一种TD1修饰的抗肿瘤脂质体及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于纳米技术领域，具体涉及一种TD1修饰的抗肿瘤脂质体及其制备方法与应用。

背景技术

脂质体作为纳米药物载体的一类，能显著提高水不溶性药物的溶解度，如具有抗肿瘤作用的金黄霉素A。皮肤局部施用是脂质体常见应用之一，如中国专利C201711175784.1申请了一种柔性脂质体的制备方法，其在脂质体配方内加入胆酸钠作为表面活性剂赋予脂质体变形能力，得到的脂质体具有较好的透皮性能。但是此类柔性脂质体最多只能渗透进入皮肤深层组织，无法透过皮肤进入体内。

TD1是一种具有透皮能力的短肽，其氨基酸序列为ACSSSPSKHCG，该短肽能携带胰岛素、表皮生长因子、纳米粒等生物大分子或纳米载体通过皮肤进入体内。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明的目的之一是提供一种STD1修饰的抗肿瘤脂质体，本发明采用TD1修饰载疏水药物的脂质体，促进脂质体高效透过皮肤，进入皮下组织和身体，最终达到治疗皮肤肿瘤的目的。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种TD1修饰的抗肿瘤脂质体的制备方法，包括以下步骤：

S1、将TD1-PEG-DSPE与卵磷脂、胆酸钠、疏水药物溶解于有机溶剂中，得到脂质溶液；

S2、将得到的所述脂质溶液经旋转蒸发后得到薄膜，然后用PBS水化溶解，得到脂质水化混悬液；

S3、将得到的所述混悬液进行超声处理，得到TD1修饰的抗肿瘤脂质体。

作为本发明的进一步优选，所述胆酸钠、卵磷脂、疏水药物、TD1-PEG-DSPE的质量比为1~5:5~9: 0.5~1: 0.5。

作为本发明的进一步优选，为了获取TD1-PEG-DSPE，本发明通过在NHS-PEG-DSPE上接枝TD1实现，具体的获取步骤包括：步骤一：向溶解的NHS-PEG-DSPE中加入TD1并进行搅拌，得到反应液；步骤二：将得到的所述反应液放入超滤管进行超滤浓缩，收集浓缩液冷冻干燥，得到TD1-PEG-DSPE。

作为本发明的进一步优选，为了保证TD1在所述NHS-PEG-DSPE上的充分接枝，确定所述NHS-PEG-DSPE的浓度范围为10~50mg/mL，所述NHS-PEG-DSPE和TD1的质量比为1:1~4。进一步优选为NHS-PEG-DSPE和TD1的质量比为1:2，反应时间为12~24h。

作为本发明的进一步优选，步骤二中超滤采用的超滤管的截留分子量为3000~10000道尔顿。进一步优选为截留分子量为10000道尔顿的超滤管。

作为本发明的进一步优选，所述疏水药物为金黄霉素A，所述卵磷脂为蛋黄卵磷脂。

作为本发明的进一步优选，步骤S1中所述有机溶剂为甲醇-二氯甲烷的混合溶液，二者的体积比可以为4~1:1，更为优选的，二者的体积比为1:1。

通过上述制备方法制备得到的TD1修饰的抗肿瘤脂质体，通过多重作用实现药物透皮递送的效果：首先，胆酸钠作为表面活性剂，可以软化脂质体表面，使其具有很强的变形能力，更容易通过皮肤；其次，脂质体表面连接的TD1可以在皮肤上打开纳米孔道，供脂质体渗透。因此，将金黄霉素A负载于TD1修饰的脂质体中，既可以显著提高金黄霉素A的皮肤透过性，也可以克服金黄霉素A因水溶性差而生物利用率低的问题，最终使得金黄霉素A发挥良好的抗肿瘤效果。

本发明的另一目的在于提供TD1修饰的抗肿瘤脂质体的应用，主要用于在局部皮肤施用。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

本发明提供的抗肿瘤脂质体具有高度柔韧性和高效皮肤渗透的性质，从而提高药物的透皮渗透和吸收。

本发明提供的抗肿瘤脂质体表面修饰有TD1肽，能在皮肤上创建纳米孔洞，使脂质体或药物能穿透皮肤进入皮下组织和体内。

本发明制备的抗肿瘤脂质体具有优异的细胞相容性、制备效率高。

附图说明

附图1为本发明制备的TD1修饰的抗肿瘤脂质体小鼠体内抗肿瘤实验。

具体实施方式

一、 制备抗肿瘤脂质体

实施例1

本发明制备TD1修饰的抗菌脂质体的原理如附图1所示，具体制备方法包括以下步骤：

（1）获取TD1-PEG-DSPE：将20mg的NHS-PEG-DSPE溶解于水中，再加入10mg的TD1，搅拌反应12 h，得到反应液。

（2）将反应液放入截留量为10000道尔顿的超滤管进行超滤浓缩，收集浓缩液并进行冷冻干燥，得到TD1-PEG-DSPE。

（3）取质量比为3:7:0.5:1的胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和TD1-PEG-DSPE，用甲醇-二氯甲烷混合溶液溶解，得到脂质溶液。

（4）将脂质溶液在40℃下旋转蒸发有机溶剂，形成脂质薄膜，然后将脂质薄膜用PBS水化溶解，得到脂质水化混悬液。

（5）将得到的脂质水化混悬液进行超声分散，超声条件为：功率100w、时间5min，得到TD1修饰的抗肿瘤脂质体。

实施例2

本实施例与实施例1的不同之处在于，胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和SPACE-PEG-DSPE的质量比为1:9:0.5:0.5。

实施例3

本实施例与实施例1的不同之处在于，胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和SPACE-PEG-DSPE的质量比为2:8:0.5:0.5。

实施例4

本实施例与实施例1的不同之处在于，胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和SPACE-PEG-DSPE的质量比为4:6:0.5:0.5。

实施例5

本实施例与实施例1的不同之处在于，胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和SPACE-PEG-DSPE的质量比为5:5:0.5:0.5。

实施例6

本实施例与实施例1的不同之处在于，胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和SPACE-PEG-DSPE的质量比为3:7:1:0.5。

对比例1

一种普通柔性脂质体的制备方法，包括以下步骤：

（1）取质量比为3:7:0.5:0.5的胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和mPEG-PEG-DSPE，用甲醇-二氯甲烷混合溶液溶解，得到脂质溶液。

（2）将脂质溶液在40℃下旋转蒸发有机溶剂，形成脂质薄膜，然后将脂质薄膜用PBS水化溶解，得到脂质水化混悬液。

（3）将得到的脂质水化混悬液进行超声分散，超声条件为：功率100w、时间5min，得到普通柔性脂质体。

对比例2

本对比例与对比例1的不同之处在于，胆酸钠、蛋黄卵磷脂、金黄霉素A和mPEG-PEG-DSPE的质量比为1:9:0.5:0.5。

二、抗肿瘤试验

使用免疫缺陷裸鼠来测试TD1修饰的抗肿瘤脂质体的抗肿瘤实验。将10

结果如附图1所示，说明实施例1制备的TD1修饰的抗肿瘤脂质体具有较好的抗肿瘤性能，并且其疗效还优于临床抗癌药物紫杉醇注射液。

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。