储存条件：密闭，0～4℃冰箱保存。

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日，每袋2g)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，大鼠拟设4个剂量，分别为30.24g生药/kg/d、15.12g生药/kg/d、7.56g生药/kg/d及3.78g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍及1/2倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2.阳性对照药：

阳性对照药一：小儿感冒颗粒，12g/袋，用法用量：1～3岁一次半袋，4～7岁一次1袋～1袋半，8～12岁，一次2袋，一日2次。批号：19110938，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

阳性对照药二：泰诺林(对乙酰氨基酚)，3.2g/mL，用法用量：1～3岁3mL，4～6岁5mL，7～9岁8mL，10～12岁10mL，批号：190213061，上海强生制药有限公司。

1.3.试剂：高活性鲜酵母：湖北安琪酵母有限公司，-80℃保存。

1.4.仪器:动物体温计：型号AT320，深圳市中正大鹏科技有限公司。

1.5.普通饲料：使用标准SPF级大鼠颗粒饲料，由北京市科澳协力饲料有限公司提供。

1.6.动物：Wistar大鼠，雄性，60～80g，90只，SPF级，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2.方法

2.1动物肛温筛选：幼年Wistar雄性大鼠，体重60±80g，90只，每日测肛温1次，连续2日，使大鼠适应此操作。选择肛温范围在37.5～38.5℃，且肛温波动在0.5℃以内者，用于实验。第3日测动物肛温2次，间隔1h，选择肛温差值在0.3℃以内动物进行造模。

2.2造模方法：将15％鲜酵母悬液，20mL/kg，背部皮下注射，注射5h后。选肛温升高0.8℃以上者用于实验。

2.3剂量分组及给药方法：根据造模后肛温与基础肛温的差值均衡分组，分别为模型对照组、中药阳性对照药组小儿感冒颗粒(11.34g/kg)、西药阳性对照药泰诺林组(3mL/kg)，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量(3.78g生药/kg)、中剂量(7.56g生药/kg)、大剂量(15.12g生药/kg)、特大剂量(30.24g生药/kg)组(分别相当于临床等效剂量的0.5，1.0，2.0，4.0倍)。各给药组20mL/kg灌胃给药1次。模型组在同等条件下给予同体积纯水。

2.4检测时间：分别测定给药后1h、2h、3h、4h的肛温,以不同时间所测肛温与各基础肛温的差值为肛温变化的指标。

2.5统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用T检验进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3.试验结果

表23用于治疗流感的中药组合物颗粒对酵母致大鼠发热模型的解热作用

从表23可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒大剂量组于给药2h能显著降低动物肛温(与模型对照组比P<0.05)，大剂量组于给药0.5h，2h均能显著降低动物肛温(与模型对照组比P<0.05)，各剂量组于给药4h均能显著降低动物肛温(与模型对照组比P<0.05或P<0.01)。阳性对照药泰诺林于给药0.5～3h能显著降低动物肛温(与模型对照组比P<0.01)。

因此，由以上结果可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒对酵母发热模型有一定的解热作用。

二、抗炎实验

(一)对醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响

1实验材料

1.1受试药物：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，小鼠拟设3个剂量，分别为43.68g生药/kg/d、21.84g生药/kg/d、10.92g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2阳性对照药物：

1.2.1小儿感冒颗粒，12g/袋，用法用量：1-3岁一次半袋，4-7岁一次1袋～1袋半，八岁至十二岁2袋，一日2次。批号：19110938，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

1.2.2阿司匹林肠溶片，拜耳医药保健有限公司，生产批号：BJ10299。

1.3试剂：生理盐水，石家庄四药有限公司，生产批号：1907173202；伊文思兰：中国医药公司北京采购供应站，批号：871825；乙酸：国药集团化学试剂有限公司，批号：20140304；

1.4仪器：半自动生化分析仪：GF-D800，山东高密彩虹分析仪器有限公司

1.5动物：醋酸扭体及毛细血管通透性实验：动物：ICR小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2方法

2.1分组及给药：ICR小鼠，随机分成6组，每组10只。分别为模型对照组、阿司匹林阳性对照组(Asp，0.33g/kg)、小儿感冒颗粒组(16.38g/kg)、本中药组合物颗粒小、中、大剂量组(10.92g，21.84，43.68g生药/kg)，连续灌胃给药5d。

2.2造模方法：于第5d末次给药1h后腹腔注射0.7％醋酸0.2mL。20min后小鼠尾静脉注射0.5％伊文思兰氯化钠溶液0.3mL/只，并造成腹腔毛细血管损伤，导致通透性增加。20min后腹腔注射5mL生理盐水，处死，轻揉腹部60次，吸取腹腔液。

2.3检测指标：取出腹腔液，2000r/min，离心10min，吸上清液用分光光度计在590nm处测吸光度(A)值。

2.4统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3试验结果

表24用于治疗流感的中药组合物颗粒对醋酸所致小鼠毛细血管通透性的影响

注：与模型对照组比，*表示P<0.05，**表示P<0.01

从表24可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量组和中剂量组腹腔冲洗液OD值均小于模型组，但无统计学差异(与模型对照组比P>0.05)，大剂量组腹腔冲洗液OD值显著低于模型对照组(P<0.05)，由此可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒可显著减少醋酸所致小鼠毛细血管通透性。

(二)用于治疗流感的中药组合物颗粒对角叉菜胶所致大鼠后肢足跖炎症性肿胀模型的影响

1实验材料

1.1受试药物：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，大鼠拟设3个剂量，分别为30.24g生药/kg/d、15.12g生药/kg/d、7.56g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2阳性对照药物：

地塞米松：天津力生制药股份有限公司，批号1909028；

小儿感冒颗粒：北京同仁堂科技发展有限公司制药厂，批号：19110938；

1.3试剂

角叉菜胶，sigma，批号9000-07-1；生理盐水，石家庄四药有限公司，生产批号：1907173202。

1.4仪器:足趾容积测量仪：型号：YLS-7B，山东省医学科学院设备站

1.5动物：Wistar大鼠，雄性，60～80g，90只，SPF级，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-000。

2方法

2.1分组及给药：大鼠随机分成6组，每组10只，分别为模型组，本中药组合物颗粒小、中、大剂量组(7.56，15.12，30.24g生药/kg)，小儿感冒颗粒组(11.34g/kg)，地塞米松组(醋酸地塞米松片，0.42mg/kg)。各组大鼠自由饮水、摄食。模型组灌胃给于纯净水之外，其余各组均给予相应的药物，连续灌胃给药5d。

2.2造模方法：于末次给药1h后，每组小鼠的右后足足跖部注入0.1％角叉菜胶0.1mL/只。

2.3检测指标：于末次给药之后，一次测量所有动物的右后足足容积作为基础容积，用足肿胀仪测定造模后0.5、1、2、3、4、6h的右后足踝关节以下的体积，计算肿胀度及抑制率。

肿胀度＝致炎后平均容积－基础平均容积

肿胀抑制率＝(模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀率×100％

2.4统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3结果

表25用于治疗流感的中药组合物颗粒对角叉菜胶诱导大鼠的足跖肿胀度的影响

注：与模型对照组比*表示P<0.05，**表示P<0.01。

表26用于治疗流感的中药组合物颗粒对角叉菜胶诱导大鼠的足跖肿胀抑制率的影响

注：与模型对照组比，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

从表25及表26可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量组于给药1h显著降低足跖肿胀度(与模型对照组比P<0.05)，中剂量组于给药0.5h、2h、4h显著降低足跖肿胀度(与模型对照组比P<0.05或P<0.01)，大剂量组于给药0.5h～4h显著降低足跖肿胀度(与模型对照组比P<0.05或P<0.01)。地塞米松组于给药0.5～6h显著降低足跖肿胀度(与模型对照组比P<0.05或P<0.01)。小儿感冒颗粒于给药2～6h显著降低足跖肿胀度(与模型对照组比P<0.05或P<0.01)。

由此可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒对角叉菜胶所致大鼠后肢足跖炎症性肿胀有明显的抗炎作用。

(三)对二甲苯致炎的抗炎实验

摘要：目的：观察用于治疗流感的中药组合物颗粒对二甲苯致炎的抗炎作用。方法：将ICR小鼠按体重随机分为8组，分别为模型对照组、中药阳性对照药组小儿感冒颗粒(16.38g/kg)、西药阳性阿司匹林组(0.5g/kg)，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量(5.46g生药/kg)、中剂量(10.92g生药/kg)、大剂量(21.84g生药/kg)、特大剂量(43.68g生药/kg)组(分别相当于临床等效剂量的0.5，1.0，2.0，4.0倍)。各给药组灌胃连续给药3d。另设正常对照组，每组12～13只动物，正常对照组及模型对照组给予同体积蒸馏水。于末次给药1h后，右耳涂二甲苯50μL/只，左耳做对照，1h后处死小鼠，取双耳片，称重。结果：用于治疗流感的中药组合物颗粒5.46g生药/kg、21.84g生药/kg、43.68g生药/kg连续给药3d显著减轻二甲苯所致小鼠右耳肿胀度(与模型对照组比较P<0.01)。

1实验材料

1.1受试药物：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，小鼠拟设4个剂量，分别为43.68g生药/kg/d、21.84g生药/kg/d、10.92g生药/kg/d及5.46g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍及1/2倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2.阳性对照药：

1.2.1小儿感冒颗粒，12g/袋，用法用量：1-3岁一次半袋，4-7岁一次1袋～1袋半，八岁至十二岁2袋，一日2次。批号：19110938，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

1.2.2阿司匹林肠溶片100mg/片，批号：bj14193，，拜耳医药保健有限公司。

1.3仪器

电动耳肿打耳器：型号YLS-25A，济南益延科技发展有限公司。

天平：型号BS210S,量程0.1mg，Sartarius德国。

1.4普通饲料：

使用标准SPF级大鼠颗粒饲料，由北京市科澳协力饲料有限公司提供。

1.5动物：

动物：ICR小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2.实验方法及结果

2.1方法

2.1.1剂量分组及给药：将小鼠按体重随机分为8组，分别为模型对照组、中药阳性对照药组小儿感冒颗粒(16.38g/kg)、西药阳性阿司匹林组(0.5g/kg)，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量(5.46g生药/kg)、中剂量(10.92g生药/kg)、大剂量(21.84g生药/kg)、特大剂量(43.68g生药/kg)组(分别相当于临床等效剂量的0.5，1.0，2.0，4.0倍)。各给药组灌胃给药，每日1次，连续给药3d。另设正常对照组，每组12～13只动物，正常对照组及模型对照组在给予同体积纯水。

2.1.2造模方法：于末次给药1h后，右耳涂二甲苯50μL/只，左耳做对照，1h后处死小鼠，用电动耳肿打耳器(直径8mm)将双耳同部位冲下，用电子天平称重。以两耳片重量差值作为肿胀度，计算肿胀抑制率。(肿胀抑制率(％)＝(模型对照组肿胀度—给药组肿胀度)/模型对照组肿胀度×100％。

2.1.3统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3结果

表27用于治疗流感的中药组合物颗粒对二甲苯所致耳肿胀的影响

注：与模型对照组比*表示P<0.05，**表示P<0.01。

从表27可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量组、大剂量组组及超大剂量组连续给药3d均可显著减轻二甲苯所致小鼠右耳肿胀度(与模型对照组比较P<0.01)；小儿感冒颗粒及阿司匹林组连续给药3d能显著减轻二甲苯所致小鼠右耳肿胀度(与模型对照组比较P<0.05或P<0.01)，由此可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒具有明显的抗炎作用。

综上三个抗炎实验的结果可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒对醋酸所致毛细血管通透性有明显抑制作用；对角叉菜胶致足跖肿胀有明显抗炎作用；对二甲苯胶致耳肿胀程度有明显抑制作用。

三镇痛实验

(一)用于治疗流感的中药组合物颗粒对醋酸所致小鼠扭体的影响

1.实验材料：

1.1受试药物：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，小鼠拟设3个剂量，分别为43.68g生药/kg/d、21.84g生药/kg/d、10.92g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2.阳性对照药：

1.2.1小儿感冒颗粒，12g/袋，用法用量：1-3岁一次半袋，4-7岁一次1袋～1袋半，八岁至十二岁2袋，一日2次。批号：19110938，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

1.2.2阿司匹林，拜耳医药保健有限公司，生产批号：BJ10299；

1.3仪器

秒表：型号SJ9-2II型，上海手表五厂。

热板测痛仪：型号：GJ-8402，宁海白石电子医药仪器厂。

1.4普通饲料：使用标准SPF级大鼠颗粒饲料，由北京市科澳协力饲料有限公司提供。

1.5动物：ICR小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2方法

2.1分组及给药：ICR小鼠随机分成6组，每组10只。分为模型对照组、阿司匹林阳性对照组(Asp，0.33g/kg)、小儿感冒颗粒组(16.38g/kg)、用于治疗流感的中药组合物颗粒小、中、大剂量组(生药量10.92g，21.84，43.68g生药/kg)，连续给药灌胃5d。

2.2造模方法：于第5d末次给药1h后腹腔注射0.7％醋酸0.2mL。

2.3检测指标：以小鼠躯干伸张、腹部内凹、臀部抬高为扭体表现，观察小鼠出现扭体的潜伏期，并记录20min内的扭体次数作为疼痛反应的指标，并计算抑制率。抑制率＝(生理盐水组扭体次数-给药组扭体次数)/生理盐水组扭体次数×100％。

2.4统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3结果

表28用于治疗流感的中药组合物颗粒对醋酸所致小鼠扭体次数的影响

注：与模型对照组比*表示P<0.05，**表示P<0.01。

从表28可见，本中药组合物颗粒大剂量组显著减少扭体次数(与模型对照组比P<0.05)，阿司匹林组显著减少扭体次数(与模型对照组比P<0.05)。由此可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒具有明显镇痛作用。

(二)用于治疗流感的中药组合物颗粒单次给药对热刺激致小鼠疼痛的镇痛实验

1实验材料：

1.1受试药物：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，小鼠拟设4个剂量，分别为43.68g生药/kg/d、21.84g生药/kg/d、10.92g生药/kg/d及5.46g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍及1/2倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2阳性对照药：

1.2.1小儿感冒颗粒，12g/袋，用法用量：1-3岁一次半袋，4-7岁一次1袋～1袋半，八岁至十二岁2袋，一日2次。批号：19110938，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

1.2.2美林(布洛芬混悬液)，2g/mL，用法用量：1-3岁4mL，4-6岁5mL，7-9岁8mL，10-12岁10mL，批号：190216069，上海强生制药有限公司。

1.3仪器

秒表：型号SJ9-2II型，上海手表五厂。

热板测痛仪：型号：GJ-8402，宁海白石电子医药仪器厂。

1.4普通饲料：使用标准SPF级大鼠颗粒饲料，由北京市科澳协力饲料有限公司提供。

1.5动物：ICR小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2方法

2.1动物筛选：雌性ICR小鼠，实验前用热板测痛仪(恒温55℃±0.5℃)测定痛阈值(以小鼠舔后足为疼痛反应，以痛反应的潜伏期为痛阈值)，以痛阈值小于30秒的为合格动物。

2.2剂量分组及给药方法：将合格小鼠测定痛阈值，以痛阈值及体重进行均衡分为7组，分别为对照组、中药阳性对照药组感冒颗粒(13.68g/kg)、西药阳性对照药美林组(4.45mL/kg)，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量(5.46g生药/kg)、中剂量(10.92g生药/kg)、大剂量(21.84g生药/kg)、特大剂量(43.68g生药/kg)组(分别相当于临床等效剂量的0.5，1.0，2.0，4.0倍)。单次灌胃给药。对照组在同等条件下给予同体积纯水。

2.3检测时间：测定单次给药4h痛阈值。

2.4统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3结果

表29用于治疗流感的中药组合物颗粒单次给药对热刺激致小鼠疼痛的影响

注：与模型对照组比，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

从表29可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒大剂量组和特大剂量组于给药4h能显著提高小鼠痛阈值(与对照组比较P<0.01或P<0.05)；小儿感冒颗粒于给药4h能显著提高小鼠痛阈值(与对照组比较P<0.05)，由此可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒具有明显镇痛作用。

(三)用于治疗流感的中药组合物颗粒连续给药3d对热刺激致小鼠疼痛的镇痛实验

1.实验材料：

1.1受试药物：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，小鼠拟设4个剂量，分别为43.68g生药/kg/d、21.84g生药/kg/d、10.92g生药/kg/d及5.46g生药/kg/d(分别相当于人临床用量的4倍、2倍、等倍及1/2倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2.阳性对照药：

1.2.1小儿感冒颗粒，12g/袋，用法用量：1-3岁一次半袋，4-7岁一次1袋～1袋半，八岁至十二岁2袋，一日2次。批号：19110938，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

1.2.2美林(布洛芬混悬液)，2g/mL，用法用量：1-3岁4mL，4-6岁5mL，7-9岁8mL，10-12岁10mL，批号：190216069，上海强生制药有限公司。

1.3仪器

秒表：型号SJ9-2II型，上海手表五厂；热板测痛仪：型号：GJ-8402，宁海白石电子医药仪器厂。

1.4普通饲料：

使用标准SPF级大鼠颗粒饲料，由北京市科澳协力饲料有限公司提供。

1.5动物：

I动物：ICR小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2方法

2.1.动物筛选：雌性ICR小鼠，实验前用热板测痛仪(恒温55℃±0.5℃)测定痛阈值(以小鼠舔后足为疼痛反应，以痛反应的潜伏期为痛阈值)，以痛阈值小于30秒的为合格动物。

2.2.剂量分组及给药方法：将合格小鼠测定痛阈值，以痛阈值及体重进行均衡分为7组，分别为对照组、中药阳性对照药组感冒颗粒(13.68g/kg)、西药阳性对照药美林组(4.45mL/kg)，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量(5.46g生药/kg)、中剂量(10.92g生药/kg)、大剂量(21.84g生药/kg)、特大剂量(43.68g生药/kg)组(分别相当于临床等效剂量的0.5，1.0，2.0，4.0倍)。各给药组灌胃给药20mL/kg，每日1次。连续给药3d，对照组在同等条件下给予同体积纯水。

2.3.检测时间：连续给药3d，末次给药2h测定小鼠痛阈值。

2.4统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3结果

表30用于治疗流感的中药组合物颗粒连续给药3d对热刺激致小鼠疼痛的影响

注：与模型对照组比，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

从表30可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒中剂量组和大剂量组于给药2h能显著提高小鼠痛阈值(与对照组比较P<0.05)；小儿感冒颗粒于给药2h能显著提高小鼠痛阈值(与对照组比较P<0.05)，由此可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒具有镇痛作用。

综合上述三个镇痛实验可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒能显著降低扭体次数，显著升高小鼠痛阈值，具有明显镇痛作用。

四、止咳实验：用于治疗流感的中药组合物颗粒对氨水刺激咳嗽小鼠的咳嗽影响

1.实验材料

1.1受试药名称：同解热实验

剂量设置依据：①小儿标准体重计算方法采用公式：2岁以上小儿体重计算标准为年龄×2+8。②本试验中采用的参考剂量：小儿临床用量的中间值(5岁，4袋/日)，即8g颗粒×2.625g生药/18kg/d(相当于1.2g生药/kg/d)。③试验中按人与动物体表面积换算，小鼠拟设3个剂量，分别为43.68g生药/kg/d、21.84g生药/kg/d、10.92g生药/kg/d(分别相当于人

临床用量的4倍、2倍、等倍)。

给药途径：灌胃给药。

1.2阳性对照药：

1.2.1银贝止咳颗粒，功能主治：清热解毒，止咳化痰。适用于小儿痰多而稠，发热咽痛或恶风等症。

用法用量：开水冲服。1岁以内一次服半袋～1袋；2～4岁一次服1袋～2袋；5～7岁一次服2袋～3袋；7岁以上的酌量或遵医嘱；一日3次，每袋2g，批号：20130820，哈尔滨儿童制药厂有限公司。

1.2.2盐酸氨溴索片：主要功效：适用于痰液粘稠而不易咳出者。

用法用量：口服。成人：一次1-2片，一日3次，饭后服。每片含30mg，批号：20130923，上海勃林格殷格翰药业有限公司。

1.3试剂：氨水，国药集团化学试剂有限公司，批号20140924。

1.4动物：动物：ICR小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。

2实验方法

2.1剂量分组及给药方法：按体重均衡分组，分别为正常对照组、模型对照组组、中药阳性对照药组银贝止咳颗粒(12.74g/kg)、西药阳性对照药组(21mg/kg)，用于治疗流感的中药组合物颗粒小剂量(10.92g生药/kg)、中剂量(21.84g生药/kg)、大剂量(43.68g生药/kg)组(分别相当于临床等效剂量的1.0，2.0，4.0倍)。每组10只～12只动物，各给药组连续灌胃给药5d，每日1次。模型组在同等条件下给予同体积纯水。

2.2.造模方法：实验前1d动物禁食16h，不禁水，末次给药后1h，将动物放入氨水刺激器内，30s后取出，立即观察咳嗽反应情况。

2.3.检测指标：取出动物后观察咳嗽潜伏期(动物出现咳嗽时间)，5min内咳嗽次数。

2.4统计方法：实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0进行单因素方差分析，并以LSD法进行组间比较，P<0.05为有显著性差异。

3实验结果

表31用于治疗流感的中药组合物颗粒对氨水刺激咳嗽小鼠咳嗽的影响

注：与模型对照组比，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

从表31可见，用于治疗流感的中药组合物颗粒中剂量组和盐酸氨溴索对氨水刺激咳嗽小鼠5min内咳嗽次数有显著抑制作用(与模型对照组比P<0.05)，由此可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒能显著抑制嗽次数，具有止咳作用。

综上上述各药效学实验可知，用于治疗流感的中药组合物颗粒对酵母及内毒素引起的肛温升高有明显解热作用，对醋酸所致毛细血管通透性有明显抑制作用，对角叉菜胶及二甲苯致炎模型有明显抗炎作用，还能显著降低扭体次数，显著升高小鼠痛阈值，具有明显镇痛作用，同时还对氨水刺激咳嗽小鼠5min内咳嗽次数有显著抑制作用，即，本申请所述的中药组合物可同时起到解热、消炎、止咳和镇痛等作用，可同时缓解流感的各种症状，对流行性感冒具有良好的治疗效果。

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