用途为治疗包膜病毒感染的化合物

技术领域

本发明一般涉及某些病毒感染的治疗。更具体地，本发明涉及某些化合物在治疗包膜病毒感染中的用途。

背景技术

病毒是只能在宿主生物体内复制的传染性病原体。病毒可以感染包括人类在内的各种生物体。独立于宿主细胞之外的病毒颗粒通常由称为壳蛋白的蛋白质外壳包裹着的病毒基因组(可能是DNA或RNA，单链或双链，线性或环状)组成。在一些被称为包膜病毒的病毒中，蛋白质外壳被包裹在一层称为包膜的膜中。其他病毒没有包膜。

病毒感染代表着一个重大的医疗保健问题。在过去的20年里，全球爆发病毒感染的次数有所增加。例如，2020年，SARS-CoV-2病毒(严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型)，即引起COVID-19的包膜病毒，迫使世界许多地区进入“封锁”状态，对全球经济和全球健康造成了严重而持久的影响。针对此类病毒确定新的治疗和预防方法非常重要。

抗病毒药物有很多种类，例如进入抑制剂、脱壳抑制剂、释放(或退出)抑制剂、蛋白酶抑制剂以及核苷酸/核苷类似物。例如，以“特敏福”(Tamiflu)品牌销售的小分子药物奥司他韦是一种神经氨酸酶抑制剂，可抑制甲型和乙型流感病毒(其为包膜病毒)从宿主细胞中的释放。病毒对抗病毒药物的耐药性是全球医疗保健领域的一个重大问题。例如，在这方面，病毒蛋白的突变可使这种突变病毒对通过靶向该病毒蛋白发挥作用的抗病毒药物产生耐药性。例如，有报道称甲型流感病毒变种对奥司他韦有耐药性。

显然，替代性的、最好是较有优势的抗病毒治疗(特别是对人类致病的病毒)是非常可取的。这种治疗方法可用于治疗或预防病毒病原体感染(如人类感染)。

发明内容

本发明者惊奇地发现，一类带有特定C-端修饰的三肽化合物对包膜病毒，其包括对人类致病的包膜病毒，具有极佳的抗病毒活性。这种三肽是阳离子(带正电荷)且体积庞大。化合物LTX-109就是这一类化合物中的一种。据报道，LTX-109具有抗菌活性(例如Saravolatzetal.,Antimicrobial Agents and Chemotherapy(2012),Vol.56(8)pages4478-4482)，但这些分子的抗病毒活性尚未得到证实。鉴于本发明者的研究结果，这类化合物显然是目前抗包膜病毒疗法中的一类重要药物。

因此，在一个方面，本发明提供了一种用途为治疗受试者包膜病毒感染的化合物，其中该化合物为式(I)化合物

AA-AA-AA-X-Y-Z(I)

其中，以任何顺序，该AA(氨基酸)单元中的2个为阳离子氨基酸，优选为赖氨酸或精氨酸，但也可以是组氨酸或在pH为7.0时带正电荷的任何非遗传编码或修饰的氨基酸。并且该AA中的1个为具有大亲脂性R基团的氨基酸，R基团具有14-27个非氢原子，优选包含2个或更多个例如2或3个可稠合或连接的环状基团，这些环状基团通常包括5或6个非氢原子，优选为6个非氢原子(对于稠合环来说，非氢原子当然可以是共享的)；

X为N原子，其可以但优选不被支链或非支链的C

Y代表选自-R

R

R

Z是包括1至3个环状基团的基团，每个环状基团具有5或6个非氢原子(优选C原子)，2个或更多个的环状基团可以稠合；一个或多个环可以被取代，并且这些取代基可以但通常不包括极性基团，合适的取代基包括卤素，优选溴或氟和C

Y和Z之间的键是Y的R

合适的非遗传编码氨基酸和修饰过的氨基酸可以提供阳离子氨基酸，其包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸的类似物，例如高赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、二氨基庚二酸、二氨基丙酸和高精氨酸，以及三甲基赖氨酸和三甲基鸟氨酸、4-氨基哌啶-4-羧酸、4-氨基-1-氨甲酰胺哌啶-4-羧酸和4-胍基苯丙氨酸。

AA的大亲脂性R基团可以含有杂原子，例如O、N或S，通常不超过一个杂原子，优选为氮。该R基团优选具有不超过2个极性基团，更优选不含极性基团或仅含一个极性基团，最优选不含极性基团。

根据本发明的用途的化合物优选为肽。

根据本发明的用途的化合物优选为式(II)的化合物

AA

其中：

AA

AA

X、Y和Z如上所定义。

进一步优选地，根据本发明的用途的化合物包括式(III)和(IV)的化合物：

AA

AA

其中AA

在上述化合物中，特别优选某些化合物。具体地，其中具有大亲脂性R基团的氨基酸(为方便起见本文称为AA

在一些优选的实施方案中，Y为-R

在一些优选的实施方案中，Z为苯基(Ph)。

进一步优选的一组化合物是其中-X-Y-Z共同形成基团-NHCH

这些化合物包括所有对映体形式，包括D和L氨基酸，以及由氨基酸R基团和C-端封端基团“-X-Y-Z”内的手性中心产生的对映体。β和γ氨基酸以及α氨基酸都包括在术语“氨基酸”内，N取代的甘氨酸也是如此，它们都可以被认为是AA单元。根据本发明的用途的化合物包括β肽和缩酚肽。

最优选的化合物具有结构式：

t-Bu表示叔丁基。这种具有上述结构式并含有氨基酸2,5,7-三-叔丁基-L-色氨酸的化合物是用于本发明的最优选的化合物(并且在本文中也称为LTX-109)。含有其他阳离子残基以代替Arg、特别是Lys的该化合物的类似物也是高度优选的。含有如上所定义的C-端封端基团的类似物也是高度优选的。

根据本发明的用途的另一种优选化合物是：

该化合物(即结构式如上所示的化合物)可称为Arg-Phe(4-(1-萘基))-Arg-NH-CH

根据本发明的用途的另一种优选化合物是：

该化合物(即结构式如上所示的化合物)可称为Arg-Phe(4-(2-萘基))-Arg-NH-CH

根据本发明的用途的另一种优选化合物是：

t-Bu表示叔丁基。该化合物(即结构式如上所示的化合物)可称为Lys-Tbt-Lys-NH-CH

在优选的实施方案中，根据本发明的用途的化合物选自由LTX-109、LTX-7和LTX-12所组成的组。化合物LTX-109是根据本发明的用途的最优选的化合物。

根据本发明的用途的化合物优选为肽。

式(I)至(IV)的化合物可以是拟肽，本文所描述和定义的肽的拟肽也代表了符合本发明用途的化合物。拟肽的典型特征在于保留其肽等价物的极性、三维尺寸和功能性(生物活性)，但其中的肽键已被取代，并且通常被更稳定的连接取代。“稳定”是指对水解酶的酶促降解具有更强的抵抗力。一般来说，取代酰胺键的键(酰胺键替代物)保留了酰胺键的许多特性，例如构象、空间体积、静电特性、氢键键合的可能性等。哈伍德学术出版社(Horwood Acad)于1996年《药物设计与开发》第14章(Krogsgaard、Larsen、Liljefors和Madsen为编辑)对拟肽的设计和合成技术进行了一般性讨论。在当前的情况下，分子可能与膜反应，而不是与酶的特定活性位点反应，因此，精确模拟亲和力、效能或底物功能等描述的一些问题并不相关。基于给定的肽结构或所需的官能团模序，可以很容易地制备拟肽。合适的酰胺键替代物包括以下基团：N-烷基化(Schmidt,R.et al.,Int.J.Peptide ProteinRes.,1995,46,47)，逆反酰胺(Chorev,M and Goodman,M.,Acc.Chem.Res,1993,26,266)，硫代酰胺(Sherman D.B.and Spatola,A.F.J.Am.Chem.Soc.,1990,112,433)、硫酯、膦酸盐、亚甲基酮(Hoffman,R.V.and Kim,H.O.J.Org.Chem.,1995,60,5107)、羟甲基、氟乙烯基(Allmendinger,T.et al.,TetrahydronLett.,1990,31,7297)、乙烯基、亚甲基氨基(Sasaki,YandAbe,J.Chem.Pharm.Bull.

本发明中使用的拟肽化合物通常具有3个可被识别的亚基，其大小和功能与氨基酸(AA单元)大致相当。因此，术语“氨基酸”可以在本发明中方便地用于指代拟肽化合物的等价亚基。此外，拟肽可具有与氨基酸的R基团等价的基团，并且本文中合适的R基团以及N和C-端修饰基团的讨论(经必要修正)适用于拟肽化合物。

正如上面引用的教科书中所讨论的，除了酰胺键的取代之外，拟肽可涉及用拟二肽或拟三肽结构替换较大的结构单元，在这种情况下，模拟部分涉及肽键，例如唑衍生的模拟物可用作二肽替换物。然而，优选地，拟肽和及其拟肽骨架中的酰胺键已被如上所述的结构替换。

合适的拟肽包括还原肽，其中通过还原剂例如硼烷或氢化物试剂(例如铝酸化锂)的处理，酰胺键被还原成亚甲基胺。该还原还具有增加分子整体阳离子度的额外优势。

其他拟肽包括例如通过逐步合成酰胺功能化的聚甘氨酸而形成的拟肽。可以容易地从其肽前体获得一些拟肽主链，例如已经完全甲基化的肽，Ostresh，J.M.等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)91,11138-11142.中描述了合适的方法。强碱性条件将有利于N-甲基化而非O-甲基化，并导致肽键和N-端氮中的部分或全部氮原子甲基化。

拟肽主链优选包括聚酯、聚胺及其衍生物以及取代的烷烃和烯烃。拟肽优选具有N和C端，其可以如本文所讨论地进行修饰。

本发明的用途的化合物可以任何便利的方式合成。通常，存在的反应基团(例如氨基、硫醇和/或羧基)将在整个合成过程中受到保护。因此，合成的最后一步是对本发明的受保护衍生物的脱保护。

在构建肽时，原则上可以从C-端或N-端开始，但优选从C-端开始。

肽合成的方法是本领域熟知的，但对于本发明来说，在固相载体上进行合成可能是极其便利的，这样的载体是本领域众所周知的。

已知的氨基酸保护基团种类繁多，合适的胺保护基团可包括碳苯氧基(也称Z)、叔丁氧基羰基(也称Boc)、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基(Mtr)和9-芴甲氧羰基(也称Fmoc)。应当理解，当肽从C-末端开始构建时，每个新添加残基的α-氨基上都会具有一个胺基保护基团，该保护基团需要在下一个偶联步骤之前选择性地脱除。

例如，可使用的羧基保护基团包括易于裂解的酯基，如苄基(Bzl)、对硝基苄基(ONb)、五氯苯基(OPClP)、五氟苯基(OPfp)或叔丁基(OtBu)，以及固体载体上的偶联基团，如与聚苯乙烯相连的甲基。

巯基保护基团包括对甲氧基苄基(Mob)、三苯甲基(Trt)和乙酰氨基甲基(Acm)。

存在多种脱除胺基和羧基保护基团的方法。但是，这些方法必须与所采用的合成策略一致。对于用于在下一个偶联步骤之前除去临时α-氨基保护基团的条件下，侧链保护基团必须是稳定的。

胺保护基如Boc和羧基保护基如tBu可通过酸处理(如用三氟乙酸)同时脱除。巯基保护基团例如Trt可以使用氧化剂例如碘选择性地脱除。

根据本发明的用途的化合物(如LTX-109)可按照WO 2009/081152A2中所述方法合成。

根据本发明的用途的化合物(例如肽)表现出抗包膜病毒的活性。换句话说，根据本发明的用途的化合物表现出抗包膜病毒的活性。

本发明的用途的化合物通常在合适的体外试验(或由其测定或由其评估)，例如终点稀释试验(如TCID50试验)中表现出抗包膜病毒的活性(抗包膜病毒活性)。技术人员熟悉合适的体外试验方法，例如合适的终点稀释试验(如TCID50试验)。在本文的实施例部分描述优选的TCID50试验。本发明中使用的化合物可表现出抗包膜病毒的活性(抗包膜病毒活性)，如通过显微镜(如电子显微镜)测定(或评估)。本发明中的用途的化合物可引起病毒包膜破坏(或包膜不稳定或裂解)，其可通过任何合适的方法或试验进行评估(或测定)，例如通过显微镜(如电子显微镜)。一种优选的电子显微镜方法在本文的实施例1中进行了描述。

本发明用途的化合物可通过直接影响膜(或病毒包膜)的机制发挥抗包膜病毒的作用，因此可被视为膜(或病毒包膜)作用的抗病毒剂。因此，这些化合物可被视为具有溶解、破坏甚至穿透病毒包膜的作用。与作用于靶向病毒的蛋白成分或与之相互作用的制剂相比，其具有明显的治疗优势。病毒蛋白的突变可能会产生新形式的病毒蛋白，从而导致对通过靶向这些病毒蛋白发挥作用的抗病毒药物产生耐药性。不过，与特定的病毒蛋白靶点相比，当靶点是(来自宿主细胞的)脂质层(或脂质膜)时，产生耐药性的问题要小得多。包膜破坏效应可导致包膜病毒颗粒迅速破坏。除了直接的膜(包膜)破坏或去稳定活性之外，根据本发明的用途的化合物还可以具有破坏或抑制靶病毒(例如通过其他作用机制)的其他有用特性。

如上所述，本发明提供了本文其他部分中定义的用途为治疗包膜病毒感染的化合物。换句话说，本发明提供了用途为治疗受试者感染的本文定义的化合物，其中该感染的病原体是包膜病毒。

“包膜病毒”是指被包裹在(或包封在)脂质层(或脂质膜)中的病毒。脂质层可以是脂质双分子层。因此，包膜病毒具有一个被外膜或包膜覆盖(或包裹，或包封，或围绕)的衣壳(病毒衣壳)，该外膜包括脂质层(通常是磷脂层)，例如脂质双分子层。病毒包膜还可包括一种或多种病毒编码蛋白(如糖蛋白)。病毒包膜的脂质层来源于(或获得于)受感染宿主细胞的脂质膜(如脂质双分子层)。当然，根据本发明的包膜病毒的包膜来自(或源自或获得自)真核脂质膜，优选来自哺乳动物(如人类)脂质膜。这种真核脂质膜可以是细胞膜或细胞器(如内质网；或高尔基体；或内质网-高尔基体中间体(ERGIC)，有时也称为囊泡-管状簇(VTC))。病毒包膜通常是在宿主细胞膜(脂质双分子层)上获得的，这一过程可称为“出芽”或“脱芽”。在出芽过程中，新形成的病毒颗粒会被宿主细胞(病毒的宿主细胞)的脂质膜制成的外层“包封”(或“包裹”或“覆盖”)起来。因此，病毒包膜的脂质层(或脂质膜)可视为直接来自宿主细胞(直接来自宿主细胞膜)。

在一些实施方案中，包膜病毒是具有源自(获得自或表征自)细胞膜(即病毒宿主细胞的细胞膜)的包膜(病毒包膜)的病毒。细胞膜也可称为质膜、细胞质膜或原生质膜。

在一些实施方案中，包膜病毒是一种具有源自(获得自或表征自)细胞内细胞器(膜结合细胞器)膜(即病毒宿主细胞的细胞器膜)的包膜(病毒包膜)的病毒。此类膜结合细胞器包括如内质网；或高尔基体；或内质网-高尔基体中间体(ERGIC)。

任何包膜病毒感染都可以根据本发明进行治疗。通常情况下，包膜病毒优选为感染(或能够感染)哺乳动物的病毒。例如，哺乳动物包括人类和任何家畜、家养动物或实验动物。具体实例包括小鼠、大鼠、猪、猫、狗、羊、兔、牛和猴。在本发明的一些实施方案中，哺乳动物是人。因此，通常情况下，根据本发明的包膜病毒优选为哺乳动物病原体，优选人类病原体。

在一些实施方案中，包膜病毒是呼吸道感染的病原体。呼吸道感染可以是上呼吸道和/或下呼吸道感染。在一些实施方案中，呼吸道感染是上呼吸道感染。

包膜病毒可以是DNA病毒或RNA病毒。在一些实施方案中，包膜病毒是RNA病毒(例如单链(ss)RNA包膜病毒)。

在一些实施方案中，包膜病毒可以是以下类型之一的病毒：疱疹病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒、非洲猪瘟病毒、黄病毒、甲病毒、披膜病毒、冠状病毒、正粘病毒、正肺病毒、副粘病毒、弹状病毒、布尼亚病毒、丝状病毒或逆转录病毒。

在一些实施方案中，包膜病毒是正肺病毒(例如呼吸道合胞病毒，RSV)、正粘病毒(例如流感病毒，例如甲型流感病毒)或冠状病毒(例如严重急性呼吸综合征冠状病毒2型，SARS-CoV-2)。

在一些实施方案中，包膜病毒是正肺病毒(例如呼吸道合胞病毒，RSV)。

在一些实施方案中，包膜病毒是正粘病毒(例如甲型流感病毒)。

在一些实施方案中，包膜病毒是冠状病毒(例如严重急性呼吸综合征冠状病毒2型，SARS-CoV-2)。

在一些实施方案中，包膜病毒选自由呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒和严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)组成的组。

在一些实施方案中，包膜病毒是呼吸道合胞病毒(RSV)。RSV可引起呼吸道感染，如人类呼吸道感染。在一些实施方案中，包膜病毒不为RSV。

在一些实施方案中，包膜病毒是甲型流感病毒。甲型流感可引起呼吸道感染，如人类呼吸道感染。在一些实施方案中，包膜病毒不为甲型流感病毒。

在一些实施方案中，包膜病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)。SARS-CoV-2可引起呼吸道感染，如人类呼吸道感染。SARS-CoV-2是可导致2019冠状病毒疾病(COVID-19)的病毒。在一些实施方案中，包膜病毒不为SARS-CoV-2病毒。

换言之，一方面，本发明提供了如本发明所定义的化合物，其用途为治疗由包膜病毒感染引起的疾病或病症。本文描述的本发明的其他方面的实施方案经必要修改后适用于本发明的该方面。

在一些实施方案中，所治疗的疾病或病症是呼吸道感染(例如上呼吸道和/或下呼吸道感染)。

在一些实施方案中，所治疗的疾病或病症是流感。

在一些实施方案中，所治疗的疾病或病症是2019冠状病毒疾病(COVID-19)。

根据本发明的用途的化合物通常以制剂或组合物的形式存在(或施用)，该制剂或组合物包括与合适的稀释剂、载体和/或赋形剂混合的一种或多种根据本发明的用途的化合物。合适的稀释剂、赋形剂和载体是技术人员所熟知的。因此，本发明提供了一种制剂(或组合物)，其包括本发明所定义的化合物，该化合物的用途为治疗包膜病毒感染。通常情况下，制剂(或组合物)优选为药物制剂(或药物组合物)。因此，稀释剂、载体和/或赋形剂优选为药学上可接受的稀释剂载体和/或赋形剂。

根据本发明的用途的组合物可以例如以适合于口服、鼻腔、呼吸道(如上呼吸道)、肠胃外、静脉内、局部或直肠给药的形式施用。技术人员很容易选择合适的施用形式，例如根据要治疗的感染类型(或部位)来选择。

根据本发明的用途的化合物(或制剂或组合物)可以口服、经鼻、肠胃外、静脉内、局部或直肠施用。

根据本发明的用途的化合物(或制剂或组合物)可以施用于呼吸道，如上呼吸道。

如本文所用，术语“药用”包括本发明在兽医方面的应用。

本文定义的活性化合物可以以常规药理学给药形式存在，例如片剂、包衣片剂、溶液、乳剂、脂质体、粉剂、胶囊或持续释放形式。

可以使用常规药物赋形剂以及通常的生产方法来制备这些剂型。

片剂可通过将一种或多种活性成分与已知赋形剂混合制成，该赋形剂例如为稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或乳糖；崩解剂，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，如淀粉或明胶；润滑剂，如硬脂酸镁或滑石粉，和/或缓释剂，如羧聚乙烯、羧甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素或聚乙酸乙烯酯。

如果需要，片剂可以由多层组成。在生产包衣片剂时，可用通常用于片剂包衣的制剂，例如聚乙烯吡咯烷酮或虫胶、阿拉伯树胶、滑石粉、二氧化钛或糖，将其与以类似于片剂的方式获得的片芯包衣制备。为了获得持续释放或避免不相容性，片芯也可以由多个层组成。片剂-包衣也可以由多个层组成，以获得持续释放，在这种情况下，可以使用上述用于片剂的赋形剂。

例如，溶液(如注射溶液)可以以常规方式生产，例如添加防腐剂如对羟基苯甲酸酯，或稳定剂，如EDTA。溶液可以装入小瓶或安瓿中。

含有一种或多种活性成分的胶囊可以例如通过将活性成分与惰性载体例如乳糖或山梨糖醇混合，并将混合物填充到明胶胶囊中来制备。合适的栓剂可以例如通过将活性成分或活性成分组合与为此目的设想的常规载体如天然脂肪或聚乙二醇或其衍生物混合来制备。

剂量可根据受试者的年龄、体重和性别等参数而有所不同。技术人员可以容易地确定合适的剂量。可以容易地制备合适的剂量单位。

根据本发明进行的治疗可能涉及与一种或多种用途为治疗或预防包膜病毒感染(或由此引起的病症)的其他活性剂联合给药。一般而言，一种或多种其他活性剂可以与根据本发明的化合物基本上同时施用于受试者；例如来自单一药物组合物或来自密切配合施用的两种药物组合物。因此，在一些实施方案中，药物组合物可以额外包括一种或多种其他的活性成分(例如，一种或多种其他的抗病毒化合物)。或者，可以在施用根据本发明的化合物之后向受试者施用一种或多种其他活性剂。本发明所用的“在…之后”是指“错开的”，即在与施用根据本发明的化合物不同的时间向受试者施用一种或多种其他制剂。一般而言，两种药剂需在有效间隔开的时间施用，以允许两种药剂发挥其各自的治疗效果，即，它们以“生物学有效时间间隔”施用。一种或多种其他活性剂可以在施用根据本发明的化合物之前的生物学有效时间或在施用根据本发明的化合物之后的生物学有效时间施用于受试者。

本文中使用的术语“治疗”或“疗法”包括治疗和预防(或预防性)疗法。因此，根据本发明的用途的化合物可以用于治疗或预防。

换言之，本发明提供了治疗受试者(或患者)的包膜病毒感染的方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗或预防有效量的本文所定义的化合物。本发明所描述与本发明其他方面有关的本发明实施方式经必要修改后也适用于本发明的这一方面。

本发明还提供了一种治疗由包膜病毒感染引起(或以包膜病毒感染为特征)的疾病或病症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗或预防有效量的本文所定义的化合物。本文所描述的与本发明其他方面有关的本发明实施方案经必要修改后也适用于本发明的这一方面。

有效量(如治疗或预防有效量)将根据临床评估确定，并可容易地监测。施用的量通常应当有效杀死或灭活所有或部分靶向包膜病毒或防止或降低其繁殖率或以其他方式减轻其对身体的有害影响。也可以进行预防性药物施用。

进一步换言之，本发明提供了本文所定义的化合物在制备用于治疗包膜病毒感染的药物中的用途。本文所描述的与本发明其他方面有关的本发明实施方案经必要修改后也适用于本发明的这一方面。

进一步换言之，本发明提供了本文所定义的化合物在制备用于治疗由包膜病毒感染引起(或以包膜病毒感染为特征)的疾病或病症的药物中的用途。本文所描述的与本发明其他方面有关的本发明实施方案经必要修改后也适用于本发明的这一方面。

进一步换言之，本发明提供了本文所定义的化合物在治疗包膜病毒感染的用途。本文所描述的与本发明其他方面有关的本发明实施方案经必要修改后也适用于本发明的这一方面。

进一步换言之，本发明提供了本文所定义的化合物在治疗由包膜病毒感染引起(或以包膜病毒感染为特征)的疾病或病症的用途。本文所描述的与本发明其他方面有关的本发明实施方案经必要修改后也适用于本发明的这一方面。

另一方面，提供了一种用途为使包膜病毒的包膜不稳定和/或渗透的本发明化合物。

本文使用的术语“受试者”或“患者”包括任何哺乳动物，例如人类和任何家畜、家养动物或实验动物。具体实例包括小鼠、大鼠、猪、猫、狗、羊、兔、牛和猴。然而，优选地，受试者或患者为人类受试者。因此，根据本发明进行治疗的受试者或患者优选为人类。

在一些实施方案中，根据本发明的受试者是患有包膜病毒感染的受试者。在一些实施方案中，根据本发明的受试者是怀疑患有包膜病毒感染的受试者。在一些实施方案中，根据本发明的受试者可以是处于发生(或处于感染)包膜病毒感染的风险中的受试者。

在一些实施方案中，根据本发明的受试者是患有由包膜病毒感染引起的疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，根据本发明的受试者是怀疑患有由包膜病毒感染引起的疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，根据本发明的受试者可以是处于发生(或处于感染)由包膜病毒感染引起的疾病或病症的风险中的受试者。

本发明还提供了包含一种或多种根据本发明的化合物的试剂盒，其用于本文所描述的方法和用途。优选地，该试剂盒包含用于治疗本文所描述的有包膜病毒感染的说明书。

如在整个申请中所使用的，术语“一个(a)”和“一个(an)”的含义是指所引用的“至少一个”、“至少第一个”、“一个或多个”或“多个”所指的组分或步骤，除非其后具体说明上限的情况。

此外，当本发明使用术语“包括(comprise)”、“包括(comprises)”、“具有(has)”或“具有(having)”,或其他等同术语时，则在一些更具体的实施方案中，这些术语包括术语“由...组成”或“基本上由...组成”，或其他同等术语。

附图说明

现在将参考以下非限制性实施例和附图进一步描述本发明，其中：

图1：

具体实施方式

实施例

实施例1：1％LTX-109对慢病毒类颗粒包膜的体外影响

本实施例中使用的病毒是慢病毒类颗粒，其表面表达水泡性口炎糖蛋白(VSV-G)。这种病毒类颗粒表现为完整的包膜病毒，但其没有基因组。将病毒样品与对照组病毒(在缓冲液中)或含有1％ LTX-109最终溶液的病毒一起孵育10分钟，然后将病毒样品装载到辉光放电处理的电子显微镜网格上。然后用滤纸干燥网格，再加入阴性染色液(4％乙酸铀水溶液)2分钟。除去染色液后，将网格短暂干燥，然后在JEOLJEM-1230电子显微镜中以80kV电压成像。图像用Morada相机拍摄，并用Adobe Photoshop做进一步处理。获得的图像如图1所示。

图1清楚地显示，经过对照(仅缓冲液)处理(孵育)后的慢病毒类颗粒具有完整的包膜，而经过1％ LTX-109处理(孵育)后的慢病毒类颗粒则具有被破坏(或被溶解)的包膜。因此，该实验表明LTX-109对慢病毒类颗粒具有抗病毒膜破坏/不稳定作用。

实施例2：LTX-109对甲型流感病毒(IAV)的抗病毒活性

目的

本研究的目的是测试LTX-109对IAV(甲型流感病毒)的抗病毒活性。

方法

为了检测1％的LTX-109(w/v)是否具有抗IAV病毒的活性，将1x10

1小时后，加入过量冷培养基停止孵育，并通过过滤器将制剂与病毒物理分离，以减少对试验细胞的细胞毒性。在1％的制剂中观察到一些浑浊现象，但没有沉淀。通过对微量滴定板中的单层MDCK-II细胞进行连续稀释(连续十倍稀释)来定量感染性病毒(MDCK-II细胞是哺乳动物细胞，在病毒感染后能显示细胞病变效应(CPE))。通过将过滤步骤分离出来的病毒重新悬浮于1毫升培养基中，获得连续稀释的起始溶液(即纯溶液(或未稀释溶液))。对于连续稀释中的病毒的每个稀释度，都在微量滴定板的八个孔中进行测试(即病毒的每个稀释度分别应用于八个孔，每个孔中含有一个MDCK-II细胞单层)。还进行了适当的对照。细胞感染五天后，通过测定半数细胞(特定稀释度下的半数孔)显示病毒诱导的细胞病变效应(TCID50)的稀释度来量化病毒滴度。TCID50(TCID50/ml)试验法(组织培养感染剂量50试验法)是一种终点稀释试验法，在本领域众所周知，通常用于定量检测病毒滴度。TCID50/ml提供了病毒感染单位/ml的测量。“/ml”是指上述起始溶液(即纯/未稀释溶液)的/ml。

为了确定制剂对试验细胞是否有残余的细胞毒性作用，还进行了一项平行测试，即在没有病毒的情况下执行相同的程序。

结果

1％ LTX-109对甲型流感病毒(IAV)的抗病毒活性测试结果见表1(下文所述)。

与PBS对照孵育1小时后，测得IAV的平均值为5.16E+04TCID50/ml。

用1％ LTX-109孵育1小时后，测得的平均值为1.58E+01TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了3个log以上，即99.9％。

过滤后，仅在1％制剂的第一次稀释前观察到细胞毒性，但不影响测试的有效性。

表1.用PBS或1％ LTX109孵育1小时后获得的平均病毒滴度。与PBS对照相比，测得的感染率降低了3个log以上。

表1

结论

根据本发明报告的研究结果，与PBS对照相比，将IAV暴露于1％ LTX-109中1小时可使病毒的感染率降低3个log以上，相当于降低了99.9％。这些结果表明，LTX-109对甲型流感病毒(一种包膜病毒)具有优异的抗病毒活性。

实施例3：λLTX-109对呼吸道合胞病毒(RSV)的抗病毒活性

目的

本研究的目的是测试LTX-109对RSV(呼吸道合胞病毒)的抗病毒活性。

方法

为了检测1％ LTX-109(w/v)和0.1％ LTX-109(w/v)是否具有抗RSV病毒活性，将1x 10

1小时后，加入过量冷培养基停止孵育，并通过过滤器将制剂与病毒物理分离，以减少对检测细胞的细胞毒性。在制剂中观察到一些浑浊现象，特别是1％的制剂，但没有沉淀。通过对微量滴定板中的单层Hep2细胞进行连续稀释(连续十倍稀释)来定量感染性病毒(Hep2细胞是哺乳动物细胞，在病毒感染后能显示细胞病变效应(CPE))。通过将过滤步骤分离出来的病毒重新悬浮于1毫升培养基中，获得连续稀释的起始溶液(即纯溶液(或未稀释溶液))。对于连续稀释中的病毒的每个稀释度，都在微量滴定板的八个孔中进行测试(即病毒的每个稀释度分别应用于八个孔，每个孔中含有一个Hep2细胞单层)。还进行了适当的对照。细胞感染八天后，通过测定半数细胞(特定稀释度下的半数孔)显示病毒诱导的细胞病变效应(TCID50)的稀释度来量化病毒滴度。TCID50(TCID50/ml)试验法(组织培养感染剂量50试验法)是一种终点稀释试验法，在本领域众所周知，通常用于定量检测病毒滴度。TCID50/ml提供了病毒感染单位/ml的测量。“/ml”是指上述起始溶液(即纯/未稀释溶液)的/ml。

为了确定制剂对试验细胞是否有残余的细胞毒性作用，还进行了一项平行测试，即在没有病毒的情况下执行相同的程序。

结果

1％ LTX-109和0.1％ LTX-109对呼吸道合胞病毒(RSV)的抗病毒活性测试结果汇总于表2(如下所述)。

与PBS对照孵育1小时后，测得的RSV平均值为3.13E+05TCID50/ml。

用1％的LTX-109培养1小时后，测得的平均值为1.58E+02TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了3个log以上，即99.9％。

用0.1％ LTX-109孵育1小时后，测得的平均值为8.76E+01TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了3个log以上，即99.9％。

过滤后，仅在1％制剂的第一次稀释前观察到细胞毒性，但不影响测试的有效性。0.1％制剂未观察到细胞毒性。

表2.用PBS或1％ LTX-109或0.1％ LTX-109孵育1小时后获得的平均病毒滴度。与PBS对照相比，测试的两种LTX-109浓度的感染性均下降3个log以上。

表2

/>

结论

根据本发明报告的研究结果，与PBS对照相比，将RSV暴露于1％LTX-109或0.1％LTX-109中1小时，可以使病毒的感染率降低3个log以上，相当于降低了99.9％。这些结果表明，LTX-109对RSV(一种包膜病毒)具有优异的抗病毒活性。

实施例4：LTX-109对SARS-CoV-2病毒的抗病毒活性

目的

本研究的目的是测试LTX-109对SARS-CoV-2病毒的抗病毒活性。

方法

为了检测1％的LTX-109(w/v)是否具有抗SARS-CoV-2病毒活性，将5x10

1小时后，加入过量冷培养基停止孵育，并通过过滤器将制剂与病毒物理分离，以减少对试验细胞的细胞毒性。在1％的制剂中观察到一些浑浊现象，但没有沉淀。通过对微量滴定板中的单层Vero细胞进行连续稀释(连续十倍稀释)来定量感染性病毒(Vero细胞是哺乳动物细胞，在病毒感染后能显示细胞病变效应(CPE))。通过将过滤步骤分离出来的病毒重新悬浮于1毫升培养基中，获得连续稀释的起始溶液(即纯溶液(或未稀释溶液))。对于连续稀释中的病毒的每个稀释度，都在微量滴定板的八个孔中进行测试(即病毒的每个稀释度分别应用于八个孔，每个孔中含有一个Vero细胞单层)。还进行了适当的对照。细胞感染五天后，通过测定半数细胞(特定稀释度下的半数孔)显示病毒诱导的细胞病变效应(TCID50)的稀释度来量化病毒滴度。TCID50(TCID50/ml)试验法(组织培养感染剂量50试验法)是一种终点稀释试验法，(组织培养感染剂量50检测法)是一种终点稀释检测法，在本领域众所周知，通常用于定量检测病毒滴度。TCID50/ml提供了病毒感染单位/ml的测量。“/ml”是指上述起始溶液(即纯/未稀释溶液)的/ml。

为了确定制剂对试验细胞是否有残余的细胞毒性作用，还进行了一项平行测试，即在没有病毒的情况下执行相同的程序。

结果

1％ LTX-109对SARS-CoV-2病毒的抗病毒活性测试结果总结于表3中(如下所述)。

与PBS对照孵育1小时后，测得SARS-CoV-2的平均值为4.27E+06TCID50/ml。

用1％的LTX-109孵育1小时后，测得的平均值为1.99E+02TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了4个log以上，即99.99％。

过滤后，仅在1％制剂的第一次稀释前观察到细胞毒性，但不影响测试的有效性。

表3.用PBS或1％LTX-109孵育1小时后获得的平均病毒滴度。与PBS对照相比，测得感染率降低了4个log以上。

表3

结论

根据本发明报告的研究结果，与PBS对照相比，将SARS-CoV-2暴露于1％LTX-109中1小时可使病毒的感染率降低4个log以上，相当于降低了99.99％。这些结果表明，LTX-109对SARS-CoV-2(一种包膜病毒)具有优异的抗病毒活性。

实施例5：LTX-12对SARS-CoV-2病毒的抗病毒活性

目的

本研究的目的是测试LTX-12对SARS-CoV-2病毒的抗病毒活性。

方法

所使用的SARS-CoV-2分离株来自BEI资源(BEI Resources)：SARS-CoV-2分离株英国/02/2020(BEI资源目录号(NR52359))。

为了检测的LTX-12(w/v)是否具有抗SARS-CoV-2病毒活性，将7x 10

在室温(RT)下孵育1小时后，通过添加过量的冷试验培养基(5ml)停止孵育，并通过过滤器(Sartorius VivaSpin 6,100000MWCO,PES(Sartorius,VS0642))将制剂与病毒物理分离，以减少对试验细胞的细胞毒性。试验培养基为M199培养基(Gibco，41150087)，辅以0.4％ BSA(Gibco 15260037)和1X p/s(Gibco 15070063)。

感染性病毒通过前一天以8000个细胞/100μl/孔铺在微量滴定板上的Vero细胞单层进行连续稀释(10倍连续稀释，10

为了确定LTX-12对试验细胞是否有残余的细胞毒性作用，还进行了一项平行测试，即在没有病毒的情况下执行相同的程序。

结果

LTX-12对SARS-CoV-2病毒的抗病毒活性测试结果总结于表4中(如下所述)。

与PBS对照孵育1小时后，测得SARS-CoV-2的平均值为6.86E+05TCID50/ml。

用LTX-12孵育1小时后，测得的平均值为1.58E+02TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了3个log以上，即99.977％。

用基于Triton的裂解缓冲液(阳性对照)孵育1小时后，测得2.80E+01TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了4个log以上，即99.996％。

在上述平行试验中，未观察到对Vero细胞(试验细胞)有明显的细胞毒性。

表4.用PBS或LTX-12孵育后获得的平均病毒滴度。表中还显示了用基于Triton的裂解缓冲液(阳性对照)孵育后获得的病毒滴度。

表4

结论

根据本发明报告的结果，与PBS对照相比，将SARS-CoV-2暴露于LTX-12中1小时可使病毒的感染率降低约3.6个log，相当于至少降低了99.9％。这些结果表明，LTX-12对SARS-CoV-2(一种包膜病毒)具有优异的抗病毒活性。

作为阳性对照的Triton提供了一个基准，并确认了试验的适用性。已知包膜病毒易受Triton影响，虽然Triton(阳性对照)的影响略微超过LTX-12，但与之相比，检测的肽(LTX-12)仍然表现出色。

细胞毒性测试表明，过滤步骤后可能与病毒相关的任何残留肽都不会对TCID50试验中的活性产生影响。

实施例6：LTX-7对甲型流感病毒的抗病毒活性

目的

本研究的目的是测试LTX-7对甲型流感病毒的抗病毒活性。

方法

使用的甲型流感菌株为A/WSN/33株(H1N1)。

为了检测的LTX-7(w/v)是否具有抗甲型病毒活性，将5x 10

在室温(RT)下孵育1小时后，通过添加过量的冷试验培养基(5ml)停止孵育，并通过过滤器(Sartorius Viva Spin6,100,000MWCO,PES(Sartorius,VS0642))将制剂与病毒物理分离，以减少对试验细胞的细胞毒性。试验培养基为DMEM(Gibco 61965-026)，辅以0.1％ FBS(Gibco 10500-064)、20mM Hepes(Gibco 15630-056)、0.3％ BSA组分V(Gibco15260037)和1X p/s(Gibco15070063)。

感染性病毒通过前一天以9000个细胞/100μL/孔铺在微量滴定板上的MDCK-II细胞单层进行连续稀释(10倍连续稀释，10

为了确定LTX-7对试验细胞是否有残余的细胞毒性作用，还进行了一项平行测试，即在没有病毒的情况下执行相同的程序。

结果

LTX-7对甲型流感病毒(IAV)的抗病毒活性测试结果见表5(下文所述)。

与PBS对照孵育1小时后，测得甲型流感病毒的平均值为1.33E+06TCID50/ml。

用LTX-7孵育1小时后，测得的平均值为1.58E+01TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了4个log以上，即99.99％。

用基于TritonX100的裂解缓冲液(阳性对照)孵育1小时后，测得1.58E+01TCID50/ml，与PBS对照相比，感染率降低了4个log以上，即99.99％以上。

过滤后，(仅)在LTX-7制剂、TritonX-100(阳性对照)和PBS(不含病毒)的纯原液下观察到对MDCK-II细胞的细胞毒性，但不影响测试的有效性。

表5.用PBS或LTX-7培养后获得的平均病毒滴度。表中还显示了用基于与TritonX-100裂解缓冲液(阳性对照)孵育后获得的病毒滴度。

表5

结论

根据本发明报告的结果，与PBS对照相比，将甲型流感病毒暴露于LTX-7中1小时，可使甲型流感病毒的感染率降低4.75个log。这相当于至少减少了99.99％。这些结果表明，LTX-7对甲型流感病毒(一种包膜病毒)具有优异的抗病毒活性。

作为阳性对照的TritonX-100提供了一个基准，并确认了试验的适用性。已知包膜病毒易受TritonX-100影响。在这项研究中，LTX-7的表现与阳性对照一样好。

细胞毒性测试表明，将LTX-7直接应用于MDCK-II细胞仅在进行任何连续稀释之前(即使用纯制剂)才具有细胞毒性。因此，过滤步骤后可能与病毒相关的任何残留肽都不会对TCID50试验中的活性产生影响。