余麦口咽合剂中有效成分的含量检测方法

技术领域

本发明属于中药质量检测技术领域，具体涉及余麦口咽合剂中有效成分的含量检测方法。

背景技术

余麦口咽合剂为中药合剂,处方含有余甘子、地黄、赤芍、麦冬、甘草等多味中药,具有滋阴降火的功效,用于治疗阴虚火旺、虚火上炎所致的口疮灼热、疼痛、局部红肿、心烦、口干、小便黄赤,以及复发性口腔溃疡。

赤芍和余甘子是余麦口咽合剂中的主要有效成分，具有清热凉血,散淤止痛,消食健胃,生津止咳的功效。其中芍药苷能解热、抗炎、抗溃疡；没食子酸能生津止渴、止血凉血；柯里拉京能抗菌,杀菌消炎,抑制病毒；鞣花酸能抗氧化、防止感染、抑制溃疡。

目前，还未见同时检测余麦口咽合剂中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸含量的报道，因此，建立一种准确度高、专属性高、重现性良好的能够同时检测出余麦口咽合剂中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸含量的方法，为评价余麦口咽合剂的质量提供了依据，更能对其进行有效监控。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够同时检测余麦口咽合剂中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸含量的方法。

本发明为解决上述技术问题采用的技术方案是提供了余麦口咽合剂中有效成分的含量检测方法。所述检测方法采用高效液相色谱法对余麦口咽合剂中的没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸进行检测，将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，外标法计算余麦口咽合剂中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的含量；所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相以乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；双波长检测：225～235nm，245～255nm；柱温为：25℃～35℃；流速为：0.5～1.5mL/min。

进一步地，所述流动相的梯度洗脱为：0～10min，7％流动相A，93％流动相B；10～30min，7％～25％流动相A，93％～75％流动相B；30～40min，25％流动相A，75％流动相B；40～45min，25％～7％流动相A，75％～93％流动相B；45～50min，7％流动相A，93％流动相B。

进一步地，所述对照品溶液的配制为：精密称取没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸对照品，加入甲醇制成每1mL各含40μg的混合对照品溶液。

进一步地，所述供试品溶液的配制为：精密量取余麦口咽合剂样品5～10mL于100mL容量瓶中，加入体积浓度为75～85％的甲醇溶液80mL，超声30～60min，超声频率为33～59kHz，功率为250～720W，放冷，定容，摇匀，滤过得续滤液，即得。

优选地，所述供试品溶液的配制为：精密量取余麦口咽合剂样品5mL于100mL容量瓶中，加入体积浓度为80％的甲醇溶液80mL，超声60min，超声频率为59kHz，功率为720W，放冷，定容，摇匀，滤过得续滤液，即得。

进一步地，所述高效液相色谱法的色谱条件满足以下至少一项：

紫外检测器双波长检测：230nm，250nm。

柱温为：30℃。

流速为：1.0mL/min。

进样量为10μL。

进一步地，所述外标法是分别以对照品溶液中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸浓度与峰面积为对照，按照公式Cx＝CR×Ax/AR，分别计算供试品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的含量；式中CR为各对照品溶液浓度；AR为混合对照品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的色谱峰面积；Ax为供试品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的色谱峰面积。

本发明的有益效果是：

本发明提供的余麦口咽合剂中有效成分的含量检测方法能够同时有效检测出没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸四种成分的含量，检测步骤简便，具有良好的线性，灵敏度高，具有良好的重复性和准确度，可为余麦口咽合剂提供全面、可靠的质量控制依据。

具体而言，本发明提供的含量检测方法中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的线性范围分别是17.751～42.6024(R2＝0.9993),17.444～41.8656(R2＝0.9991),22.44～53.856(R2＝0.9991),21.07～50.568(R2＝0.9993)，具有良好的线性；没食子酸、柯里拉京、芍药苷、鞣花酸的平均回收率(n＝6)分别为97.56％(RSD＝0.42％)，98.42％(RSD＝0.92％)，97.16％(RSD＝0.54％),96.38％(RSD＝1.14％)，检测结果具有较高准确度。

附图说明

图1为实施例1中余麦口咽合剂的供试品溶液色谱图。

图2为实施例1中混合对照品溶液的色谱图。

图3为实施例2中线性关系考察没食子酸标准曲线图。

图4为实施例2中线性关系考察柯里拉京标准曲线图。

图5为实施例2中线性关系考察芍药苷标准曲线图。

图6为实施例2中线性关系考察鞣花酸标准曲线图。

图7为实施例2中精密度考察的色谱图。

具体实施方式

下面将通过具体的实施例对本发明作进一步地详细阐述。

实施例1余麦口咽合剂中有效成分的含量检测

1.1仪器与试剂

仪器：Aglient 1260Ⅱ高效液相色谱仪，G7114A紫外检测器，美国安捷伦公司；SQP电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；SB25-12DTD超声波清洗机，宁波新芝生物科技；UPR-Ⅱ-40L超纯水机，四川优普超纯科技。

试剂：甲醇(批号：2022091902)、乙腈(批号：2022052101)、磷酸(批号：2019111501)均为成都市科隆化学品有限公司的色谱纯试剂；水为超纯水；芍药苷对照品(批号：110736-202145)；没食子酸对照品(批号：110831-201906，纯度为91.5％)购于中国食品药品检定研究院；柯里拉京对照品(批号：AO2GB143893，纯度为≥98％)；鞣花酸对照品(批号：S24D11G135548，纯度为≥98％)购于上海源叶生物科技有限公司。

1.2色谱条件

色谱柱：HPLC column Shim-pack GIST C18(250mm×4.6mm,5μm)；流速1mL/min；柱温30℃；双波长检测：230nm、250nm；进样量10μL；流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1。

表1流动相梯度程序

1.3对照品溶液的制备

精密称定没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸对照品适量，加入甲醇分别制成每1mL各含40μg的混合对照品溶液。

1.4供试品溶液的制备

精密量取余麦口咽合剂样品5mL于100mL容量瓶中，加入体积浓度为80％的甲醇溶液80mL，超声处理60min，超声频率59kHz，超声功率720W，放冷，定容，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

1.5余麦口咽合剂有效成分的测定

分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液各10μL，供试品溶液连续进样两针，注入高效液相色谱仪，获得色谱图，见图1和图2。

理论塔板数按没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸计算，均不低于1300。以对照品溶液中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸浓度与峰面积为对照，按照公式Cx＝CR×Ax/AR，分别计算供试品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的含量；式中CR为各对照品溶液浓度，AR为混合对照品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的色谱峰面积，Ax为供试品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的色谱峰面积。含量测定结果见表2。

表2余麦口咽合剂有效成分测得结果/mg/mL

实施例2方法学验证

2.1线性关系考察

精密量取对照品溶液，分别配制成原液对应的50％，80％，90％，100％，120％浓度的对照品溶液,分别进样10μL，记录色谱峰面积，以峰面积Y为纵坐标，溶液浓度X(μg/mL)为横坐标，进行线性回归，结果表明(见表3)，没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的线性范围分别是17.751～42.6024(R2＝0.9993),17.444～41.8656(R2＝0.9991),22.44～53.856(R2＝0.9991),21.07～50.568(R2＝0.9993)，线性关系良好。

表3线性检测结果(n＝6)

2.2精密度考察

精密吸取混合对照品溶液10μl，连续进样6次，以没食子酸、柯里拉京、芍药苷、鞣花酸色谱峰峰面积计，测得值的RSD分别为1.32％，1.34％，1.38％，1.37％；表明仪器精密度良好。见表4和图7。

表4精密度检测结果

2.3重复性考察

分别取余麦口咽合剂样品6份，按照本发明方法分别制备余麦口咽合剂供试品溶液,按本发明方法进行测定,每次进样10μL，分别测得峰面积，结果没食子酸、柯里拉京、芍药苷、鞣花酸的RSD值分别为0.42％，0.46％，0.33％，1.68％。结果表明该方法重复性良好。结果见表5。

表5重复性检测结果/mg/mL

2.4稳定性考察

精密吸取余麦口咽合剂供试品溶液上述色谱条件,每次进样10μL，分别于制备后0、4、8、12、24h测定峰面积,以没食子酸、柯里拉京、芍药苷、鞣花酸色谱峰峰面积计，测定值的RSD分别为0.27％，0.35％，0.24％，0.43％，表明样品溶液在24h内基本稳定。结果见表6。

表6稳定性试验检测结果

2.5加样回收率考察

精密量取5mL已知含量的样品6份，分别加入混合对照品溶液5mL，按照供试品溶液制备方法分别制备余麦口咽合剂供试品溶液,然后按照本发明方法进行测定，每次进样10μL，分别测得峰面积，计算加样回收率。结果见表7。

表7加样回收率结果

2.6含量测定

精密量取3批余麦口咽合剂5mL，每批平行测定2份，按照本发明方法制备供试品溶液，进行测定，计算样品中没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸的含量(见表8)。

表8含量测得结果

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采用本发明方法能够同时有效检测出没食子酸、柯里拉京、芍药苷和鞣花酸四种成分的含量，检测步骤简便，具有良好的线性，灵敏度高，具有良好的重复性和准确度，可为余麦口咽合剂提供全面、可靠的质量控制依据。结果表明，本发明方法的线性范围分别是17.751～42.6024(R2＝0.9993)，17.444～41.8656(R2＝0.9991)，22.44～53.856(R2＝0.9991)，21.07～50.568(R2＝0.9993)，具有良好的线性；没食子酸、柯里拉京、芍药苷、鞣花酸的平均回收率(n＝6)分别为97.56％(RSD＝0.42％)，98.42％(RSD＝0.92％)，97.16％(RSD＝0.54％),96.38％(RSD＝1.14％)，检测结果具有较高准确度。