一种盐酸金刚烷胺的含量检测方法

技术领域

本发明涉及药品的质量检测方法，尤其是一种盐酸金刚烷胺的含量检测方法。

背景技术

盐酸金刚烷胺(amantadine hydrochloride)是饱和三环癸烷的氨基衍生物，可用于治疗帕金森病、帕金森综合征、药物诱发的锥体外系疾患、一氧化碳中毒后帕金森综合征及老年人合并有脑动脉硬化的帕金森综合征，也可用于防治A型流感病毒所引起的呼吸道感染。其结构中无不饱和共价键，在紫外条件下无明显吸收，建立操作简单、稳定高效、适用性广的盐酸金刚烷胺含量检测方法有利于有效的控制盐酸金刚烷胺制剂产品的质量，从而确保制剂的临床疗效。

盐酸金刚烷胺的含量检测方法在中国药典、美国药典中均有收载，其中中国药典推荐使用电位滴定法，操作复杂，专属性较差；美国药典推荐使用气相色谱法，操作复杂，易产生操作误差，不适用于大量样品的检测。另外，文献、专利中均有盐酸金刚烷胺含量检测方法的报道，其中，专利CN102879517A、CN101816682A、CN101816681B中提及使用滴定法测定盐酸金刚烷胺含量，该方法操作复杂，专属性差；专利CN101797277B中提及使用HPLC-ELSD法测定盐酸金刚烷胺含量，该方法操作简单，但对实验室设备要求较高，需要使用高压气体，且稀释剂中不能含有不可挥发的盐；陈建《反向高效液相色谱法同时测定复方氨酚烷胺片中4种组分的含量》一文中提到使用高效液相色谱法，220nm波长检测盐酸金刚烷胺含量，该方法操作简单，但盐酸金刚烷胺在紫外条件下无明显吸收，该方法无法重现；高毓涛《高效液相-示差折光法同时测定复方氨酚烷胺片中对乙酰氨基酚和盐酸金刚烷胺的含量》及《HPLC-RID测定盐酸金刚烷胺片中盐酸金刚烷胺的含量》文中提到使用示差折光检测器对盐酸金刚烷胺含量进行测定，该方法采用甲醇水溶液作为流动相体系，操作简单，但稀释剂对盐酸金刚烷胺含量的检测影响较大，在使用纯化水、pH1.0介质、pH6.8介质等作为稀释剂时，样品检测会受到干扰甚至无法检测。在上述基础上，申请人对该药物的检测方法进行了研究，以期探索适用范围广，操作简便，能稳定检测的检测方法。

公开号为CN 101576546 A的中国专利申请公开了一种高效液相色谱蒸发光散射测定盐酸金刚烷胺含量的方法，该方法检测器为蒸发光散射检测器，流动相为醋酸铵溶液与甲醇的组合体系。该方法所用的蒸发光散射检测器(ELSD)灵敏度较低，流动相和稀释剂中不能存在不易挥发的盐，实验室要求也较高，需要使用高压气体。

在盐酸金刚烷胺制剂的检测中，首先需要从盐酸金刚烷胺制剂中将盐酸金刚烷胺进行充分溶出，如果不能将盐酸金刚烷胺充分提取出来会严重影响到结果的准确度。现有的盐酸金刚烷胺含量的高效液相色谱检测方法都忽略了盐酸金刚烷胺的溶出步骤，但是申请人发现溶出介质的种类会对检测结果产生很大的影响，因此，需要开发出一种高效检测方法能适合不同溶出介质。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种盐酸金刚烷胺的含量检测方法，该方法操作简便、稳定高效、准确度高、重现性好、适用范围广，可用于多种稀释剂或溶出介质条件下盐酸金刚烷胺的含量检测，能有效地控制盐酸金刚烷胺制剂的质量，从而确保制剂的临床疗效。

本发明的技术方案如下：

一种盐酸金刚烷胺的含量检测方法，包括以下步骤：

(1)将盐酸金刚烷胺对照品用稀释剂溶解并定量稀释制成对照液；

(2)将含盐酸金刚烷胺的待测样品配制成待测液；

(3)采用高效液相色谱分别对对照液和待测液进行测试得到色谱图，然后根据色谱图的结果得到盐酸金刚烷胺的含量；

所述高效液相色谱的条件如下：用十八烷基键合硅胶为填充剂；醋酸铵缓冲液-甲醇为流动相；检测器为RID检测器。

作为优选，步骤(1)中，所述稀释剂的pH值为1.0～6.8；

所述稀释剂含有的介质为盐酸、盐酸与氯化钠的组合、磷酸二氢钾与氢氧化钠的组合、乙酸与乙酸钠的组合、盐酸与邻苯二甲酸的组合，或磷酸氢二钠与枸橼酸的组合。为了提高检测方法的准确性，稀释剂和待测液的介质最好能保持一致，所述的稀释剂进一步优选为盐酸。

作为优选，步骤(2)中，所述待测样品为盐酸金刚烷胺片；

所述待测液配制方法如下：取盐酸金刚烷胺片，以0.1mol/L盐酸500～1000mL为溶出介质，转速为每分钟50～100转，温度为37℃，经30～60分钟，过滤得到所述待测液。该配制方法为药典中所用的溶出方法，可充分将盐酸金刚烷胺片中的盐酸金刚烷提取出来。

作为优选，步骤(3)中，所述流动相中醋酸铵缓冲液用醋酸调节pH在3.0～5.0之间。作为进一步的优选，步骤(3)中，所述流动相中醋酸铵缓冲液用醋酸调节pH在3.8～4.2之间。

作为优选，步骤(3)中，所述流动相中醋酸铵缓冲液浓度在10mmol/L～30mmol/L之间。

作为优选，步骤(3)中，所述流动相中醋酸铵缓冲液与甲醇的体积比为：40～50：50～60；作为进一步的优选，步骤(3)中，所述流动相中醋酸铵缓冲液与甲醇的体积比为：43～47：53～57。

作为优选，步骤(3)中，高效液相色谱的柱温为30℃，流速为1.0～1.2ml/min，检测池温度在30℃～40℃之间。

作为优选，步骤(3)中，根据样品溶液浓度自由调节进样量5μl～100μl。

作为优选，步骤(3)中，盐酸金刚烷胺的含量采用外标法以峰面积计算；

外标法的线性方程如下：y＝1103.5632x-89.8627。

本发明的有益效果：与现有检测方法相比，本发明建立的盐酸金刚烷胺含量检测方法，对盐酸金刚烷胺的含量测定进行了研究和筛选，所采用的含量检测方法操作简便，稳定高效，准确度高，重现性好，适用性广，可用于多种稀释剂或溶出介质条件下盐酸金刚烷胺的含量检测，能有效地控制盐酸金刚烷胺制剂的质量，达到了有效控制药物质量的目的，从而确保制剂的临床疗效。

附图说明

图1为文献方法10％甲醇水溶液作流动相的色谱图；

图2为文献方法40％甲醇水溶液作流动相的色谱图；

图3为本发明方法的色谱图。

具体实施方式

本发明的盐酸金刚烷胺的含量检测方法中，一般测定方法如下：

盐酸金刚烷胺照中国药典通则0512高效液相色谱法-示差折光检测器测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；醋酸铵缓冲液-甲醇为流动相；检测器为RID检测器；该色谱条件下稀释剂应对盐酸金刚烷胺检测无干扰。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀释制成适宜浓度的溶液。

准确度溶液的配制：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，加入足量辅料，用稀释剂溶解并定量稀释制成适宜浓度的溶液，滤过，取续滤液即得。

供试品溶液的配制：取盐酸金刚烷胺制剂适量，用适量稀释剂超声使溶解，用稀释剂定量稀释制成适宜浓度的溶液，滤过，取续滤液即得。

测定方法：取对照品溶液与准确度溶液、供试品溶液适量，分别注入带RID检测器的液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

前述的盐酸金刚烷胺的含量检测方法，准确度溶液回收率在98.0％～102.0％之间。

为了验证本发明的可行性，申请人进行了以下实验研究。

一、含量测定的研究

【含量测定】盐酸金刚烷胺照中国药典通则0512高效液相色谱法-示差折光检测器测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；醋酸铵缓冲液(醋酸铵浓度为20mmol/L，用醋酸调节pH至4.0)-甲醇(醋酸铵缓冲液：甲醇＝45：55)为流动相；检测器为RID检测器；柱温为30℃；流速为1ml/min；检测池温度为34℃；该色谱条件下稀释剂应对盐酸金刚烷胺检测无干扰。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀释制成适宜浓度的溶液。

供试品溶液的配制：取盐酸金刚烷胺制剂适量，用适量稀释剂超声使溶解，用稀释剂定量稀释制成适宜浓度的溶液，滤过，取续滤液即得。

测定方法：取对照品溶液与供试品溶液适量，分别注入带RID检测器的液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

二、RID文献方法研究

【文献方法重现】盐酸金刚烷胺照中国药典通则0512高效液相色谱法-示差折光检测器测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇水溶液为流动相；检测器为RID检测器；柱温为30℃；流速为1ml/min。

供试品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，用稀释剂溶解并定量稀释制成适宜浓度的溶液。

测定方法：取供试品溶液适量，分别注入带RID检测器的液相色谱仪，记录色谱图。

使用文献方法10％甲醇水溶液为流动相时，分别采用流动相、pH1.2介质、pH4.0介质、pH6.8介质、水介质做稀释剂均不能检测到色谱峰；使用40％甲醇水溶液为流动相时，采用流动相、pH1.2介质、pH4.5介质下能够检测到色谱峰，但不同稀释剂样品间响应值差异较大，色谱峰漂移，pH6.8介质、水介质做稀释剂的样品不能检测到色谱峰；对甲醇比例进行调整，均无法排除稀释剂的影响。

本发明与RID文献方法对比图如图1～图3所述，本发明在稀释剂选择上明显优于文献报道的方法，在pH1.2介质、pH4.5介质、pH6.8介质及水介质做稀释剂时均能稳定检测，且在各稀释剂条件下样品溶液响应值基本一致。

实施例1

盐酸金刚烷胺的含量检测方法用于溶出度样品检测的实施方式如下。所述的溶出度样品为盐酸金刚烷胺片，该样品是由盐酸金刚烷胺加适量辅料制成的片剂，每片含100mg盐酸金刚烷胺。

【溶出度测定】盐酸金刚烷胺照中国药典通则0512高效液相色谱法-示差折光检测器测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；醋酸铵缓冲液(醋酸铵浓度为20mmol/L，用醋酸调节pH至4.0)-甲醇(45：55)为流动相；检测器为RID检测器；柱温为30℃；流速为1ml/min；检测池温度为34℃；该色谱条件下介质溶液应对盐酸金刚烷胺检测无干扰。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶解并定量稀释制成每1ml含盐酸金刚烷胺0.2mg的溶液。

供试品溶液的配制：取盐酸金刚烷胺片，照中国药典通则0931溶出度与释放度测定法第一法，以0.1mol/L盐酸500ml为溶出介质，转速为每分钟75转，温度为37℃，依法操作，经45分钟时，取适量溶液，滤过，取续滤液即得。

测定方法：取对照品溶液与供试品溶液适量，进样量100μl，分别注入带RID检测器的液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

本品45分钟溶出量应不低于标示量的80％。

实施例2

盐酸金刚烷胺的含量检测方法用于清洁残留样品检测的实施方式如下。

【清洁残留样品测定】盐酸金刚烷胺照中国药典通则0512高效液相色谱法-示差折光检测器测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；醋酸铵缓冲液(醋酸铵浓度为20mmol/L，用醋酸调节pH至4.0)-甲醇(45：55)为流动相；检测器为RID检测器；柱温为30℃；流速为1ml/min；检测池温度为34℃；该色谱条件下稀释剂溶液应对盐酸金刚烷胺检测无干扰。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，加纯化水溶解并定量稀释制成每1ml含盐酸金刚烷胺1μg的溶液。

供试品溶液的配制：取盐酸金刚烷胺对照品适量，精密称定，加纯化水溶解并定量稀释制成每1ml含盐酸金刚烷胺10μg的样品储备液，定量稀释样品储备液分别制成每1ml含盐酸金刚烷胺0.5μg、0.7μg、1.0μg、1.4μg、2.0μg的溶液，即得。

测定方法：取对照品溶液与供试品溶液适量，进样量100μl，分别注入带RID检测器的液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，绘制线性曲线。

线性方程y＝1103.5632x-89.8627，各浓度点响应因子RSD(％)为5.57％，y-轴截距偏差为0.09，线性确定系数R

本发明的实施方式不限于上述实施例，在不脱离本发明宗旨的前提下做出的各种变化均属于本发明的保护范围之内。