蓼蓝叶中的氮杂卓类生物碱及其制备方法和应用

技术领域：

本发明属于医药技术领域，尤其涉及植物蓼蓝中制备新氮杂卓类生物碱化合物的方法及这类化合物在神经保护方面的应用。

背景技术：

蓼蓝：蓼蓝[Polygonum tinctoriumAit.]，属于蓼科蓼属植物，一年生草本，在全国各地均有栽培或为半野生状态。蓼蓝叶在我国用药历史悠久，干燥叶作蓼大青叶入药。性寒，味苦，具有清热解毒，凉血消斑的功效。

随着全球人口老龄化的进程，神经退行性疾病受到越来越多的关注，其中阿尔茨海默氏症和帕金森症等正成为导致中老年人死亡的主要杀手。近年来的研究表明，SH-SY5Y细胞系对于氧自由基的变化非常敏感常被用于研究神经元细胞受氧化应激影响的机制。氧化应激介导了多种神经退行性疾病中的细胞损伤。因此，抗氧化应激被认为是一种有效的神经退行性疾病的治疗策略，对于治疗神经退行性疾病有着很好的前景。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种从蓼蓝中制备新氮杂卓类生物碱化合物，以及其在神经保护方面的应用。

本发明所述一种从蓼科蓼属植物蓼蓝[Polygonum tinctorium Ait.]中分离得到的新氮杂卓类生物碱化合物的结构如图所示：

本发明的制备技术方案包括如下步骤：

取蓼蓝的干燥叶以乙醇提取，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏采用二氯甲烷萃取并将所得组分经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇系统100:0-0:100进行等度梯度洗脱，共收集到4个组分(A-D)。

组分A经聚酰胺柱色谱，以乙醇-水系统0:100-100:0进行梯度洗脱，得两个组分A1和A2。

利用HP20柱色谱将A1组分以乙醇-水系统30:70-90:10进行梯度洗脱，得三个组分(A1-1-A1-3)。

利用ODS柱色谱将A1-2组分以乙醇-水系统30:70-90:10进行梯度洗脱，得四个组分(a-b)。

所得组分b经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇系统50:1-10:1在TLC分析的基础上得到四个亚组分(a1-a4)。

在制备性反相高效液相色谱上使用甲醇-水的流动相来分离亚组分a2得到了化合物1。

所述步骤中，采用的蓼蓝为蓼科蓼属植物蓼蓝[Polygonum tinctorium Ait.]的干燥叶。

所述步骤中，取蓼蓝的干燥叶以70-80％工业乙醇回流提取2-3次，每次2-3h。

所述步骤中，在制备性反相高效液相色谱上以70:30的甲醇-水流动相分离亚组分a2。

所得化合物经过系统结构鉴定结果如下：

利用高分辨质谱，一维NMR、二维NMR对化合物1的结构鉴定。化合物结构的表征结果如表1和图1至图8所示。

化合物1，白色固体(甲醇)。HRESIMS给出准分子离子峰249.0634[M+Na]

在HMBC谱中，H-10与C-3存在相关，H-11与C-3,C-4,C-10以及氮甲基碳(δ

表1化合物1的

对本发明所述1个新化合物的神经保护活性进行了考察，其中在过氧化氢(H

一种药物组合物，包含上述从蓼蓝中制备得到的氮杂卓类生物碱化合物或其在药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。

一种蓼蓝提取物，包含上述氮杂卓类生物碱化合物。

本发明还提供所述从蓼蓝中制备得到的氮杂卓类生物碱化合物或包含上述化合物的药物组合物在制备神经保护活性药物中的应用。

本发明还提供所述从蓼蓝中制备得到的氮杂卓类生物碱化合物或包含上述化合物的药物组合物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的应用。

本发明的优点在于，所述化合物为新化合物，结构新颖，同时其抗神经炎症活性强，具有进一步开发的价值。

附图说明：

图1化合物1的UV谱；

图2化合物1的HR-ESIMS谱；

图3化合物1的1H-NMR谱(600MHz,DMSO-d6)；

图4化合物1的13C-NMR谱(150MHz,DMSO-d6)；

图5化合物1的HSQC谱(600MHz,DMSO-d6)；

图6化合物1的HMBC谱(600MHz,DMSO-d6)；

图7化合物1的计算机辅助结构解析结果；

图8化合物1的实测与计算NMR统计参数分析。

具体实施方式：

下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：

氮杂卓类生物碱化合物1的制备，具体操作如下：

取蓼蓝的干燥叶以70％工业乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏采用二氯甲烷萃取并将所得组分经硅胶柱色谱， 以二氯甲烷-甲醇系统100:0-0:100进行等度梯度洗脱，共收集到4个组分(A-D)。

组分A经聚酰胺柱色谱， 以乙醇-水系统0:100-100:0进行梯度洗脱，得两个组分A1和A2。

利用HP20柱色谱将组分A1以乙醇-水系统30:70-90:10进行梯度洗脱，得三个组分(A1-1-A1-3)。

利用ODS柱色谱将组分A1-2以乙醇-水系统30:70-90:10进行梯度洗脱，得四个组分(a-b)。

所得组分a经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇系统50:1-10:1在TLC分析的基础上得到四个亚组分(a1-a4)。

在制备性反相高效液相色谱上使用甲醇-水(70:30，v/v)的流动相来分离亚组分a2得到了化合物1。

实施例2：

化合物1的抗神经炎症的活性考察。

SH-SY5Y培养细胞，每组3个复孔。H

表2化合物1的神经保护活性

a

以上描述仅为本公开内容的较佳实施例以及对所运用技术原理的说明。本领域技术人员应当理解， 本公开内容中所涉及的发明范围， 并不限于上述技术特征的特定组合而成的技术方案，同时也应涵盖在不脱离所述发明构思的情况下，由上述技术特征或其等同特征进行任意组合而形成的其他技术方案。例如上述特征与本公开内容中公开的(但不限于)具有类似功能的技术特征进行互相替换而形成的技术方案。