一种阳离子纳米凝胶及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及高分子化学和生物技术领域，具体涉及一种核-壳型阳离子纳米凝胶的制备方法及其作为核酸转染载体的应用。

背景技术

基因治疗是将外源核酸导入细胞，代替或修改细胞内缺陷基因的表达，或是表达特定功能蛋白质，调控细胞的生物学活动，从而达到治疗疾病的目的。在遗传疾病、癌症、2型糖尿病、阿尔兹海默症等多种疾病治疗与疫苗开发方面，基因治疗均具有广阔的前景。但由于核酸分子量大、带有负电且亲水性高，难以直接被细胞摄取，设计开发安全高效的递送载体是实现核酸药物高效利用的关键。

目前常用的核酸递送载体可分为病毒载体和非病毒载体。病毒载体递送效率高，但生产成本高，且具有潜在的致癌性。非病毒载体主要包括阳离子脂质体和阳离子聚合物。此类载体具有良好的生物安全性、广泛的适用性，易于规模化制备和功能修饰，是商业化转染试剂开发的主流方向。然而，现有非病毒载体普遍存在递送效率较低、细胞毒性大、操作方式繁琐等共性问题，且针对各种不同核酸药物的递送效果参差不齐。

因此，本领域迫切需要设计高效、安全、操作便捷、通用的核酸药物递送载体。

发明内容

本发明旨在一种低毒、高效、操作便捷、通用的阳离子纳米凝胶核酸转染载体，本发明的另一目的是提供所述阴离子纳米凝胶的制备方法及其在核酸转染中的应用。

在本发明的第一方面，提供一种阳离子纳米凝胶，所述阳离子纳米凝胶具有核-壳结构，形成核结构的物质包括结构如式Ⅰ所示的一种或两种以上阳离子单体，形成壳结构的物质包括中性聚合物；

其中，

R

R

R

n为1-3之间的整数。

在另一实施方式中，所述中性聚合物选自下述的一种或两种以上：聚乙二醇、聚乙烯、聚四氟乙烯、聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、聚甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱、聚3-[[2-(甲基丙烯酰氧)乙基]二甲基铵]丙酸酯、和聚3-[(3-丙烯酰胺基丙基)二甲基铵]丙酸盐。

在另一实施方式中，所述阳离子纳米凝胶的直径为40-500nm。

在本发明的第二方面，提供一种如上所述的本发明提供的阳离子纳米凝胶的制备方法，所述方法包括步骤：

(1)以阴离子聚合物为模板，加入结构如式Ⅰ所示的一种或两种以上阳离子单体、交联剂、中性聚合物-链转移剂、引发剂，混合并使溶液pH至电中性；

(2)引发聚合得到纳米凝胶复合物；

(3)除去纳米凝胶复合物中的聚阴离子模板得到如上所述的本发明提供的阳离子纳米凝胶；

其中，

R

R

R

n为1-3之间的整数。

在另一实施方式中，所述阴离子聚合物模板选自下述的一种或两种以上：聚丙烯酸、聚2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸钠、聚对苯乙烯磺酸钠、聚甲基丙烯酸二甲氨乙酯、聚甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵、和聚2-氨基乙基甲基丙烯酸酯。

在另一实施方式中，所述阳离子单体和阴离子聚合物模板的电荷浓度分别为5-500mM。

在另一实施方式中，所述交联剂选自下述的一种或两种以上：二烯丙基二硫醚、N,N'-双(丙烯酰)胱胺、和2,2-二硫二乙醇二丙烯酸。

在另一实施方式中，所述交联剂的用量为阳离子单体浓度的1-50mol％。

在另一实施方式中，所述中性聚合物选自下述的一种或两种以上：聚乙二醇、聚乙烯、聚四氟乙烯、聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、聚甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱、聚3-[[2-(甲基丙烯酰氧)乙基]二甲基铵]丙酸酯、和聚3-[(3-丙烯酰胺基丙基)二甲基铵]丙酸盐。

在另一实施方式中，所述中性聚合物上接枝或不接枝靶向分子，所述接枝的靶向分子选自叶酸、阿仑膦酸钠、转铁蛋白、透明质酸、多肽、甘露糖、或生物素。

在另一实施方式中，所述链转移剂选自下述的一种或两种以上：甲基(苯基)氨基二硫代甲酸氰甲酯、S-氰甲基-S-十二基三硫代碳酸盐、二硫代苯甲酸氰基异丙酯、4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸、S-(2-氰基-2-丙基)-S-十二烷基三硫代羰基酯、4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸、和2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸。

在另一实施方式中，所述引发剂包括光引发剂和热引发剂。

在另一实施方式中，所述引发剂选自下述的一种或两种以上：2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮、2-羟基-4'-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮、苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基次膦酸锂、过硫酸盐、和水溶性偶氮化合物。

在另一实施方式中，步骤(2)为光引发剂在紫外灯光照下引发聚合1-12小时；或为热引发剂在60-80℃下引发聚合1-12小时。

在另一实施方式中，所述步骤(3)使用用无机盐溶液超滤、离心或透析除去纳米凝胶复合物中的聚阴离子模板。

在另一实施方式中，所述无机盐选自下述的一种或两种以上：氯化钠、氯化钾、硝酸钠、硝酸钾、硫酸钠、和硫酸钾。

在另一实施方式中，所述无机盐的浓度为0.1-5mol/L。

在本发明的第三方面，提供一种如上所述的本发明提供的阳离子纳米凝胶在核酸转染中的应用。

在本发明的第四方面，提供一种纳米凝胶-核酸复合物，通过如上所述的本发明提供的阳离子纳米凝胶与核酸形成。

在另一实施方式中，所述核酸选自下述的一种或两种以上：小干扰RNA(siRNA)、信使RNA(mRNA)、和质粒(pDNA)。

在本发明的第五方面，提供一种如上所述的本发明提供的纳米凝胶-核酸复合物的制备方法，所述方法包括步骤：使如上所述的本发明提供的阳离子纳米凝胶在培养基中与核酸混合，得到如上所述的本发明提供的纳米凝胶-核酸复合物。

在本发明的第六方面，提供一种如上所述的本发明提供的纳米凝胶-核酸复合物在核酸转染中的应用。

据此，本发明提供了一种高效、安全、操作便捷、通用的核酸药物递送载体。

附图说明

图1为制备实施例中核-壳型阳离子纳米凝胶的粒径；其中，

(a)制得的不同粒径的NG1纳米凝胶的粒径分布图；

(b)制得的不同交联度的NG1纳米凝胶的粒径与PDI；

(c)不同单体制得的纳米凝胶NG1-NG15的粒径分布图。

图2为制备实施例中所制备NG1在10mM GSH溶液中的光强随时间变化。

图3为制备实施例中制备的NG1与商业化转染试剂Lipo3000、Lipo8000细胞毒性的对比结果。

图4为制备实施例中所制备的NG1及NG15和商业化转染试剂Lipo3000、Lipo8000在Hela细胞中的核酸转染结果；其中，

(a)siRNA递送的荧光图像、流式细胞术结果与介导细胞凋亡的结果；

(b)mRNA转染的荧光图像、流式细胞术结果；

(c)pDNA转染的荧光图像、流式细胞术结果。

图5为制备实施例中所制备的NG1及NG15在多种细胞系中的siRNA递送结果。

具体实施方式

发明人经过广泛深入的研究，开发了一种核-壳型阳离子纳米凝胶载体。所述阳离子纳米凝胶内部含有大量正电荷，可以高效负载多种核酸药物分子；同时，所述阳离子纳米凝胶核具有良好的生物相容环境，能有效保持核酸的结构和生物活性；其交联剂可以针对胞内环境响应，介导核酸药物的逃逸和可控释放。凝胶壳层为中性聚合物，可以大大弱化凝胶表面正电荷，降低细胞毒性；同时可以选择性地修饰靶向分子，实现核酸药物精准递送。在此基础上，完成了本发明。

具体地，本发明提供了一种核-壳型阳离子纳米凝胶，壳层为中性聚合物，核心为聚阳离子单体与交联剂；然后将该纳米凝胶与核酸在完全培养基中直接混合，制备核酸递送复合物，移入预接种细胞的孔板中，24小时后通过荧光显微镜定性观察转染效果，或通过流式细胞仪定量检测转染结果。

本发明也提供了一种阳离子纳米凝胶的合成方法，包括如下步骤：

以阴离子聚合物为模板，加入阳离子单体、交联剂、中性聚合物-链转移剂、引发剂，调节溶液pH至电中性，然后通过抽充氮气的方式除氧，引发聚合得到纳米凝胶复合物。用无机盐溶液超滤、离心或透析除去纳米凝胶复合物中的聚阴离子模板，即可得到所述阳离子纳米凝胶。

其中，所述的阳离子单体的结构通式如式Ⅰ所示，且为式Ⅰ所述单体中的一种或多种的组合：

式Ⅰ中，

R1为侧链官能团，包括但不局限于-H、-CH

R2为连接键，包括但不局限于-C(＝O)-NH-、-C(＝O)-O-、-C

R3为化学官能团，包括但不局限于-NH

n取值为1-3之间的整数；

进一步地，所述阳离子单体和阴离子聚合物模板的电荷浓度均取自5-500mM；例如但不限于，所述阳离子单体和阴离子聚合物模板的电荷浓度均取自10-100mM、15-400mM、30-200mM、25-300mM、50-350mM等。

其中，所述的交联剂包括但不限于，二烯丙基二硫醚、N,N'-双(丙烯酰)胱胺、2,2-二硫二乙醇二丙烯酸。

其中，所述的阴离子聚合物模板包括但不限于，聚丙烯酸、聚2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸钠、聚对苯乙烯磺酸钠、聚甲基丙烯酸二甲氨乙酯、聚甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵或聚2-氨基乙基甲基丙烯酸酯。

其中，所述的中性聚合物包括但不限于，聚乙二醇、聚乙烯、聚四氟乙烯、聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、聚甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱、聚3-[[2-(甲基丙烯酰氧)乙基]二甲基铵]丙酸酯、聚3-[(3-丙烯酰胺基丙基)二甲基铵]丙酸盐。

其中，所述的链转移剂包括但不局限于，甲基(苯基)氨基二硫代甲酸氰甲酯、S-氰甲基-S-十二基三硫代碳酸盐、二硫代苯甲酸氰基异丙酯、4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸、S-(2-氰基-2-丙基)-S-十二烷基三硫代羰基酯、4-氰基-4-[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸、2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸。

其中，所述中性聚合物上可接枝靶向分子而形成靶向分子-中性聚合物-链转移剂；所述的靶向分子包括但不局限于，叶酸、阿仑膦酸钠、转铁蛋白、透明质酸、多肽、甘露糖、生物素。

其中，所述靶向分子的接枝方法为：

对于含-COOH的靶向分子，选用两端为-NH

对于含-NH

其中，引发剂为光引发剂或热引发剂，包括但不局限于，2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮、2-羟基-4'-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮、苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基次膦酸锂、过硫酸盐、水溶性偶氮化合物；

进一步地，反应条件为光引发剂在紫外灯光照下引发聚合1-12小时；或为热引发剂在60-80℃下引发聚合1-12小时；

聚合时间例如但不限于，2-9小时、5-7小时等；

使用热引发剂时的温度例如但不限于，65-75℃、70-80℃等。

进一步地，所述引发剂含量为阳离子单体的0.1-10wt％，例如但不限于，0.5-4wt％、1-3wt％、0.7-7wt％、5-8wt％等。

其中，所述无机盐为氯化钠、氯化钾、硝酸钠、硝酸钾、硫酸钠或硫酸钾的一种或多种；

进一步地，所述无机盐的浓度为0.1-5mol/L，例如但不限于，0.5-3mol/L、1-4mol/L、2-3.5mol/L等。

其中，所述阳离子纳米凝胶的粒径为40-500nm；优选地，为180-300nm。

其中，所述阳离子纳米凝胶的交联剂为阳离子单体浓度的1-50mol％，例如但不限于，5-40mol％、15-45mol％、25-35mol％等；优选地，为3-30mol％。

本发明还提供了所述阳离子纳米凝胶在核酸转染中的应用。

所述核酸转染是将核酸由细胞外递送到细胞内，并使核酸成功表达。

其中，所述核酸包括但不限于小干扰RNA(siRNA)、信使RNA(mRNA)、质粒(pDNA)等。

本发明还提供一种包括所述阳离子纳米凝胶和核酸的复合物。

本发明还提供所述复合物的制备方法，包括步骤：将阳离子纳米凝胶加入到含血清的DMEM完全培养基中，吹打均匀；然后加入核酸，涡旋5-30s，即得复合物。

所述核酸的浓度为0.1-20μg/mL，阳离子纳米凝胶的浓度为5-100μg/mL。优选地，所述核酸的浓度为1-10μg/mL，阳离子纳米凝胶的浓度为10-50μg/mL。

本发明还提供所述复合物在核酸转染中的应用。

为使本领域技术人员可了解本发明的特点及效果，以下谨就说明书及权利要求书中提及的术语及用语进行一般性的说明及定义。除非另有指明，否则文中使用的所有技术及科学上的字词，均为本领域技术人员对于本发明所了解的通常意义，当有冲突情形时，应以本说明书的定义为准。

本文描述和公开的理论或机制，无论是对或错，均不应以任何方式限制本发明的范围，即本发明内容可以在不为任何特定的理论或机制所限制的情况下实施。

在本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征，如数值、数量、含量与浓度仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值(包括整数与分数)。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，只要这些特征的组合不存在矛盾，所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、本发明提供的阳离子纳米凝胶转染试剂递送效率高、细胞毒性低、操作便捷、且通用于多种核酸药物和细胞系，性能明显优于市售转染试剂。

2、本发明提出的阳离子纳米凝胶对siRNA、mRNA、pDNA都具有很高的递送效率，是一个高效、通用的核酸递送平台；所述阳离子纳米凝胶的毒性远远低于Lipofectamine3000(Lipo3000)、Lipofectamine8000(Lipo8000)等常用商业化试剂，在核酸转染的实验条件下细胞的存活率高于90％，具有很高的安全性和生物相容性；同时，所述转染操作极为简便，避免了核酸与转染试剂在无血清培养基或缓冲液中预混合、需要孵育时间等商业化试剂常用的繁琐操作。

3、本发明提出的核酸转染载体是一种低毒、高效、操作便捷、通用的转染平台，在非病毒基因载体方面具有潜在的体外转染及临床应用价值。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量(克)。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

制备实施例

制备核-壳型阳离子纳米凝胶

下述实施例中的修饰叶酸和链转移剂的聚乙二醇通过下述方法获得：

称取NH

实施例1

制备NG1纳米凝胶

称取聚丙烯酸29.0mg(阴离子聚合物模板的电荷浓度为20mM)，4-乙烯基苄胺53.3mg(单体浓度(对单体而言，单体浓度等于电荷浓度)为20mM，)，N,N'-双(丙烯酰)胱胺10.4mg(单体浓度的10mol％)，2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮1.1mg(单体浓度的2wt％)，叶酸-聚乙二醇-4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸21.0mg溶解于20ml去离子水中，调节溶液pH至电中性，对反应体系抽充氮气除氧，在紫外光照下反应8h，即可得到纳米凝胶复合物。向上述得到的纳米凝胶复合物中加入0.1753g氯化钠，调节溶液的盐浓度为1.5M，并用1.5M的氯化钠为洗脱液，用超滤离心管离心洗涤纳米凝胶复合物6次除去阴离子聚合物模板，再用去离子水透析除去氯化钠，即可得到纳米凝胶，命名为NG1。所制得不同尺寸的纳米凝胶粒径分布如图1(a)所示。

实施例2

制备不同交联度的NG1纳米凝胶

称取聚丙烯酸29.0mg(阴离子聚合物模板的电荷浓度为20mM)，4-乙烯基苄胺53.3mg(单体浓度为20mM)，N,N'-双(丙烯酰)胱胺10.4-52.0mg(单体浓度的10-50mol％)，2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮1.1mg(单体浓度的2wt％)，叶酸-聚乙二醇-4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸21.0mg溶解于20ml去离子水中，调节溶液pH至电中性，对反应体系抽充氮气除氧，在紫外光照下反应8h，即可得到纳米凝胶复合物。向上述得到的纳米凝胶复合物中加入0.1753g氯化钠，调节溶液的盐浓度为1.5M，并用1.5M的氯化钠为洗脱液，用超滤离心管离心洗涤纳米凝胶复合物6次除去阴离子聚合物模板，再用去离子水透析除去氯化钠，即可得到不同交联度的纳米凝胶，粒径和PDI如图1(b)所示。

实施例3

制备NG1-15纳米凝胶

称取聚丙烯酸29.0mg(阴离子聚合物模板的电荷浓度为20mM)，4-乙烯基苄胺53.3mg(或苄乙基三甲基氯化铵84.7mg；N-4-乙烯基苄基-N,N-二甲胺64.5mg；4-乙烯基-N-甲基苯甲胺58.9mg；甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵83.1mg；丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵77.5mg；N,N,N-三甲基-3-(2-甲基烯丙酰氨基)-1-氯化丙铵88.3mg；(3-丙烯酰胺丙基)三甲基氯化铵82.7mg；甲基丙烯酸-2-(二甲氨基)乙酯62.9mg；2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯57.3mg；N-[(3-(二甲氨基)丙基]甲基丙烯酰胺68.1mg；N-[(3-二甲氨基)丙基]丙烯酰胺62.5mg；2-氨基乙基甲基丙烯酸酯66.2mg；2-胍基乙基甲基丙烯酸酯68.9mg)，单体浓度均为20mM，N,N'-双(丙烯酰)胱胺20.8mg(单体浓度的20mol％)，2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮1.1mg(单体浓度的2wt％)，叶酸-聚乙二醇-4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸21.0mg溶解于20ml去离子水中，调节溶液pH至电中性，对反应体系抽充氮气除氧，在紫外光照下反应8h，即可得到纳米凝胶复合物。向上述得到的纳米凝胶复合物中加入0.1753g氯化钠，调节溶液的盐浓度为1.5M，并用1.5M的氯化钠为洗脱液，用超滤离心管离心洗涤纳米凝胶复合物6次除去阴离子聚合物模板，再用去离子水透析除去氯化钠，即可得到纳米凝胶，命名为NG1-NG14。

特别地，以4-乙烯基苄胺为单体，以未修饰叶酸的聚乙二醇-4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸为链转移剂，按照上述操作流程制备了NG15。

所制备不同化学组成的纳米凝胶粒径分布如图1(c)所示。

如图1所示结果表明，依照本发明的合成方法，可制备出粒径、交联度可随意独立调节的阳离子纳米凝胶，所得纳米凝胶的粒径分散度较窄，且该方法通用于至少14种阳离子单体。实验结果证明所述方法是一种通用性强的可控聚合方法，所得纳米凝胶具备可调的尺寸、刚度等结构参数。

测试实施例

实施例1

核-壳型阳离子纳米凝胶NG1的可降解性评价

将本发明实施例1制备的NG1稀释于20mM pH为7.4的PB溶液中，利用动态光散射(DLS)表征复合物的光强和尺寸。然后向溶液中加入GSH，使得溶液中的GSH浓度为10mM。利用DLS监测复合物光强和粒径随时间的变化。

图2所示结果表明，在GSH加入后，NG1的光强在2个小时之内迅速降低，粒径大大减小，证实了NG1可响应于GSH浓度而降解。

实施例2

核-壳型阳离子纳米凝胶NG1的细胞毒性评价

将Hela细胞预先接种到96孔板中，在37℃、5％CO

图3所示结果表明，在高达100μg/mL的浓度下，NG1处理的Hela细胞存活率高于90％，显著高于商业化试剂。结果表明本发明制备的阳离子纳米凝胶对细胞的毒性较低，优于一般商业化试剂，具有较好的生物相容性。

应用实施例

实施例1

核-壳型阳离子纳米凝胶NG1和NG15转染siRNA

以绿色荧光分子FAM标记的小干扰RNA(siRNA-FAM)作为模型核酸，通过检测细胞内的荧光，在Hela细胞上评估阳离子纳米凝胶递送的效率，并介导血管内皮生长因子小干扰RNA(siVEGF)的成功转染。

siRNA递送具体方法如下：将Hela细胞接种到24孔板中，在37℃、5％CO

siRNA转染具体操作方法如下：将Hela细胞预先接种到96孔板中，在37℃、5％CO

图4(a)为本发明实施例1及实施例3中所得材料NG1与NG15以不同浓度在HeLa细胞上递送siRNA-FAM和转染siVEGF的结果。结果表明NG1与NG15可对100％的细胞进行高效的核酸递送，并可以高效转染siVEGF，诱导细胞凋亡。NG1与NG15介导的siRNA胞内递送和细胞凋亡水平均高于商业化试剂Lipo3000与Lipo8000；NG1介导的递送与转染效率略高于NG15，表明叶酸分子进一步促进了受体介导的内吞作用。

实施例2

核-壳型阳离子纳米凝胶NG1和NG15转染绿色荧光蛋白mRNA(GFP mRNA)和质粒(GFP pDNA)

将Hela细胞接种到24孔板中，在37℃、5％CO

图4(b)(c)为NG1及NG15在Hela细胞上转染GFP mRNA或GFP pDNA的结果。结果表明NG1和NG15在Hela细胞中转染mRNA及pDNA的效率显著高于商业化试剂Lipo3000、Lipo8000，实现了绿色荧光蛋白的高效表达。NG1转染效率显著高于NG15，证明叶酸分子进一步促进了受体介导的内吞作用。所述阳离子纳米凝胶是一种通用的核酸转染平台。

实施例3

核-壳型阳离子纳米凝胶NG1和NG15在多种细胞系中转染siRNA

将人肺泡腺癌基底上皮细胞(A549)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)分别接种到24孔板中，在37℃、5％CO

图5为本发明制备实施例中所得材料NG 1及NG15在A549、HUVEC、NIH-3T3细胞上递送siRNA的结果。结果表明，NG1及NG15可以在多种细胞系中高效递送siRNA，

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。