用螺甾内酯和酰基富烯的组合治疗癌症

技术领域

本申请涉及癌症治疗，并且更具体地，本申请涉及使用包括螺甾内酯(spironolactone)的组合疗法的癌症治疗。

背景技术

癌症是人类最常见的死因之一。用于患有晚期癌症的患者的治疗策略的发展已经显著改善了总体生存。然而，对抗癌剂的抗性是不可避免的，并且晚期癌症的预后仍然很差。癌症耐药性有几个潜在来源，包括药物转运蛋白的改变、细胞凋亡的抑制、线粒体改变、DNA损伤修复的促进、自噬、上皮-间充质转变和癌症干细胞(CSC)。考虑这些机制的适当策略是治愈癌症所必需的。

癌症的组合疗法已经变得更加普遍，这部分是由于通过多种途径攻击疾病的可见优势。尽管在过去的几十年中已经鉴定了许多有效的组合疗法；但鉴于每年由癌症引起的持续大量的死亡，一直需要鉴定用于抗癌治疗的有效治疗方案。

因此，始终需要改进的方法来治疗癌症。

发明内容

本申请公开了以下发现：与由单独的酰基富烯(acylfulvene)或螺甾内酯治疗所提供的效果相比，用隐杯伞素(illudin)或隐杯伞素类似物(例如，酰基富烯)和螺甾内酯的组合来治疗受试者的癌症具有协同更强的效果(即，大于各自加在一起的效果)。例如，与用单独的隐杯伞素或酰基富烯或螺甾内酯治疗癌症时所递送的细胞毒性相比，用隐杯伞素或酰基富烯和螺甾内酯的组合治疗癌症所递送的细胞毒性出乎意料地更大(或大于两者加在一起的细胞毒性)。此外，发现组合疗法导致比使用单独的任一疗法时发现的更快速的癌细胞杀伤和更快速的肿瘤缩小。

本申请的一个方面包括用于治疗癌症的组合疗法。在实施方案中，该疗法包括施用活性剂的组合，这些活性剂包括隐杯伞素或隐杯伞素类似物(例如，酰基富烯)和螺甾内酯。

本申请的另一个方面提供了药物组合物，其包含以治疗或预防癌症的剂量与药学上合适的载体或赋形剂混合的隐杯伞素或隐杯伞素类似物(例如，酰基富烯)和螺甾内酯或其药学上可接受的盐。药物组合物还可以与其他治疗剂或治疗形式同时、相继或交替地组合施用。

本申请的另一个方面包括治疗有效量的以组合使用的每种隐杯伞素或酰基富烯和螺甾内酯，与单独使用每种药剂的单一疗法相比，当组合使用时，该治疗有效量将更低。此类较低的治疗有效量可提供较低的治疗方案毒性。

本申请的另一个方面包括包含酰基富烯的疗法，该酰基富烯是(+)-羟基脲甲基酰基富烯。

本申请的另一个方面包括包含酰基富烯的疗法，该酰基富烯是伊洛福芬(Irofulven)。

本申请的另一个方面包括治疗癌症，该癌症可包括实体瘤和血液恶性肿瘤。肿瘤诸如但不限于增殖性或赘生性疾病，诸如癌、肉瘤或混合型癌症，包括乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、前列腺癌或脑癌，间皮瘤、卵巢癌、肺癌或胰腺癌可作为治疗的靶标。

附图说明

图1A显示使用包括LP-184的示例性处理的U87成胶质细胞瘤细胞中的细胞生长速率；

图1B显示使用包括LP-184的示例性处理的CHLA-06非典型畸胎样横纹肌样瘤细胞中的细胞生长速率；

图1C显示使用包括LP-184的示例性处理的CAKI-2乳头状肾细胞癌细胞系中的细胞生长速率；

图2A显示使用包括LP-284的示例性处理的RPMI 8226人类骨髓瘤细胞系中的细胞生长；

图2B显示使用包括LP-284的示例性处理的SUDHL6细胞系中的细胞生长；

图3显示用LP-184和螺甾内酯处理GBM细胞；

图4A显示使用包括LP-184的示例性处理的M1123成胶质细胞瘤细胞中的细胞生长速率；

图4B显示使用包括LP-184的示例性处理的Mayo39 GBM神经球细胞中的细胞生长速率；

图4B显示使用包括LP-184的示例性处理的U87成胶质细胞瘤细胞中的细胞生长速率；

图5显示M1123细胞系中较低剂量的LP-184和螺甾内酯的细胞生长速率。

图6显示Mayo39细胞系中较低剂量的LP-184和螺甾内酯的细胞生长速率。

图7显示U87细胞系中较低剂量的LP-184和螺甾内酯的细胞生长速率。

图8显示LP-184和螺甾内酯的协同作用。

图9A显示使用包括LP-100的示例性处理的ARTR非典型畸胎样横纹肌样瘤细胞中的细胞生长速率

图9B显示使用包括LP-100的示例性处理的22RV1前列腺癌细胞中的细胞生长速率

图9C显示使用包括LP-100的示例性处理的ACHN肾癌细胞中的细胞生长速率

图10显示螺甾内酯在较低剂量的LP-100下在MDAPCA2b细胞系中增强了效果。

具体实施方式

本申请提供了用于治疗实体癌和血癌的组合疗法。在实施方案中，该疗法包括施用活性剂的组合，这些活性剂包括隐杯伞素或隐杯伞素类似物(例如，酰基富烯)和螺甾内酯。在其他实施方案中，该疗法包括施用其他疗法的组合。在其他实施方案中，该组合疗法可用于治疗实体癌(例如，肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌和膀胱癌)、成胶质细胞瘤和非典型畸胎样横纹肌样瘤和肾细胞癌)的生化发生或复发。在其他实施方案中，该疗法包括可用于治疗血癌的生化发生和复发的组合疗法，其中向患者施用治疗有效量的酰基富烯(例如，羟基脲甲基酰基富烯)或其盐和螺甾内酯。在某些实施方案中，该组合可提供对淋巴瘤的治疗，诸如套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma；MCL)和双打击淋巴瘤(double-hit lymphoma；DHL)。在多发性骨髓瘤(MM)中，在骨髓中的浆细胞的过度生长会排挤正常的造血细胞。

隐杯伞素或酰基富烯

在一个实施方案中，本申请包括使用了隐杯伞素或隐杯伞素类似物(例如，酰基富烯)。酰基富烯是隐杯伞素的一类细胞毒性半合成衍生物，隐杯伞素是可以从杰克灯笼蘑菇(jack o′lantern mushroom)(奥尔类脐菇(Omphalotus olearius))中提取的天然产物。通过用酸处理(反向普林斯反应(Prins reaction)从倍半萜烯隐杯伞素S衍生的酰基富烯的反应性远低于隐杯伞素S。

在一个示例中，酰基富烯是(-)-羟基脲甲基酰基富烯(由Lantern Pharma Inc.命名为LP-184)，其使光正向偏移，如下所示：

在另一个示例中，酰基富烯是(+)-羟基脲甲基酰基富烯(由Lantern Pharma Inc.命名为LP-284)，其使光负向偏移，如下所示：

(+)-羟基脲甲基酰基富烯和(-)-羟基脲甲基酰基富烯是对映体并且现在是公知的。

在另一个示例中，酰基富烯是伊洛福芬。

螺甾内酯

螺甾内酯的化学名称包括7α-乙酰基硫代螺内酯、7α-乙酰基硫代-17α-羟基-3-氧代孕甾-4-烯-21-甲酸γ-内酯、7α-乙酰基硫代-3-氧代-17α-孕甾-4-烯-21，17.β.-羧内酯、3-(3-氧代-7α-乙酰基硫代-17.β.-羟基雄甾-4-烯-17α-基)丙酸内酯、7α-乙酰基硫代-17α-(2-羧乙基)雄甾-4-烯-17β-醇-3-酮γ-内酯和7α-乙酰基硫代-17α-(2-羧乙基)睾酮γ-内酯)。其他名称包括SC-9420和NSC-150339。

螺甾内酯的类似物和衍生物的示例包括在结构上密切相关的那些，诸如临床上使用的坎利酮(canrenone)、坎利酸钾(potassium canrenoate)、屈螺酮(drospirenone)和依普利酮(eplerenone)。其他示例包括从未市售的螺内酯SC-5233(6，7-二氢坎利酮；7α-去硫代乙酰基螺甾内酯)、SC-8109(19-去甲-6，7-二氢坎利酮)、螺沙宗(spiroxasone)、普罗酮(prorenone)(SC-23133)、梅希利酮(mexrenone)(SC-25152、ZK-32055)、地西利酮(dicirenone)(SC-26304)、螺利酮(spirorenone)(ZK-35973)和美螺利酮(mespirenone)(ZK-94679)。

螺甾内酯是具有显著醛固酮拮抗特性的甾族内酯化合物(美国专利第3,257,390号)。螺甾内酯可包括其衍生物、异构体、盐和溶剂化物。螺甾内酯是可商购获得的且具有分子式C

在一个实施方案中，可在施用螺甾内酯之前、同时或之后施用酰基富烯或羟基脲甲基酰基富烯或其盐。

本申请的一个方面包括治疗有此需要的受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的螺甾内酯和有效量的酰基富烯。螺甾内酯可以在酰基富烯之前或与其同时施用以获得最佳协同效果。螺甾内酯降解关键的核苷酸切除修复(NER)蛋白XPB/ERCC3(参考文献：https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7277409/)并导致NER缺陷。具有NER缺陷的受试者对基于隐杯伞素的抗癌剂更敏感。

另一个实施方案包括一种药物组合物，其具有治疗有效量的隐杯伞素或其隐杯伞素类似物、其衍生物或药学上可接受的盐；和治疗有效量的螺甾内酯或其类似物、衍生物或药学上可接受的盐。隐杯伞素类似物可以是羟基脲甲基酰基富烯。

在另一个实施方案中，用于治疗受试者的癌症的试剂盒包括治疗有效量的隐杯伞素或其隐杯伞素类似物、其衍生物或药学上可接受的盐；和治疗有效量的螺甾内酯或其类似物、衍生物或药学上可接受的盐：

在另一个实施方案中，第二治疗剂是一种或多种选自喜树碱衍生物、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、埃博霉素(epothilone)B、5-FU、吉西他滨(gemcitabine)、奥沙利铂(oxaliplatin)、顺铂(cisplatinum)、卡铂(carboplatin)、美法仑(melphalam)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、阿霉素(doxorubicin)、伊马替尼(imatinib)、埃罗替尼(erlotinib)、贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)和Raf激酶抑制剂的化疗剂。

在另一个实施方案中，第二治疗剂是一种或多种选自紫杉醇或顺铂的化疗剂。

术语″组合疗法″可包括或包括将上述治疗剂与其他生物活性成分和非药物疗法(例如，手术或放射疗法)进一步组合施用。当组合疗法进一步包括非药物治疗时，非药物治疗可以在任何合适的时间进行，只要实现来自治疗剂和非药物治疗的组合的共同作用的有益效果即可。例如，在适当的情况下，当非药物治疗暂时从治疗剂的施用中移除时，可能数天或甚至数周，仍然实现有益的效果。

在另一个方面，本文的组合物或组合疗法或其药学上可接受的盐或溶剂化物可与放射疗法组合施用。放射疗法也可以与本发明的组合物和本文所述的另一种化疗剂组合施用，作为多药剂疗法的部分。

组合疗法可以通过施用两种或更多种药剂来实现，例如，酰基富烯、螺甾内酯和一种或多种其他治疗剂，它们中的每一种单独配制和施用，或者通过在单一制剂中施用两种或更多种药剂来实现。组合疗法还涵盖其他组合。例如，两种药剂可以一起配制并与含有第三药剂的单独制剂结合施用。尽管组合疗法中的两种或更多种药剂可以同时施用，但它们不是必须的。例如，第一药剂(或药剂组合)的施用可以在第二药剂(或药剂组合)的施用之前数分钟、数小时、数天或数周。因此，两种或更多种药剂可在彼此间隔数分钟内或在彼此间隔1小时、2小时、3小时、6小时、9小时、12小时、15小时、18小时或24小时内或在彼此间隔1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、12天、14天内或在彼此间隔2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周内施用。在一些情况下，甚至更长的间隔也是可能的。尽管在许多情况下期望在组合疗法中使用的两种或更多种药剂同时存在于患者体内，但这不是必须的。

组合疗法的方法可以或应当产生协同效果，其中化合物或其他治疗剂的组合的效果大于由任何化合物或其他治疗剂作为单一药剂施用产生的效果的总和。协同效果也可以是通过施用任何化合物或其他治疗剂作为单一药剂所不能实现的效果。协同效果可包括但不限于通过减小肿瘤大小、抑制肿瘤生长或增加受试者生存来治疗癌症的效果。协同效果还可包括降低癌细胞活力、诱导癌细胞死亡和抑制或延迟癌细胞生长。

如本领域技术人员所认识到的，治疗有效剂量可变化，这取决于所治疗的疾病、疾病的严重程度、施用途径、患者的年龄和总体健康状况、赋形剂的使用、与其他治疗性治疗共同使用的可能性(诸如使用其他药剂)以及治疗医师的判断。例如，选择有效剂量的指南可通过参考羟基脲甲基酰基富烯的处方信息或其期刊讨论来确定。

本文所用的术语″有效量″是指减轻疾病或病症的至少一种或多种症状所需的药剂的量，并且涉及足以提供所需效果的药物组合物的量。因此，术语″治疗有效量″是指当施用于非典型受试者时足以提供特定效果的药剂的量。在各种情况下，本文所用的有效量还将包括足以延缓疾病症状的发展、改变疾病症状的进程(例如但不限于，减缓疾病症状的进展)或逆转疾病症状的量。因此，指定确切的″有效量″通常是不可行的。然而，对于任何给定情况，本领域普通技术人员仅使用常规实验即可确定适当的″有效量″。

根据本文所述方法施用药剂的剂量范围取决于例如药剂的形式、其效力以及本文所述病症的症状、标志物或指标需要降低的程度，例如肿瘤生长所需的百分比减少。剂量不应太大，以免引起不良副作用。通常，剂量将随着患者的年龄、病症和性别而变化，并且可由本领域技术人员确定。在出现任何并发症的情况下，剂量也可由个体医师调整。

本文所用的术语″治疗有效量″是指治疗、改善或预防所鉴定的疾病或病症，或表现出可检测的治疗或抑制效果的药剂的量。该效果可通过本领域已知的任何测定方法检测。用于受试者的精确有效量将取决于受试者的体重、体型和健康状况；病症的性质和程度；以及选择用于施用的治疗剂或治疗剂组合。对于给定情况的治疗有效量可通过临床医生的技能和判断范围内的常规实验来确定。在一个优选的方面，待治疗的疾病或病症是癌症。在另一个方面，待治疗的疾病或病症是细胞增殖性病症。

熟练的临床医生可确定本文所述的药剂在例如本文所述的病症的治疗中的功效，或诱导如本文所述的应答(例如，实体瘤或血癌)的功效。然而，治疗被认为是″有效的治疗″，如本文所使用的术语，如果本文所述病症的一种或多种体征或症状以有益的方式改变，其他临床上可接受的症状得到改善，或甚至减轻，或在根据本文所述方法治疗后，例如至少10％诱导了期望应答。例如，可通过测量根据本文所述的方法治疗的病症的标志物、指标、症状和/或发生率，或任何其他合适的可测量参数，例如肿瘤大小和/或生长速率，来评估功效。功效还可通过住院治疗或需要药物干预(即疾病的进展停止)来评估个体恶化的失败来测量功效。测量这些指标的方法是本领域技术人员已知的和/或在本文中有所描述。治疗包括对个体或动物(一些非限制性示例包括人类或动物)疾病的任何治疗，并且包括：(1)抑制疾病，例如防止症状恶化(例如，疼痛或炎症)；或(2)减轻疾病的严重程度，例如，使症状好转。用于治疗疾病的有效量是指当施用有此需要的受试者时，足以导致对该疾病进行有效治疗的量，如该术语在本文中所定义的。药剂的功效可通过评估病症或期望应答的物理指标来确定。本领域技术人员完全有能力通过测量此类参数中的任何一个参数或参数的任何组合来监测施用和/或治疗的功效。可在本文所述的病症的动物模型中评估功效，例如在小鼠模型中治疗血癌。当使用实验动物模型时，当观察到标志物(例如肿瘤大小和/或生长率)的统计学显著变化时，证明治疗的功效。在一些实施方案中，治疗有效量的羟基脲甲基-酰基富烯、酰基富烯或伊洛福芬或其药学上可接受的盐选自由以下组成的组：0.5mg/天、1mg/天、2.5mg/天、5mg/天、10mg/天、20mg/天、30mg/天、60mg/天、90mg/天、120mg/天、150mg/天、180mg/天、210mg/天、240mg/天、270mg/天、300mg/天、360mg/天、400mg/天、440mg/天、480mg/天、520mg/天、580mg/天、600mg/天、620mg/天、640mg/天、680mg/天和720mg/天。

施用剂量应根据需要的个体的需要进行调整。已知在人类中每日施用25mg至50mg螺甾内酯以用于治疗心力衰竭，以及每日施用100mg至400mg螺甾内酯以用于治疗醛固酮增多症。已经研究了使用25mg至400mg范围内的螺甾内酯的潜在副作用。对于癌症的治疗，剂量可以范围介于每天25mg至400mg。例如，可使用的螺甾内酯的剂量浓度范围介于5μM至25μM，在小鼠中(i.p.)为25mg/kg至100mg/kg，在人类中临床每天(口服)为20mg至200mg。

所使用的术语″治疗″包括治疗性治疗和预防性治疗(降低发生的可能性)。这两个术语都表示降低、抑制、减弱、减少、阻止或稳定疾病(例如，本文描述的疾病或病症)的发展或进展、减轻疾病的严重程度或改善与疾病相关的症状。

药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、包装或分配器中。

本发明的组合物能够进一步形成盐。本发明的组合物每分子可形成超过一种盐，例如一盐、二盐、三盐。所有这些形式也涵盖在所要求保护的发明的范围内。

如本文所用，″药学上可接受的盐″是指本发明化合物的衍生物，其中通过制备其酸或碱盐来使母体化合物改性。药学上可接受的盐的示例包括但不限于碱性残基(诸如胺)的无机或有机酸盐、酸性残基(诸如羧酸)的碱金属或有机盐等。药学上可接受的盐包括例如由无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，此类常规无毒盐包括但不限于衍生自无机酸和有机酸的那些无毒盐，这些无机酸和有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙烷磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢酸、碳酸、柠檬酸、依地酸(edetic)、乙烷二磺酸、1，2-乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇酰对氨基苯胂酸、己基间苯二酚酸、海巴明酸(hydrabamic)、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟基萘酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸(napsylic)、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、次乙酸(subacetic)、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、单宁酸、酒石酸、甲苯磺酸，以及常见的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。

药学上可接受的盐的其他示例包括己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘康酸等。本发明还涵盖当母体化合物中的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)取代时形成的盐；或与有机碱(诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等)配位。

应当理解，所有提及的药学上可接受的盐包括相同盐的溶剂加成形式(溶剂化物)。

如本文所用，术语″选择性地″意指倾向于在一个群体中比在另一个群体中以更高的频率发生。比较的群体可以是细胞群体。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选择性地作用于癌症或癌前细胞，但不作用于正常细胞。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选择性地作用以调节一个分子靶标(例如，核苷酸切除修复(NER)参与者ERCC3)。本发明还提供选择性抑制酶(诸如NER蛋白)的活性的方法。优选地，如果事件在群体A中发生的频率是群体B的两倍以上，则该事件相对于群体B在群体A中选择性地发生。如果事件在群体A中发生的频率是五倍以上，则该事件选择性地发生。如果事件在群体A中发生的频率是群体B的十倍以上；更优选地，五十倍以上；甚至更优选地，100倍以上；并且最优选地，1000倍以上，则该事件选择性地发生。例如，如果细胞死亡在癌细胞中的发生频率是正常细胞的两倍以上，则认为细胞死亡在癌细胞中选择性发生。

该组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物经口、经鼻、经皮、经肺、吸入、经颊、舌下、腹膜内、皮下、肌内、静脉内、直肠、胸膜内、鞘内和肠胃外施用。在一个实施方案中，经口施用该化合物。本领域技术人员将认识到某些施用途径的优点。

根据多种因素来选择使用化合物的给药方案，这些因素包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医学状况；待治疗的病症的严重程度；施用途径；患者的肾和肝功能；以及所采用的特定化合物或其盐。普通熟练的医生或兽医可以容易地确定并开出预防、对抗或阻止病症进展所需的药物有效量的处方。

所公开的本发明化合物的配制和施用技术可见于Remington：the Science andPractice of Pharmacy，第19增刊版，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.(1995)中。在一个实施方案中，本文所述的化合物和其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或稀释剂组合用于药物制剂中。合适的药学上可接受的载体包括惰性固体填充剂或稀释剂以及无菌水溶液或有机溶液。这些化合物将以足以提供本文所述的范围内的所需剂量的量存在于此类药物组合物中。

除非另有说明，否则本文所用的所有百分比和比率均以重量计。本发明的其他特征和优点从不同的实施例中显而易见。所提供的实施例说明了可用于实施本发明的不同组分和方法。这些实施例不限制所要求保护的发明。基于本发明的公开内容，本领域技术人员可以鉴定和使用可用于实施本发明的其他组分和方法。

如本文所用，″有此需要的受试者″是患有癌前病症的受试者。优选地，有此需要的受试者患有癌症。″受试者″包括哺乳动物。哺乳动物可以是例如任何哺乳动物，例如人类、灵长类动物、鸟、小鼠、大鼠、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物是人类。本发明的受试者包括已经被诊断患有癌症或癌前病症、具有癌症或癌前病症的症状或处于发展癌症或癌前病症的风险下的任何人类受试者。

有此需要的受试者可患有难治性或抗性癌症。″难治性或抗性癌症″是指对治疗无反应的癌症。癌症在治疗开始时可能是抗性的，或者在治疗期间可能变得抗性。在一些实施方案中，有此需要的受试者在最近疗法的缓解后癌症复发。在一些实施方案中，有此需要的受试者接受用于癌症治疗的所有已知有效疗法并且均失败。在一些实施方案中，有此需要的受试者接受至少一种先前疗法。在某些实施方案中，先前疗法是单一疗法。在某些实施方案中，先前疗法是组合疗法。

在一些实施方案中，有此需要的受试者可能由于先前疗法而患有继发性癌症。″继发性癌症″是指由于以前的致癌疗法(诸如化学治疗)而产生的癌症。

癌症是可引起几乎任何体征或症状的一组疾病。体征和症状将取决于癌症的位置、癌症的大小以及其对附近器官或结构的影响程度。如果癌症扩散(转移)，则症状可能出现在身体的不同部位。

治疗癌症可使肿瘤大小减小。肿瘤大小的减小也可称为″肿瘤消退″。优选地，在治疗之后，肿瘤大小相对于其治疗之前的大小减小5％或更多；更优选地，肿瘤大小减小10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减小75％以上或更多。肿瘤大小可通过任何可重复的测量手段来测量。肿瘤大小可作为肿瘤的直径来测量。

治疗癌症使肿瘤数量和大小减小。优选地，在治疗之后，肿瘤数量或大小相对于治疗之前的数量减小5％或更多；更优选地，肿瘤数量或大小减小10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减小75％以上。肿瘤数量可通过任何可重复的测量手段来测量。肿瘤数量可通过计数肉眼可见的或在指定放大倍数下可见的肿瘤来测量。优选地，指定的放大倍数是2×、3×、4×、5×、10×或50×。

治疗癌症可使远离原发性肿瘤部位的其他组织或器官中转移性病变数量减少。优选地，在治疗之后，转移性病变数量可相对于治疗之前的数量减少5％或更多；更优选地，转移性病变数量减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；并且最优选地，减少75％以上。转移性病变数量可通过任何可重复的测量手段来测量。转移性病变数量可通过计数肉眼可见的或在指定放大倍数下可见的肿瘤来测量。优选地，指定的放大倍数是2×、3×、4×、5×、10×或50×。

治疗癌症可使经治疗的受试者群体与仅接受载体的群体相比，平均生存时间增加。优选地，平均生存时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；并且最优选地，超过120天。群体平均生存时间的增加可通过任何可重复的手段来测量。群体的平均生存时间的增加可例如通过计算群体在开始用活性化合物治疗后的平均生存期来测量。群体的平均生存时间的增加也可例如通过计算群体在完成用活性化合物的第一轮治疗后的平均生存期来测量。

治疗癌症可使经治疗的受试者群体与未治疗的受试者群体相比，平均生存时间增加。优选地，平均生存时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；并且最优选地，超过120天。群体平均生存时间的增加可通过任何可重复的手段来测量。群体的平均生存时间的增加可例如通过计算群体在开始用活性化合物治疗后的平均生存期来测量。群体的平均生存时间的增加也可例如通过计算群体在完成用活性化合物的第一轮治疗后的平均生存期来测量。

治疗癌症可使经治疗的受试者群体与接受用不是本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物进行的单一疗法的群体相比，平均生存时间增加。优选地，平均生存时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；并且最优选地，超过120天。群体平均生存时间的增加可通过任何可重复的手段来测量。群体的平均生存时间的增加可例如通过计算群体在开始用活性化合物治疗后的平均生存期来测量。群体的平均生存时间的增加也可例如通过计算群体在完成用活性化合物的第一轮治疗后的平均生存期来测量。

治疗癌症可使经治疗的受试者群体与仅接受载体的群体相比，死亡率降低。治疗癌症可使经治疗的受试者群体与未经治疗的群体相比，死亡率降低。治疗癌症可使经治疗的受试者群体与接受用不是本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物进行的单一疗法的群体相比，死亡率降低。优选地，死亡率降低超过2％；更优选地，超过5％；更优选地，超过10％；并且最优选地，超过25％。经治疗的受试者群体的死亡率的降低可通过任何可重复的手段来测量。群体死亡率的降低可例如通过计算群体在开始用活性化合物治疗后每单位时间疾病相关死亡的平均数量来测量。群体死亡率的降低还可例如通过计算群体在完成用活性化合物的第一轮治疗后每单位时间疾病相关死亡的平均数量来测量。

治疗癌症可使肿瘤生长速率降低。优选地，在治疗之后，肿瘤生长速率相对于治疗之前的数量降低至少5％；更优选地，肿瘤生长速率降低至少10％；更优选地，降低至少20％；更优选地，降低至少30％；更优选地，降低至少40％；更优选地，降低至少50％；甚至更优选地，降低至少50％；并且最优选地，降低至少75％。肿瘤生长速率可通过任何可重复的测量手段来测量。肿瘤生长速率可根据每单位时间肿瘤直径的变化来测量。

治疗癌症可使肿瘤再生减少。在治疗之后，肿瘤再生可小于5％；更优选地，肿瘤再生可小于10％；更优选地，小于20％；更优选地，小于30％；更优选地，小于40％；更优选地，小于50％；甚至更优选地，小于50％；并且最优选地，小于75％。肿瘤再生可通过任何可重复的测量手段来测量。肿瘤再生例如通过在治疗后先前肿瘤缩小之后测量肿瘤直径的增加来测量。治疗停止后肿瘤不再复发表明肿瘤再生减少。

治疗或预防细胞增殖性病症可使细胞增殖速率降低。优选地，在治疗之后，细胞增殖速率降低至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；甚至更优选地，至少50％；并且最优选地，至少75％。细胞增殖速率可通过任何可重复的测量手段来测量。细胞增殖速率通过例如测量每单位时间组织样品中分裂细胞的数量来测量。

治疗或预防细胞增殖性病症可使增殖细胞比例降低。优选地，在治疗之后，增殖细胞比例降低至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；甚至更优选地，至少50％；并且最优选地，至少75％。增殖细胞比例可通过任何可重复的测量手段来测量。优选地，增殖细胞比例例如通过相对于组织样品中非分裂细胞的数量定量分裂细胞的数量来测量。增殖细胞比例可以等于有丝分裂指数。

治疗或预防细胞增殖性病症可使细胞增殖的面积或区域的大小减小。优选地，在治疗之后，细胞增殖的面积或区域的大小相对于其在治疗之前的大小减小至少5％；更优选地，减小至少10％；更优选地，减小至少20％；更优选地，减小至少30％；更优选地，减小至少40％；更优选地，减小至少50％；甚至更优选地，减小至少50％；并且最优选地，减小至少75％。细胞增殖的面积或区域的大小可通过任何可重复的测量手段来测量。细胞增殖的面积或区域的大小可测量为细胞增殖的面积或区域的直径或宽度。

治疗或预防细胞增殖性病症可使具有异常外观或形态的细胞的数量或比例降低。优选地，在治疗之后，具有异常形态的细胞的数量相对于其在治疗之前的大小减少至少5％；更优选地，减少至少10％；更优选地，减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；甚至更优选地，减少至少50％；并且最优选地，减少至少75％。异常细胞外观或形态可通过任何可重复的测量手段来测量。异常的细胞形态可通过显微镜测量，例如使用倒置组织培养显微镜测量。异常的细胞形态可呈现核多态性的形式。

将本发明的组合物施用给有此需要的细胞或受试者可导致调节(即，刺激或抑制)感兴趣的蛋白质甲基转移酶的活性。

治疗癌症或细胞增殖性病症可导致细胞死亡，并且优选地，细胞死亡导致群体中细胞数量减少至少10％。更优选地，细胞死亡是指减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；更优选地，减少至少75％。群体中的细胞数量可通过任何可重复的手段测量。可通过荧光活化细胞分选术(FACS)、免疫荧光显微镜和光学显微镜测量群体中的几个细胞。测量细胞死亡的方法如Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.100(5)：2674-8，2003中所示。在一个方面，细胞死亡通过凋亡发生。

优选地，有效量的本发明组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物对正常细胞不是显著细胞毒性的。如果以治疗有效量施用化合物不会在超过10％的正常细胞中诱导细胞死亡，则治疗有效量的化合物对正常细胞不是显著细胞毒性的。如果以治疗有效量施用化合物不会在超过10％的正常细胞中诱导细胞死亡，则治疗有效量的化合物不会显著影响正常细胞的活力。在一个方面，细胞死亡通过凋亡发生。

使细胞与本发明的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物接触可选择性地诱导或活化癌细胞中的细胞死亡。向有此需要的受试者施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可选择性地诱导或活化癌细胞中的细胞死亡。使细胞与本发明的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物接触可选择性地诱导受细胞增殖性病症影响的一个或多个细胞中的细胞死亡。优选地，向有此需要的受试者施用本发明的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选择性地诱导受细胞增殖性病症影响的一个或多个细胞中的细胞死亡。

本申请涉及通过向有此需要的受试者施用本发明的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物来治疗或预防癌症的方法，其中施用本发明的组合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物导致以下的一种或多种：通过在细胞周期的一个或多个阶段(例如，G1、G1/S、G2/M)中积累细胞或诱导细胞衰老或促进肿瘤细胞分化来防止癌细胞增殖；通过细胞毒性、坏死或凋亡促进癌细胞中的细胞死亡，而在正常细胞中没有显著量的细胞死亡，在动物中的抗肿瘤活性具有至少2的治疗指数。如本文所用，″治疗指数″是最大耐受剂量除以有效剂量。

术语″试剂盒″是指如上定义的组合伴侣可独立给药或通过使用具有不同量组合伴侣的不同固定组合给药，即同时或在不同时间点给药。成套试剂盒(kit of parts)的各部分然后可以例如同时或按时间顺序交错施用，即对于成套试剂盒的任何部分在不同的时间点并以相同或不同的时间间隔施用。在组合制剂中待施用的组合伴侣的总量的比率可以变化。组合伴侣可以通过相同途径或通过不同途径施用。

本领域技术人员可以参考通用参考文本来详细描述本文所讨论的已知技术或等效技术。当然，在制备或使用本发明的一个方面时也可以参考这些文本。

实施例

为了更有效地理解本文公开的公开内容，下面提供了实施例。应当理解，这些实施例仅用于说明的目的，不应被解释为以任何方式限制本公开。

LP-100(伊洛福芬)、LP-184和LP-284属于酰基富烯化合物家族，已知其诱导通过转录偶联核苷酸切除修复(TC-NER)途径修复的DNA病变。如果TC-NER途径受损，则DNA损伤不能再被修复，并且细胞死亡将发生。

螺甾内酯选择性诱导细胞死亡并抑制癌细胞的生长。如下所示，单独的10μM螺甾内酯不会导致降低的细胞生存。与酰基富烯组合，细胞或肿瘤被杀死或减少。

实施例1

图1A、图1B和图1C显示在处理U87(成胶质细胞瘤细胞系)、CHLA-184(非典型的畸胎样横纹肌样瘤细胞系)和CAKI-2(乳头状肾细胞癌细胞系)中将10μM螺甾内酯与LP-06组合导致比使用单独的LP-184显著更低的细胞生存百分比。可以看出，单独的螺甾内酯基本上不改变生长速率。

实施例2

图2A和图2B显示，尽管单独的10μM螺甾内酯处理不会引起对多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226人类骨髓瘤细胞系的细胞毒性，但其将LP-284IC50降低了7/12。另外，当用450nMLP-284加10uM螺甾内酯处理SUDHL6双打击淋巴瘤细胞系时，与单独的450nM LP-284相比，细胞生存百分比显著降低。

实施例3

图3显示用LP-184和5μM螺甾内酯处理GBM细胞导致体外U87、M1123和MayO39成胶质细胞瘤培养物中LP-184IC50降低了2/3至5/6。图3显示具有标准误差的相对IC50数据/细胞群体，并且表1列出了平均IC50值。

表1

实施例3

图4A、图4B和图4C显示对M1123(成胶质细胞瘤细胞系)、Mayo39(成胶质细胞瘤细胞系)和U87(成胶质细胞瘤细胞系)的10μM螺甾内酯处理导致TC-NER组分ERCC3在蛋白质水平下的时间依赖性消耗，如通过蛋白质印迹(western blot)分析所测量的。代表性图像显示了在不同的成胶质细胞瘤细胞系中24小时至72小时内螺甾内酯介导的ERCC3显著下调的ERCC3蛋白质印迹强度的定量。

实施例4

图5、图6和图7分别显示螺甾内酯在较低剂量的LP-184下在M1123、Mayo39和U87细胞系中增强了效果。这显示LP-184与螺甾内酯的治疗有效量低于单独使用LP-184作为单一疗法时的治疗有效量。

实施例5

图8显示LP-184和螺甾内酯的协同作用。将带有预先建立的皮下U87异种移植肿瘤的SCID小鼠用单独的螺甾内酯、单独的LP-184或它们的组合处理。在植入后第8天以每周5天腹膜内25mg/kg开始螺甾内酯处理，并且在第9天以每隔一天静脉内4mg/kg开始LP-184处理，共4剂。与未处理的对照相比，螺甾内酯单一疗法对肿瘤生长没有影响。如图2中所示，单独的LP-184和与螺甾内酯组合诱导完全或接近完全的肿瘤消退。在大约第25天开始，与用LP-184+螺甾内酯处理的仅1/5动物中肿瘤再生长(在4/5肿瘤中持续完全应答)相比，用单独的LP-184处理的5/5动物中肿瘤生长再次出现。从第8天开始，肿瘤体积在LP-184和螺甾内酯中相对于单独的LP-184显著降低，并且平均差异的大小持续增加直至第42天观察的最后一天，其中在LP-184+螺甾内酯处理的小鼠中平均体积低了9/10(p值为0.048)。

实施例6

图9A、图9B和图9C显示向CHLA 06(非典型畸胎样横纹肌样瘤细胞系)、22RV1(前列腺细胞系)和ACHN(肾细胞癌细胞系)添加10μM螺甾内酯不会改变细胞生长速率。此外，细胞活力数据显示，在细胞处理中将10uM螺甾内酯与LP-100组合导致比使用单独的LP-100显著更低的细胞生存百分比。

实施例7

图10显示螺甾内酯在较低剂量的LP-100下在MDAPCA2b细胞系中增强了效果。使用伊洛福芬与螺甾内酯(或抑制参与TC-NER途径的DNA修复蛋白的作用的其他药剂)的组合来增强肿瘤细胞杀伤。

实施例8-协同作用评分

使用MacSynergy II软件对LP-184和螺甾内酯的组合进行评分。这个程序允许用Bliss独立模型对由两种抑制剂的棋盘式组合产生的所有数据点的药物相互作用进行三维检查。置信界限由重复数据确定。如果95％置信限(CL)不与理论加性表面重叠，则两种药物之间的相互作用与加性显著不同。可以确定协同作用或拮抗作用的体积并以三维图形描绘，并且表示两种药物浓度每次变化的协同作用或拮抗作用的相对量。协同作用和拮抗作用体积基于Bliss独立模型，其假定两种化合物独立地作用于不同的靶标。在Bliss独立模型下的一组预测分数应答faAB被计算为faAB＝faA+faB-faAfaB，其中faA和faB分别表示化合物A和B在量dA和dB下的可能应答分数，例如抑制百分比(％)，并且描述化合物A和B的组合在量(dA+dB)下的抑制百分比。95％协同作用/拮抗作用体积是在Bliss独立模型下观察到的抑制与faAB预测的95％置信限之间的差异的总和。MacSynergy II用于数据分析。

LP-184和螺甾内酯的组合具有14.10与15.52μM之间的协同作用体积(加性协同作用)。根据体外胰腺癌细胞活力计算Bliss协同作用评分(表2)。＞10的评分被认为指示协同作用和＜0拮抗作用。在Capan-1(BRCA2损失)、Hs766t(ATR突变体)和Panc03.27细胞系中分别实现LP-184+螺甾内酯的14.08、16.47和15.52的总体Bliss协同作用评分。螺甾内酯在测试的所有3种细胞系中显示出与LP-184的高度协同作用。表2显示了胰腺细胞中的那些结果。

表2.螺甾内酯在胰腺癌细胞中与LP-184体外协同作用

虽然上面已经讨论了多个示例性方面和实施方案，但是本领域技术人员将认识到其某些修改、置换、添加和子组合。因此，以下所附权利要求书和此后的权利要求旨在被解释为包括如在它们的真实精神和范围内的所有这样的修改、置换、添加和子组合。