一种卡洛芬脂质体及其制备方法

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种卡洛芬脂质体及其制备方法。

背景技术

卡洛芬是美国辉瑞公司于20世纪70年代开发的高效动物用非甾体类抗炎药，在兽医临床上主要用于治疗犬，猫术后疼痛及炎症，并可有效控制犬骨关节炎引起的疼痛。大量研究资料表明：卡洛芬吸收迅速而完全，0.5-1小时血药浓度达到峰值，血浆半衰期约为12小时，大部分被代谢成β-葡萄糖醛酸酯，从尿中排泄，其胃肠道作用及肾毒害作用远远小于其他非甾体抗炎药，已被确定为一种较为安全的兽用消炎镇痛药。卡洛芬在水中溶解度极低，不易制备水针剂，在用药时带来不便，使治疗效果受到限制。

CN116270556A公开了一种兽用卡洛芬透皮剂的制备方法，将溶剂加热至一定温度后，加入处方量的卡洛芬溶解，再加入透皮剂的一种混合均匀，以纯化水加至近全量，经酸碱调节剂调节pH后加纯化水至全量，即得卡洛芬透皮剂。以溶剂为溶媒，再配合透皮促进剂使卡洛芬具有高度透皮性，从而可以通过皮肤给药达到解热镇痛、抗炎退烧的效果。对透皮促进剂月桂氮卓酮进行改性使得其促进活性更佳，且刺激性更低，加强了透皮剂的治疗效果及温和性。

CN115919846A公开了一种卡洛芬包合物及其制备方法和应用，该包合物包括包合剂以及包载在包合剂内的卡洛芬；所述的包合剂和卡洛芬的质量比为(4-6)：(1-3)。所述的包合剂包括α-环糊精、β-环糊精或羟丙基环糊精中的任意一种。与现有技术相比，该卡洛芬包合物提高了卡洛芬的水溶性，方便动物给药，包合剂和有机溶剂能协同增效，共同促进提高卡洛芬药效，包合率高，有效解决卡洛芬不溶于水的技术瓶颈；此外，利用喷雾干燥工艺，避免加热和冷却等过程，减少药效损耗和物料损失，同时简化了生产流程，便于工业化生产应用。

现有技术中，对于卡洛芬进行包合的工艺大多对技术要求过高，无法有效包封卡洛芬，且易产生不良反应。

脂质体作为一种药物载体，其疏水层和亲水核心可以封装各种类型的药物，包括疏水性和亲水性的药物，从而提高药物溶解度，且脂质体的结构与细胞膜极其类似，使其具有高度的生物相容性和生物可降解性。因此，脂质体可以保护药物在到达病灶部位前不被酶降解，同时药物通过物理包载的形式“隐藏”在脂质体内部，可以提高药物稳定性，降低药物的毒性，提高给药剂量，发挥更佳的治疗效果。此外，双亲性磷脂形成的双分子层表面，可以通过物理或者化学手段，与配体或者其他功能基团进行结构修饰使脂质体具有组织靶向性，延长脂质体在病灶部位的有效滞留时间，甚至可以实现高效靶向药物递送。脂质体是一种理想的药物载体，用于增强药物在水中溶解性，提高疗效和增加药物安全性。

因此，开发一种卡洛芬脂质体，具备良好的包封率和载药量，可以有效提升卡洛芬的水溶性，进而提升卡洛芬的疗效，是本领域的研究重点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种卡洛芬脂质体及其制备方法，具备良好的包封率和载药量，有效提升了卡洛芬的水溶性。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种卡洛芬脂质体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将磷脂、胆固醇、卡洛芬和抗氧化剂溶于复合溶剂中，除去复合溶剂，得到混合物；

(2)将所述混合物溶于蔗糖水溶液中进行分散、均质，得到所述卡洛芬脂质体。

本发明采用脂质体作为卡洛芬的药物载体，可以有效增强卡洛芬在水中的溶解性，延长药物在病灶部位的有效滞留时间，提高卡洛芬的治疗效果，并且脂质体具有高度的生物相容性和生物可降解性，增加了药物的安全性。本发明在原料中加入抗氧化剂，有效防止脂质体其中的原料成分氧化变质。本发明采用蔗糖溶液作为冻干保护剂，防止其在冻干过程，脂质体的形态及稳定性遭到破坏。

优选地，所述磷脂包括氢化磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰胆碱、1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺或卵磷脂中的任意一种或两种的组合。

优选地，所述磷脂为二硬脂酰基磷脂酰胆碱。

优选地，所述磷脂与胆固醇的质量比为(1.5-2.5):1，例如可以为1.6:1、1.8:1、2:1、2.2:1、2.4:1等。

优选地，所述磷酸和胆固醇的总量与卡洛芬的质量比为(10-20):1，例如可以为12:1、14:1、16:1、18:1等。

优选地，所述抗氧化剂为维生素E。

优选地，所述复合溶剂包括甲醇和氯仿。

优选地，所述甲醇和氯仿的体积比为(0.8-1.2):1，例如可以为0.9:1、1:1、1.1:1等。

优选地，所述蔗糖水溶液中蔗糖的质量百分含量为10-20％，例如可以为11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％等。

优选地，所述分散采用超声的方式进行。

优选地，所述超声的功率为200-400W，例如可以为250W、300W、350W等，时间为8-12min，例如可以为9min、10min、11min等。

优选地，所述均质采用微射流高压均质机进行。

优选地，所述均质的压力系数为15000-20000psi，例如可以为16000psi、17000psi、18000psi、19000psi等。

优选地，所述均质重复进行2-3次。

优选地，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将磷脂、胆固醇、卡洛芬和维生素E溶于复合溶剂中，复合溶剂为甲醇和氯仿按照体积比(0.8-1.2):1混合得到，除去复合溶剂，得到混合物；

所述磷脂包括氢化磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰胆碱、1,2-十四酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺或卵磷脂中的任意一种或两种的组合，优选为二硬脂酰基磷脂酰胆碱；

所述磷脂与胆固醇的质量比为(1.5-2.5):1；

所述磷酸和胆固醇的总量与卡洛芬的质量比为(10-20):1；

(2)将所述混合物溶于蔗糖的质量百分含量为12-16％的蔗糖水溶液中进行200-400W超声分散8-12min，再采用微射流高压均质机于压力系数为15000-20000psi进行均质，均质重复进行2-3次，得到所述卡洛芬脂质体。

第二方面，本发明提供一种卡洛芬脂质体，所述卡洛芬脂质体采用如第一方面所述的制备方法制备得到；

优选地，所述卡洛芬脂质体的包封率为66.7-73.5％，例如可以为67％、68％、69％、71％、73％等。

优选地，所述卡洛芬脂质体的载药量为4.2-4.6％，例如可以为4.3％、4.4％、4.5％等。

本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明采用脂质体作为卡洛芬的药物载体，可以有效增强卡洛芬在水中的溶解性，延长药物在病灶部位的有效滞留时间，提高卡洛芬的治疗效果，并且脂质体具有高度的生物相容性和生物可降解性，增加了药物的安全性。本发明在原料中加入抗氧化剂，有效防止脂质体其中的原料成分氧化变质。本发明采用蔗糖溶液作为冻干保护剂，防止其在冻干过程，脂质体的形态及稳定性遭到破坏。

附图说明

图1为实施例1制备的卡洛芬脂质体的投射电镜图；

图2为实施例1制备的卡洛芬脂质体粒径分布图；

图3为实施例1制备的卡洛芬脂质体的电位图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

本文所用术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，还可包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。

本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。

本发明所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例性地”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本文中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。

以下实施例中试剂或仪器来源如下：

卡洛芬：麦克林C830557；

二硬脂酰磷脂酰胆碱：Sigma 850365；

胆固醇：Sigma C8667。

实施例1

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，所述卡洛芬脂质体采用如下方法进行制备：

(1)称取10mg二硬脂酰磷脂酰胆碱，5mg胆固醇，1mg卡洛芬，0.25mg维生素E溶解于4mL甲醇与氯仿复合溶剂(1:1，v/v)中，得到混合溶液并转移至50mL圆底烧瓶内，于37℃水浴条件下，设定转速为100r/min，旋转蒸发除去复合溶剂，得到固体混合物；

(2)将0.5mg蔗糖溶解在3mL去离子水中，加入到步骤(1)圆底烧瓶中，与固体混合物于60℃水浴25min，然后300W功率下室温超声10min，得到脂质体分散液。

(3)采用微射流高压均质机(NanoGenizer30K)，在压力系数18000psi下将脂质体分散液均质3次，分散液由浑浊变澄清，得到粒径大小均一的卡洛芬脂质体。

实施例2

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，所述卡洛芬脂质体采用如下方法进行制备：

(1)称取9mg二硬脂酰磷脂酰胆碱，6mg胆固醇，0.8mg卡洛芬，0.3mg维生素E溶解于5mL甲醇与氯仿复合溶剂(1:1.2，v/v)中，得到混合溶液并转移至50mL圆底烧瓶内，于37℃水浴条件下，设定转速为100r/min，旋转蒸发除去复合溶剂，得到固体混合物；

(2)将0.4mg蔗糖溶解在2.5mL去离子水中，加入到步骤(1)圆底烧瓶中，与固体混合物于60℃水浴25min，然后200W功率下室温超声12min，得到脂质体分散液。

(3)采用微射流高压均质机(NanoGenizer30K)，在压力系数15000psi下将脂质体分散液均质4次，分散液由浑浊变澄清，得到粒径大小均一的卡洛芬脂质体。

实施例3

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，所述卡洛芬脂质体采用如下方法进行制备：

(1)称取10mg二硬脂酰磷脂酰胆碱，4mg胆固醇，1.2mg卡洛芬，0.25mg维生素E溶解于6mL甲醇与氯仿复合溶剂(1.2:1，v/v)中，得到混合溶液并转移至50mL圆底烧瓶内，于37℃水浴条件下，设定转速为100r/min，旋转蒸发除去复合溶剂，得到固体混合物；

(2)将0.7mg蔗糖溶解在3mL去离子水中，加入到步骤(1)圆底烧瓶中，与固体混合物于60℃水浴25min，然后400W功率下室温超声8min，得到脂质体分散液。

(3)采用微射流高压均质机(NanoGenizer30K)，在压力系数20000psi下将脂质体分散液均质3次，分散液由浑浊变澄清，得到粒径大小均一的卡洛芬脂质体。

实施例4

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，将二硬脂酰磷脂酰胆碱替换为等量的氢化磷脂酰胆碱；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

实施例5

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，调整二硬脂酰磷脂酰胆碱为8mg，调整胆固醇为7mg；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

实施例6

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，调整二硬脂酰磷脂酰胆碱为11mg，调整胆固醇为4mg；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

实施例7

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，将甲醇与氯仿复合溶剂替换为等量的甲醇；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

实施例8

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，将甲醇与氯仿复合溶剂替换为等量的氯仿；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

实施例9

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，调整卡洛芬为1.8mg；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

实施例10

本实施例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，调整卡洛芬为0.5mg；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

对比例1

本对比例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，未加入维生素E；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

对比例2

本对比例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，将蔗糖替换为等量的葡萄糖；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

对比例3

本对比例提供一种卡洛芬脂质体，其与实施例1的区别仅在于，步骤(2)不同，本对比例步骤(2)为：

将0.5mg蔗糖溶解在3mL去离子水中，加入到步骤(1)圆底烧瓶中，与固体混合物于60℃水浴25min，得到脂质体分散液；其他原料、用量和制备方法均与实施例1相同。

测试例1

对实施例、对比例制备的卡洛芬脂质体采用透射电镜法进行测试，示例性地，实施例1制备的卡洛芬脂质体的投射电镜图如图1所示，由图1可知，卡洛芬脂质体分布均匀，大小均一，均为单室脂质体，卡洛芬封装于脂质双层中。

将所得电镜图中的粒径进行统计，得出各卡洛芬脂质体样本的平均粒径，结果如表1所示，示例性地，实施例1制备的卡洛芬脂质体粒径分布情况如图2所示。

对于实施例、对比例制备的卡洛芬脂质体的分散性进行检测，分散性指数(PDI)结果如表1所示。

对实施例、对比例制备的卡洛芬脂质体进行电位测试，示例性地，实施例1制备的卡洛芬脂质体的电位图如图3所示。

表1

根据表格数据可知，实施例1-3采用本发明提供的技术方案进行制备得到的卡洛芬脂质体，大小均一，粒径较小，分散性较好；由实施例1、实施例4可知，当将磷脂替换为其他常见的种类时，分散性较差；由实施例1和实施例5-6可知，当磷脂和胆固醇的比例在(8-12):(4-6)时效果最优，当胆固醇的比例过高，会增加脂质体的粒径，同时分散性变差，当磷脂的比例过高时，会引起产品粒径变大且分散性较差的问题；由实施例1和实施例7-8可知，复合溶剂为甲醇和氯仿时效果最优，当采用单一的甲醇作为溶剂，粒径不均一，平均粒径大幅增加，当采用单一的氯仿作为溶剂，致使分散性差；由实施例1、对比例1可知，当未加入抗氧化剂维生素E时，会对粒径稍有影响；由实施例1、对比例2可知，当将蔗糖替换为葡萄糖时，会对粒径稍有影响；由实施例1、对比例3可知，当未进行分散就直接进行均质，会导致粒径较大，出现团聚，分散性差。

测试例2

卡洛芬脂质体包封率、载药量检测

采用超高效液相色谱串联质谱仪检测：

(1)分析方法：采用沃特世ACQUITY

超高效液相色谱洗脱程序：

质谱参数：采用负离子模式(ESI

(2)样品前处理：取1mL卡洛芬脂质体溶液，加入4mL乙腈，震荡10min，8000rpm离心15min，取1mL上清液进行超高效液相色谱串联质谱仪检测，计算得到被包载进脂质体的卡洛芬的质量。

包封率公式为：

包封率(％)＝(被包载的卡洛芬药物质量/初始投入卡洛芬药物质量)×100％；

载药量公式为：

载药量(％)＝(被包载的卡洛芬药物质量/初始投入物料总质量)×100％；测试结果如表2所示。

表2

根据表格数据可知，实施例1-3采用本发明提供的技术方案进行制备得到的卡洛芬脂质体，包封率更高，载药量更高；由实施例1、实施例4可知，当将磷脂替换为其他常见的种类时，载药量明显降低；由实施例1和实施例5-6可知，当磷脂和胆固醇的比例在(8-12):(4-6)时效果最优，当胆固醇的比例过高，会降低包封率及载药量，当磷脂的比例过高，会降低包封率及载药量；由实施例1和实施例7-8可知，复合溶剂为甲醇和氯仿时效果最优，当采用单一的甲醇作为溶剂，会降低包封率，当采用单一的氯仿作为溶剂，会较少药物的包封；由实施例1、对比例1可知，当未加入抗氧化剂维生素E时，会降低包封率；由实施例1、对比例2可知，当将蔗糖替换为葡萄糖时，会降低包封率；由实施例1、对比例3可知，当未进行分散就直接进行均质，会出现团聚，从而降低载药量和包封率。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。