一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂及制备方法

技术领域

本发明涉及医用检测试剂技术领域，尤其涉及一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂及制备方法。

背景技术

目前，免疫比浊法是目前免疫化学分析中常用的化学法，不仅可以使用全自动仪器进行测试实现自动化管理，也可以用于POCT试剂进行快速检测，免疫比浊法的基本原理将抗体吸附在大小式中，均匀一致的乳胶颗粒上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时，发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗粒发生凝聚，胶乳颗粒凝聚时，改变了反应液的散射性和透光性，反应液散光性能或透光性能的改变与被测抗原浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。

但现有技术中，测试低浓度抗原和小分子抗原时，由于抗原少，抗原分子量小，表面位点少，抗原抗体复合物颗粒小，光强度弱，导致测试低值样本灵敏度不好。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂及制备方法，旨在解决现有技术中的测试低浓度抗原和小分子抗原时，由于抗原少，抗原分子量小，表面位点少，抗原抗体复合物颗粒小，光强度弱，导致测试低值样本灵敏度不好的技术问题。

为实现上述目的，本发明采用的一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂，所述可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠、吐温-20、聚乙二醇35000、特定蛋白A和纯净水；

所述R2试剂包括4-吗啉乙磺酸、胶乳微球、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、抗体、牛血清白蛋白和纯净水。

本发明还提供一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂的制备方法，制备如上述所述的可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂，包括如下步骤：

使用原料二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠和纯净水制成PB溶液备用；

向所述PB溶液中添加吐温-20、聚乙二醇35000、特定蛋白A和纯净水制成所述R1试剂；

使用纯净水、4-吗啉乙磺酸、胶乳微球、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、抗体和牛血清白蛋白制成所述R2试剂。

其中，制备PB溶液包括如下步骤：

使用精准度为1/10000g的天平称取0.781g的二水合磷酸二氢钠和1.79g的十二水合磷酸氢二钠倒入至烧杯之中；

使用量筒量取80ml的纯净水并加入至烧杯之中，使用玻璃棒搅拌至完全溶解；

以此制得PB溶液。

其中，制备R1试剂包括如下步骤：

使用精准度为1/10000g的天平称取0.02g的吐温-20和8g的聚乙二醇35000；

将0.02g的吐温-20和8g的聚乙二醇35000倒入至PB溶液之中；

向烧杯之中添加特定蛋白A并搅拌至溶解，制得混合溶液A；

将混合溶液A倒入至定容瓶之中，并添加纯净水直至达到100ml，摇晃均匀后倒入至100～200ml的棕色瓶之中，于2～8℃存储；

以此R1试剂制备完成。

其中，制备R2试剂包括如下步骤：

取100ml烧杯，依次量取61.48ml的纯净水、1.42ml的4-吗啉乙磺酸、7.1ml的胶乳微球和1.42ml的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，并倒入至烧杯之中，于37℃恒温箱之中搅拌20min；

向烧杯之中添加抗体，于37℃恒温箱搅拌1h；

再向烧杯之中添加1.42ml的牛血清白蛋白，并于37℃恒温箱中搅拌1h，制得混合溶液B；

将所述混合溶液B20000r/min离心20min，并去除上清液，超声加入R2保存液；

以此R2试剂制备完成。

本发明的一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂及制备方法的有益效果为：通过在所述R1试剂中加入特定蛋白A先于样本中的抗原结合，抗原和特定蛋白A的复合物再与所述R2试剂中的抗体致敏胶乳颗粒结合增加了抗原抗体复合物的颗粒大小，提高了散射光和透射光的强度，提高了试剂的灵敏度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明的一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂的制备方法的步骤流程图。

图2是本发明的制备PB溶液的方法步骤流程图。

图3是本发明的制备R1试剂的方法步骤流程图。

图4是本发明的制备R2试剂的方法步骤流程图。

具体实施方式

本发明提供了一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂，所述可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠、吐温-20、聚乙二醇35000、特定蛋白A和纯净水；

所述R2试剂包括4-吗啉乙磺酸、胶乳微球、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、抗体、牛血清白蛋白和纯净水。

请参阅图1至图4，本发明还提供一种可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂的制备方法，制备如上述所述的可以提高免疫比浊试剂盒灵敏度试剂，包括如下步骤：

S1：使用原料二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠和纯净水制成PB溶液备用；

S2：向所述PB溶液中添加吐温-20、聚乙二醇35000、特定蛋白A和纯净水制成所述R1试剂；

S3：使用纯净水、4-吗啉乙磺酸、胶乳微球、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、抗体和牛血清白蛋白制成所述R2试剂。

进一步地，制备PB溶液包括如下步骤：

S11：使用精准度为1/10000g的天平称取0.781g的二水合磷酸二氢钠和1.79g的十二水合磷酸氢二钠倒入至烧杯之中；

S12：使用量筒量取80ml的纯净水并加入至烧杯之中，使用玻璃棒搅拌至完全溶解；

S13：以此制得PB溶液。

进一步地，制备R1试剂包括如下步骤：

S21：使用精准度为1/10000g的天平称取0.02g的吐温-20和8g的聚乙二醇35000；

S22：将0.02g的吐温-20和8g的聚乙二醇35000倒入至PB溶液之中；

S23：向烧杯之中添加特定蛋白A并搅拌至溶解，制得混合溶液A；

S24：将混合溶液A倒入至定容瓶之中，并添加纯净水直至达到100ml，摇晃均匀后倒入至100～200ml的棕色瓶之中，于2～8℃存储；

S25：以此R1试剂制备完成。

进一步地，制备R2试剂包括如下步骤：

S31：取100ml烧杯，依次量取61.48ml的纯净水、1.42ml的4-吗啉乙磺酸、7.1ml的胶乳微球和1.42ml的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，并倒入至烧杯之中，于37℃恒温箱之中搅拌20min；

S32：向烧杯之中添加抗体，于37℃恒温箱搅拌1h；

S33：再向烧杯之中添加1.42ml的牛血清白蛋白，并于37℃恒温箱中搅拌1h，制得混合溶液B；

S34：将所述混合溶液B20000r/min离心20min，并去除上清液，超声加入R2保存液；

S35：以此R2试剂制备完成。

在本发明中，通过在所述R1试剂中加入特定蛋白A先于样本中的抗原结合，抗原和特定蛋白A的复合物再与所述R2试剂中的抗体致敏胶乳颗粒结合增加了抗原抗体复合物的颗粒大小，提高了散射光和透射光的强度，提高了试剂的灵敏度；

在使用时，将样本添加至装有所述R1试剂的反应杯之中，均匀摇晃10s，再向反应杯中加入所述R2试剂，均匀摇晃5s，将反应杯放入至HP-083/4-Ⅱ特定蛋白分析仪的测试孔之中，仪器自动测试并显示结果。

以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。