一种奥拉帕利原料药的有关物质检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，特别涉及奥拉帕利原料药有关物质的检测方法。

背景技术

奥拉帕利(olaparib，ALPN，式Ⅰ)是2014年FDA批准用于遗传性晚期卵巢癌的靶向治疗药物，是一种创新的口服多聚腺苷核糖聚合酶强抑制剂，可导致肿瘤细胞DNA修复途径的缺陷而优先杀死癌细胞。

在奥拉帕利原料药的制备过程中，会不可避免地产生如式II所示的双取代产物杂质(标记为ALPL-ZZ5)，该杂质是由合成奥拉帕利的原料(环丙甲酰基哌嗪盐酸盐)中的杂质哌嗪引入，在奥拉帕利制备缩合步骤中产生，并普遍存在。此外，奥拉帕利在合成过程中也易降解产生式III(标记为ALPL-ZZ1)、式IV(标记为ALPL-ZZ2)、式Ⅴ(标记为ALPL-ZZ3)、式Ⅵ(标记为ALPL-ZZ4)、式Ⅶ(标记为ALPL-ZZ8)所示杂质，HBTU副产物-式Ⅷ(标记为ALPL-ZZ7)所示杂质也易在成品中残留。现有技术没有公开这七种有关物质的校正因子及同时测定的方法，且公开的奥拉帕利纯度检测方法，包括专利申请CN113720927A及期刊论文所述检测方法，均存在奥拉帕利峰无法与其后相邻杂质峰基线分离的缺陷，系统适用性不符合要求，不能准确测定单个未知杂质和总杂质的含量，从而不能有效保证奥拉帕利原料药产品的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种奥拉帕利原料药相关物质的检测方法，用于奥拉帕利原料药中ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8及其它单个未知杂质、总杂质的测定与限度控制，从而弥补现有技术的不足。

本发明提供一种奥拉帕利原料药有关物质的检测方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基键合硅胶为固定相进行色谱分离；特定杂质包含ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8中的一个或多个；流动相为溶剂A和溶剂B的混合溶剂，所述溶剂A为酸性水溶液或酸性缓冲盐溶液，所述溶剂B为乙腈；溶剂A与溶剂B进行梯度洗脱。

本发明的优选方案中，混合溶剂中，溶剂A为磷酸二氢铵溶液。

进一步优选，溶剂A为10mM磷酸二氢铵，用磷酸调PH至3.0。

进一步优选，进行梯度洗脱时，优选梯度如下：

其中溶剂A和B的百分比为体积百分比。

进一步优选，流动相的流速为0.3～1.5ml/min，色谱柱温为25～50℃，更优选为40℃。

进一步优选，色谱柱的规格选自4.6×150mm，3.5μm；4.6×250mm，5μm；4.6×150mm，5μm；2.1×150mm，1.7μm；2.1×150mm，1.6μm；2.1×150mm，1.9μm；4.6×150mm，2.7μm；4.6×150mm，2.5μm；4.6×150mm，3.5μm或4.6×150mm，3.0μm，优选4.6×150mm，3.5μm。

进一步优选，色谱柱选自Waters

进一步优选，色谱分离过程中，采用紫外检测仪进行分析检测；更进一步优选紫外检测波长为270～280nm，优选275nm或276nm。

本发明的优选方案中，按照加校正因子的主成分自身对照法测定有关物质的含量。

进一步优选，该方法包含如下步骤：取奥拉帕利原料药待测样品配制供试品溶液，将供试品溶液稀释200倍作为对照溶液，然后以溶剂A和溶剂B的混合为流动相梯度洗脱进行HPLC检测，按照加校正因子的主成分自身对照法计算各有关物质含量：特定杂质含量％＝F×(A杂/A对照)×0.5，有关物质含量为各特定杂质含量与未知杂质含量之和。其中，F为相对校正因子，A杂为供试品溶液图谱中各特定杂质或未知杂质的峰面积，A对照为对照溶液图谱中主峰峰面积，所述相对校正因子为主成份线性回归方程的斜率和特定杂质线性回归方程的斜率的比值。

再进一步优选，本发明的技术方案具体包括如下步骤：

(a)供试品溶液的配制：取奥拉帕利或一水合物待测样品溶解并稀释成1mg/ml，作为供试品溶液；

(b)对照溶液的配制：取供试品溶液适量，稀释制成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液；

(c)杂质对照品贮备液配制：取ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8对照品各约15mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加10ml N-甲基吡咯烷酮溶解并用乙腈稀释到刻度，摇匀、即得，浓度均为0.15mg/ml；

(d)系统适用性溶液的配制：取奥拉帕利或其一水合物对照品约50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，量取杂质对照品贮备液0.5ml，加20％乙腈超声溶解并稀释，摇匀，作为系统适用性溶液，其中奥拉帕利浓度约为1mg/ml，各杂质浓度均约1.5μg/ml；

(e)精密量取系统适用性溶液5～20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、奥拉帕利、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5依次出峰，主峰与前后相邻峰的分离度不得小于2.0，理论塔板数按奥拉帕利峰计算应不低于5000；

(f)精密量取供试品溶液和对照溶液5～20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有与ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8相对保留时间一致的色谱峰，按乘以校正因子的主成分自身对照法计算，各相关物质含量均不得过0.15％，其他单个未知杂质不得过0.1％，总有关物质不得过1.0％；所述ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8的相对校正因子分别为0.69、0.67、0.84、0.56、0.89，所述ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4的相对校正因子为1.0。

本发明提供了一种更有效的、检出能量更强的奥拉帕利原料药有关物质的检测方法，其优点主要体现在：(1)首次公开了奥拉帕利原料药中ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8的相对校正因子，可用于奥拉帕利原料药中ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8这7种有关物质及其它未知杂质和总杂质的同时测定与限度控制；(2)解决了现有公开的奥拉帕利原料药有关物质测定方法中奥拉帕利峰与后相邻杂质峰重叠或部分重叠的问题；(3)可定量测定7种有关物质及其它单个未知杂质与总杂质的含量，从而有效的控制奥拉帕利原料药的质量；(4)本发明提供的方法具有精密度好、分离度好、灵敏度高、重复性好，对于实现奥拉帕利原料药的质量控制、安全性保证具有重要的意义。

附图说明

附图1：实施例1中系统适用性实验图谱，采用流动相6进行梯度洗脱，其中ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、奥拉帕利、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5保留时间分别为(min)：6.139、16.609、19.635、23.369、27.808、31.613、39.070、41.538；

附图2：实施例4的典型样品图谱(批号：P-AG-210401)；

附图3：对比例1的系统适用性实验图谱。

具体实施方式

以下将参考附图，结合具体实施例对本发明做进一步阐述。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例中若无特殊说明，溶剂配比均为体积比(v/v)。下述实施例中采用的材料、试剂等如无特殊说明，皆为普通市售品，皆可于市场购得。

实施例1流动相及洗脱梯度的选择

仪器：Agilent 1290高效液相色谱仪(配备DAD检测器)；

色谱柱：Waters

鬼峰捕集柱：Welch Ghost-Buster,4.6×50mm；

流速：1.0ml/min；检测波长：275nm；进样体积：20μl；柱温：40℃；

1.杂质对照品定位溶液的配制：取ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8对照品各约15mg，精密称定，分别置100ml容量瓶中，各加10ml N-甲基吡咯烷酮溶解并用乙腈稀释到刻度，摇匀、即得，浓度均为0.15mg/ml；

2.杂质对照品贮备液配制：取ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8对照品各约15mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加10ml N-甲基吡咯烷酮溶解并用乙腈稀释到刻度，摇匀、即得，浓度均为0.15mg/ml；

3.系统适用性溶液的配制：取奥拉帕利或其一水合物对照品约50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，量取杂质对照品贮备液0.5ml，加20％乙腈超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，其中奥拉帕利浓度约为1mg/ml，各杂质浓度均约1.5μg/ml；

4.精密量取系统适用性溶液20μl，注入色谱仪，以下述流动相1～6梯度洗脱，溶剂配比均为体积比(v/v)：

5.流动相1-6的洗脱梯度为：

6.结果分析：除流动相2外，其它4种流动相与优选洗脱方法结合所得图谱中，不仅各个特定杂质及未知杂质均与相邻峰基线分离，而且主峰与前后相邻峰基线分离且主峰的拖尾因子及理论塔板数均符合规定；

7.结论：流动相1,3-6及洗脱方法既能实现主峰与后相邻杂质峰基线分离，对其它各未知杂质的分离也具有较好的选择性，可用于奥拉帕利原料药样品中ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8及其它单个未知杂质与总杂质的测定。但相比较而言，以流动相6洗脱所得图谱基线最平稳，所以优选流动相6。

实施例2色谱柱的选择

1.色谱条件

除色谱柱外，其它色谱条件均同实验例1

色谱柱1：Waters

色谱柱2：Waters

色谱柱3：ZORBAX Eclipse XDB-C18,4.6×150mm，5μm；

色谱柱4：Ultimate XB-C8，4.6×250mm，5μm；

2.系统适用性溶液均同实验例1；

3.进样及结果分析

分别以色谱柱1～4作为分析柱，系统充分平衡后，分别进样空白溶液(20％乙腈)、系统适用性溶液，用流动相6及所述优选梯度洗脱，记录色谱图。结果4根色谱柱所记录的系统适用性溶液图谱没有明显差异，均可作为本方案分析用柱。

实施例3检测方法的方法学验证

参照中国药典2020年版9101分析方法验证指导原则对实施例1～2所确定的优选检测条件进行方法学验证。

1.色谱条件：

色谱柱：Waters

鬼峰捕集柱：Welch Ghost-Buster,4.6×50mm；

流速：1.0ml/min；检测波长：276nm；进样体积：20μl；柱温：40℃；

流动相：溶剂A和溶剂B的混合；

溶剂A：溶剂A：10mM磷酸二氢铵水溶液，用磷酸调PH至3.0；溶剂B：乙腈；

洗脱梯度为：

2.溶液配制：

(a)空白溶液、样品溶解溶剂与稀释剂均为：乙腈-水(20:80)；

(b)奥拉帕利对照品溶液：取奥拉帕利或其一水合物对照品适量，精密称定，溶于乙腈-水(20:80)并稀释成含奥拉帕利1mg/ml，作为对照品溶液；

(c)杂质对照品贮备液及定位溶液的配制：各取ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8对照品各约15mg，精密称定，分别置100ml容量瓶中，各加10ml N-甲基吡咯烷酮溶解并用乙腈稀释到刻度，摇匀、即得，浓度均为0.15mg/ml；

(d)杂质对照品贮备液配制：取ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8对照品各约15mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加10ml N-甲基吡咯烷酮溶解并用乙腈稀释到刻度，摇匀、即得，浓度均为0.15mg/ml；

(e)系统适用性溶液的配制：取奥拉帕利或其一水合物对照品约50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，量取杂质对照品贮备液0.5ml，加20％乙腈超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，其中奥拉帕利浓度约为1mg/ml，各杂质浓度均约1.5μg/ml；

(f)定量限、检测限及线性溶液：取各杂质对照品贮备液及奥拉帕利对照品贮备液适量，用溶剂A-溶剂B(90:10)稀释得系列浓度的稀释溶液；

(g)供试品溶液及重复性溶液、中间精密度溶液的配制：取奥拉帕利或其一水合物样品溶于乙腈-水(20:80)并稀释成约含奥拉帕利1mg/ml，作为供试品溶液；同法平行配制6份，作为重复性溶液；由另一名分析人员在不同日期同法平行配制6份中间精密度溶液，用不同设备进行中间精密度考察；

(h)对照溶液的配制：取供试品溶液适量，用乙腈-水(20:80)稀释制成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液；

(i)加标供试品溶液：取奥拉帕利或其一水合物样品适量，精密称定，至容量瓶中，加各杂质对照品贮备液适量，用溶剂A-溶剂B(90:10)溶解并稀释至刻度，其中奥拉帕利浓度约1mg/ml，ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8各约1.5μg/ml；

(i)准确度测试溶液及杂质对照品溶液

取奥拉帕利或其一水合物供试品适量，精密称定，置于容量瓶中，加入杂质对照品贮备液适量，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，制备4个杂质浓度分别为定量限浓度、50％限度水平、100％限度水平、150％限度水平的测定溶液，每个浓度平行制备3份，其中供试品浓度均为1mg/ml。另外取杂质对照品贮备液适量，置容量瓶中，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，制得100％限度水平的杂质对照品溶液。

(j)强力破坏溶液

酸破坏供试品溶液：称取供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，加入2mol/L盐酸溶液6ml，室温放置，2小时后加2mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，用乙腈-水(20:80)定容，摇匀即得。

碱破坏供试品溶液：称取供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)6ml超声使溶解，加入2mol/L氢氧化钠溶液6ml，室温放置，2小时后加2mol/L盐酸溶液中和至中性，用乙腈-水(20:80)定容，摇匀即得。

氧化破坏供试品溶液：称取供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，加入30％过氧化氢溶液2ml，室温放置，4小时后用乙腈-水(20:80)定容，摇匀，即得。

高温破坏供试品溶液：称取供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)6ml超声使溶解，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，置水浴95℃条件下水浴破坏，4小时后取出放冷至室温，用稀释剂定容，摇匀，即得。

高温固体破坏供试品溶液：取供试品约100mg，置于扁型称量瓶中，在105℃烘箱内放置8小时后，取出放冷至室温，称取该供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀即得。

光照破坏供试品溶液：称取供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，置光照箱中，24小时后取出(总照度≥1.2×105lux·hr总紫外幅度≥20W·hr/m2)。

光照固体破坏供试品溶液：取供试品约100mg，置于扁型称量瓶中，置光照箱中，24小时后取出(总照度≥1.2×105lux·hr总紫外幅度≥20W·hr/m2)，称取该供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀即得。

湿热破坏：取供试品约100mg，精密称定，置于扁型称量瓶中，置40℃/75％恒温恒湿箱中，14天后取出，称取该供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀即得。

高温氧化破坏：称取供试品20mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)超声使溶解，加入30％过氧化氢溶液2ml，置水浴95℃条件下，2.5小时后用乙腈-水(20:80)定容，摇匀即得。

同法进行空白溶液破坏。

3.测定方法

(a)专属性测定方法：精密量取系统适用性溶液和对照溶液、强制降解溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、奥拉帕利、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5依次出峰，主峰与前后峰的分离度不得小于2.0；主峰的拖尾因子应在0.8～1.5之间；理论塔板数按奥拉帕利峰计算应不低于5000；对照溶液连续进样5次，主峰峰面积和保留时间的相对标准偏差(RSD)不得过2.0％；各破坏溶液中主峰与前后峰分离度均≥2.0；各破坏溶液中，降解回收率范围在90.0％～110.0％之间。

(b)定量限、检测限测定方法：分别取稀释剂空白及系列稀释溶液进样，记录色谱图，计算奥拉帕利主峰及各杂质峰信噪比，当信噪比约为3时对应浓度为检测限，当信噪比约为10时对应浓度为定量限；定量限溶液连续6次测定相应峰面积的RSD值不得大于15.0％。

(c)线性测定方法：精密量取奥拉帕利及各杂质定量限及定量限以上系列稀释溶液(最高浓度为限度浓度的200％)20μl，分别进样一针，记录色谱图，线性的相关系数r应不小于0.990；y轴截距相当于100％浓度水平百分比不得过10.0％，主成分和已知杂质的线性斜率之比为相应杂质的校正因子。

(d)溶液稳定性测定方法

将配制好的系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液、供试品加标溶液置于样品盘中，室温下分别于不同时间点精密量取20μl进样，记录色谱图；各时间供试品溶液中，主峰峰面积与0小时测定值的比值应在95.0％～105.0％之间，定量限以上所有杂质在不同时间点含量与0小时差值应不得过0.03％，不得出现大于LOQ的新杂质；各时间供试品加标溶液中，主峰峰面积与0小时测定值的比值应在95.0％～105.0％之间，各杂质在不同时间点含量与0小时差值应不得过0.03％；各时间点下，对照溶液色谱图中，主峰峰面积与0小时测定值的比值应在95.0％～105.0％之间。

(e)精密度测定方法

将配制好的系统适用性溶液、对照溶液、精密度测定溶液置于样品盘中，分别精密量取20μl进样，记录色谱图；6份重复性溶液中，如单个杂质和总杂含量结果≥0.1％，则RSD不得过10.0％；如单个杂质和总杂含量结果<0.1％，则与其平均值差值的绝对值不得过0.02％；12份精密度溶液中，如单个杂质和总杂含量结果≥0.1％，则RSD不得过10.0％；如单个杂质和总杂含量结果<0.1％，则与其平均值差值的绝对值不得过0.02％。

(f)准确度测定方法

将配制好的系统适用性溶液、对照溶液、杂质对照品溶液、供试品溶液、准确度测定溶液置于样品盘中，分别精密量取20μl进样，记录色谱图；定量限浓度的准确度溶液中各杂质回收率单值和均值在80.0％～120.0％之间；其他浓度的准确度溶液中各杂质回收率单值和均值在90.0％～110.0％之间，9份回收率RSD不得大于10.0％。

4、验证结果见下表

表1：方法学验证结果

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方法学验证结果显示：本法专属、灵敏、准确度高、重复性好、线性范围宽，各项验证内容均符合可接受标准，因此该方法可用于测定奥拉帕利原料药中有关物质ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8及其它未知杂质与总杂质的测定。

实施例4三批奥拉帕利原料药样品中ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8及其它未知杂质与总杂质的测定

1.色谱条件

仪器：Agilent 1290高效液相色谱仪(配备DAD检测器)；

色谱柱：Waters

鬼峰捕集柱：Welch Ghost-Buster，4.6×50mm；

流速：1.0ml/min；检测波长：276nm；进样体积：20μl；柱温：40℃；

流动相：溶剂A和溶剂B的混合；溶剂A：10mM磷酸二氢铵水溶液，用磷酸调PH至3.0；

溶剂B：乙腈；

洗脱梯度为：

2.溶液配制

(a)供试品溶液的配制：取奥拉帕利待测样品溶于乙腈-水(20:80)并稀释成1mg/ml，作为供试品溶液；

(b)对照溶液的配制：取供试品溶液适量，用乙腈-水(20：80)稀释制成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照溶液；

(c)杂质对照品贮备液、杂质定位溶液、系统适用性溶液的配制：同实验例2；

(d)杂质对照品溶液取杂质对照品贮备液适量，置容量瓶中，用乙腈-水(20：80)稀释至刻度，摇匀，得到ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ4、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8各约1.5μg的杂质混合溶液；

3.样品测定

(a)精密量取系统适用性溶液、对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、奥拉帕利、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5依次出峰，主峰与前后峰的分离度不得小于2.0，理论塔板数按奥拉帕利峰计算应不低于5000；对照溶液连续进样5次，主峰峰面积和保留时间的RSD应不得大于2.0％

(b)精密量取供试品溶液、对照溶液、杂质对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有与ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5相对保留时间一致的色谱峰，按乘以校正因子的主成分自身对照法或杂质外标对照法计算，含ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5均不得过0.15％，其它单个未知杂质不得过0.1％，总杂不得过1.0％；所述ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ5、ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8的相对校正因子分别为0.69、0.67、0.84、0.56、0.89，所述ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4的相对校正因子为1.0。测定结果见下表2(ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5按加校正因子的主成分自身对照法计算，其它按主成分自身对照法计算)和表3(ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5按杂质外标对照法计算，其它按主成分自身对照法计算)。

表2：3批样品测定结果

其中特定杂质ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5按加校正因子的主成分自身对照法计算，其它按主成分自身对照法计算。

表3：3批样品测定结果

其中杂质ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5按杂质外标对照法计算，其它按主成分自身对照法计算。

测定结果表明，ALPL-ZZ7、ALPL-ZZ8、ALPL-ZZ2、ALPL-ZZ3、ALPL-ZZ1、ALPL-ZZ4和ALPL-ZZ5按杂质外标对照法计算与加校正因子的主成分自身对照法所得结果没有显著差异，为了操作简便及节约成本，本技术方案采用加校正因子的主成分自身对照法。系统适用性溶液图谱见附图1，典型样品图谱见附图2(批号：P-AG-210401)。

对比例1专利公开方法(CN113720927A公开)系统适用性考察

仪器：Agilent 1290高效液相色谱仪(配备DAD检测器)；

色谱柱：Waters

鬼峰捕集柱：Welch Ghost-Buster，4.6×50mm；

流速：1.0ml/min；检测波长：276nm；进样体积：20μl；柱温：40℃；

流动相：溶剂A和溶剂B的混合；溶剂A：0.05％(v/v)三氟乙酸水溶液，溶剂B：乙腈；

系统适用性溶液同实验例1；

进样及结果分析：系统充分平衡后，分别进样溶剂空白、系统适用性溶液，记录色谱图，结果系统适用性溶液所得图谱中，主成分同后相邻杂质峰部分重叠，系统适用性不符合要求，图谱详见附图3。