一种检测细胞核共振频率的方法

技术领域

本发明属于生物医疗技术领域，具体涉及一种检测细胞核共振频率的方法。

背景技术

恶性肿瘤是危害人群健康的最重要原因之一，目前主要的治疗方式包括手术、放疗、化疗及靶向治疗等。然而，仍有部分患者治疗效果不佳。近年来，通过物理方法来治疗肿瘤开始应用于临床。

声波是指物体的机械振动波，具有很强的组织穿透能力，已被广泛用于临床诊断和治疗，如成像和高强度聚焦超声。

共振是指物理系统在特定频率下，比其他频率以更大的振幅做振动的情形，这些特定频率和波长称之为共振频率。在共振频率下，很小的周期振动便可产生很大的振动，因为系统储存了动能。当阻力很小时，共振频率约与系统自然频率(或称固有频率)相等，后者是自由振荡时的频率。

从理论上说，结构系统的固有频率仅依赖于系统的固有特性(如质量、刚度)，当周期激励频率接近其固有频率时，系统振幅趋向于无穷大，即发生共振。相较于健康细胞，肿瘤细胞的细胞核尺寸、刚度、质量均有别于正常细胞，两者的固有频率理应存在差异。利用这一差异可达到选择性杀伤肿瘤细胞的目的。在给予肿瘤细胞细胞核的固有频率时，引起肿瘤细胞细胞核大幅度振动，从而导致肿瘤细胞死亡，该频率对正常细胞没有影响。

但不同部位肿瘤细胞(如肺癌、肝癌等)的物理特性，甚至是同一部位不同个体的肿瘤也存在异质性。因此，根据精准治疗及个体化治疗的原则，在使用超声共振治疗之前，应对靶肿瘤进行细胞核固有频率的检测。

为此本发明提出了一种检测细胞核共振频率的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测细胞核共振频率的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种检测细胞核共振频率的方法，具体步骤包括：S1：将手术取得的肿瘤标本在无菌环境下放入4℃的培养液中，使用4℃预冷的磷酸缓冲盐溶液清洗2遍；

S2：然后使用0.125％的胰酶在培养箱中进行消化，然后加入适量含胎牛血清的培养基终止消化；

S3：将消化后的混合物过滤，取经过滤后的细胞按每孔5000个细胞的密度接种于6孔板进行培养；

S4：使用慢病毒转染肿瘤细胞，使细胞表达携带核定位序列的增强型绿色荧光蛋白EGFP，在细胞质内合成的EGFP将被转运到细胞核，使得细胞发出明亮的荧光；

S5：将细胞放置于荧光显微镜下，在FITC通道下进行观测，拍照记录；

S6：紧接着对标记的细胞加载不同频率的超声进行激励，再次进行拍照；

S7：若该频率为肿瘤细胞核的固有频率，则细胞核将会高频振动，在曝光时长远高于振动周期，则在长曝光情况下，细胞核在此时的荧光面积将大于非振动时的细胞核，就可检测出该肿瘤细胞核的固有频率。

优选的，所述步骤S2中，用0.125％的胰酶在培养箱中消化的时间为15-30分钟，温度保持在37℃。

优选的，所述步骤S3中，采用40μm细胞筛进行过滤。

优选的，所述步骤S5中，荧光显微镜采用的是共聚焦显微镜或超辨率显微镜。

优选的，所述步骤S5和步骤S6中，进行拍照记录时，两次拍照的设定参数需要保持一致。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本方法为在体外检测肿瘤细胞核固有频率的系统策略，通过外科手术中取得的患者肿瘤组织取得肿瘤细胞，对肿瘤细胞进行慢病毒转染标记细胞核，使细胞核可发出明亮荧光；对标记的细胞加载不同频率的超声进行激励，以寻找肿瘤细胞核的固有频率；更加准确的辨别肿瘤细胞的共振频率，为后续的杀伤肿瘤细胞提供保障。

附图说明

图1为本发明的流程示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种检测细胞核共振频率的方法，具体步骤包括：S1：将手术取得的肿瘤标本在无菌环境下放入4℃的培养液中，使用4℃预冷的磷酸缓冲盐溶液清洗2遍；

S2：然后使用0.125％的胰酶在培养箱中进行消化，然后加入适量含胎牛血清的培养基终止消化；

S3：将消化后的混合物过滤，取经过滤后的细胞按每孔5000个细胞的密度接种于6孔板进行培养；

S4：使用慢病毒转染肿瘤细胞，使细胞表达携带核定位序列的增强型绿色荧光蛋白EGFP，在细胞质内合成的EGFP将被转运到细胞核，使得细胞发出明亮的荧光；

S5：将细胞放置于荧光显微镜下，在FITC通道下进行观测，拍照记录；

S6：紧接着对标记的细胞加载不同频率的超声进行激励，再次进行拍照；

S7：若该频率为肿瘤细胞核的固有频率，则细胞核将会高频振动，在曝光时长远高于振动周期，则在长曝光情况下，细胞核在此时的荧光面积将大于非振动时的细胞核，就可检测出该肿瘤细胞核的固有频率。本实施例中，优选的，所述步骤S2中，用0.125％的胰酶在培养箱中消化的时间为15-30分钟，温度保持在37℃。本实施例中，优选的，所述步骤S3中，采用40μm细胞筛进行过滤。本实施例中，优选的，所述步骤S5中，荧光显微镜采用的是共聚焦显微镜或超辨率显微镜。本实施例中，优选的，所述步骤S5和步骤S6中，进行拍照记录时，两次拍照的设定参数需要保持一致，为了更好的进行对比，更加直观的对比出结果。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。