一株马克斯克鲁维酵母及其在亚麻籽源糖苷生物转化中的应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及马克斯克鲁维酵母，特别涉及一株马克斯克鲁维酵母全细胞催化亚麻籽饼亚麻木酚素提取物的应用。

背景技术

亚麻是重要的油籽作物，亚麻籽饼粕是生产亚麻籽油的副产物，含亚麻木酚素、蛋白、多糖等多种活性成分，由于加工技术水平有限未很好地开发利用，一般被用作动物饲料，造成亚麻籽饼粕资源的浪费。亚麻木酚素，一种多酚类植物雌激素，存在于亚麻籽种皮中，亚麻籽经榨油后亚麻木酚素留在亚麻籽饼中。开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(Secoisolariciresinol diglucoside，SDG)是亚麻籽中最主要的木酚素，一般以5个SDG残基与4个HMGA残基连接而成的低聚物(SDG-HMGA)形式存在，需要经过碱水解断裂酯键才能得到游离的SDG单体。SDG的极性较大，生物利用度低，需要经过肠道微生物转化生成肠道木酚素以发挥其雌激素和抗雌激素、抗氧化和抗癌等生物活性，但木酚素的生物利用度具有个体差异。开环异落叶松树脂酚(Secoisolariciresinol，SECO)是SDG向肠道木酚素转化的重要中间体，抗氧化活性和脂溶性优于SDG，其抗氧化性约为SDG的4倍，具有更高的生物利用度。SDG可以通过酸水解/酶解/微生物转化后获得SECO，利用微生物将SDG转化为SECO是目前较为热门的研究，是提高SDG生物利用度的一种有效方式，特别是全细胞催化，对设备要求低、反应体系简单、成本低，具有工业化的应用前景。木酚素碱解提取物中除了SDG外还含有其他羟基肉桂酸类糖苷，最常见的为对香豆酸糖苷(p-coumaric acid glucoside，CAG)和阿魏酸糖苷(Ferulic acid glucoside，FAG)。HMGA偶联不仅限于木酚素，CAG和FAG存在于含有酯键的SDG聚合物结构中，可能是木酚素大分子的末端单位。木酚素大分子中的CAG与FAG和SDG一样，易通过碱水解释放单体，酸水解/酶解/微生物转化后也易断裂糖苷键，生成生物活性物质对香豆酸(p-coumaric acid，CA)和阿魏酸(Ferulic acid，FA)。阿魏酸在植物中很少以游离形式出现，主要与单糖、寡糖、多胺、脂类和多糖等共轭形式存在，据报道其具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗血栓和抗癌活性等生物活性。对香豆酸也以游离或共轭形式存在于植物中，具有抗氧化、抗癌、抗菌等生物活性。

马克斯克鲁维酵母常见于发酵乳制品，可产生一系列挥发性香味和风味物质，在2014年原卫计委发布的《有关新食品原料、普通食品名单汇总》名单中，可作为益生菌应用于食品工业。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一株马克斯克鲁维酵母及其在亚麻籽源糖苷生物转化中的应用。该菌株是从发酵豆制品中筛选的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18，可应用于亚麻籽SDG、FAG和CAG等糖苷的生物转化。该菌株静息细胞转化亚麻籽源的糖苷SDG、CAG和FAG可获生物活性物质SECO、CA和FA，SDG、CAG和FAG转化分别达到70％、90％和70％及以上，SECO、CA和FA生成率分别达到50％、60％和70％及以上。这株菌具有高效转化SDG、CAG、FAG为天然抗氧化剂SECO、CA、FA的能力，反应体系简单，获得的产物与益生菌的混合物可直接添加到食品中，在功能食品开发方面具有潜在的应用价值。

本发明还提供一种富含糖苷的亚麻籽饼乙醇-碱提取物，原料为冷榨亚麻籽饼、热榨亚麻籽饼及亚麻籽饼经过粉碎筛得到的不同目数的组分，包括但不限于SDG、CAG和FAG等糖苷，克服了亚麻籽饼资源浪费严重的问题，方法简单高效、成本低、提高了亚麻籽饼的综合利用度，具备产业化潜力。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一株马克斯克鲁维酵母，菌株命名为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)JY18，是从发酵豆制品中筛选出来的。

所述的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏时间为2023年04月18日，保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所，保藏编号：GDMCC No：63367。

所述的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18，具有以下特征：菌落在YPD平板上为呈乳白色，圆形，不透明，表面湿润无褶皱，细胞显微形态为卵圆形。经ITS基因测序鉴定为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)，命名为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18。

一种生物菌剂，包括上述马克斯克鲁维酵母的菌体或培养液。

所述的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18或生物菌剂在亚麻籽源糖苷生物转化中的应用。

优选的，所述的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18在全细胞催化亚麻籽源糖苷转化中的应用。

优选的，所述的亚麻籽源糖苷为亚麻籽源酚类糖苷；

进一步的，所述的亚麻籽源糖苷包括SDG、CAG和FAG中的至少一种。

优选的，亚麻籽源糖苷生物转化或亚麻籽源糖苷转化所用的底物为亚麻籽饼乙醇-碱提取物。

优选的，所述的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18全细胞催化亚麻籽饼乙醇-碱提取物将SDG、CAG、FAG转化为SECO、CA、FA。

所述亚麻籽饼乙醇-碱提取物中富含糖苷，原料为冷榨亚麻籽饼、热榨亚麻籽饼及亚麻籽饼经过粉碎过筛得到的不同目数的组分，提取物包括但不限于SDG、CAG和FAG三种酚类糖苷。

所述的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18全细胞催化亚麻籽饼乙醇-碱提取物中的酚类糖苷物质包括但不限于SDG、CAG、FAG转化为SECO、CA、FA，具有应用实际生产天然抗氧化剂SECO、CA和FA和开发功能性食品的潜能。

进一步的，马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化亚麻籽饼乙醇-碱提取物中的SDG、CAG、FAG转化为SECO、CA、FA的条件为SDG的浓度0.02～0.10mmol/L、pH 7.0～8.0、温度40～45℃、转化时间20～28h。

具体的，所述应用为：将马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入至PBS，重悬均匀，加入亚麻籽饼乙醇-碱提取物甲醇溶液，使SDG的终浓度为20～100μM，于40～45℃下反应20～28h，获得益生菌和转化产物混合物，具有木酚素和益生菌的双重功效，可应用于食品中；

进一步的，所述PBS的pH为7～8。

进一步的，所述的亚麻籽饼乙醇-碱提取物甲醇溶液中SDG的浓度为1～5mM；

优选的，所述亚麻籽饼乙醇-碱提取物中SDG的含量为4.61～11.42mg/g、CAG的含量为1.52～3.28mg/g、FAG为的含量0.62～1.34mg/g。

进一步的，马克斯克鲁维酵JY18全细胞催化亚麻籽饼乙醇-碱提取物中的SDG、CAG和FAG转化率分别达到70％、90％和70％及以上，SECO、CA和FA生成率分别达到50％、60％和70％及以上。

进一步的，所述亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备方法，包括如下步骤：

将亚麻籽饼粉碎，加入正己烷进行脱脂，获得脱脂亚麻籽粉；称取脱脂亚麻籽粉，加入68～72％乙醇水溶液(优选70％)，室温搅拌，离心，上清旋蒸后冻干，再加入NaOH溶液进行水解，加HCl中和至pH 5.8～6.2(优选pH 6.0)，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物。

优选的，所述的亚麻籽饼为冷榨亚麻籽饼和热榨亚麻籽饼中的至少一种；

优选的，所述的粉碎的条件为粉碎5～6次，每次5～7s；

优选的，粉碎后还可以包括过筛，进一步，经40目筛网筛分获得大于40目亚麻籽饼；或者，经60目筛网筛分获得小于等于60目亚麻籽饼；或者，依次经40目、60目筛网筛分获得40～60目且不含40目亚麻籽饼。

优选的，所述的正己烷的用量为亚麻籽饼六倍体积的正己烷；所述脱脂为搅拌11h～13h(优选12h)进行脱脂；

优选的，所述的脱脂亚麻籽粉与68～72％乙醇水溶液(优选70％)的质量体积比为1g：6mL；

优选的，所述的室温搅拌的时间为28h～30h；

优选的，所述的离心的条件为8000rpm离心10min；

优选的，所述的NaOH溶液的浓度为0.28～0.32mol/L，进一步为0.30mol/L；所述脱脂亚麻籽粉与NaOH溶液的质量体积比为1g：1mL。

优选的，所述水解的条件为50～60℃水解28～32min，进一步为60℃水解30min。

上述马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18可作为益生菌应用于食品中。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明的马克斯克鲁维酵JY18来源于中国传统发酵豆制品，可作为益生菌应用于食品工业。

(2)本发明的亚麻籽饼乙醇-碱提取物，原料为冷榨亚麻籽饼、热榨亚麻籽饼及亚麻籽饼经过粉碎过筛得到的不同目数的组分，包括但不限于SDG、CAG和FAG三种酚类糖苷，亚麻籽饼粉碎筛分方法简单、高效，相对富集了SDG、FAG和CAG等糖苷成分，有效简化了糖苷提取的前处理，降低了提取成本。

(3)本发明的全细胞催化高效转化亚麻籽饼乙醇-碱提取物中SDG、CAG和FAG，具有应用于实际生产天然抗氧化剂SECO、CA和FA的潜力。

(4)本发明的全细胞催化亚麻籽饼乙醇-碱提取物中，在SDG浓度0.02～0.10mmol/L、pH 7.0～8.0、温度40～45℃、转化亚麻籽饼乙醇-碱提取物20～28h，其中SDG、CAG和FAG转化率分别达到70％、90％和70％及以上，SECO、CA和FA生成率分别达到50％、60％和70％及以上。

(5)本发明可获得亚麻木酚素益生菌转化产物，具有木酚素和益生菌的双重功效。

附图说明

图1是马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上生长形态观察结果图。

图2是马克斯克鲁维酵母JY18在显微镜下的形态观察结果图。

图3是马克斯克鲁维酵母JY18的系统发育进化树。

图4是实施例3制备得到的亚麻籽饼乙醇-碱提取物的液相色谱图。

图5是实施例3中马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化亚麻籽饼乙醇-碱提取物的液相色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为从商业途径得到的试剂和材料。

液相检测方法如下：

色谱柱：Titank C18 5u有机硅胶杂化色谱柱(250*4.6mm)；流动相：A相为含0.1％冰乙酸的超纯水，D相为色谱级乙腈；检测波长：280nm；洗脱梯度为：0min D相比例为10％，20min内D相比例线性增加至20％，20-50min，D相比例增加至80％，并以80％平衡至55min，D相比例下降至10％，并以10％平衡至60min；流速：0.5mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。

实施例1马克斯克鲁维酵母JY18的分离和鉴定

称取10g粉碎的亚麻籽经榨油后剩余的副产物亚麻籽饼粕，添加2倍重量的发酵豆制品捣碎，加入20倍体积无菌生理盐水，37℃培养3周获得混合发酵培养液。从混合发酵培养液中筛选木酚素转化菌。上述发酵培养液采用添加了0.5％ SDG聚合物(亚麻木酚素聚合物，由萨斯喀彻温大学Martin J.T.Reaney教授实验室提供，纯度为77.19％；也有在文献“CN116179407A、一株屎肠球菌及其在亚麻木酚素生物转化中的应用”中公开)的无糖YPD平板分离筛选，反复划线分离、镜检获得单菌落。

将筛选出的具有转化SDG能力的酵母接种于YPD平板于28℃培养48h，观察菌落的外观形态，并于显微镜下观察菌体的形态。挑取单菌落接种于YPD液体培养基中，培养48h后制成菌悬液，根据酵母基因组提取试剂盒SK8257的操作说明提取酵母的基因组DNA，使用通用真菌引物ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')和ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')通过PCR扩增ITS基因。并由生工生物工程(上海)股份有限公司测序。所得ITS序列在GeneBank数据库中进行Blast比对，本菌株JY18与Kluyveromyces marxianus strain E4有超过99.9％的同源性。采用邻接法构建系统发育树(图3)，菌株JY18与Kluyveromycesmarxianus strain E4(KU296047.1)和Kluyveromyces marxianus strain JYC2610(MN648696.1)聚为一支。结合形态学特征及生理生化实验结果，鉴定菌株JY18为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)，命名为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)JY18。

其中，马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18进行菌落形态观察(图1)，显微镜观察(图2)，具有以下主要形态特征：菌落在YPD平板上为呈乳白色，圆形，不透明，表面湿润无褶皱，细胞显微形态为卵圆形。

因此，马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18的保藏信息为：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏时间为2023年04月18日，保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所，保藏编号：GDMCC No：63367。

其中，马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)JY18的ITS序列，如SEQ IDNO：1所示(598bp)。

实施例2亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备及马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化

将亚麻籽在室温下用螺旋榨油机直接压榨制得冷榨亚麻籽饼，粉碎冷榨亚麻籽饼(5～7s，5次)，加入六倍体积的正己烷搅拌12h进行脱脂，称取5.0g脱脂亚麻籽粉，加入30mL的70％乙醇水溶液，室温搅拌28h，8000rpm离心10min，上清旋蒸后冻干，加入5mL 0.30mol/L NaOH于60℃水解30min，加HCl中和至pH 6.0，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物，称重，溶于甲醇，离心，上清过0.22μm有机相滤膜，于进样瓶中备用。通过HPLC方法分析计算其中的SDG、CAG和FAG含量，分别为5.34mg/g、2.07mg/g和0.62mg/g，且含有少量的CA和FA。

将上述乙醇-碱提取物溶于甲醇配制成1mM SDG溶液备用。马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上划线活化，挑单菌落接种于YPD肉汤培养基，28℃培养48h后，挑取单菌落于YPD肉汤中28℃培养48h，获得菌悬液。取100μL菌悬液于5mL YPD肉汤中，28℃培养48h，各三个平行。4℃高速离心10min(8000rpm)，除上清，菌体沉淀加入1mL无菌生理盐水涡旋清洗菌体，4℃高速离心10min(8000rpm)，重复两次得菌体沉淀。马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入500μL pH 7.4无菌PBS，重悬均匀，加入20μL 1mM SDG溶液，于45℃下反应24h；加入等体积甲醇终止反应。4℃高速离心10min(8000rpm)，上清过0.22μm有机相滤膜HPLC方法分析。SDG、CAG和FAG转化率分别达到100％、100％和80.98％，SECO、CA和FA生成率分别达到85.05％、66.84％和75.33％。

实施例3亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备及马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化

将亚麻籽在室温下用螺旋榨油机直接压榨制得冷榨亚麻籽饼，粉碎冷榨亚麻籽饼(5～7s，5次)，称取100g粉碎的冷榨亚麻籽饼，经40目筛网筛分，获得大于40目亚麻籽饼。粉碎后，加入六倍体积的正己烷搅拌12h进行脱脂，称取5.0g脱脂亚麻籽粉，加入30mL的70％乙醇水溶液，室温搅拌28h，8000rpm离心10min，上清旋蒸后冻干，加入5mL 0.30mol/L NaOH于60℃水解30min，加HCl中和至pH 6.0，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物，称重，溶于甲醇，离心，上清过0.22μm有机相滤膜，于进样瓶中备用。通过HPLC方法分析(图4)计算其中的SDG、CAG和FAG含量，分别为11.33mg/g、3.27mg/g和1.43mg/g，且含有少量的CA和FA。

将上述乙醇-碱提取物溶于甲醇配制成1mM SDG溶液备用。马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上划线活化，挑单菌落接种于YPD肉汤培养基，28℃培养48h后，挑取单菌落于YPD肉汤中28℃培养48h，获得菌悬液。取100μL菌悬液于5mL YPD肉汤中，28℃培养48h，各三个平行。4℃高速离心10min(8000rpm)，除上清，菌体沉淀加入1mL无菌生理盐水涡旋清洗菌体，4℃高速离心10min(8000rpm)，重复两次得菌体沉淀。马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入500μL pH 7.4无菌PBS，重悬均匀，加入10μL 1mM SDG溶液，于45℃下反应24h；加入等体积甲醇终止反应。4℃高速离心10min(8000rpm)，上清过0.22μm有机相滤膜HPLC方法分析(图5)。SDG、CAG和FAG转化率分别达到100％、100％和92.33％，SECO、CA和FA生成率分别达到93.90％70.28％和83.92％。

实施例4亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备及马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化

将亚麻籽置于干热烘焙机中，180℃旋转干炒20min，再在室温下用螺旋榨油机压榨制得热榨亚麻籽饼，粉碎热榨亚麻籽饼(5～7s，6次)，称取100g粉碎的热榨亚麻籽饼，经40目筛网筛分获得大于40目亚麻籽饼。粉碎后，加入六倍体积的正己烷搅拌11h进行脱脂，称取5.0g脱脂亚麻籽粉，加入30mL的68％乙醇水溶液，室温搅拌30h，8000rpm离心10min，上清旋蒸后冻干，加入5mL 0.28mol/L NaOH于50℃水解28min，加HCl中和至pH 6.2，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物，称重，溶于甲醇，离心，上清过0.22μm有机相滤膜，于进样瓶中备用。通过HPLC方法分析计算其中的SDG、CAG和FAG含量，分别为11.42mg/g、3.28mg/g和1.34mg/g，且含有少量的CA和FA。

将上述乙醇-碱提取物溶于甲醇配制成5mM SDG溶液备用。马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上划线活化，挑单菌落接种于YPD肉汤培养基，28℃培养48h后，挑取单菌落于YPD肉汤中28℃培养48h，获得菌悬液。取100μL菌悬液于5mL YPD肉汤中，28℃培养48h，各三个平行。4℃高速离心10min(8000rpm)，除上清，菌体沉淀加入1mL无菌生理盐水涡旋清洗菌体，4℃高速离心10min(8000rpm)，重复两次得菌体沉淀。马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入500μL pH 7.0无菌PBS，重悬均匀，加入10μL 5mM SDG溶液，于45℃下反应28h；加入等体积甲醇终止反应。4℃高速离心10min(8000rpm)，上清过0.22μm有机相滤膜HPLC方法分析。SDG、CAG和FAG转化率分别达到70.85％、90.11％和72.08％，SECO、CA和FA生成率分别达到54.94％、60.47％和70.64％。

实施例5亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备及马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化

将亚麻籽置于干热烘焙机中，180℃旋转干炒20min，再在室温下用螺旋榨油机压榨制得热榨亚麻籽饼，粉碎热榨亚麻籽饼(5～7s，6次)，加入六倍体积的正己烷搅拌13h进行脱脂，称取5.0g脱脂亚麻籽粉，加入30mL的72％乙醇水溶液，室温搅拌30h，8000rpm离心10min，上清旋蒸后冻干，加入5mL0.32mol/L NaOH于55℃水解32min，加HCl中和至pH 6.2，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物，称重，溶于甲醇，离心，上清过0.22μm有机相滤膜，于进样瓶中备用。通过HPLC方法分析计算其中的SDG、CAG和FAG含量，分别为5.56mg/g、2.21mg/g和0.65mg/g，且含有少量的CA和FA。

将上述乙醇-碱提取物溶于甲醇配制成2mM SDG溶液备用。马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上划线活化，挑单菌落接种于YPD肉汤培养基，28℃培养48h后，挑取单菌落于YPD肉汤中28℃培养48h，获得菌悬液。取100μL菌悬液于5mL YPD肉汤中，28℃培养48h，各三个平行。4℃高速离心10min(8000rpm)，除上清，菌体沉淀加入1mL无菌生理盐水涡旋清洗菌体，4℃高速离心10min(8000rpm)，重复两次得菌体沉淀。马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入500μL pH 8.0无菌PBS，重悬均匀，加入20μL 2mM SDG溶液，于40℃下反应24h；加入等体积甲醇终止反应。4℃高速离心10min(8000rpm)，上清过0.22μm有机相滤膜HPLC方法分析。SDG、CAG和FAG转化率分别达到88.01％、100％和70.19％，SECO、CA和FA生成率分别达到81.69％、65.44％和72.12％。

实施例6亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备及马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化

将亚麻籽在室温下用螺旋榨油机直接压榨制得冷榨亚麻籽饼，粉碎冷榨亚麻籽饼(5～7s，5次)，称取100g粉碎的冷榨亚麻籽饼，经60目筛网筛分获得小于等于60目亚麻籽饼。加入六倍体积的正己烷搅拌12h进行脱脂，称取5.0g脱脂亚麻籽粉，加入30mL的70％乙醇水溶液，室温搅拌28h，8000rpm离心10min，上清旋蒸后冻干，加入5mL 0.30mol/L NaOH于60℃水解30min，加HCl中和至pH 6.0，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物，称重，溶于甲醇，离心，上清过0.22μm有机相滤膜，于进样瓶中备用。通过HPLC方法分析计算其中的SDG、CAG和FAG含量，分别为4.61mg/g、1.52mg/g和0.65mg/g，且含有少量的CA和FA。

将上述乙醇-碱提取物溶于甲醇配制成1mM SDG溶液备用。马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上划线活化，挑单菌落接种于YPD肉汤培养基，28℃培养48h后，挑取单菌落于YPD肉汤中28℃培养48h，获得菌悬液。取100μL菌悬液于5mL YPD肉汤中，28℃培养48h，各三个平行。4℃高速离心10min(8000rpm)，除上清，菌体沉淀加入1mL无菌生理盐水涡旋清洗菌体，4℃高速离心10min(8000rpm)，重复两次得菌体沉淀。马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入500μL pH 7.0无菌PBS，重悬均匀，加入20μL 1mM SDG溶液，于40℃下反应20h；加入等体积甲醇终止反应。4℃高速离心10min(8000rpm)，上清过0.22μm有机相滤膜HPLC方法分析。SDG、CAG和FAG转化率分别达到100％、92.23％和72.04％，SECO、CA和FA生成率分别达到88.90％、72.07％和84.22％。

实施例7亚麻籽饼乙醇-碱提取物的制备及马克斯克鲁维酵母JY18全细胞催化

将亚麻籽在室温下用螺旋榨油机直接压榨制得冷榨亚麻籽饼，粉碎冷榨亚麻籽饼(5～7s，5次)，称取100g粉碎的冷榨亚麻籽饼，依次经40目、60目筛网筛分获得40～60目(不含40目)亚麻籽饼。加入六倍体积的正己烷搅拌12h进行脱脂，称取5.0g脱脂亚麻籽粉，加入30mL的70％乙醇水溶液，室温搅拌28h，8000rpm离心10min，上清旋蒸后冻干，加入5mL0.30mol/L NaOH于60℃水解30min，加HCl中和至pH 6.0，冻干后得亚麻籽饼乙醇-碱提取物，称重，溶于甲醇，离心，上清过0.22μm有机相滤膜，于进样瓶中备用。通过HPLC方法分析计算其中的SDG、CAG和FAG含量，分别为6.69mg/g、2.32mg/g和0.84mg/g，且含有少量的CA和FA。

将上述乙醇-碱提取物溶于甲醇配制成1mM SDG溶液备用。马克斯克鲁维酵母JY18在YPD平板上划线活化，挑单菌落接种于YPD肉汤培养基，28℃培养48h后，挑取单菌落于YPD肉汤中28℃培养48h，获得菌悬液。取100μL菌悬液于5mL YPD肉汤中，28℃培养48h，各三个平行。4℃高速离心10min(8000rpm)，除上清，菌体沉淀加入1mL无菌生理盐水涡旋清洗菌体，4℃高速离心10min(8000rpm)，重复两次得菌体沉淀。马克斯克鲁维酵母JY18的菌体沉淀加入500μL pH 8.0无菌PBS，重悬均匀，加入30μL 1mM SDG溶液，于45℃下反应28h；加入等体积甲醇终止反应。4℃高速离心10min(8000rpm)，上清过0.22μm有机相滤膜HPLC方法分析。SDG、CAG和FAG转化率分别达到100％、97.61％和78.07％，SECO、CA和FA生成率分别达到85.44％、65.91％和74.77％。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。