一种凌霄花提取物的制备方法及其产品和应用

技术领域

本发明属于物质提取技术领域，涉及一种凌霄花提取物的制备方法及其产品和应用。

背景技术

皮肤衰老是由机体内外多因素共同作用引起皮肤外观及各皮肤层结构和功能发生退行性变化的过程。老化的皮肤屏障功能紊乱，不仅会对外在形象和心理健康产生负面影响，还与许多皮肤疾病发生密切相关。

凌霄花为常用中药，主要含有苯乙醇苷类、酚酸类、黄酮及花色素类、五环三萜类、挥发油等化学成分。现代药理研究表明，凌霄花具有抗凝血、抗炎镇痛、脑保护、抗氧化、抗抑郁等作用。目前常用的凌霄花提取技术所用溶剂为：乙醇、水和乙酸乙酯等，具有效率低，提取率不佳等缺点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种凌霄花提取物的制备方法及其产品和应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种凌霄花提取物的制备方法，所述制备方法包括：

(1)将凌霄花与含有深共晶溶剂的溶液混合，回流提取，得到提取液；

(2)将提取液进行抽滤，得到滤液；

(3)将滤液进行浓缩，得到浓缩液；

(4)使用大孔树脂吸附浓缩液，洗脱，得到洗脱液；

(5)将洗脱液进行浓缩、干燥，即得。

凌霄花为紫葳科、凌霄属攀援藤本植物凌霄的花朵。本发明所述凌霄花提取物的制备方法能有效得到多酚等抗氧化和延缓衰老成分，并且可以对其中的提取剂、灰尘、杂质等进行去除，以保证所得凌霄花提取物的安全性。采用本发明的制备方法所得凌霄花提取物中多酚含量可稳定大于30wt.％。本发明所得凌霄花提取物可显著清除DPPH自由基，其效果与维生素C相当；其次，所得凌霄花提取物可显著促进胶原蛋白I和胶原蛋白III的分泌，其中促进胶原蛋白I分泌量可达3倍以上，促进胶原蛋白III分泌量可达2倍以上，具有抗氧化和延缓衰老的作用，可以作为活性物用于护肤品及医药辅助用品中。

优选地，所述含有深共晶溶剂的溶液包括深共晶溶剂和水。

优选地，所述含有深共晶溶剂的溶液中深共晶溶剂的质量百分含量为10-80％，例如10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

含有深共晶溶剂的溶液中，深共晶溶剂的质量百分含量对于提升提取物中的多酚含量十分重要。

优选地，所述深共晶溶剂由氢键供体和氢键受体反应得到。

优选地，所述反应的温度为40-70℃，时间为1-2h。

所述反应的温度可以选择40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃等，所述时间可以选择1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h、2h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述氢键供体包括柠檬酸和/或尿素。

优选地，所述氢键受体包括氯化胆碱、L-脯氨酸或甜菜碱中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述氢键供体和氢键受体的摩尔比为(1-6):1，其中(1-6)中的具体点值均可选择1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述凌霄花与含有深共晶溶剂的溶液的比例为1g:(5-20)mL，其中(5-20)中的具体点值均可选择5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述回流提取的温度为60-100℃，时间为1-3h。

所述温度可以选择60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃等，所述时间可以选择1h、1.2h、1.5h、1.8h、2h、2.2h、2.5h、2.8h、3h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述回流提取的次数为1-3次，例如1次、2次、3次等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述抽滤的压力为50-150mbar，例如50mbar、60mbar、70mbar、80mbar、90mbar、100mbar、110mbar、120mbar、130mbar、140mbar、150mbar等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述滤液与浓缩液的体积比为(3-10):1，其中(3-10)中的具体点值均可选择3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述大孔树脂包括AB-8或D101。

优选地，所述滤液与大孔树脂的质量比为1:(30-50)，其中(30-50)中的具体点值均可选择30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述吸附的时间为6-18h，例如6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述洗脱包括依次使用水、10-25％乙醇水溶液、40-80％乙醇水溶液洗脱。

所述10-25％乙醇水溶液中乙醇的质量百分含量可以选择10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、25％等，所述40-80％乙醇水溶液中乙醇的质量百分含量可以选择40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述水、10-25％乙醇水溶液、40-80％乙醇水溶液与大孔树脂的体积比独立地为(8-15):1，其中(8-15)中的具体点值均可选择8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，步骤(5)所述浓缩的压力为50-150mbar，温度为40-60℃。

所述压力可以选择50mbar、60mbar、70mbar、80mbar、90mbar、100mbar、110mbar、120mbar、130mbar、140mbar、150mbar等，所述温度可以选择40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃、58℃、60℃等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述干燥的温度为-80～-50℃，时间为48-72h。

所述干燥的温度可以选择-80℃、-78℃、-75℃、-72℃、-70℃、-68℃、-65℃、-62℃、-60℃、-58℃、-55℃、-52℃、-50℃等，时间可以选择48h、52h、56h、60h、64h、68h、72h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的凌霄花提取物的制备方法制备得到的凌霄花提取物。

第三方面，本发明提供一种根据第二方面所述的凌霄花提取物在制备延缓衰老的产品中的应用。

本发明所述凌霄花提取物可以显著促进胶原蛋白I和胶原蛋白III的分泌，促进胶原蛋白I分泌量可达3倍以上，促进胶原蛋白III分泌量可达2倍以上。

第四方面，本发明提供一种根据第二方面所述的凌霄花提取物在制备抗氧化的产品中的应用。

优选地，所述产品包括化妆品或保健品。

优选地，所述凌霄花提取物在产品中的质量百分含量为0.005-0.02％，例如0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.011％、0.012％、0.013％、0.014％、0.015％、0.016％、0.017％、0.018％、0.019％、0.02％等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明首次采用深共晶提取方法，得到凌霄花提取物；

(2)本发明的凌霄花提取物的制备方法能有效得到多酚等抗氧化和延缓衰老成分，并且可以对其中的提取剂、灰尘、杂质等进行去除，以保证所得凌霄花提取物的安全性；

(3)采用本发明的制备方法所得凌霄花提取物中多酚含量可稳定＞30wt.％，可保证其质量的可靠性，易于商业化；

(4)采用本发明的制备方法所得凌霄花提取物，可显著清除DPPH自由基，其效果与维生素C相当；其次，所得凌霄花提取物可显著促进胶原蛋白I和胶原蛋白III的分泌，其中促进胶原蛋白I分泌量可达3倍以上，促进胶原蛋白III分泌量可达2倍以上，具有抗氧化和延缓衰老的作用，可以作为活性物用于护肤品及医药辅助用品中。

附图说明

图1是凌霄花提取物的制备方法流程图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

制备例1

本制备例提供一种深共晶溶剂，所述深共晶溶剂由甜菜碱和尿素反应得到，所述甜菜碱和尿素的摩尔比为1:2。

制备方法为：将甜菜碱和尿素混合，60℃下搅拌1h。

制备例2

本制备例提供一种深共晶溶剂，所述深共晶溶剂由氯化胆碱和柠檬酸反应得到，所述氯化胆碱和柠檬酸的摩尔比为1:2。

制备方法为：将氯化胆碱和柠檬酸混合，60℃下搅拌1h。

制备例3

本制备例提供一种深共晶溶剂，所述深共晶溶剂由L-脯氨酸和尿素反应得到，所述L-脯氨酸和尿素的摩尔比为1:6。

制备方法为：将L-脯氨酸和尿素混合，60℃下搅拌1h。

制备例4

本制备例提供一种深共晶溶剂，所述深共晶溶剂由甜菜碱和柠檬酸反应得到，所述甜菜碱和柠檬酸的摩尔比为1:1。

制备方法为：将甜菜碱和柠檬酸混合，60℃下搅拌1h。

实施例1

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其制备流程图如图1所示，所述制备方法包括：

(1)将凌霄花原料晒干，去杂，粉碎，得到凌霄花粉末；

(2)将凌霄花粉末与含有40％制备例1所述深共晶溶剂的溶液按照1:10g/mL比例混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液；

(3)将所得滤液进行减压抽滤，得滤液；

(4)对步骤(3)所得滤液进行减压浓缩，至体积为步骤(2)所述提取液的1/5，得到浓缩液；

(5)取大孔树脂AB-8进行活化并装柱，滤液与大孔树脂的质量比为1:40，将浓缩液上柱吸附16h后，先用去离子水洗脱10个柱体积，所得洗脱液舍弃；然后用体积浓度为20％乙醇水溶液作为除杂溶剂洗脱10个柱体积，所得洗脱液舍弃。最终用体积浓度为50％的乙醇水溶液洗脱10个柱体积，富集得到的洗脱液留存备用；

(6)将洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，即得。

实施例2

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，所述制备方法包括：

(1)将凌霄花原料晒干，去杂，粉碎，得到凌霄花粉末；

(2)将凌霄花粉末与含有40％制备例1所述深共晶溶剂的溶液按照1:5g/mL比例混合，在60℃下回流提取3h，提取1次，合并所得提取液；

(3)将所得滤液进行减压抽滤，得滤液；

(4)对步骤(3)所得滤液进行减压浓缩，至体积为步骤(2)所述提取液的1/3，得到浓缩液；

(5)取大孔树脂AB-8进行活化并装柱，滤液与大孔树脂的质量比为1:30，将浓缩液上柱吸附18h后，先用去离子水洗脱15个柱体积，所得洗脱液舍弃；然后用体积浓度为10％乙醇水溶液作为除杂溶剂洗脱15个柱体积，所得洗脱液舍弃。最终用体积浓度为40％的乙醇水溶液洗脱15个柱体积，富集得到的洗脱液留存备用；

(6)将洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，即得。

实施例3

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，所述制备方法包括：

(1)将凌霄花原料晒干，去杂，粉碎，得到凌霄花粉末；

(2)将凌霄花粉末与含有40％制备例1所述深共晶溶剂的溶液按照1:20g/mL比例混合，在100℃下回流提取1h，提取3次，合并所得提取液；

(3)将所得滤液进行减压抽滤，得滤液；

(4)对步骤(3)所得滤液进行减压浓缩，至体积为步骤(2)所述提取液的1/10，得到浓缩液；

(5)取大孔树脂AB-8进行活化并装柱，滤液与大孔树脂的质量比为1:50，将浓缩液上柱吸附6h后，先用去离子水洗脱8个柱体积，所得洗脱液舍弃；然后用体积浓度为25％乙醇水溶液作为除杂溶剂洗脱8个柱体积，所得洗脱液舍弃。最终用体积浓度为80％的乙醇水溶液洗脱8个柱体积，富集得到的洗脱液留存备用；

(6)将洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，即得。

实施例4

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为“将凌霄花粉末与含有40％制备例2所述深共晶溶剂的溶液按照1:10g/mL比例混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液”，其他操作保持不变。

实施例5

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为“将凌霄花粉末与含有40％制备例3所述深共晶溶剂的溶液按照1:10g/mL比例混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液”，其他操作保持不变。

实施例6

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为“将凌霄花粉末与含有40％制备例4所述深共晶溶剂的溶液按照1:10g/mL比例混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液”，其他操作保持不变。

实施例7

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为“将凌霄花粉末与含有10％制备例1所述深共晶溶剂的溶液按照1:10g/mL比例混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液”，其他操作保持不变。

实施例8

本实施例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为“将凌霄花粉末与含有80％制备例1所述深共晶溶剂的溶液按照1:10g/mL比例混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液”，其他操作保持不变。

对比例1

本对比例提供一种凌霄花提取物的制备方法，所述制备方法包括：

(1)将凌霄花原料晒干，去杂，粉碎，得到凌霄花粉末；

(2)将凌霄花粉末与50％乙醇溶液混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液；

(3)将所得滤液进行减压抽滤，得滤液；

(4)对步骤(3)所得滤液进行减压浓缩，至体积为步骤(2)所述提取液的1/5，得到浓缩液；

(5)将步骤(4)所述浓缩液冷冻干燥，即得。

对比例2

本对比例提供一种凌霄花提取物的制备方法，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为“将凌霄花粉末与50％乙醇溶液混合，在80℃下回流提取2h，提取2次，合并所得提取液”，其他操作保持不变。

对比例3

本对比例提供一种凌霄花提取物的制备方法，参考文献为：《凌霄花多酚微波提取工艺优化及其抗氧化研究》，郑茜等，化学试剂，2021，43(09)。

所述方法包括：将凌霄花采摘后，置于烘箱中，60℃烘干，粉碎，过筛。准确称量100g的凌霄花粉末，加入40％乙醇，料液比为32g/mL、微波提取的功率为281W，提取时间37s。

对比例4

本对比例提供一种凌霄花提取物的制备方法，参考文献为：专利CN111110713B。

所述方法包括：氯化胆碱和甘油以摩尔比1:2置80℃的水浴中合成提取溶剂，将100g凌霄花按照质量比1:6的比例与提取溶剂混合，超声提取40min，离心后取上清液，上清液通过HP-20大孔树脂洗脱除去提取溶剂，依次采用0.1％的甲酸水和50％乙醇溶液进行洗脱，收集50％乙醇洗脱馏分，浓缩干燥得到凌霄花中多酚类化合物。

测试例1

多酚含量测试

测试方法：参照GBT8313-2018，以没食子酸为对照品，使用分光光度法测定样品中的多酚含量，具体实验步骤为：配制200μg/mL样品，依次加入福林酚试剂，碳酸钠试剂，避光反应1h，760nm处测定样品吸光度。以没食子酸为标准品对照，制作标准曲线，通过计算得到多酚含量。

没食子酸标准曲线：Y＝0.228X+0.0853，R

表1

由表1数据可知，本发明所述制备方法制备得到的凌霄花提取物多酚含量较高，且深共晶溶剂氢键供体和氢键受体选择会对多酚含量产生影响，深共晶溶剂的浓度同样会对多酚含量产生影响。

测试例2

抗氧化活性测试

测试方法：

通过2,2-二苯基-1-吡啶并肼(DPPH)自由基清除实验评价凌霄花提取物的抗氧化能力，具体测试方法为：使用VC(维生素C)作为阳性对照，配制0.5mg/mL的凌霄花提取物为母液，倍半稀释8个浓度，加入DPPH试剂，振荡摇匀，室温避光反应30min，在517nm处测定吸光度。

DPPH自由基清除率公式为：

其中OD

OD

OD

OD

表2

由表2数据可知，维生素C对DPPH自由基清除作用IC

测试例3

延缓衰老效果测试

测试方法：

实验设置H

表3

由表3结果所示，与对照组相比，实施例1-3制备得到的凌霄花提取物可显著促进胶原蛋白I和胶原蛋白III的分泌，其中促进胶原蛋白I分泌量可达3倍以上，促进胶原蛋白III分泌量可达2倍以上，表明本发明制备的凌霄花提取物可以通过显著促进胶原蛋白分泌达到延缓皮肤衰老的作用。

测试例4

参照《化妆品安全技术规范》(2015年)，对实施例1-3制备得到的凌霄花提取物进行急性眼刺激性/腐蚀性试验、皮肤刺激性/腐蚀性试验、皮肤变态反应试验、皮肤光毒性试验、激素、农残、微生物、重金属和H-Clat致敏性测试，综合评估凌霄花提取物的安全性。

表4

检测结果如表4所示，实施例1-3所得提取物经深共晶提取得到的凌霄花提取物均无刺激性、无皮肤变态反应、无致敏性和光毒性，激素、农残等均未检出。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种凌霄花提取物的制备方法及其产品和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。